5.

ENZIMI
 5.1. Hemijski sastav, strukture i funkcije E
 5.2. Energija aktivacije i specifičnost enzima
 5.3. Michaelis-Mentenov prilaz kinetici
enzimskih reakcija
 5.3.1. Vmax i Km i mogućnosti odredjivanja
 5.3.2. Značenje vrednosti Km i Vmax
 5.3.3. Kinetička savršenost enzimske
katalize: kcat/Km odnos
 5.3.4. Mehanizam enzimske katalize
 5.4. Faktori koji utiču na aktivnost enzima
 5.5. Nomenklatura i klasifikacija enzima
 5.6. Izoenzimi i multienzimski kompleks
 5.7. Enzimi biljaka
 5.8. Regulacija aktivnosti enzimskih reakcija
 5.9. Značajne oznake u enzimologiji
Karbon anhidraza
 Razmena materija i svih životnih procesa odvija
se biohemijskim reakcijama katalizovanim sa
nekoliko hiljada proteinskih katalizatora - enzima
 Enzimi - su specifični prosti ili složeni globularni
proteini (sa izuzetkom nekih skoro otkrivenih ribonukleaza-
RNaza koje katalizuju sopstveno uplitanje) koji ubrzavaju, ili
regulišu brzinu termodinamički mogućih reakcija,
smanjivanjem energije aktivacije na relativno
niskoj temperaturi i normalnom pritisku. U
ćelijama se nalaze u količini od 90% u odnosu
na ukupne proteine, ali je samo mali broj enzima
aktivan u posmatranom trenutku.
5.1. Hemijski sastav, strukture
i funkcije enzima
 Proučavanje hemijskog sastava enzima započelo je
izolovanjem prvog enzima ureaze (1926. godine) u
kristalnom stanju, iako su procesi katalizovani
enzimima bili poznati od davnina. Smatra se da je do
danas izolovano i hemijski determinisano oko 3.000
enzima čije realativne molekulske mase (Mr) imaju
vrednosti od 12.000 do preko 1.200 000.
 Prema hemijskom sastavu enzimi se mogu klasifikovati
u 3 grupe i to:
 proste proteinske enzime,
 metalo-proteinske enzime i
 složene proteinske enzime
 Prostorna struktura
Aktivni centar karbon
anhidraze

 Hemijski sastav, strukture

i funkcije enzima
 Enzimi su proteini
Neke RNA-molekule mogu takođe katalizovati reakcije
 Katalizatori hemijskih reakcija
 Enzimi katalizuju oko 4000 reakcija
 Enzimi se obično nazivaju prema reakciji koju katalizuju (npr. GALAKTAZA
razlaže galaktozu itd.)
1. Prosti proteinski enzimi

►Monomerni enzimi - su enzimi izgradjeni isključivo od

prostog polipeptidnog lanca i ne mogu disosovati u
manje jedinice. Najčešće katalizuju hidrolitičke reakcije
i obično su izgradjeni od 100-300 aminokiselinskih
ostataka. Vrednosti Mr se kreću od 13.000 do 30.000.
Monomerni enzimi su neke proteinaze i peptidaze.
►Oligomerni enzimi - su izgradjeni iz dva ili više
polipeptidnih lanaca koji su povezani nekovalentnim
interakcijama (ali ne i peptidnim vezama), pa se
nazivaju dimernim, trimernim ili tetramernim enzimima
čije Mr imaju vrednosti iznad 35.000. Enzimi glikolaze
su oligomerni i izgradjeni su od 2 ili 4 subjedinice.
2. Metalo-proteinski enzimi

 Metalo-proteinski
enzimi - kao Metalni
Naziv enzima
biokatalizatori pored joni
proteina u svojoj
strukturi imaju i
metalni jon (kao Katalaza, peroksidaza Fe2+ /Fe3+
Tirozinaza Cu2+
kofaktor) koji olakšava Mn2+
Arginaza Zn2+
enzimu da obavi Alkohol-dehidrogenaza Mg
katalitičku funkciju. Fosfo-hidrolaza K+
Neki od enzima koji u Piruvat-kinaza Se2+
svojoj strukturi sadrže Glutation-peroksidaza
metalni jon dati su u
tabeli.
3. Složeni PROTEINSKI enzimi

