TEKNIKA IMUNOENZIMATIKE

ELISA
 PERKUFIZIMI
• ELISA eshte teknike imunologjike qe perdoret
per te dozuar Antitrupa ose Antigene.

• Si shenjues perdoren enzima si: Peroksidaza

dhe Fosfataza alkaline.

• Pucetat prej polistireni ( si ne figure) sherbejne

si suport i ngurte. Paretet e brendshme te
pucetave vishen me Antigen kur i panjohur
eshte Antitrupi.

• Paretet vishen me Antitrupa kur i panjohur

eshte Antigeni.
 ELISA KOLORIMETRIKE
• Kjo teknike perdoret per te dozuar Antitrupat ne
serum.

• Te fiksuar ne paretet e brendshme te eneve prej

polistireni jane Antigenet.

• Ne kete teknike shenohet me enzime nje Anti-

imunoglobuline ( Antitrup i dyte )

• Ky tip ELISE zhvillohet sipas modelit Sandwich.

• Perdoret per te dozuar Antitrupa anti -HIV,

Antitrupa autoimune.
 ELISA ME KOMPETICION
Dozimi i Antigeneve

Antitrupi këtu është i palëvizshëm, i fiksuar në një suport të ngurtë (për shembull
faqja e epruvetës, grimcat plastike).

Ai do të reagojë: nga njëra anë me një Antigjen te shënjuar me një enzimë, nga ana
tjetër me një antigjen jo te shënjuar i pranishëm në një lëng biologjik. Sa më e lartë
të jetë sasia e Antigenit te pa shenuar aq më pak i rëndësishëm është formimi i
kompleksit midis Antitrupave dhe Antigjenëve të shënjuar. Pasi hartohet kurba
standart me solucione kontrolli (antigjen të njohur), mund të përcaktohet më tej
sasia e antigjenit (veçanërisht hormone) që përmbahet në lëngun e panjohur.
ELISA ME KOMPETICION

• Perdoret per te dozuar molekula

te vogla si T3, T4, Progesteron.
 ELISA SANDWICH

• Dozimi i Antigeneve

• Ne kete metode nuk përdoret fenomeni e konkurimit.

Antigjeni që duhet të përcaktohet inkubohet në fillim me një sasi të caktuar të

Antitrupit korrespondues të fiksuar në një suport. Pastaj vihet në veprim me
një Antitrup te shënuar me një enzimë identik si ai i fiksuar ne suport. Ai
fiksohet mbi hapësirat e Antigjenit të lëna të lira gjatë reaksionit të
mëparshëm. Veprimtaria enzimatike e fiksuar në këtë mënyrë mbi kompleksin
është drejtpërdrejtë funksion i sasisë së Antigjenit.
Leximi i rezultatit
• ELISA eshte teknike qe ben vleresim sasior. Per kete na ndihmojne
perdorimi i standarteve ( solucione me perqendrime te njohura).

• Ne perfundim te procedures zhvillohet nje ngjyre qe matet ne fotometer.

• Matja behet ne 450 nm. Skanohet pllaka e ELISES. Lexohet Densiteti

optik i seciles pucete. Software ben llogaritjen e titrit ne perputhje me
Densitetin optik bazuar ne kurben e ndertuar me ndihmen e standarteve.
 Radioimunologjia
• Eshte teknike imunologjike ne te cilen komplekset Ag - At vihen ne dukje nga perdorimi
i lendeve radioaktive.

• Kjo teknike perdoret per te dozuar Antigen ose Antitrupa.

• Dozon molekula qe normalisht ndodhen ne organizem si hormonet e tiroides.

• Dozon molekula qe prodhohen ne kushte te caktuara patologjike si markuesit

tumorale.

Dozon molekula te rendit mikrogram, nanogram qe teknikat kolorimetrike nuk i dozojne.

Radioimunologjia eshte nga teknikat me te ndjeshme.

SHENJUESIT RADIOAKTIVE

• Si shenjues radioaktiv perdoret kryesisht Jodi radioaktiv (J 125) qe ka

ndjeshmeri mjaft te mire por nje gjysem jete te shkurter ( 60 dite).

• Lendet radioaktive perbejne rrezik ndotje radioaktive te ambjentit.

• Lendet radioaktive nuk kane qendrueshmeri te larte.

 PARIMI I PUNES SE RADIOIMUNOLOGJISE
Dozimi i Antigeneve

• Sasia e Antitrupit mbahet konstante.

• Parametrat variabel jane Antigeni i panjohur ne serum dhe Antigeni i njohur dhe i shenuar me
lende radioaktive. Te dy Antigenet kane specificitet per Antitrupin.

• Antigeni i pashenuar dhe Antigeni i shenuar do te konkurojne midis tyre per te njejtin Antitrup.

• Ne fillim vihet ne kontakt Antigeni i panjohur me Antitrupin. Me pas shtohet Antigeni i njohur
dhe i shenuar. Matet radioaktiviteti i cili eshte ne perpjestim te drejte me perqendrimin e
Antigenit te panjohur.

• Ag + Ag* +At Ag-At +Ag*At

AVANTAZHET E RIA

• RIA gezon specificitet te larte

• RIA gezon sensitivitet te larte

• RIA dozon sasi te vogla te Antigenit dhe Antitrupit

DISAVANTAZHET E RIA

• Ne RIA nevojitet personel i trajnuar.

• RIA duhet te aplikohet ne mjedise me mbrojtje te posacme per personelin.

• Reagentet e RIA nuk kane qendrueshmeri te larte

• Per keto arsye RIA po zevendesohet me metoda te tjera po aq te ndjeshme

por me te pastra per ambjentin dhe me nje qendrueshmeri me te larte.

KEMILUMINISHENCA
PERDORIMET E RIA
• RIA eshte nje nga teknikat imunologjike qe ka perdorim :

• Per dozimin e hormoneve

• Per dozimin e medikamenteve

• Per dozimin e markuesve tumorale

• Imunologji, per dozimin e Antitrupave ne alergjite ushqimore dhe

Antitrupa te tjere.

• Per dozimin e Antigeneve virale, si HBsAg.