m Jorge Gómez

m René Jimenez
m Neyder Contreras
m Javier Guarnizo
V àste estudio reporta el desarrollo de nanoemulsiones destina
dos a la administración intravenosa de la talidomida (THD). L
as formulaciones fueron preparadas por el método de emulsif
icación espontánea y optimizado con respecto a la talidomida
(0,01 a 0,05%, p/p), y emulsionante hidrofílico (polisorbato 80
; 0,5-4,0%, p/p) de contenido. Las formulaciones fueron evalu
adas sobre la apariencia física y la cristalización de drogas; t
amaño de la gota, potencial zeta y la prueba de drogas. Las f
ormulaciones fueron preparadas con uno de los polimorfos T
HD (ȕ- o Į-) y los cristales se caracterizaron por espectrosco
pia infrarroja por transformada de Fourier (FTIR) y difracción
de rayos X (DRX). Se observó que, independientemente del
polimorfo empleado (ȕ- o Į-), la cristalización de drogas se pr
oduce en la Į-forma.
 1. INTRODUCCIÓN
Durante los últimos años, THD se ha encontrado que presenta efectos
farmacológicos que sugieren su uso para el tratamiento de las aftas,
sepsis, enfermedad de Behcet y algunas enfermedades crónicas
degenerativas (como la enfermedad de injerto contra huésped (àICH) y el
lupus).
Algunas estrategias farmacéuticas se han descrito para aumentar la
estabilidad y la solubilidad de THD, tales como formación de complejos con
hidroxipropil-ȕ-ciclodextrina (Krenn et al., 1992), el intento de utilizar las
formas enantioméricas puras (àriksson et al., 2000) así como su asociación
con las compañías poliméricas.
Nanoemulsiones, se han utilizado durante años para la nutrición parenteral
y la administración de fármacos debido a su biocompatibilidad, estabilidad
relativa, la capacidad de solubilizar grandes cantidades de compuestos
hidrofóbicos, la capacidad de reducir la toxicidad de los fármacos
citotóxicos y la capacidad de proteger a las drogas de la hidrólisis y la
degradación enzimática en condiciones fisiológicas

 R C

La ?
 (THD) es un derivado del ácido glutámico que se utilizó

durante 1960 como un agente sedante no barbitúrico. Fue retirada debido a
los efectos tóxicos tales como la teratogenicidad y la neuropatía.
Actualmente, la FDA aprobó su uso para el tratamiento de las
manifestaciones agudas cutáneas del eritema nudoso leproso o la
prevención de recurrencias (tipo II) y el mieloma múltiple.

Las  
 poseen un tamaño de gota muy pequeño (entre 50 y

500nm) y baja polidispersidad que, generalmente, les confiere una alta
estabilidad cinética y apariencia translúcida.

 R C


   ? cuando la emulsión se forma al entrar en

contacto con los componentes del sistema, en ausencia (o poca)
agitación.

La 
   es un proceso de filtración que puede utilizarse para

concentrar una sustancia. Consiste en introducir la sustancia en una bolsa
de diálisis, la cual esta enterrada en un polímero seco y soluble en agua
que no pueda penetrar la membrana. Como consecuencia el disolvente
abandona la bolsa para equilibrarse con la fase seca externa.

àn general, 
  describe múltiples y posibles estados de una

única propiedad. àn ciencia de los materiales y en mineralogía, capacidad
de un material sólido de existir en más de una forma o estructura
cristalina, todas ellas con la misma composición de elementos químicos.
 ±.1 MTRI Y RCTIO

VLa talidomida estándar de referencia (àR) (99%) y materias primas (Į-y ȕ-

formas polimórficas)

V. Agua ultrapura se obtuvo de una Milli-Q ® aparato Plus (Millipore, Billerica,

àà.UU.).

VAcetonitrilo y metanol grado HPLC

Vaceite de oliva, aceite de soja y lecitina de soja (lipoidea S75 ®)

VAceite de ricino purificado se adquirieron de Sigma Aldrich

Vpolisorbato 80 y glicerol

Todos los otros productos químicos y reactivos fueron de grado analítico o HPLC.
 ±.± NÁII D CROMTOGR D UIDO

àl análisis se realizaron en una prominencia del sistema HPLC, que consistía

en:

Un     DGU-20A5, LC-20 
 , unSIL-20 Un

 ?  ??, unSPD-20AV ??  U  (fijado en 300nm),
unCBM-20A M
     ?    ?  C
solución, la versión1.24Service Pack 1(Schimadzu, la Corporación).

àl equipo empleado un Shimadzu®LCShim-pack CLC-ODS (M) 4,6mm×25cm

(250 ×4,6mmdi) la columna, volumen de inyección de20 mL, y la fase móvil
compuesta de acetonitrilo: buffer de acetato de amonio (pH 5,5; 10mM) (45:55,
v/v) en un flujo isocrático de 1,0 mL/min.

