INTERPRETASI

PEMERIKSAAN IMUNOLOGI
DASAR PEMERIKSAAN LABORATORIUM
IMUNOLOGI
1. Uji respon imunologik non spesifik

Macam :
2. Uji respon imunologik spesifik

3. Uji interaksi antigen-antibodi

1. Uji respon imunologik non spesifik
►Seluler

• Kuantitatif  pe atau pe jumlah leukosit,

monositosis, eosinofilia
• Kualitatif  uji hambatan migrasi leukosit, uji
gangguan fagositosis, uji fungsi membunuh
mikroba
►Humoral

• Kadar CRP  me > 100 x pd infeksi atau

kerusakan jaringan
• Kadar komplemen  C3, C4, faktor B, properdin
2. Uji respon imunologik spesifik

► Seluler
1. Kualitatif  uji transformasi limfosit (dg PHA &
con A)
 uji sitotoksisitas
 uji produksi limfokin
2. Kuantitatif  tes rosette (Sebuah tes penapisan
kualitatif untuk mendeteksi signifikan-10-
foetomaternal perdarahan ml, dimana sel-sel
indikator bentuk yang mudah)
► Humoral
Elektrpforesis protein
Imuno elektroforesis
Elektrpforesis protein Imuno elektroforesis
3. Uji interaksi antigen-antibodi
1. Reaksi presipitasi
- utk antibodi/antigen terlarut 
terbentuk presipitat (gumpalan)
- jml antigen & antibodi hrs
seimbang
2. Reaksi aglutinasi
- utk antibodi/antigen btk
partikel  terbentuk aglutinasi
- jml antigen & antibodi hrs
seimbang
- m/ : Widal, gol darah, tes
kehamilan
3. Interaksi Antigen-antibodi tingkat
molekuler

- RIA (radio immunoassay) : penentuan

berdasarkan reaksi imunologi yg
menggunakan kit RIA (Contoh : utk
mendeteksi fs ginjal, fs tiroid)

- ELISA ( enzyme linked immunosorbent

assay) : deteksi patogen yg mendasarkan
pada reaksi antibodi & antigen (Contoh : utk
deteksi fs hati, fs trombositopenia, gangguan
fungsi hormonal)
RIA (Radio Immunoassay)
ELISA
Struktur Virion HIV

10
Susunan Gen
Berat molekul Gen Antigen

gp 160 ENV bentuk polimer gp 41

gp 120 ENV membran luar
p 66 POL reverse transcriptase
p 55 GAG precursor protein
p 51 POL reverse transcriptase
gp 41 ENV transmembran
p 39 GAG fragmen p 55
p 31 POL endonuclease
p 24 GAG core protein
p 17 GAG core protein
11
p 24 antigen
 Merupakan alat laboratorium yang
berguna pada infeksi HIV untuk:
 Prediksi HIV  AIDS: rapid progressor
(Farzadegan et al., 1996).
 Diagnosis, prognosis, monitoring terapi anti
retroviral, dan skrining bagi donor darah
sukarela (Arens, et al., 1997).
 Skrining darah, identifikasi infeksi akut,
monitoring infeksi, deteksi infeksi, dan
pemeriksaan infeksi pada Bayi Baru Lahir
(Constantine, 2001).
12
Window period
 Individu terinfeksi HIV tapi seronegatif thd
pemeriksaan antibodi HIV
 Infeksi HIV dapat dideteksi selama
window period:
 HIV-PCR  deteksi asam nukleat:
 Tdk dpt dikerjakan pad lab rutin
 Peralatan canggih
 Ketrampilan >>
 Kultur HIV
 Pemeriksaan p24 antigen

13
Deteksi p24 antigen
 p24 antigen muncul secara karakteristik
pada fase awal dan akhir infeksi HIV:
 Antigen ini muncul cepat setelah infeksi 
replikasi awal virus dan ≈ ↑ level viremia
selama seseorang terkena infeksi.
 Ketika antibodi HIV terdeteksi  antigen p24
≠ terdeteksi, dikarenakan adanya kompleks
antigen antibodi di dalam darah.
 Jika p24 antigen terdeteksi  pertanda infeksi.

14
Potentially cross reacting samples:
 Wanita hamil
 Penderita autoimmune disease
 Sampel (+) utk IgM anti bodi thd:
 Cytomegalovirus
 Herpes simplex virus
 Rubella virus
 Toxoplasma gondii
 Sampel (+) rhematoid factor
 Hepatitis C virus antibody
 Epstein-Barr virus capsid antigen antibody.

