PRUEBAS SEROLÓGICAS

• DENGUE
• CHINKUNGUYA
• PRUEBA DE HIV
• PRUEBA DE HEPATITIS A,B,C
 PRUEBA RÁPIDA PARA LA DETECCIÓN
CUALITATIVA DE ANTÍGENO NS1, LOS
ANTICUERPOS IgG E IgM DEL VIRUS DEL DENGUE
GENERALIDADES:
• Los virus de Dengue, trasmitidos por el
mosquito Aedes aegypti y los mosquitos
Aedes albopictus, se encuentran
ampliamente diseminados por todas las
áreas tropicales y sub tropicales del
mundo.
• Se conocen cuatro serotipos distintos (virus
de dengue 1, 2, 3 y 4).
• Sin embrago, si el paciente es infectado
por segunda vez con un serotipo diferente,
es mucho mas probable que ocurra una
enfermedad mas severa, fiebre de dengue
hemorrágico o síndrome de shock por
dengue.
GENERALIDADES:

• Para el manejo del paciente son

esenciales pruebas rápidas y confiables
de infecciones primarias y secundarias
de dengue.
• La infección primaria de dengue se
caracteriza por fiebre entre moderada y
alta, dolor de cabeza, dolor muscular y
erupción cutánea.
• La respuesta inmune incluye la producción
de anticuerpos de IgM hacia el quinto día
de los síntomas, y persiste por 30-60 días.
GENERALIDADES:

• Los IgG aparecen el día 14 y persisten por

toda la vida.
• Las infecciones secundarias suelen
producir fiebre alta y en algunos casos
eventos hemorrágicos y falla circulatoria.
• Las infecciones secundarias presentan una
elevación de los IgG dentro de los 1-2 días
subsiguientes a la aparición de los
síntomas e inducen respuesta de IgM
después de 20 días de haberse adquirido la
infección
USO DE LA PRUEBA

• El Casete de Prueba Rápida de Dengue

(SangreEntera/Suero/Plasma) es un
inmunoensayo cromatográfico rápido para
la detección cualitativa del antígeno NS1 y
los anticuerpos IgG e IgM del virus del
dengue en sangre entera, suero o plasma
humano como ayuda en el diagnóstico de
infecciones por dengue.
FUNDAMENTO
• Es un inmunoensayo cualitativo basado en membrana para la detección de
anticuerpos contra Dengue
• Esta prueba contiene dos componentes:
– IgG
– IgM.
• En el componente IgG:
– Anticuerpos anti IgG humano están recubiertos en la región de la línea
de prueba IgG.
– Durante la prueba, la muestra reacciona con partículas recubiertas de
antígeno Dengue que se encuentran en el casete de prueba.
– La mezcla luego migra hacia arriba en la membrana
cromatográficamente por acción capilar y reacciona con el anticuerpo
anti-IgG humano en la región de línea de prueba IgG.
– Si la muestra contiene anticuerpos IgG contra dengue, una línea de color
aparecerá en la zona de la prueba de IgG.
FUNDAMENTO

• En el componente IgM:
– Anticuerpos anti IgM humano están recubiertos en la
zona de la prueba IgM.
– Durante la prueba, la muestra reacciona con el
anticuerpo anti IgM humano.
– Si la muestra contiene anticuerpos IgM contra Dengue,
estos reaccionaran con el anticuerpo anti-IgM humano y
las partículas recubiertas con antígeno Dengue que se
encuentran en el casete de prueba; este complejo es
capturado por el anticuerpo anti IgM humano, formando
una línea coloreada en la región de la línea de prueba
IgM.
FUNDAMENTO
• La Prueba Rápida en Casete para Dengue NS1​
– Es un inmunoensayo cualitativo basado en membrana para la detección
del antígeno de Dengue NS1 en sangre entera, suero o plasma.
– Durante la prueba, la muestra reacciona con un conjugado-Anticuerpo
contra Dengue en el casete de prueba.
– El anticuerpo conjugado con oro se unirá al antígeno de dengue en la
muestra, que a su vez se unirá con el anticuerpo Anti Dengue NS1
recubierto en la membrana.
– A medida que los reactivos se mueven a través de la membrana, el
anticuerpo anti Dengue NS1 en la membrana se unirá el complejo
antígeno anticuerpo causando la formación de una línea rosa pálido u
oscuro en la zona de prueba de la membrana.
– La intensidad de las líneas variará dependiendo de la cantidad de
antígeno presente en la muestra.
REACTIVOS

