Biomateriais e Engenharia de Tecidos Artigo1stem Cell

BIOMATERIAIS E
ENGENHARIA DE
TECIDOS
LUCIANA DUARTE
2011
Título :Características biológicas das cél

ulas-tronco mesenquimais
 CARACTERÍSTICAS BIOLÓGICAS DAS CÉLULAS- TRONCO
MESENQUIMAIS
 ISO10993-1 15/OUT/2009

Agência Nacional de Vigilância Sanitária
Gerência-Geral de Tecnologia de Produtos para Saúde
GGTPS
GEMAT
Tecnologia de Materiais de Uso em Saúde
GEQUIP
Tecnologia em Equipamentos
GEVIT
Produtos de Diagnóstico In Vitro

PRODUTOS PARA SAÚDE
Resolução RDC nº. 185, de 22/10/2001
PRODUTO MÉDICO - produto para a saúde, tal como

equipamento, aparelho, material ou sistema de uso ou
aplicação médica, odontológica ou laboratorial,
destinado à prevenção, diagnóstico, tratamento,
reabilitação ou anticoncepção e que não utiliza meio
farmacológico, imunológico ou metabólico para
realizar sua principal função em seres humanos,
podendo entretanto ser auxiliado em suas funções por
tais meios.

PRODUTOS PARA SAÚDE

LEGISLAÇÕES APLICÁVEIS
 Lei nº. 6.360, de 23/09/1976 - Dispõe sobre a

vigilância sanitária a que ficam sujeitos os
medicamentos, as drogas, os insumos farmacêuticos e
correlatos, cosméticos, saneantes e outros produtos, e
dá outras providências
 Decreto nº. 79.094, de 05/01/1977 -

Regulamenta a Lei no 6.360, de 23 de setembro de
1976, que submete ao sistema de vigilância sanitária
os medicamentos, insumos farmacêuticos, drogas,
correlatos, cosméticos, produtos de higiene,
saneantes e outros.

LEGISLAÇÕES APLICÁVEIS
 Resolução RDC nº. 185, de 22/10/2001 - Dispõe

sobre o registro de produtos médicos na Agência
Nacional de Vigilância Sanitária – ANVISA
 Resolução RDC nº. 260, de 23/09/2002 – Regula

os produtos para saúde
 Resolução RDC nº. 97/00 - Define e caracteriza o

termo "grupo de produtos" e suas aplicações
 Resoluções Específicas – Ex.: DIU (Portaria DIMED

06/1984), Preservativos (RDC 03/2002), Derivados
ruminantes (RDC 305/2002 e RDC 68/2003)

CLASSIFICAÇÃO DE RISCO DE MATERIAIS
DE USO EM SAÚDE (RDC 185/01)
 CLASSE I – RISCO BAIXO

 CLASSE II – RISCO MÉDIO
 CLASSE III – RISCO ALTO
 CLASSE IV – RISCO MUITO ALTO

PRINCIPAIS ENSAIOS E
ESTUDOS PRÉ- CLÍNICOS
 Irritação / corrosão dérmica e de mucosas
 Sensibilização Dérmica e de Mucosas
 Implantes em Tecidos ou ósseos ( 105 dias)
 Pirogênio ( endotoxinas ) “ in vitro” e “ in vivo”
 Reatividade Biológica e Intra cutânea
 Toxicidade aguda e aguda sistêmica
 Toxicidade crônica
 Dl-50 Oral e dermal
 Hemocompatibilidade
 Hemólise
 Genotoxicidade
 Citotoxicidade

NATUREZA DE CONTATO
 DISPOSITIVO DE SUPERFÍCIE
PELE
MUCOSAS
SUPERFICIE CORROMPIDA

DISPOSITIVO INTRODUZIDO
COM COMUNICAÇÃO EXTERNA
 COMUNICAÇÃO EXTERNA
INDIRETO COM O SANGUE

TECIDO, OSSO OU DENTE
INTERNO A CIRCULAÇÃO SANGUÍNEA

DISPOSITIVO DE IMPLANTE
 IMPLANTE
TECIDO OSSEO
SANGUE
CARDIOVASCULAR

Caracterização dos artigos médios
TEMPO DE CONTATO
 A- LIMITADO MENOS DE 24HS

 B - PROLONGADO 24HS ATÉ 30 DIAS
 C – PERMANENTE MAIS DE 30 DIAS

Características biológicas das células-tronco
mesenquimais
Biological characteristics of mesenchymal stem cells

 Autores : Sergio P. Bydlowski, Adriana A. Debes, Luciana M. F.
Maselli,Felipe L. Janz. Faculdade de Medicina da Universidade de São
Paulo (USP) – São Paulo-SP
 Recebido: 20/04/2009 Aceito: 22/04/2009 Rev. Bras. Hematol. Hemoter.
2009;31(Supl. 1):25-35
 Revisão,serão abordados as principais características das células-tronco
mesenquimais ,marcadores moleculares e de membrana, as características
de divisão e de diferenciação, a heterogeneidade e as aplicações clínicas
potenciais.