► Složeni proteinski enzimi - pored proteinskog dela u svom

sastavu imaju koenzim (Co) ili prostetičnu grupu (vidi poglavlje
6). Proteinski deo enzima se naziva apoenzim, a složeni enzim
holoenzim. Tako npr. složeni proteinski enzim je i piruvat-
dekarboksilaza koja kao koenzim u svojoj strukturi sadrži vitamin
B1.
► Šematski prikaz prostih i složenih enzima dat je na slici 5-1.
Prost enzim A se jedini sa koenzimom (Co) ili prostetičnom
grupom u složeni dvokomponentni enzim ili holoenzim B.
Model veze E + S
 model ključa i brave po E. Fisher-u,
 model indukovanog prilagođavanja po D. Koshland-u
 model fluktuacionog prilagođavanja
Model veze E + S
 Model ključa i brave
► Најуочљивија карактеристика
ензима је њихова специфичност.
Емил Фишер је 1890 године
констатовао да је ова хипотеза
коректна услед специфичности
облика ензима и молекула на које
они делују.
► Сваки молекул на који
одређени ензим утиче, има
тачно одређени облик,
помоћу којег се молекули
вежу на тачно одређени
ензим. На пример, ако је
молекул на који ензим утиче
у облику коцке, а сам ензим
има регион у облику троугла
на који молекул треба да се
надовеже, до повезивања
неће доћи, јер у том случају
ензим није коректан за тај
молекул. Ова хипотеза се
зато и назива хипотеза
Кључ и брава, јер је сваки
кључ специфичан за сваку
браву коју откључава.
Model veze E + S
 Model indukovanog
prilagođavanja
► 1958. Даниел Кошланд је
предложио модификацију хипотезе
Кључ и брава којa је названа
хипотеза индукованог
прилагођавања
► Ензими су веома флексибилне
структуре. Активни регион
ензима може бити модификован
како би дошло до интеракције
молекула и ензима. Ланци амино
киселина се могу преклапати на
тај начин који би одговарао
ензиму, како би дошло до
интеракције, и на тај начин ензим
могао да изврши своју
каталитичку функцију. У веома
ретким случајевима, молекули
при уласку у активни регион
могу да се прилагоде ензиму,
како би дошло до интеракције
ензима и молекула. Аналогија
слична овој је на пример када
облачимо рукавицу, и како се
рукавица прилагођава нашој
руци, како би се савршено
прилагодила руци.
 Enzimska reakcija

Enzim + supstrat
 Energija aktivacije i specifičnost enzima

► Reakcija razlaganja C6H12O6

 Specifičnost prema supstratu
uslovljava njegovu veliku selektivnost u
izboru supstrata.
 Apsolutnu specifičnost - kada enzim
katalizuje pretvaranje samo jednog
supstrata
 Grupnu specifičnost - enzim katalizuje
reakcije sa nizom supstrata
 Stereohemijsku specifičnost - kada
enzim katalizuje pretvaranje samo
jednog stereoizomernog oblika supstrata
(npr. D-aminooksidaza ili L-
aminooksidaza itd.).
 Optičku specifičnost - enzim katalizuje
razlaganje celog molekula ili samo
jednog njegovog dela (-glukozidaza
hidrolizuje samo -, ali ne i -glikozidnu
vezu).
Kinetika enzimskih reakcija
 Kriva zasićenja (pokazuje odnos koncentracije
supstrata i brzine reakcije):
Jednosupstratna reakcija

 E+S
 Brzine stvaranja i razlaganja ES kompleksa:
brzina stvaranja: ES = k1 c(E) c(S)
brzina razlaganja: ES = (k2 + k3) c(ES)

k1 k3
E+S ES E+P
k2
Michaelis-Menten-ova jednačina

 Michaelis-Mentenovom  MM-jednačina:
jednačinom se definišu
kvantitativni odnosi c(S)
između V i c(S) kada su V= Vmax
Vmax i Km poznate
c(S) + Km
vrednosti
MM-konstanta (Km):
Km = c[S] x Vmax / 2
► Značenje vrednosti Vmax
i Km ?
Multisupstratne reakcije

