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E + S
SE
E + P
Protenas con actividad cataltica de los seres vivos. Unidades del Metabolismo Regulan la vel. de las reac. qum. espontneas ( G-). No promueven reacciones no-espontneas ( G +). Incrementan la Vel. De reaccin 103 a 1012 veces sin afectar el sentido de la reaccin. No forman parte del producto de la reaccin.
PROPIEDADES GENERALES
AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIN
De 106 to 1012 veces vs sin enzima. An ms rpido que los catalizadores qumicos.
CONDICIONES DE REACCIN
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC) pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5 Presin atmosfrica normal
CAPACIDAD DE REGULACIN
Por concentracin de sustrato Por concentracin de enzima Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato) Por inhibidores no competitivos (modificacin covalente de la enzima) Por regulacin alostrica
HEnzima
Substrato de glucosa
Sitio de enlace
La unin del sustrato produce un cambio conformacional de la enzima hexoquinasa (cinasa), la cual es monomrica.
Concent.
Tiempo
ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
Vo = V
mx a
[S]
Km + [S]
Vmx a
KM
Km de algunas enzimas
ENZIMA Catalasa Hexoquinasa SUSTRATO H2O2 ATP D-Glucosa D-Fructosa Anhidrasa carbnicoa Quimotripsina -Galactosidasa Treonina deshidrogenasa HCO3Gliciltirosinilglicina N-Benzoiltirosinamida D-Lactosa L-Treonina Km (mM) 25.0 0.4 0.05 1.5 9.0 108.0 2.5 4.0 5.0
ATP + Glucosa ADP + 6-fosfato de glucosa 2 Rutas Desplazamiento Simple, los 2 S se unen a la E A + B + E EAB C + D
Determinacin Cuantitativa de la Cintica Enzimtica 1. La reaccin global 2. Procedimeinto analtico para determinar elS que desaparece o el P que aparece 3. S el E requiere Cofactores (ines o coenzimas) 4. La dependencia de la actividad enzimtica con la [S] o se la KM del S. 5. El pH ptimo 6. Un intervalo de temperatura en la que la E es estable y muestra actividad elevada.
Enzima Pepsina
Vo
3 pH
11
14
Ribonucleasa
Vo
Vo
Vo
37 85 Temperatura oC)
10
50 100 Coenzima
10
1.0 Unidad de Actividad Enzimtica (U): La cantidad que transforma 1.0 mol (10-6 M) de S /min, a 25 0C, en las condiciones de medida ptima. Actividad especfica: Es el no. de U de una E / mg de protena. Es decir: una medida de la pureza de la E. Al purificarla, el valor llega a un mximo y es estable. Nmero de recambio No. de molculas de S transformadas /unidad de tiempo, por una molcula de E ( o por un solo sitio cataltico) Enzima No. de Recambio 36 000 000 1 000 000 12 000 1 240
Vmx ? a KM?
pendiente
Grfica de Eadie-Hofstee
Vmx a
Vo
V max
KM
Vo [S]
Cuando: Vo= Vmax Todos los sitios activos estn ocupados y no hay molculas de E libre. KM= [S] S... Vmax KM representa la cantidad de sustrato necesaria para fijarse a la mitad de la E disponible y producir la mitad de la Vmax KM representa la concentracin del sustrato en una clula
Inhibidores
Reactivos qumicos especficos que pueden inhibir a la mayor parte de las enzimas. Irreversibles INHIBIDORES Reversibles
Inhibidor Irreversible
Inhibicin permanente Unin irreversible por medio de enlaces covalentes. Modificaciones qumicas de los gps. catalticos. Modificada la enzima, est siempre inhibida. Para distinguirlo de los reversible se someten a dilisis y si no se separan enzima e inhibidor, ste es permanente.
Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo (DFP) Acetilcolina
Acetilcolinesterasa
Acetato + Colina
Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo (DFP)
Serina
Iodoacetamida
Cistena Histidina
Inhibidor Reversible
La unin del inhibidor y la enzima es reversible. Al quitar el inhibidor del medio, se recupera la actividad. Hay 3 tipos: Competitiva No Competitiva Acompetitiva (Alostrica)
Antibiticos Insecticidas Hervicidas Venenos Diferentes Medicamentos Inhibicin enzimtica Dolor Inflamacin Infecciones virales Cncer
Inhibicin Competitiva
Inhibidores Competitivos
Malonato Sulfas Deshidrogenasa del cido succnico Infecciones microbianas
Inhibicin No Competitiva
El inhibidor NO se une al sitio activo
Cinticas de Inhibicin
1 V
Competitivo Vmx igual a KM diferente
No inhibitor
1/[S]
Inhibicin acompetitiva
El inhibidor se une a una SUBUNIDAD reguladora