KROMATOGRAFI GAS

Abdul Rohman
Department of Pharmaceutical Chemistry,
Faculty of Pharmacy UGM
2023

08/27/2023 1
08/27/2023 2
 MATERI PRESENTASI

• Introduction
• GC instrumentation
– Carrier gas
– Injection mode
– Column and stationary phase
– Column efficiency
– Solute detection
• Derivatization for GC analysis
• Development in GC analysis
– Fast chromatography
– (two dimensional GC x GC)
• GC-MS
• Application of GC in Gas analysis
08/27/2023 3
 REFERNSI YANG DISARANKAN

Aplikasi:
Journal of Chromatography A (Elsevier)
Journal of Chromatography B (Elsevier)
Biomedical Chromatography (Wiley)
Chromatographia (Springer)
Journal of Liquid Chromatography and related techniques (Taylor & Francis)
 PENDAHULUAN

• Kromatografi merupakan teknik pemisahan secara fisika-

kimia yang melibatkan penggunaan fase diam dan fase
gerak.
• Kromatografi merupakan teknik analisis yang sangat
powerful karena mampu menjalankan 3 fungsi sekaligus:
– Analisis kualitatif (tR)
– Analisis kuantitatif (peak area, peak height)
– Preparatif (jarang digunakan dalam kromatografi gas, tetapi
sering dalam KLT atau KCKT)
• Dalam kromatografi gas, maka fase gerak yang
digunakan berupa gas.
 PEMBAGIAN KROMATOGRAFI

Kromatografi planar
Kromatografi berdasarkan kolom (column based chromatography)
 Types of Gas Chromatography

There are two modes of gas

chromatography:
• Gas-liquid chromatography (GLC), which employs a
liquid stationary phase  Partition

• Gas-solid chromatography (GSC)  Adsorption

Partition = Absorption vs Adsorption
GC ELUTION MECHANISM

• Gas chromatography (GC) is a separation technique

where volatile, thermally stable solutes migrate through
a column containing a stationary phase

• Solutes are therefore generally eluted in order of

increasing boiling point, except where there are specific
interactions with the stationary phase.

Fase gerak Tekanan uap

Distribusi sesuai
Komponen dengan K dan suhu

Fase diam Afinitas pada fase diam

Chromatographic Process
Typical GC chromatogram
Single Chromatogram
Chromatogram and Terms
 Advantages of GC

• Fast analysis, typically minutes

• Efficient, providing high resolution
• Sensitive, easily detecting ppm and often ppb
• Non-destructive, making possible on line coupling to MS
• Highly precise quantitative analysis, with typically RSD
of 1 – 5 %
• Require small samples, typically µL
• Reliable and relatively simple
• Inexpensive
 Disadvantages of GC

• Limited to volatile samples

• Not suitable for thermally labile samples
• Fairly difficult for large, preparative samples
• Require spectroscopy, usually mass-
spectrometry for confirmation of peak
identity
 THE USES OF GAS CHROMATOGRAPHY

08/27/2023 16
GC Instrumentation
Components of GC instrument

• 1. Carrier gas; 2. Flow control; 3. Sample inlet

• 4. Column; 5. Oven (controlled temperature
zones); 6. Detector; 7. Data systems.
MOBILE PHASE (FASE GERAK/GAS PEMBAWA)

• The mobile phase is known as the carrier-gas because

its sole purpose is to transport solutes through the
column, thus not contributing to chromatographic
selectivity.
• It should be inert, non toxic, non flammable and
preferably cheap.
• Helium and nitrogen are invariably used routinely,
the former with capillary (open tubular) columns and
the latter with packed columns.
MOBILE PHASE (FASE GERAK/GAS PEMBAWA)
FLOW CONTROL and MEASUREMENT

• Pengukuran dan pengendalian gas pembawa

sangat penting baik dari sisi efisiensi kolom
atau dari sisi analisis kualitatif.
– Efisiensi dapat dilihat dari kecepatan linier gas
pembawa yang mampu memberikan nilai H yang
optimal
– Kecepatan gas juga menentukan reprodusibilitas
waktu retensi  Identifikasi atau analisis kualitatif.
GAS PEMBAWA DAN DETEKTOR

Gas pembawa Detektor

Hidrogen Hantar panas
Helium Hantar panas
Ionisasi nyala
Fotometri nyala
Termoionik
Nitrogen Ionisasi nyala
Tangkap elektron
Fotometri nyala
Termoionik
Argon Ionisasi nyala
Argon + metana 5% Tangkap elektron
Karbon dioksida Hantar panas
Sample injection

• Alat untuk menginjeksikan sampel dapat

dilakukan dengan syringe atau dengan teknik
autosampler
Autosampler
 Metode Injeksi pada GC
• There are a number of injections methods
Split injection
Splitless injection
On-column injection
Flash-vaporization
Automated sample injection
Headspace analysis
Metode Injeksi dan jenis kolom
GC injection systems
 Split injection