15
Sensitivitas pemeriksaan p24 antigen
 Pemeriksaan standart:
 Neonatus – umur 1 bln  0-20%
 Umur 3 – 6 bln  55-75%
 Dewasa asimtomatik  4%
 Selama infeksi akut (sebelum serokonversi)  55-75%
 Pemeriksaan ICD:
 Me ↑ sensitivitas 3-8 kali dibandingkan pemeriksaan standart
(Praharaj, et al., 2003).
 Elisa gen ke4 (Saville et al., 2001):
 100%  high risk
 99,7%  low risk

16
 Spesivisitas pemeriksaan p24 antigen
generasi ke3 & 4:

Gen 3
WEBER, et al., JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Apr. 2002.
17
ICD Nishanian et al., 1990:
1. 100µL spesimen + 50µL 0,5 N HCl
(pH 2,5-3,0)

2. Inkubasi pada suhu 37°C selama 1 jam

3. Dinetralisasi dengan 50µL 0,5 N NaOH

sampai pH 6,8 - 7,2.

4. Kerjakan pemeriksaan p24 antigen.

18
Transmission of HIV Infection to
Neonates
A. Methods of HIV vertical transmission

1. Transplacental: 30-50%

2. Intrapartum: 50-70%

3. Breastfeeding
a. Mothers with established disease: 16%
b. Mothers who develop primary disease postpartum:
26%

19
Transmission of HIV Infection to
Neonates …
B. Risk Factors for HIV Vertical Transmission
1. Neonate
a. First born twin
b. Prematurity
c. Bacterial infection
d. Breastfeeding
2. Maternal
a. New onset disease
b. Low CD4+ T-lymphocyte cell count (helper cells)
c. High CD8+ T-lymphocyte cell count (suppressor
cells)

20
Transmission of HIV Infection to
Neonates …
B. Risk Factors for HIV Vertical Transmission
2. Maternal
d. High viral load {elevated serum p24 antigen ICD),
elevated plasma HIV ribonucleic acid (RNA) and
increased circulating cell associated virus}
e. Rapid and efficient viral replication rate
f. T-cell line tropism
g. Chorioamnionitis
h. Prolonged/complicated labor
i. Mixing of maternal and fetal blood
j. On-going illicit drug use

21
Diagnosing HIV Infection in Neonates
 Diagnostic testing should be performed
between:

1. Birth and 48 hours

2. One to two months of age

3. Three to six months of age

22
Diagnostic Tests
A. HIV Antibody by Enzyme Immunoassay
(EIA):
 This test is not adequate for differentiating
maternal versus newborn infection.
B. HIV Culture:
 Not readily available, expensive to perform,
requires a large volume of blood, and
definitive results may not be available for two
to four weeks.

23
Diagnostic Tests …
C. HIV-p24 Antigen Assay:
 Standard Assay:
 The p24 Antigen (Ag) in the serum of neonates is
bound to maternal HIV antibody. This test is not
sensitive for the detection of HIV infection in
neonates.
 ICD-HIV-p24 Assay (ICD):
 If acid hydrolysis is used to interfere with antigen-
antibody complexes in the serum, then the
sensitivity of p24 can be increased and utilized as
an early diagnostic tool. One hundred percent
detection by one to three months of age.

24
Diagnostic Tests …
C. HIV-DNA-PCR
(polymerase chain reaction):

 Is the preferred virologic method for

diagnosing HIV infection in infancy.

 It is a highly sensitive and specific test, with

93% of infected neonates PCR positive by 14
days of life.

25
Diagnostic Tests …
E. HIV-IgA Antibody Test:
 Maternal IgA antibodies do not cross the
placenta, therefore the detection of HIV
specific antibodies in the newborn serum
indicates presence of HIV infection.
 This assay is sensitive after the third month
of life with 94% detection at six months and
100% detection at nine months (assay not
available for commercial use at this time).

26
Diagnostic Tests …
F. Immunologic Testing:
The following tests should be performed on all
neonates born to HIV positive mothers.
 Lymphocyte subsets: CD4, CD8, and CD4/CD8 ratio
should be tested at one, three, and six months of age,
then every three months until HIV status of the neonate
is known. Monitoring should be performed on all
neonates who are HIV infected.
 Quantitative immunoglobulin: IgG, IgM, and IgA
 Skin tests performed later in infancy include: candida,
mumps, tuberculin skin test (purified protein derivative-
PPD)

27
28
Pemeriksaan laboratorium HIV
 Biakan virus

 Deteksi antigen:
 p24

 Deteksi materi genetik:

 DNA provirus/RNA

 Deteksi antibodi:
 penyaring & konfirmasi
29
Berbagai teknik yang dipakai pada
pemeriksaan laboratorium infeksi HIV
(deteksi antigen/antibodi)

 Aglutinasi

 Enzyme immunoassay (EIA)