CONCEITO CÉLULAS TRONCO
 Células-tronco são células indiferenciadas
 Apresentam uma série de características que as tornam
candidatas à utilização terapêutica.
 As principais características são a capacidade de
autorrenovação e de se diferenciarem em diversos tipos
celulares.
 Acreditam que tenham papel regenerativo em casos de lesão
ou injúria.
 Medula óssea foi a mais estudada, como fonte tanto de
células-tronco hematopoéticas quanto de células-tronco
mesenquimais

INTRODUÇÃO
 Células-tronco são células indiferenciadas
 As principais características das células-
tronco são: sua capacidade de
autorrenovação,mantendo seu estado
indiferenciado, reposição ativa de
população de maneira constante nos
tecidos; capacidade de se diferenciar em
diversos tipos celulares

Células estromais mesenquimais
multipotentes(MSC s)
 Grupo de células clonogênicas, presentes
no estroma da medula óssea, capazes de
diferenciação em várias linhagens de
células do tipo mesodérmico e,
possivelmente, em outros tipos celulares
não mesodérmicos, como células neurais
ou hepatócitos.

 Julius Clonheim, em 1867- FIBROBLASTOS –
REPARO DE COLÁGENO
 Fornecem o suporte do estroma para o
crescimento e diferenciação de células-
tronco hematopoéticas e para a
hematopoese
 0,01% a 0,0001% das células nucleadas
 Morfologia semelhante ao fibroblasto.

 Friedenstein ( Rússia), descobriu que as
MSCs aderem a placas de
cultura,assemelham a fibroblastos “in
vitro”, e formam colônias / UNIDADES
FORMADORAS DE FIBROBLASTO
 CAPLAN: Foi o primeiro a chamá-las de
Stem Cell

Células-tronco mesenquimais
X
Células-tronco embrionárias
 uma capacidade de diferenciação mais
limitada
 facilidade de isolamento destas células
 sua capacidade de propagação em
cultura
 não serem imunogênicas, podendo
teoricamente em transplantes alogênicos

Alogênico quando o doador e receptor são pessoas diferentes. O doador deve
ser compatível (a partir da tipagem do antígeno de histocompatibilidade = HLA)
ao receptor, podendo ser consangüíneo (geralmente irmãos) ou não
consangüíneos (através de bancos de medula)

Uma boa MSC !!!!
 Célula mononuclear com aderência
seletiva
 Expressão de marcadores de superfície
 Diferenciar em osso, gordura e cartilagem

Marcadores de MSC
 CD105,CD73 e CD90 estejam presentes,
 CD34, CD45, CD14, CD11b, CD79 , ou
CD19 e HLA-DR não sejam expressos em
mais de 95% das células em cultura.

Uma boa MSC !!!! Estudo é feito
pela exclusão de marcadores!
 CD45 (marcador de todas as células hematopoéticas),
 CD34(um marcador de célula-tronco hematopoética primitiva)
 CD11b (um marcador de célula imune) e glicoforina-A (marcador
de linhagem eritróide).
 Não expressam as moléculas coestimulatórias CD80, CD86 e
CD40, ou as moléculas de adesão CD31 (PECAM-1, expresso em
células endoteliais e hematopoéticas), CD18 (LCAMB), CD56
(NCAM-1)
 Expressam níveis variáveis de CD105 (endoglina-

FIBROBLASTO), CD73 (ecto-5'-nucleotidase- PROLIFERAÇÃO
CELULAR), CD90 estejam presentes

Stro-1- MARCADOR DE MSC
 Negativa para STRO 1- enzima secretada
por fibroblastos 1:10
 Positiva STRO 1 + CD 106 1:3
 Tenho um sistema de exclusão geral ,

porém a inclusão é diferenciada

Características das MSCs in vitro
 ISOLAMENTO:Gradiente de densidade para
obtenção de células mononucleares
 CULTIVO: soro fetal + aderência ao plástico
 Trocas de cultura – as células hematopoéticas
são removidas, heterogenicidade , fração
que se autorrenova = MSC fibroblastóides
fusiforme

MULTIPLICAÇÃO
 DOADOR
 PLAQUEAMENTO
 03 SEMANAS
12 A 15 PLAQUEAMENTOS
MULTIPOTENCIALIDADE
CÉLULAS DE ADULTOS

Diferenciação das MSCs
 Interação célula-célula
 Divisão celular
 Regulação gênica- EUCROMATINA,
Histona acetil transferase ( acetilação) e
histina-desacetilase ( remove acetila) ,
metilação ( inibe a expressão)