• Split injection is used with

capillary columns to
prevent overloading the
stationary phase with
sample.
• Sensitivity is less than
with splitless injection
because of the very small
fraction of injected
sample reaching the
column
 Splitless injection

• Tidak ada pemecahan sampel yang diinjeksikan

• is used with capillary columns when samples
contain low levels of some components, and
maximum sensitivity is required.
• Detektor GC adalah detektor massa, sehingga
splitless injectionlebih sensitif karena tidak ada
yang terbuang.
 On-column injection
• is used with both capillary and packed
columns to minimize the possibility of
the decomposition of thermally labile
solutes as well as providing increased
sensitivity.

• It is also ideal for quantitative analysis.

 Flash-vaporization

• is primarily used with packed

columns and is a means of
rapidly volatilizing samples in a
zone heated 20–50 oC above
the column temperature to
provide as narrow a band of
vapor as possible.

• However, there is a risk of

thermally degrading labile
solutes.
COLUMN AND STATIONARY PHASE

• Kolom merupakan tempat terjadinya proses

pemisahan karena di dalamnya terdapat fase
diam. Oleh karena itu, kolom merupakan
komponen sentral pada KG.
• Ada 2 jenis kolom pada KG:
Kolom kemas (packing column)
kolom kapiler (capillary column).
30 m x 0,53 mm x 0,88 mm OV-101 5% pada Chromosorb 80/100

diameter Jenis fase Jenis pendukung

panjang kolom dan konsentrasi
ketebalan
lapisan
Packed column dan open tubular column
Packed column dan open tubular column

Contoh kolom
kemas (atas)
dan kolom
kapiler
(bawah)
(direproduksi
atas kebaikan
Alltech).
Packed column dan open tubular column
Kolom kemas
Meskipun kinerja kolom
kemas kurang baik
dibanding dengan kolom
kapiler, kolom kemas
masih sering digunakan
untuk beberapa analisis
rutin karena mudahnya
penanganan dan dengan
tersedianya fase diam
dengan pilihan yang luas.
Meskipun demikian,
kolom ini tidak terbiasa
untuk digunakan dalam
analisis sekelumit (trace
analysis).
JENIS KOLOM DAN PEMISAHANNYA
PEMILIHAN KOLOM
EFFICIENCY AND RESOLUTION

• Two means of assessing the quality of a

chromatographic separation are: to measure the
extent of band broadening of individual solute
peaks (efficiency) and the degree of separation of
adjacent peaks (resolution).

• For column chromatography, a plate number, N is

used as a measure of efficiency.
Asymmetric peak (Tailing/fronting factor)

TF kurang dari 1,8 atau

beberapa ada yang
menyatakan < 2,0
GC CHROMATOGRAM
RESOLUTION
RESOLUTION
PERHITUNGAN RESOLUSI
Band broadening
Band broadening
 PERTIMBANGAN PEMILIHAN KOLOM

08/27/2023 47
 STATIONARY PHASE

• GLC stationary phases are thin coatings of very high

boiling liquids, oils or waxes, some with a polymeric
structure, e.g. polysiloxanes and polyethylene glycol.
• They can be classified according to their polarity,
varying from nonpolar hydrocarbons to polar polyesters,
cyanopropyl silicones and alumina.
STATIONARY PHASE
STATIONARY PHASE

Fase diam Suhu Suhu

minimum (0C) maksimum (0C)
Apiezon L 50 255
Metil silikon 0 (untuk gom 100) 300-3500
Fenil/metil silikon 0 300
Carbowax (polietilen 10-30 225
glikol)
Sianosilikon 0 275
Alkil ftalat 20 225
Dexsil 50 450
(polikarboranilena
siloksan)
STATIONARY PHASE
STATIONARY PHASE AND SELECTIVITY
STATIONARY PHASE AND SELECTIVITY
STATIONARY PHASE AND SELECTIVITY
 Temperature control

• Temperature control is essential in ensuring

reproducible separations by GC.

• The column is enclosed in an insulated and

thermostatically-controlled oven with a heater
and circulating fan to maintain a uniform
temperature from ambient to about 400 oC.
• Temperature
 Isothermal
 Programmed temperature
 PEMROGRAMAN SUHU

(iv)

(i)
(ii)

(iii)

(v)
Suhu

Waktu
Pemisahan: isotermal vs terprogram
PENGARUH SUHU
Pemisahan: isotermal vs terprogram

Pemisahan seri n-alkana

yang dilakukan pada
suhu isotermal (gambar
a) dan pada suhu
terprogram (pada
gambar b); kolom:
Apiezon 3%; kecepatan
alir fase gerak (Helium):
10 ml/menit.
DETEKTOR PADA KROMATOGRAFI
Detektor merupakan perangkat yang diletakkan pada
ujung kolom tempat keluar fase gerak (gas pembawa) yang
membawa komponen hasil pemisahan.