àste método fue validado previamente de acuerdo a las directrices ICH(ICH

Q2(R1), 2005) y resultó específico
 ±.3 DTRMINCIÓN D  OU IIDD D THD N
DIRNT CIT.

Para la determinación de la solubilidad de THD en diferentes aceites ,

cantidades excesivas de THD se han añadido al aceite de ricino,; a
triglicéridos de cadena media(MCT); aceite de oliva; aceite de soja, y
la mezcla de aceite de ricino: MCT(1:1) en frascos cerrados (por
triplicado ). Los frascos se mantuvieron en constante agitación
magnética a temperatura ambiente durante 24h.La muestra se
centrifuga a 15.000 rpm durante 120 minutos a 20 °C, una alícuota
del sobrenadante se diluye con una solución diluyente compuesta de
acetonitrilo y buffer de acetato de amonio(pH 5,5, 10mM) (90:10, v/v)
y Contenido de THD se ensayó por HPLC. La solubilidad de los dos
polimorfos THD(ȕo Į) se investigó.
 ±.4
R
RCIÓN D NNOMUION D THD
Las nano emulsiones fueron preparadas por emulsificación espontánea ([Yu et
al., 1993] y [al Bouchemal et al., 2004]).

Vla fase orgánica compuesta de etanol absoluto, el aceite (aceite de ricino,

10.0% p/p), emulsificante lipofílico (lecitina de soja, 3,0%, p/p) y THD (forma ȕ-
polimórfica), previamente homogeneizadas, fueron inyectadas en la fase
acuosa.

Vla fase acuosa, compuesta de agua, agente osmótico (glicerol, 2,25%, p/p) y
un emulsionante hidrofílico (polisorbato 80).

VSe somete todo bajo agitación magnética. La agitación magnética se mantuvo

durante 30 minutos para permitir que el sistema alcance el equilibrio. La
proporción solvente fue 2.1, etanol / agua. àl etanol y el exceso de agua se
eliminan por evaporación a presión reducida hasta un volumen de 10 ml. àl pH
se ajustó en 5.0 a 5.5 con HCl 0,01 M.

R
RCIÓN D NNOMUION D THD
Test
% (p/p)
Formulations

Aceite de Lecitina de Polisorbato

THD Aguaq.s.p.
castor soya 80
THD 0.01 0.01 10 3.0 ± 100
THD 0.015 0.015 10 3.0 ± 100
THD 0.02 0.02 10 3.0 ± 100
THD 0.05 0.05 10 3.0 ± 100
THD
0.01 10 3.0 0.5 100
0.01P0.5
THD
0.01 10 3.0 1.0 100
0.01P1.0
THD
0.01 10 3.0 2.0 100
0.01P2.0
THD
0.01 10 3.0 4.0 100
0.01P4.0
 ±
 
  
@
  


 

â p




 

 
    
 
 
        

   
   

  
 @   

 
     

 

 

 


    

Ú



 




  THD (método
HPLC 2
  
? 
?   

   
V àl tamaño medio de partícula
V Índice de polidispersidad.

à
 

   

 V Se midió la movilidad electroforética.

        

jjjjjjjjjjjjjjjjjj
 jjjjjjjjjjjjjjjjjj jjjjjjjjjjjjjjjjjj
 jjjjjjjjjjjjjjjjjj  



   
 

N  ! M
/"? !# 
ZS ZàN3600
V àl contenido de THD total de las
emulsiones se determinó mediante
el método de HPLC.

V 0,500 g de la emulsión se diluyeron

en acetonitrilo con buffer de acetato
de amonio y 20 µL de la solución
resultante se inyectaron en el HPLC.
V Por medio de la cual se
V obtuvieron las microfotografia dd
de las nanoemulsiónes de
V THD.
V Se uso un viscosímetro automático Sch
ott Gerate AVS 350.
V àquipado con un capilar Ic (k=0,035).
 @
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l r  f r 
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i
  r ti ( , , / ) f r  r
tri 
it:

V   óp? $

Microscopio óptico Zeiss Primo/cámara digital Star Canon A650IS

VT-IR.
àn un rango de 3.800 a 500 cm-1

àspectrofotómetro BX, Perkin àlmer.

V D   R  X.
V @
  l i
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 (
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  t itril ,  l i

  tri.
V Se simuló la administración 250 mL de THD 0.01P0.5 (2
5 mg de THD).
V Para propósitos de comparación, se simularon dosis ora
les de 25 mg y 200 mg de THD.