 Utvrdjeno je da se kinetika
multisupstratnih reakcija može odvijati po
tri različita mehanizma i to:
♦ uredjenom mehanizmu
♦ slučajnom mehanizmu
 ping-pong mehanizmu
Uredjeni mehanizam

 Svi supstrati učestvuju u reakciji po

specifičnom redosledu pre oslobadjanja
prvog proizvoda:
A B P Q

E E
EA E AB E PQ EQ
Slučajni mehanizam

 Svi supstrati učestvuju u reakciji po

slučajnom redosledu pre oslobadjanja
prvog proizvoda:
A B Q P

EA EP
E E
EB (EAB EPQ ) EQ

B A P Q
Ping-pong mehanizam

 Jedan do dva proizvoda se oslobadjaju

pre nego što se svi supstrati dodaju
enzimu:
A P B Q

E E
EA FP F FB EQ
5.3.1. Vmax i Km i mogućnosti njihovog
određivanja
 Km i najveća brzina Vmax mogu 1 1 Km 1
se lako odrediti iz brzina katalize pri   
različitim koncentracijama V V max V max S
supstrata ako enzim deluje prema
jednostavnoj šemi datoj u jednačini
5-2. Zbog toga je pogodno MM-
jednačinu preurediti u izraz koji
daje pravolinijski dijagram što su
1934.g. učinili Lineweawer i Burk 1/V
koristeći recipročne vrednosti obeju nagib:
strana MM-jednačine: Km/Vmax

 Dijagram 1/V prema 1/[S] daje

odsečak na ordinati:
pravu liniju sa odsečkom na
1/Km 1/Vmax
ordinati 1/Vmax i koeficijentom
smera odnosno nagibom prave
1/S
Km/Vmax (slika 5-8).
5.3.2. Značenje vrednosti Km i Vmax

 Značenje vrednosti Km

 Vrednosti Km raznih enzima jako se razlikuju (tabela 5-3). Za

većinu enzima vrednosti Km leže izme|u 10-1 i 10-6 mol/dm3.
Vrednosti Km za neki enzim zavise od koncentracije i prirode
supstrata kao i uslova u kojima reakcija teče kao što su
temperatura i jonska jačina. Km ima dva značenja.
1. to je koncentracija supstrata pri kojoj je pola aktivnih mesta enzima
ispunjena, tj. pri kojoj je postignuta polovina maksimalne brzine
reakcije (tabela 5-3).
2. Km je jednaka konstanti disocijacije kompleksa ES ako je k3
mnogo manja od k2. Kada je taj uslov ispunjen Km je mera jačine
kompleksa ES. Velika Km znači slabo vezivanje, a mala Km
pokazuje jako vezivanje tj. afinitet enzima prema datom supstratu
Tabela 5-3. Km vrednosti nekih enzima

Enzim Supstrat Km (mol dm-3)

glukokinaza glukoza 1x10-4

fruktokinaza fruktoza 7x10-4
katalaza H2O2 6x10-6
karboanhidraza CO2 8x10-3

piruvat-karboksilaza piruvat 1x10-3

treonin-deaminaza treonin 5x10-3

Tabela 5-4. Broj izmena nekih enzima Vmax

 Značenje vrednosti Vmax:

Enzimi Broj
 Najveća brzina Vmax - pokazuje broj izmena
izmena (turnover number) enzima ( s-1)
ako je poznata koncentracija aktivnih katalaza 40.000.000
mesta c(E), jer je
Vmax = k3 c(E)
karboanhidraza 800.000
 Kinetička konstanta k3 naziva se
brojem izmena enzima i predstavlja
broj molekula supstrata pretvorenih DNA 15
u molekule proizvoda u jedinici polimeraza I
vremena kada je enzim potpuno
zasićen supstratom. triptofan- 2
 Za katalazu ovaj broj iznosi sintetaza
40.000.000 s-1 i jedan je od najvećih
poznatih (tabela 5-4).
5.3.4. Mehanizam enzimske katalize
►Preduslov za studije mehanizma enzimske katalize je poznavanje
enzimskih reakcija koje se odvijaju u četiri faze (jednačina 5-32).
 I II III IV