Detektor pada kromatografi adalah suatu sensor

elektronik yang berfungsi mengubah sinyal gas pembawa
dan komponen-komponen di dalamnya menjadi sinyal
elektronik.

Sinyal elektronik detektor akan sangat berguna untuk

analisis kualitatif maupun kuantitatif terhadap komponen-
komponen yang terpisah di antara fase diam dan fase
gerak.
 AN IDEAL DETECTOR

• a rapid and reproducible response to the

presence of solute vapors in the carrier gas;
• high sensitivity, i.e. able to detect very low
levels of solutes;
• stable in operation;
• a signal directly proportional to solute
concentration or mass over a wide range
(wide linear dynamic range)
SINYAL PADA KROMATOGRAFI
SINYAL PADA KROMATOGRAFI
Characteristics of GC detectors
Characteristics of GC detectors
Thermal conductivity detector (TCD)

Schematic diagram of a thermal conductivity detector

 Detektor hantar panas
• Panas dihantarkan dari benda yang
suhunya tinggi ke benda lain di
sekelilingnya yang suhunya lebih rendah.
• Jika ada komponen/senyawa yang dibawa
fase gerak masuk kedalam detektor,
karena BM senyawa biasanya tinggi maka
daya hantar menjadi turun
 Lanjutan Detektor TCD…….
• Kedua filamen ini dihubungkan dengan rangkaian listrik yang
disebut jembatan Wheatstone, untuk menyeimbangkan arus
listrik.

• Bila molekul sampel masuk ke dalam detektor, maka sampel akan

menurunkan daya hantar panas, akibatnya filamen menjadi lebih
panas (suhu mejadi lebih tinggi) yang menyebabkan naiknya
tahanan sehingga menurunkan arus listrik.

• Perbedaan arus listrik antara 2 filamen ini dikirimkan ke rekorder

atau sistem pengolah data yang kemudian ditampilkan sebagai
kromatogram.
 Keuntungan Detektor TCD

• Tidak merusak sampel (non destructive) 

Bisa dianalisis lebih lanjut

• Detektor hantar panas termasuk detektor

konsentrasi, yakni semua molekul yang
melewatinya diukur jumlahnya dan tidak
tergantung pada laju aliran fase gerak
Flame ionization detector
 Detektor ionisasi nyala

• gas efluen dari kolom dialirkan ke dalam nyala hidrogen yang

terbakar di udara.

• Sampel yang dibawa oleh gas pembawa mengalir ke dalam

nyala dan diuraikan menjadi ion.

• Ion ini akan meningkatkan daya hantar dan karenanya akan

meningkatkan arus listrik yang mengalir diantara 2 elektroda.

• Arus itu selanjutnya diperkuat di amplifier dan direkam oleh

rekorder.
Electron capture detector
Nitrogen-phosphorus detector (NPD)
• This is a selective detector that is basically a flame ionization
detector, modified by positioning a ceramic bead containing a
rubidium or cesium salt, electrically heated to 800 oC, between
the burner jet and the collector electrode.

• The response to nitrogen-containing compounds is enhanced

by a factor of about 50 over that of an unmodified FID, and the
response to phosphorus-containing compounds is enhanced
by a factor of about 500.

• The linear dynamic range is intermediate between those of the

FID and TCD.
Nitrogen-phosphorus detector (NPD)
Derivatization for GC analysis
Derivatization for GC analysis
 Derivatization agents
• Esterification
• Acylation
• Alkylation
• Sylilation
Analysis of fatty acid after as methyl ester
KROMATOGRAFI GAS-SPEKTROMETRI MASSA
KROMATOGRAFI GAS-SPEKTROMETRI MASSA

Electron impact
Positive ion chemical ionization
Negative ion chemical ionization
KROMATOGRAFI GAS-SPEKTROMETRI MASSA
 Fast Chromatography
The principal objective of a gas chromatographic (GC) analysis is
to obtain the resolution of all the different compounds injected
in the shortest time possible.

The analysis time of a GC separation depends on the type of sample and

on the number of compounds that have to be analysed.
 Strategies for the fast GC
• minimization of the resolution to a value just sufficient
(e.g. by reduction of the column length, lower film
thickness, adoption of above optimum carrier gas
velocity).
• maximization of the selectivity of the chromatographic
system (e.g. by using more selective stationary phase) or
detection (e.g. by using the mass spectrometric
detection
• Implementation of a method that reduces analysis time
at constant resolution (e.g. by reduction of column inner
diameter or by using hydrogen as carrier gas).
Fast Chromatography
Fast Chromatography
Two dimensional GC (GC x GC)