TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - ĐH ĐÀ NẴNG

KHOA HÓA - NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC

ĐỀ TÀI:
CÔNG NGHỆ VI SINH TRONG
SẢN XUẤT ENZYME PROTEASE

GVHD : TS. LÊ LÝ THÙY TRÂM

NHÓM : 6
SVTH : TRẦN THỊ LÝ
PHẠM THỊ SEN
NGUYỄN BÍCH THÚY
TRỊNH THỊ XUÂN NHÂN
 MỤC LỤC

1. Tổng quan tài liê ̣u

1.1. Khái niê ̣m

1.2. Phân loại

1.3. Ứng dụng

1.4. Nguồn thu nhận

2. Sản xuất enzyme protease từ Aspergillus oryzae

2.1. Aspergillus oryzae

2.2. Quy trình công nghệ

2
1.Tổng quan tài liệu
1.1 Định nghĩa:

Protease là nhóm enzyme thủy phân có khả năng cắt liên kết peptide
(-CO-NH-) có trong polypeptide, protein và một số cơ chất khác thành
các amino acid tự do hoặc peptide phân tử thấp

3
1. Tổng quan tài liê ̣u
1.2. Phân loại:

4
1.Tổng quan tài liê ̣u
1.3. Ứng dụng:

● Trong công nghiê ̣p chế biến thịt, thủy sản

● Trong sản xuất bia, nước mắm
● Trong công nghiê ̣p sữa
● Trong công nghiê ̣p da
● Trong y học: phân hủy máu dông, làm thuốc tiêu hóa,...
● Trong các ngành công nghiê ̣p khác: xử lí rác thải, xử lí phim X
quang,sản xuất thức ăn gia súc...

5
1.Tổng quan tài liê ̣u
1.4. Nguồn thu nhận

● Tụy Tạng: pepsin, tripsin

01 ĐỘNG VẬT
● Dạ Dày Bê: renin
● Papain : Nhựa cây đu đủ
02 THỰC VẬT ● Bromelian : Chồi, vỏ dứa
● Ficin: Nhựa cây cọ

● Vi khuẩn: Bacillus subtilics

03 VI SINH VẬT ● Xạ khuẩn: Steptomyces grieus
● Nấm mốc: Aspergillus oryzae

6
2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.1. Aspergillus oryzae

● Nấm mốc giàu các enzym thủy phân nội bào và ngoại bào (amylase,
protease, pectinase…)
● Có hình thái, màu sắc gần giống với nấm sợi Aspergillus flavus,
nhưng không sản sinh độc tố gây ung thư như nấm sợi A. flavus.

Nấm mốc Aspergillus oryzae 7

2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.2. Sơ đồ quy trình công nghệ

8
 2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.1. Hoạt hóa và nhân giống

Nhân giống
Giống sản Hoạt hóa sản xuất
xuất Nhân giống

9
2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.2. Chuẩn bị môi trường nuôi cấy

Hấp thanh
Thành phần Làm nguội Đổ khay
trùng (118-
môi trường (30℃) (2-3cm)
125℃)

● Nguồn C, N: Cám gạo, tinh bột, chất béo, cellulose, protein,…

● Khoáng và các yếu tố kích thích sinh trưởng
● Có thể thêm trấu (tạo bề mặt tiếp xúc lớn, mỏng, xốp)
● Điều kiện phòng nuôi cấy: t=28-32℃, pH=6,5
● Thời gian từ 36-60h
10
2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.3. Nuôi cấy

❖ Áp dụng phương pháp nuôi cấy bề mặt

❖ Giai đoạn 1:
● Diễn ra trong 10-14h, ở nhiệt độ <30℃
● Nhiệt độ tăng chậm, môi trường còn rời rạc
● Giống mới bắt đầu thích nghi với môi trường nên phát triển chậm
● Sợi nấm và enzyme mới bắt đầu hình thành
● Yêu cầu: phải kiểm soát nhiệt độ <30℃

11
2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.3. Nuôi cấy

❖ Giai đoạn 2:
● Diễn ra trong 14-18h, nhiệt độ từ 29-30℃
● Các sợi nấm bắt đầu phát triển mạnh, chất dinh dưỡng giảm nhanh,
enzyme tạo ra là nhiều nhất
● Lượng O2 giảm, CO2 tăng
● Độ ẩm giảm, nhiệt độ tăng nhanh (có thể lên tới 40-45℃)
● Yêu cầu: cung cấp đủ oxi và duy trì nhiệt độ trong 29-30℃

12
 2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.3. Nuôi cấy

❖ Giai đoạn 3:
❖ Kéo dài trong 10-20h
● Qúa trình trao đổi chất yếu
dần, nhiệt độ môi trường giảm
● Bào tử bắt đầu hình thành và
lượng enzyme bị giảm xuống
● Yêu cầu: duy trì nhiệt độ ở
30℃

13
 2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.4. Nghiền

❖ Mục đích:
• Thu enzyme nội bào và ngoại bào
❖ Phương pháp
● Cơ học: Sử dụng chất trợ nghiền như cát,
thạch anh, bột thủy tinh,... (được rửa sạch và
sấy khô ở hơn 100℃)
● Vật lí, hóa học: Sóng siêu âm, dung môi
như glycerin, aceton,.
Thiết bị nghiền búa

14
2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.5. Trích li

❖ Mục đích: Hòa tan các enzyme thủy

phân và tách ra khỏi các vâ ̣t chất khác
trong dịch.
❖ Phương pháp:
● Dung môi được sử dụng là nước
● Cứ 1 phần thể tích enzyme thô sẽ hòa
tan với 4-5 phần thể tích nước
● Thiết bị trích li kiểu vít tải

15
2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.5. Trích li

❖ Yếu tố ảnh hưởng

● Tỷ lệ nước trích li
● Thời gian trích li: 30-40ph
● Nhiệt độ: Nhiệt độ tối ưu là 20-30℃
● Có thể đánh tơi chế phẩm trước khi trích li để tăng hiệu suất
2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.6. Lọc

❖ Mục đích:
● Thu dịch lọc đồng thời loại bỏ bã

Thiết bị lọc khung bản 17

2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.7. Kết tủa enzyme

❖ Mục đích:
● Tách riêng enzyme ra khỏi hỗn hợp dịch lọc
● Phương pháp:
Dịch enzyme thô Làm lạnh, đổ từ từ Tủa
Dung môi hữu cơ
(tránh mất hoạt tính enzyme) (độ ẩm > 70%)
(Cồn, sufat amon)

18
2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.7. Kết tủa enzyme

Thiết bị li tâm dạng đĩa

19
2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.8. Sấy

❖ Mục đích:
● Giảm hàm lượng ẩm
● Kéo dài thời gian bảo quản enzyme

Thiết bị sấy đông khô 20

2. Sản xuất enzyme protease từ A. oryzae
2.3. Thuyết minh quy trình công nghệ
2.3.9. Enzyme thành phẩm

Enzyme tinh sạch

Phối trộn
phụ gia

21
 Tài Liê ̣u Tham Khảo:

● Công Nghê ̣ Enzyme - Lương Đức Phẩm

● Công nghệ vi sinh vật và ứng dụng - Lê Gia Huy, Khuất Hữu
Thanh
● http://doc.edu.vn/tai-lieu/nghien-cuu-quy-trinh-san-xuat-enzyme-pr
otease-tu-vi-sinh-vat-11313/
● https://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/7416230

22