E  S  ES  ES  EP  E  P
 U prvoj fazi E se pravilno približava supstratu (da bi se za njega vezao
jonskom, kovalentnom ili nekom drugom vezom). U drugoj fazi se
indukovano menja S pod uticajem enzima da bi se omogućila
odgovarajuća enzimska reakcija (III faza). U četvrtoj fazi se oslobadja
proizvod reakcije (P) i regenerisan enzim je sposoban da stupi u narednu
reakciju.
 Mehanizmi enzimskih reakcija su često isti. Oni se mogu tumačiti samo
ako je poznata primarna struktura aktivnog centra enzima. Neki ostaci
aminokiselina su predodredjeni za katalitičko delovanje. Smatra se da su
za enzimsku katalizu odgovorna tri mehanizma i to:
 kovalentna kataliza,
 kiselo-bazna kataliza i
 kataliza jonima metala.
5.4. Faktori koji utiču na
aktivnost enzima

 koncentracija supstrata,
 koncentracija enzima,
 temperatura,
 pH,
 koenzimi i prostetične grupe,
 aktivatori i inhibitori,
 alosterični efektori i interkonverzija i dr.
Vrste inhibitora

 Konkurentna inhibicija
E + S
+I
ES
+I
E + P
E + S ES E + P
ESI EI + S
+I

EI
 Nekonkurentna inhibicija
E + S ES E + P
+I +I
ESI EI + S
Aktivatori i inhibitori
Regulatorni enzimi

Neki enzimi su biološki prilagođeni da u metabolizmu pored katalitičke

funkcije, imaju i regulatornu ulogu pa se nazivaju regulatornim
enzimima. Postoje dve glavne grupe regulatornih enzima :

1. alosterični enzimi - čija se katalitička aktivnost menja

nekovalentnim vezivanjem specifičnih metabolita za molekul
enzima (izvan aktivnog mesta)
2. kovalentno modulirani (promenjeni) enzimi - koji prelaze iz
aktivnih u neaktivne oblike delovanjem drugih enzima. Ove dve
grupe regulatornih enzima deluju na promene u metabolizmu ćelije
veoma brzo; alosterični enzimi u toku nekoliko sekundi, a
kovalentno regulisani enzimi u toku nekoliko minuta.
Alosterični enzimi
► Alosterični enzimi i alosterični efektori – jednostavnošću i
širokom primenljivošću Michaelis-Mentenov model je uveliko
doprineo razvoju enzimske hemije. Ipak kinetička svojstva mnogih
enzima ne mogu se razjasniti Michaelis-Mentenovim modelom.
Mnogi biološki katalizatori su alosterični enzimi sa sigmoidnim
dijagramima odnosa brzine reakcije V i koncentracije supstrata
c[S]; time se oni razlikuju od enzima sa hiperboličnim dijagramom i
ne zavise od Michaelis-Mentenove kinetike.
► Kod alosteričnih enzima jedno aktivno mesto u enzimu može
delovati na drugo aktivno mesto istog molekula. Mogući ishod tog
međudelovanja podjedinica istog molekula jeste vezivanje
supstrata koje postaje kooperativno i daje sigmoidni dijagram
zavisnosti V od c[S].
► Aktivnost alosteričnih enzima može se menjati takozvanim
regulacijskim molekulima vezanim za nekatalitička mesta. Zbog
navedenog se na alosterične enzime ne može primeniti Michaelis-
Mentenova jednačina.
Mehanizam alosterične
regulacije

