Recoltarea și transportul

produselor patologice
• Diagnosticul etiologic al unei boli infecțioase
depinde în mare măsură de recoltarea corectă a
produsului patologic.
• Recoltarea trebuie controlată de medic, fiind o
problemă de responsabilitate medicală.
Ce sunt produsele patologice?

Probe biologice în care se bănuiește prezența

microorganismelor.
Tipuri de produse patologice
Provenite din situsuri natural Provenite din situsuri natural
sterile: contaminate cu floră bacteriană:
- LCR (lichid cefalorahidian) - secreții din leziuni tegumentare
- lichid articular - secreții faringiene (exudat),
- sânge nazale, otice, conjunctivale,
- biopsii vaginale, uretrale
- urină - materii fecale
- etc. - spută
- etc.
Tipuri de produse patologice
Provenite din situsuri natural Provenite din situsuri natural
sterile: contaminate cu floră bacteriană:
- LCR (lichid cefalorahidian) - secreții din leziuni tegumentare
- lichid articular - secreții faringiene (exudat),
- sânge nazale, otice, conjunctivale,
- biopsii vaginale, uretrale
- urină - materii fecale
- etc. - spută
- etc.
Tipul produsului patologic influențează alegerea mediului de cultură
 Recoltarea produselor patologice

Ce produse patologice recoltăm?

- Depinde de sindromul clinic

- Depinde de momentul în care recoltăm

Ce produse patologice recoltăm?
Cum recoltăm?
Reguli generale de recoltare
- cât mai aproape de debutul bolii
- înainte de administrarea antibioticelor
- respectând regulile de asepsie și antisepsie
- cât mai rapid și corect d.p.d.v. al tehnicilor utilizate
(instrumente sterile, adecvate, marcarea recipientelor etc.)
+
- evitarea contaminării cu floră normală
- p.p. recoltat în cantitate suficientă
- din zone reprezentative (ex. de unde se observă mucus, sânge, puroi)
- în funcție de patologie
Reguli generale de recoltare

Dacă s-a administrat antibiotic:

- oprire tratament 24-48 ore
- recoltare imediat înainte de următoarea doză
- încercare de „antagonizare” a efectului antibioticului în
mediul de cultură
Reguli specifice de recoltare
- În funcție de produsul patologic (p.p.)
- În funcție de evoluția bolii (ex. coprocultura în febra tifoidă - după
prima săptămână)
- În funcție de specificul fiziopatologic al bolii (ex. se recomandă
efectuarea hemoculturii în puseul febril)
 Motive pentru care un p.p. poate fi respins
de la analiza microbiologică
- spută recoltată pe parcursul a 24 ore
- spută contaminată cu salivă și secreții din tractul respirator
superior
- urină recoltată cu mai mult de 30 de minute în urmă care
NU a fost păstrată la +4ºC
- exudat faringian, exudat nazal, spută, urină, materii fecale
etc. pentru care se solicită izolarea și identificarea germenilor
anaerobi
- produse patologice evident contaminate (ex. recipient
necorespunzător de recoltare)
 Transportul produselor patologice
În cel mai scurt timp posibil !!!
De ce?
- este necesară menținerea condiției inițiale a p.p. (inclusiv pentru
evitarea degradării celulelor inflamatorii etc.)
- diferite microorganisme au diferite temperaturi și condiții optime de
supraviețuire - la nivel de grup (ex. anaerobi, spirochete), gen (ex.
Neisseria), specie (ex. Haemophilus influenzae)
- microorganismele, inclusiv cele din flora asociată, se pot multiplica în
cursul transportului
 Transportul produselor patologice
În cel mai scurt timp posibil !!!
Pentru foarte multe p.p. se poate accepta un timp de transport de 1-2 ore.
Dacă nu e posibil, unele p.p. se pot:
- menține un timp la temperatură corespunzătoare
- scăzută (container izoterm cu gheață 0ºC, frigider +4ºC)
- 37ºC pentru Neisseria (de exemplu)
- etc.
- menține în mediu special de transport (Cary Blair, Stuart, Amies etc.)
- recolta / cultiva pe medii cu substanțe antimicrobiene care inhibă flora și
contaminanții (ex. penicilină, streptomicină și cloramfenicol pt. izolarea unui fung)
 Transportul produselor patologice
În cel mai scurt timp posibil !!!
Exemplu: Pentru urină maximum 30 de minute
- dacă nu este posibil, proba se păstrează la frigider pentru cel mult
1-2 ore
 Transportul produselor patologice
- Produsul se va ambala corespunzător, în recipiente de unică folosință,
bine închise

- Transportul se realizează în cutii / genți corespunzătoare, inscripționate

cu pictograma ”BIOHAZARD” pentru a preveni deteriorarea și
eventualele accidente (contaminarea mediului, oamenilor etc.)
 Transportul produselor patologice
Dacă se expediază la distanță se inscripționează și se specifică:

„Material infecțios”
Urina

Când recoltăm?
- ITU (infecții de tract urinar)
- unele ITS (infecții cu transmitere sexuală) când nu avem
alt produs reprezentativ
Urina