INDUTORES DE DIFERENCIAÇÃO CELULAR DE
MSC
 TGF-β( apoptose) TGF = Fator de Crescimento de Transformação
 PDGF = Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas e seu receptor
 EGF = Fator de Crescimento Epidérmico e seu receptor,
 IGF = Fator de Crescimento Tipo Insulina I e II
 VEGF = Fator de Crescimento Endotelial Venoso
 bFGF= Fator de crescimento básico para fibroblastos

TRANSCRIÇÃO
 MAPK e Smads fatores de transcrição Colágeno/cartilagem
 BFGF ou Wnt osteogênico / neural
 VEGF diferenciação endotelial
 Dexametasona, isobutil-metilxantina, insulina indometacina,
adipogênico expressam PPAR- γ2

Meios com baixa dimetil-sulfóxido (DMSO) neurônios
 5-azacitidina, anfotericina B e hidrocortisona mioblastos

MODELO DE REGULAÇÃO
DIFERENCIAÇÃO CELULAR
 CÉLULAS TRONCO : transcrição sem alteração fenotípica
 CÉLULAS COMPROMETIDAS: estímulos específicos, divisão

assimétrica

Células semelhantes às MSCs
 Medula óssea = varia com a idade
 adulto (tecido adiposo, pericitos, pele –
incluindo a derme – trabéculas ósseas,
periósteo, dente decidual, cartilagem
articular, membrana sinovial, fluido
sinovial, músculo esquelético)
 feto (líquido amniótico, placenta, fígado,
baço, timo,pulmão).

INCI:Rh - Oligopeptide-1
Efeito
Anti-envelhecimento / Anti-rugas /
Cicatrização
AplicaçãoCuidados com a pele / cuidado
do corpo Reduzir e prevenir linhas e rugas
ativamente gerar novas células da pele
- Melhorar o tom de pele que cheia de
vitalidade e energia
- Nutrir a pele que aparece mais suave,
mais brilhante e recupera seu aspecto
jovial
- Elimine as cicatrizes no rosto, formando
novas células da pele

Figura 1 - A neovascularização miocárdica dependente de STRO-1bright resulta na
melhoria integral dos parâmetros da função miocárdica. Injeção de células 0,2x106 e
1x106 STRO-1bright resultou em melhoria dependente da dose, da fração de ejeção e
encurtamento fracionário em duas a seis semanas, como medido pela ecocardiografia
feita e analisada por um técnico cego para o tratamento, comparativamente a animais
tratados com solução salina (p < 0,01) e animais tratados com células mononucleares (p
< 0,01) de medula óssea fresca, privada de STRO-1.
CMN-MO = células mononucleares de medula óssea; FE = fração de ejeção; EF =
encurtamento fracionário; IAM = infarto do miocárdio.

INDEFINIÇÕES
 Todas as etapas do processo
necessitam ainda ser definidas:
1. material utilizado (doador, tecido original, procedimentos de coleta, de
enriquecimento do meio, de separação);
2-processamento da cultura (densidade celular, número de passagens, meio
de cultura); aparelhos para cultura (qual o melhor sistema fechado;
3- utilização de métodos analíticos para detecção de compostos ativos
indesejáveis e impurezas);
4-controle de qualidade (condições de elegibilidade do doador, padrões
para o fenótipo e potencial funcional, determinação da segurança
microbiológica;
5-verificação da ausência de transformação durante o processo de cultura)


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Resolução RDC nº. 185, de 22/10/2001

PRODUTO MÉDICO - produto para a saúde, tal como

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 Lei nº. 6.360, de 23/09/1976 - Dispõe sobre a

 Decreto nº. 79.094, de 05/01/1977 -

Título :Características biológicas das cél

 Resolução RDC nº. 185, de 22/10/2001 - Dispõe

 Resolução RDC nº. 260, de 23/09/2002 – Regula

 Resolução RDC nº. 97/00 - Define e caracteriza o

 Resoluções Específicas – Ex.: DIU (Portaria DIMED

Título :Características biológicas das cél

 CLASSE I – RISCO BAIXO

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INDIRETO COM O SANGUE

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 A- LIMITADO MENOS DE 24HS

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Biological characteristics of mesenchymal stem cells

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consangüíneos (através de bancos de medula)

Título :Características biológicas das cél

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Título :Características biológicas das cél

 Expressam níveis variáveis de CD105 (endoglina-

Título :Características biológicas das cél

 Tenho um sistema de exclusão geral ,

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 CÉLULAS COMPROMETIDAS: estímulos específicos, divisão

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