► Monod, Jeffries Wyman i Jean- ► T-oblik R-oblik

Pierre Changeux, su 1965
godine predložili elegantan
pristup tumačenju delovanja
alosteričnih enzima i nazvali ga
skladnim (harmoničnim) nizak afinitet visok afinitet
modelom.
Primenimo ovaj model na alosterični
enzim sastavljen od dve jednake Slika 5-18.
podjedinice sa po jednim
aktivnim mestom. Pretpostavimo
da podjedinica može postojati u
jednoj od dve konformacije,
nazvane R i T. Stanje R
(relaksirano) ima veliki afinitet za
supstrat, a stanje T (napeto)
nizak (slika 5-18).
Skladni (harmonični) model
► Prikažimo taj proces vezivanja slikom 5- ♦ Slika 5-19.
19. Bez supstrata gotovo su svi molekuli
enzima u obliku T. Tačnije, u gornjem
primeru na svakih 104 molekula enzima u
obliku T postoji samo jedan molekul u
obliku R. Dodatkom supstrata pomera se
ta konformacijska ravnoteža prema obliku
R, jer se supstrat veže samo na taj oblik.
Prema osnovnom postulatu modela kada
se supstrat veže na jedno mesto, drugo
mesto istog enzimskog molekula takođe
mora biti u obliku R, tj. prelaz iz T u R i
obrnuto je skladan, harmoničan
(concerted). Vidimo dakle da udeo
enzimskih molekula u obliku R
progresivno raste sa dodavanjem
supstrata.
Sekvencioni model
► Sekvencioni model alosteričnih  Slika 5-20
interakcija (sl. 5-20) - je postavio
Danijel Koshland mlađi. Za
tumačenje najjednostavnijeg oblika
tog modela pretpostavlja se da
postoje samo dva konformaciona
oblika enzima (R i T) koje može
zauzeti bilo koja podjedinica:
 supstrat menja oblik podjedinice za
koju se vezao (konformacije drugih
podjedinica u enzimu ne menjaju se
znatno) i
 konformaciona promena izazvana
vezivanjem supstrata na jednu
podjedinicu može povećati ili smanjiti
afinitet vezivanja za supstrat drugih
podjedinica istog enzimskog
molekula.
5.5. Nomenkla-
Nazivi nekih Supstrat i reakcija
enzima

tura i klasifika- Ime supstrata + aza

cija enzima
fumaraza fumarna kiselina
peroksidaza peroksid
saharaza saharoza
Zavise od:
glukoza-6-fosfataza glukoza-6-fosfat

 supstrata, Ime reakcije + aza

 reakcije, dekarboksilaza dekarboksilacija

 supstrata i reakcije ili dehidrogenaza dehidrogenacija

 neinformativna imena esteraza esterifikacija
oksidaza oksidacija
►Trivijalni nazivi nekih reduktaza redukcija
enzima koji su Ime supstrata i reakcije + aza
izvedeni prema
prethodno opisanim alkohol-dehidrogenaza oksidacija alkohola
načinima dati su u glukozo-oksidaza oksidacija glukoze
tabeli.
aspartat-sintaza sinteza aspartata
Neinformativna imena
katalaza razgradnja peroksida
papain hidroliza proteina
 Klasifikacija enzima prema IUB
Типична Пример
Група Катализована реакција
реакција ензима
EC 1 катализују оксидо-редукционе реакције; врше AH + B → A + Дехидро-
Оксидо- трансфер водоникових и кисеоникових атома са BH (редукована) геназe,
редуктазе једног молекула на други A + O2 → AO2 Оксидазe
(oксидована)
EC 2 врше трансфер функционалних група (нпр. APO4 + C → Киназе
Трансферазе трансфер метил групе или фосфатне групе) A + CPO4

EC 3 катализују хидролитичне реакције у присуству AB + H2O → Липаза,

Хидролазе молекула воде AOH + BH Амилаза,
Пептидаза
EC 4 цепају или кидају различите хемијске везе (изузеци RCOCOOH →
Лиазе су хидролитичне и оксидативне реакције, јер су ти RCOH + CO2
ензими тих реакције већ поменути у горњим
групама). C-C, C-N, C-O или C-S
EC 5 катализују реакције изомеризације у појединачном AB → BA Изомераза
Изомеразе молекулу

EC 6 спајају молекуле са ковалентним везама: C-O, C-S, X + Y+ ATP → ДНК лигаза

Лигазе C-N и C-C XY + ADP + Pi
5.6. Izoenzimi i multienzimski
kompleks

 Izoenzimi (izozimi) - su složeni globularni enzimi

izgrađeni iz dva ili više oblika jednog enzima iste
supstratne specifičnosti koji katalizuju istu reakciju.
 Razlikuju se u primarnoj i kvaternarnoj strukturi, pH i
temperaturnom optimumu, izoelektričnoj tački,
molekulskoj masi, naelektrisanju i imunohemijskim
osobinama.
 Izoenzimi nastaju kao posledica kodiranja
podjedinica globularnog proteina različitim genima.
Studija izoenzima se obavlja uz pomoć metoda
proteinske hemije kao što su gel filtracija,
elektroforeza i dr.
Nomenklatura izoenzima je zasnovana na njihovim trivijalnim
nazivima uz uvođenje dopunskog obeležavanja slovima abecede ili
brojevima. Prvi izolovani izoenzim bila je laktat-dehidrogenaze (EC
1.1.1.27), (LDH).