Ce recoltăm?
- prima urină de dimineață
- sau la 4 ore de la ultima micțiune
- 20-50 mL urină, în recipient steril
Urina
Cum recoltăm?
- se face toaleta riguroasă prin spălare cu apă și săpun a organelor genitale și
perinelului
- se recoltează urina din „jetul mijlociu”
- transportul se face în maximum 30 de minute, la +4 ºC, fără mediu de
transport (și se prelucrează microbiologic imediat)
- se poate menține proba la 4ºC pentru 1-2 ore
- se poate folosi acid boric pentru conservare 24h la temperatura camerei
- pacientul își recoltează singur urina după o instruire prealabilă (situații
particulare: sondă, copii foarte mici etc.)
! Este contraindicată recoltarea la domiciliu !
Urina

Alte modalități de recoltare:

1. puncție și aspirație suprapubiană
2. cateterizare/sondare urinară
3. pungi recoltoare sterile din material plastic pentru nou-născut
UROCULTURA: singura metodă de tip CANTITATIV
• >100.000 UFC/mL - se face identificarea și antibiograma
• 10-100.000 UFC/mL - se repetă recoltarea
• <10.000 UFC/mL - nu este infecție, posibil recoltare
improprie

UFC = unități formatoare de colonii

Exudatul faringian

Când?
- eritem și edem de mucoasă
- exsudat amigdalian
- prezența de pseudomembrane
- edem al uvulei
- adenopatii locale
 Exudatul faringian

Ce putem suspecta?
➔ Streptococ beta-hemolitic de grup A
➔ Corynebacterium diphteriae
➔ Neisseria gonorrhoeae
➔ Bordetella pertussis
➔ etc.
NB!

Anumite microorganisme le putem regăsi uneori sub formă de portaj (ex. Streptococcus pyogenes)

Altele au întotdeauna semnificație patologică (ex. Neisseria gonorrhoeae)

Exudatul faringian

Se recoltază dimineața:
- înainte ca pacientul să mănânce
- fără să se spele pe dinți
- fără să utilizeze gargarisme

Dacă aceste condiții nu sunt respectate - recoltare după minimum 4 ore.

Exudatul faringian

De ce avem nevoie?
- apăsător de limbă steril
- tampoane cu vată obișnuite - 2 sau 3
- un tampon pentru examen microscopic direct
- al doilea tampon pentru însămânțare pe medii de cultură
- al treilea tampon dacă suspicionăm difterie
Exudatul faringian

Cum și de unde recoltăm?

Pacientul - stă pe scaun, spre lumină, cu gâtul în ușoară extensie.
Medicul - stă în partea laterală, purtând mască și ochelari
(pt. a evita contaminarea în cazul unui acces de tuse).
 Exudatul faringian
- se deprimă baza limbii cu un apăsător de limbă steril și se examinează
faringele posterior, pilierii, amigdalele pt. a sesiza care sunt zonele inflamate
- roșii (eritematoase)
- cu depozite, eventual purulente
- cu ulcerații

- solicităm pacientului să pronunțe vocala „A”

- prin mișcări circulare, recoltăm secreția de la nivel faringian și amigdalian
- nu atingem baza limbii și palatul moale (evităm contaminare și reflex de vomă)
- insistăm asupra zonelor cu ulcerații și depozite
- dacă se observă prezența unei „false membrane” - o detașăm cu grijă spre periferie și
recoltăm secreția de sub aceasta
Exudate otice și nazale

Pacientul stă pe scaun, cu fața spre sursa de lumină.

Recoltăm cu ajutorul unor tampoane cu vată (de cele mai multe ori)
- realizăm mișcări de rotație ferme pe zonele unde se află p.p.
- 2 (3) tampoane
Sputa

Când recoltăm?
- în diagnosticul microbiologic al infecţiilor acute ale căilor respiratorii
inferioare (IACRI)

Ce recoltăm?
- prima spută eliminată matinal (2-3 mL) (!!! nu sputa pe 24 ore)
- 3 p.p. în caz de suspiciune de infecție mycobacteriană sau fungică
Sputa

Cum recoltăm?
Modalități de recoltare
- Expectorație spontană
- Spută indusă
- Lavaj laringo-traheal
- Aspirat bronșic și lavaj bronho-alveolar
- Lavaj gastric / Aspirat gastric
- etc.
Sputa

De ce avem nevoie (pentru recoltarea expectorației spontane)?

- recoltor steril de 50-200 mL cu capac, ce permite o închidere etanșă
- +/- medii de transport (ex. Amies, Stuart)
Sputa

Recoltarea expectorației spontane:

- pacientul trebuie să înțeleagă diferența dintre „a expectora” și „a
tuși și scuipa”
- înainte de prelevare se recomandă periajul simplu al dinților și
clătirea gurii + gargară cu apă / soluție salină fiziologică, pentru
eliminarea resturilor alimentare și a bacteriilor contaminante
- efectuarea a 2 insipirații profunde, ținerea respirației câteva
secunde, apoi o a 3-a inspirație urmată de expir forțat vor
declanșa tusea ce va ușura expectorația
Sputa

Recoltarea expectorației spontane:

- sputa este depusă în recipient/flacon, care se ține sub buza
inferioară
- spălarea mâinilor după recoltare !!!