• ​
La Prueba Rápida en Casete para Dengue IgG/IgM: ​
– Contiene Partículas de oro coloidal conjugadas con antígeno
Dengue, anticuerpos anti-IgM humano, anticuerpos anti-IgG
humano recubiertos en la membrana.
• La prueba Rápida en Casete para Dengue NS1:
– Contiene partículas coloidales conjugadas con anticuerpo anti
Antígeno de Dengue, anticuerpos anti-antígeno de Dengue
recubiertos en la membrana.
ALMACENAMIENTO

– La humedad y la temperatura pueden afectar los resultados de manera negativa​

Almacene el producto en su empaque sellado a temperatura ambiente o
refrigerado (entre 2 y 30° ) hasta la fecha de vencimiento indicada en el
empaque.
– La prueba deberá permanecer en el empaque sellado hasta que sea usada.
– NO CONGELAR.
– No usar después de la fecha de expiración.
PROCEDIMIENTO

– La prueba, la muestra, el buffer, debe alcanzar temperatura ambiente (15-30 °C)

antes de comenzar el procedimiento
– Permita que el sobre alcance una temperatura ambiente antes de abrirlo.
– Remueva el dispositivo del sobre sellado y úselo dentro de la próxima hora.
– Coloque el casete en una superficie limpia y nivelada.​
 PROCEDIMIENTO
2. Para IgG/IgM: ​
• Utilizando un gotero:
• ​Muestras de ​Suero o Plasma​:​ – Sostener el gotero de 5μl verticalmente, llenar el
1. Para NS1: gotero con la muestra hasta la línea de llenado
(aproximadamente 5μl)
• Coloque el gotero de 25 μl en
– Transfiera la muestra al pocillo de muestras del
posición vertical
casete de prueba
• Añadir 3 gotas de suero o plasma
– Añadir 1gota de buffer (aproximadamente 40μl)
(aproximadamente 75 μl) al pocillo e inicie el temporizador.
demuestra,
– Evite que queden atrapadas burbujas de aire en
• Iniciar el temporizador. el pocillo de muestra.
• ​Utilizando una micropipeta:
– Llenar la micropipeta y dispense 5μl desuero o
plasma al pocillo de muestra del casete de
prueba,
– añadir1gotade buffer (aproximadamente 40 μl)
– Iniciar el temporizador.
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
• ​NS1 POSITIVO​:
– Dos líneas de color aparecen. Una línea de color debe estar en
la región de control (C) y otra línea de color debe estar en la
región de prueba (T).
• IgG e IgM POSITIVO​:
– Tres líneas aparecen.
– Una línea de color debe estar en la región de control (C), y dos
líneas de color deben aparecer en la región de la línea de
prueba IgG y en la región de línea de prueba IgM
respectivamente.
– Las intensidad es de color de las líneas no tienen que coincidir.
– Un resultado positivo para anticuerpos IgG e IgM, es
indicativo de una infección primaria por Dengue en etapa final
y una infección secundaria por Dengue en etapa inicial.
RESULTADOS

• IgG POSITIVO​:
– Aparecen dos líneas.
– Una línea de color debe estar en la región de control (C), y
una línea de color debe aparecer en la región de la línea de
prueba IgG.
– El resultado es positivo para anticuerpos IgG específicos
contra el virus Dengue y es indicativo de una probable
infección de Dengue secundaria.
• IgM POSITIVO​:
– Aparecen dos líneas.
– Una línea de color debe estar en la región de control (C), y
una línea de color aparece en la región de la línea de
prueba
RESULTADOS

• La infección primaria de Dengue se caracteriza por la presencia de anticuerpos detectables de IgM a partir
de los 3 a 5 días después de la aparición de la infección.
• La infección secundaria de Dengue se caracteriza por la elevación delos anticuerpos específicos de tipo
IgG anti-Dengue.
• En la mayoría de los casos, esto va acompañado de niveles elevados de IgM
Gracias