 Molekulska masa LDH je

134.000 i izgrađen je iz 4
podjedinice, sa Mr 33.500.
Prema strukturi podjedinice
ovog enzima razlikuju se dva
strukturna tipa (koji su
kodirani različitim genima) i
označavaju se slovima M i H.
Hibridizacijom ovih oligomera
nastaje pet elektroforetski
razdvojenih izozima koji
pokazuju da je LDH tetramer
(slika 5-25).
 Slika 5-26. Mogući izoenzimi
fosfofruktokinaze

M4 M3 L1 M2 L2 M1 L3 L4

Fosfofruktokinaza - je tetramer (enzim izgrađen iz 4

podjedinice) . Ovaj enzim egzistira u dva neznatno
različita oblika označena kao M i L, kao što su moguće i
različite kombinacije monomera ovog enzima (kao npr.
M3L1, M2L2, M1L3) kada grade tetramere (slika 5-26)
Multienzimski kompleks

 Multienzimski  Model multienzimskog

kompleksa piruvat--
kompleks - predstavlja dehidrogenaze
grupu enzima udruženih
zajedno u jednu
asocijaciju (mozaik), koja
katalizuje sekvencu
metaboličkih reakcija
kao što je pokazano
jednačinom.
E1 E2 E3
S1  S2  S3  P + E1-3
Enzimi biljaka

► Biljke su bogatije u enzimima od čoveka i životinja što

im omogućuje da sintetizuju više hiljada jedinjenja kako
primarnih tako i sekundarnih biomolekula. Zbog
navedenog se smatra da 90% ukupnih globularnih
proteina biljaka čine enzimi. Najveći broj enzima u
biljnoj ćeliji je organizovan po organelama, a samo mali
broj “pliva” bez reda. Svaka organela pojedinačno
sadrži enzime koji joj omogućavaju da obavi funkciju za
koju je “zadužena”. Najbogatije enzimima su
mitohondrije. One imaju i do 25% ukupnih ćelijskih
enzima koji katalizuju veoma značajne biohemijske
reakcije u metabolizmu ugljenih hidrata, lipida,
organskih kiselina i dr.
 Ranije je bilo naglašeno da biljna ćelija “sadrži”
oko hiljadu enzima. Od tog mnoštva na ovom
kursu biće obradjeni samo neki koji se
intenzivno istražuju u raznim biljnim vrstama.
Posebno su značajni oni čije se aktivnosti
koriste kao biohemijski parametri za
unapređenje biljne proizvodnje i to:
 enzimi metabolizma azota,
 enzimi metabolizma ugljen-dioksida,
 enzimi “gasioci” kiseoničnih radikala
 amilaze,
 enzimi regulatori temperaturnog i dr.
stresova
 Enzimi metabolizma azota - čine grupu
enzima koji katalizuju reakcije fiksacije i
asimilacije azota do njegovog ugradjivanja u
aminokiseline:
 nitrogenaza,
 nitrat-reduktaza,
 nitrit-reduktaza,
 glutamin-sintetaza,
 glutamat-sintaza,
 glutamat-dehidrogenaza i
 transaminaze
Nitrogenaza (NG, EC 1.18.2.1) - je grupno-specifični
enzim koji katalizuje ATP-zavisne redukcije više supstrata
sličnih molekulskih masa kao npr. N2 u kojem nitrogenaza
katalizuje raskidanje trostruke veze u molekulu N2 (NN).
Na taj način nitrogenaza omogućuje da se “rudnik” N iz
atmosfere (čije su rezerve oko 3.75 x 1015 tona)
eksploatiše. No i pored navedenog iz atmosfere se koristi
samo oko 10% atmosferskog N, a razlika u potrošnji se
dopunjuje veoma skupim azotnim djubrivima.