 Dot blot immunoassay

 Imunokhromatografi
30
Aglutinasi
Ag

partikel

Anti-HIV

31
 Imunokromatografi

Koloid emas

Anti-HIV

32
Enzyme immunoassay (EIA)
 Indirect EIA

 Competitive EIA

 Antigen sandwich EIA

 Capture EIA

33
Indirect EIA

Anti-human Ig+enzyme E
substrat

Anti-HIV

Ag

34
Competitive EIA

substrat
Anti-HIV+enzyme
E
Anti-HIV

Ag Ag Ag

35
 Antigen sandwich EIA

HIV Ag + enzyme E
substrat

Anti-HIV

Ag

Enzyme immunoassay (EIA) 36

Capture EIA

HIV Ag + enzyme substrat

E

Anti-HIV

Anti-human Ig G / M

37
Perkembangan reagensia EIA
 Generasi 1 : viral lysate

 Generasi 2 : recombinant antigen

 Generasi 3 : recombinant antigen &

synthetic peptide

 Generasi 4 : antigen + antibodi

38
EIA generasi pertama
 Dari biakan virus dalam jaringan/sel

 Sensitivitas sangat tinggi

 Spesivisitas rendah

 Reaktif palsu >>, karena ada komponen

media (kultur jaringan/sel)

39
EIA generasi kedua
 Menggabungkan potongan DNA HIV ke
untaian DNA suatu mikroba vehikulum
(Candida, E.coli), sehingga dihasilkan
antigen rekombinan

 Spesifitas lebih tinggi daripada generasi

pertama, walaupun masih ada pengaruh
dari komponen vehikulum

40
EIA generasi ketiga
 Antigen rekombinan ditambah dengan
peptida sintetik

 Meningkatkan reprodusibilitas reagensia

 Memperkecil kontaminasi oleh komponen

sel yang dipakai untuk vehikulum

41
 EIA generasi keempat
 Dapat mendeteksi baik antigen p24
maupun anti-HIV

 Diharapkan dapat memperkecil window

period

 Telah terbukti dapat menyaring individu

dengan antigen positif dan antibodi negatif
di populasi dengan prevalensi infeksi HIV
tinggi
Konfirmasi
42
EIA generasi keempat
anti-gp41, gp120, gp160
window
anti-p24

p24 p24
Kadar

minggu tahun
infeksi
43
44
Konfirmasi
Generasi 1 – 3 : deteksi antibodi

Western Blot
Line Immunoassay
RIPA
Imunofluoresensi
45
Konfirmasi
Generasi 4 : deteksi antigen + antibodi

Western Blot
Line Immunoassay
RIPA
Imunofluoresensi

Ag Neutralisation, NAT 46
Kesimpulan
 Pemilihan jenis reagensia harus
memperhatikan tujuan pemeriksaan,
banyaknya pemeriksaan, prevalensi
infeksi HIV populasi yang diperiksa dan
efisiensi yang diharapkan

 Perlu diperhatikan pula kemungkinan jenis

pemeriksaan konfirmasi yang diperlukan
setelah penyaringan yang memberikan
hasil yang reaktif atau positif
47
 Cara Pemeriksaan
WESTERN BLOT (WB)
Western Blot
 Qualitative enzyme immunoassay
terhadap antibodi HIV-1 dan HIV-2
 Spesifik
 Mahal
 Membutuhkan ketrampilan
 Dapat menginterpretasi hasil

49
Prinsip dasar
 Carik nitroselulosa dilekatkan dengan
antigenic protein dari HIV-1 yang sudah
dimurnikan dan specific HIV-2 synthetic
peptide dengan cara electrophoretic
blotting
 Carik nitroselulosa diinkubasi dengan
serum / plasma pasien
 Bila terdapat antibodi spesifik terhadap
HIV-1 dan / HIV-2 terjadi ikatan antigen-
antibodi
50
 Anti-human Ig Substrat
Serum pasien
yang mengandung Ab
+

+
+

Carik nitroselulosa

51
Yang perlu diperhatikan
 Selalu kerjakan kontrol positif dan negatif

 Jangan gunakan reagen dari kit dengan

no. lot yang berbeda

 Simpan reagensia pada suhu 2-8°C

52
Kriteria interpretasi
Organisasi Kriteria

1 band ENV (gp41 dan

CDC
gp120/160) dan p24

WHO 2 band ENV

p24 dan p31 dan gp41

AFDA
atau gp120/160
Masing masing 1 band
American Red Cross
GAG, POL dan ENV
53
Interpretasi hasil
 Lihat hasil carik kontrol positif dan negatif

 Bandingkan hasil pasien dengan kontrol

positif dan negatif:
 Reaktif
 Non-reaktif
 Indeterminate

54
Western blot
A. Positif untuk infeksi
HIV-1
B. Positif lemah untuk
infeksi HIV-1
C. Negatif

55
 56
(+) (+) (-) (-) (+) (+) HIV-2 +
57