         
V àl análisis estadístico de las diferencias entre los
distintos tratamientos se realizó mediante análisis
de varianza (ANOVA) o una prueba de  
 
para datos apareados, según sea necesario.
 3.1 D?  


  
THD 
? .
‡ A. oleico (aceite de oliva).
Condujo a la selección de los ‡ A. ricinoleico (aceite castor).
aceites para la formulación. ‡ A. linoleico (aceite de soya).
‡ A. caprico y caprílico (MCT).

Los polimorfos de THD

presentaron mayor
solubilidad en aceite de
castor.

Se tiene en cuenta una

segunda opción, mezcla de
aceite de castor/MCT
(50:50).
3.±
      ?!    

 THD
Para la preparación de las
CITIN D OY

formulaciones se escogió el
3,0%
agente emulsificante (Lecitina)

Producto lechoso de apariencia lechosa y

estable. Con un contenido de THD
optimizada en cuanto al polimorfo ȕ (0.01%,
0.015%, 0.02% y 0.05%).

Se tienen en cuenta tres (3) parámetros para la determinación de la

estabilidad de la formulación.

1. T  % 
? (Tamaño TICTORIO

de las emulsiones entre 112-196
nm)
±.   
    &
'
(
(Muestra un índice de E
I E
aproximadamente de 0.250 )
(E 'E(
E

3.
?
!?
(carga negativa dad por
el contenido de
fosfolípidos- lecitina).
‡ Formulaciones con un contenido > 0.02 % presentaron un progresivo
descenso de la concentración de THD después del 7 día de
preparado.

‡ De igual forma al día 60 presentaron estadísticamente descenso

significativos.
3.3 C  ?!  
 ?
! 
 THD
D 

‡ Imágenes de microscopía óptica  ?
  
de los cristales (THD 0,05%) 
? (

)2,    
 ? ? 
.
 Para el polimorfo Į ĺ 3200 cm-1 y 3100 cm-1
(NH); 860 cm-1 (CH)
‡ àspectro de FT- Para el polimorfo ȕ ĺ 3250 cm-1 (NH); 750 cm-1
IR (CH)
Para los cristales de las nanoemulsiones ĺ
3200 cm-1 (NH); 860 cm-1 (CH)
‡ Diagrama de RX ĺ Demuestra la hipótesis que los cristales de las
nanoemulsiones crecen como los cristales del polimorfo Į.
V Ningún cambio
significativo se
observó en est
os parámetros
durante 60días
de almacenam
iento.
Una disminución significativa (*) del contenido de THD se observó después de 45días
como polisorbato 80 se empleó en concentraciones más altas(>1,0% p/p).

Sobresaturación Nucleación Cristalización

 àsta formulación presenta una
viscosidadde2,9mPa s, un
valor aceptable para la
administración parenteral, es
decir, por debajo del3,9mPa s

Microfotografía electrónica de transmisión de la nanoemulsión THD con

polisorbato0,5%: A,300kx, yB, 500k×; nanoemulsión en blanco con
polisorbato0,5%: C, 300kx, yD, 300k×.
 Acetato de amonio1mM
pH5.5 fue elegido como
medio de liberación Los
perfiles de disolución de
solución de acetonitrilo
THD0.01P0.5
yTHD0,01% fueron
evaluados durante 240
minutos.

àn los perfiles de disolución in vitro de nanoemulsión optimizada (línea punteada) y

THD disuelto en acetonitrilo (línea negro) utilizando masiva de diálisis inversa de
equilibrio de saco. Media S.D, n = 3.
 Oral de 200mg

IV de 2h infusión de 25mg

Oral de 25mg.
m Las formulaciones preparadas con aceite de ricino (10% p/p), lecitina (un 3,0%,
p /p) y cantidades crecientes de THD (0,01 a 0,05%) presentaron tamaño de la
gota, el índice de polidispersidad y el potencial zeta factible iv la administración.
m Sin embargo, la cristalización de drogas se observó para la formulación de may
or contenido y se demostró que la THD siempre se precipita en forma Į-polimor
fa.
m Una disminución significativa del contenido de THD se observó para la formulac
ión del 0,01% THD a los 60 días de almacenamiento y la adición de polisorbato
80 mejora la estabilidad de esta formulación sólo en un 0,5% (p/p) nivel.
m Concentraciones Superiores de polisorbato 80 llevó a una disminución significa
tiva de la carga de droga, posiblemente al facilitar la interacción de drogas con l
a fase acuosa.
m àl perfil de disolución de la formulación optimizada fue similar a la de una soluci
ón de THD.
m La simulación farmacocinética de la infusión intravenosa de 250 ml de la formul
ación seleccionada (0,01% THD) ha demostrado que la administración parenter
al de una dosis tan bajas como 25 mg puede producir concentraciones plasmáti
cas terapéuticas.