 N≡N + 2H+ + 2e- → HN═NH + 2H+ + 2e-

→ H2N─NH2 + 2H+ + 2e- → 2NH3
Nitrat-reduktaza (NR, EC 1.6.6.1) - je oksido-reduktaza koja
katalizuje prvu fazu redukcije nitrata do nitrita. Izvori elektrona
za ovu reakciju mogu biti feredoksin i redukovani NAD(P).
Kod biljaka prvi davalac elektrona je NAD(P)H. Elektroni se
od NAD(P)H prenose preko FAD, citohroma b557 na krajnji
akceptor elektrona Mo koji se redukuje. Kod većine biljaka
ovaj enzim je lociran u citoplazmi. Nitrat-reduktaza je prvi put
1953.godine identifikovana i karakterisana u ekstraktima viših
biljaka.
NO3- + NAD(P)H + H+ → NO2- + NAD(P)+ + H2O
 Nitrit-reduktaza (Nir, EC 1.6.6.4) - je
oksidoreduktaza koja katalizuje redukciju nitrita
do amonijaka . Mr ovog enzima se kreće od 60
do 70 kDa. Nitrit-reduktaza je kod većine
biljaka locirana u hloroplastima, a kod
kukuruza je dokazana i u mezofilnim ćelijama.
Pominje se njeno nalaženje kod nekih biljaka i
u spoljnoj strani tilakoidne membrane. Izvor
elektrona za redukciju nitrita u fotosintetičkim
tkivima biljaka je redukovani feredoksin (Fd),
što upućuje na zaključak da su redukcija nitrita
i fotosinteza dva medjusobno vezana procesa.

NO2 + 6e- + 8H+ → NH4+ + 2H2O

  Glutamat-dehidrogenaza (GDH, EC 1.4.1.2) -
katalizuje sintezu glutamata reduktivnom
aminacijom -ketoglutarata sa amonijakom i
redukovanim nikotinamidskim dinukleotidom
(NADH ili NADPH).

COO- + COO-
NA D ( P ) H NA D ( P )
C O H C N H 3+
CH2 + N H 4+ CH2 + H 2O (5-50)
CH2 CH2
COO- COO-
-ketoglutarat l-glutamat
 Glutamin-sintetaza (GS, EC 6.3.1.2) -
katalizuje endergonu reakciju primarne
asimilacije azota odn. amonijaka u glutamin uz
učešće ATP (jednač. 5-51)
 Glutamat-sintaza (GOGAT, EC 1.4.1.13) -
katalizuje prenošenje amino-grupe sa
glutamina na -ketoglutarat pri čemu nastaju
dva molekula glutamata (jednačina 5-52).

- - -
COO COO + COO
+
NA D(P)H NA D(P)
HC NH 3 +
C O H C NH 3
(1)
CH 2 + CH 2 CH 2 (5-52)
(2) 2
CH 2 CH 2 CH 2
- Fdred Fd ox -
O C NH 2 COO COO

l-glutamin -ketoglutarat l-glutamat

 Transaminaze - su enzimi koji katalizuju
prenošenje amino-grupe sa jednog amino-
donora na mesto karbonilne grupe amino-
akceptora. Proizvodi ovih reakcija su nove
amino i ketokiseline. Kod biljaka su najviše
proučavane aspartat amino-transferaza (EC
2.6.1.1) i alanin amino-transferaza (EC
2.6.1.2), a reakcije koje katalizuju ovi enzimi su
date jednačinama 5-53 i 5-54).
 COO- COO-
H C NH3+ COO- (EC 2.6.1.1) COO- C O
CH 2 + C O H C NH 3+ CH2 (5-53)
+
CH 2 CH 2 CH 2 CH2
COO- COO- COO- COO-
l-glutamat oksalacetat l-aspartat -ketoglutarat

COO- COO-
H C NH3+ (EC 2.6.1.2) C O
COO -
COO - +
CH 2 + CH2 (5-54)
CH 2 C O HC NH 3+ CH2
COO- CH 3 CH 3 COO-
l-glutamat piruvat l-alanin -ketoglutarat
 Enzimi metabolizma CO2 - Najznačajniji
enzimi ove grupe su
 ribuloza-1,5-difosfat-karboksilaza
(Ribisko, RuDP-karboksilaza, EC
4.1.1.39) kod C3 i
 fosfoenolpiruvat-karboksilaza (PEP-
karboksilaza, EC 4.1.1.31) kod C4 tipa
biljaka.
Ribuloza-1,5-difosfat-karboksilaza (Ribisko, EC 4.1.1.39) - je
enzim koji katalizuje prvu reakciju u Kalvinovom ciklusu tj.
kondenzaciju ribuloze-1,5-difosfata sa CO2 iz atmosfere u
prelazni oblik 6-C intermedijera koji brzo hidrolizuje dajući dva
molekula 3-fosfoglicerata. Karboksilacija ribulozo-1,5-difosfata
data je jednačinom 5-55.

CH 2O P CH 2O P (5-55)
H 2O
C O
-
OOC C OH COO -
CHOH + CO2 C O 2 CHOH + H+
CHOH CHOH CH 2O P
CH 2O P CH 2O P 3-Fosfoglicerat
Ribuloza-1,5-difosfat 2-Karboksi-3-ketoribitol
1,5-difosfat
 Ovaj enzim je lokalizovan na strani stroma
tilakoidne membrane i verovatno je
najzastupljeniji protein u prirodi i čini oko
15% ukupnih proteina hloroplasta.
Molekulska masa Ribiska je oko 560 kDa, i
sadrži 8 velikih subjedinica (Mr 55 kDa) i 8
malih subjedinica (Mr 15 kDa) (slika 5-31).
Velika subjedinica ima katalitičku, dok
mala subjedinica ima regulatornu ulogu.
 Fosfoenolpiruvat-karboksilaza (PEP-
karboksilaza, PEPc, EC 4.1.1.31) - je enzim
koji katalizuje prvu reakciju fotoasimilacije odn.
fiksacije CO2 kod C4 biljaka koje imaju
karakterističnu anatomiju listova u tzv. Hatch-
Slake-Kortshakovom ciklusu. PEP-karboksilaza
katalizuje reakciju karboksilacije
fosfoenolpiruvata (PEP) do oksalacetata
(jednačina 5-57)
 Enzimi “gasioci” kiseoničnih radikala -

u biljkama kao proizvod normalnog ćelijskog

metabolizma, suše, niskih temperatura,
delovanja jonizujućeg zračenja, pesticida,
lekova, teških metala i sl. nastaju reaktivne
vrste kiseonika - tzv. kiseonični radikali. Kod
nekih biljaka koncentracija ovih reaktanata je
minimalna, dok je kod drugih uvećana i može
izazvati različite metaboličke poremećaje.
 Kiseonični radikali su štetni, jer uništavaju
strukture ćelijskih membrana peroksidacijom
lipida.
 Kiseonični radikali i njihovi intermedijeri nastaju
postepenom redukcijom O2 prema jednačini 5-
58.
O2 + e- → O2• - + e- + 2H+ → H2O2 + e- + H+ →
OH• + e- + H+ → H2O
 Enzimi indikatori temperaturnog stresa -
Biljke su često tokom vegetacije izložene
uslovima stresa (usled izmene klimatskih i
drugih ekoloških faktora) koji mogu izazvati
ogromne ekonomske gubitke. Zbog navedenog
započeta su intenzivna proučavanja enzima na
osnovu kojih bi se mogli odabrati otporni
genotipovi, kao npr. enzima galakto-lipaza,
malat-dehidrogenaza i dr.
 Malat-dehidrogenaza (MDH, EC 1.1.1.40) - je
oksidoreduktaza koja u citratnom ciklusu katalizuje
konverziju malata u oksalacetat (jednačina 5-73) ili pak
u Hatch-Slack-ovom ciklusu redukciju oksalacetata do
malata (jednačina 5-74).

COO- COO -
(M D H )
HO C H + NA D + C O + NA DH + H
+
(5-73)
CH 2 CH 2
COO- COO -
l-M alat Oksalacetat
Regulacija aktivnosti enzimskih
reakcija

 regulacijom aktivnosti enzima i

 regulacijom biosinteze
enzima

 Regulacija aktivnosti enzima - podrazumeva brojnost faktora

od kojih zavisi aktivnost enzima. Ona je uslovljena količinom
supstrata, prisustvom aktivatora i inhibitora, količinom metabolita,
vezivanjem enzima za različite ćelijske strukture itd., ali i uticajem
gasnog, temperaturnog, vodnog, svetlosnog i drugih režima
spoljne sredine.