- dacă proba este constituită în principal din salivă, se solicită o

altă probă
- în IACRI, o probă mucopurulentă în volum de 2-3 mL ar putea fi
suficientă
 Lichidul cefalorahidian (LCR)
Când recoltăm?
- În suspiciune de meningită / sindrom meningeal

Cum recoltăm?
- După
- examinarea fundului de ochi - FO (verificăm presiunea din a. centrală a retinei,
semne de stază papilară)
- uneori CT
- Recoltarea se face la patul bolnavului de către MEDIC care are competențe
pentru a executa această manevră (ex. prin puncție lombară)
- Tehnicile de asepsie trebuie să fie cât mai riguroase și atenția cât mai sporită
Lichidul cefalorahidian (LCR)
Pentru elucidarea etiologiei unei meningite este necesară efectuarea unor:
- examinări biochimice
- examinări citologice
- examinări microbiologice

Este de dorit, așadar, să se recolteze (la adult) 5-10 mL LCR în 2-3 tuburi sterile;

Recoltarea este invazivă, iar testele trebuie efectuate fără a mai fi nevoie să se
solicite repetarea puncției lombare.
Lichidul cefalorahidian (LCR)

Transportul - cât mai rapid, la o temperatură apropiată de temperatura

corpului uman (37ºC). Haemophilus influenzae şi Neisseria meningitidis
sunt distruși prin refrigerare.
- 2 tuburi se centrifughează (examen microbiologic și citologic)
- dacă LCR este franc purulent - examen microscopic direct, fără
centrifugare
- 1 tub se utilizează pentru teste biochimice și alte teste utile în
depistarea etiologiei
În mod ideal, LCR trebuie prelucrat imediat - procesarea p.p. trebuie să
înceapă chiar la patul bolnavului.
Materiile fecale
Se pot recolta și examina:

1. Scaun emis spontan

- defecația are loc într-un recipient de carton / plastic de unică utilizare (care
ulterior va fi decontaminat și eliminat)
- se examinează macroscopic (miros, culoare, aspect)
- se prelevă cu lingurița recoltorului porțiuni cu o șansă mai mare de izolare a
agentului patogen (mucopurulente, cu sânge, flocoane riziforme etc.)
- SAU din porțiuni diferite, atunci când nu se remarcă aspecte sugestive
precum cele menționate
- cantitate necesară - aproximativ 1 gram, suspensionat în mediu de transport
(sau minim 2 mL pentru scaune apoase)
Materiile fecale
2. Tampon rectal
- în infecții cronice cu Shigella spp.
- când se suspicionează portaj de Shigella spp. sau Salmonella spp.

Tamponul steril se introduce cu blândețe și se recoltează material din criptele rectale.

Ulterior se introduce în mediu de transport; pentru a putea închide recoltorul, se taie

tija tamponului.
Materiile fecale
3. Scaun recoltat cu sonda Nelaton
- atunci când se dorește recoltarea p.p. de la nivelul colonului sigmoid
- sonda se introduce până la nivelul dorit (15-20cm la adult, 10-12 cm la copil)
- celălalt capăt se adaptează la seringă
- se aspiră p.p. de la nivel sigmoidian
- p.p. se introduce în mediu de transport
Materiile fecale
Dacă p.p. nu poate fi prelucrat imediat sau în maximum 1 oră, se recurge la:
- mediu de transport (cel mai frecvent Cary Blair)
- transport la rece (+4ºC)
- mediu de transport la rece (+4ºC)

Mediul Cary Blair asigură supraviețuirea enterobacteriilor patogene pentru 24-48

ore, inhibând multiplicarea florei de asociație.

* Când se suspicionează infecție cu Vibrio cholerae, apa peptonată alcalină

servește drept mediu de transport ȘI mediu de îmbogățire.
Puroiul
Produs patologic format din leucocite, microorganisme, resturi celulare, fibrină, etc.

Colecții – superficiale sau profunde

- abcese
- flegmoane

Fistule

Se poate recolta:
- cu ansa bacteriologică
- cu pipeta Pasteur
- prin biopsiere
- prin chiuretare
- prin puncție și aspirare (seringă cu ac gros)

* dacă se suspicionează microorganisme anaerobe - seriga se închide cu dop

Puroiul
Din colecțiile închise (ex. abcese) se recoltează prin
puncție cu o seringă cu ac gros sau cu pipeta Pasteur

Din leziuni închise profunde se studiază și în

condiții de anaerobioză

Din colecții deschise se recoltează după curățarea

plăgii cu soluție salină fiziologică sterilă și eliminarea
primei cantități exprimate. Se poate recolta cu pipeta
Pasteur sau cu ansa bacteriologică (tampon doar
dacă nu există alternativă).
Colectie purulenta
Hemocultura
Bacteriemie = prezența tranzitorie a bacteriilor în torentul circulator
Se recoltează minimum 2 perechi de probe / 24 ore (de obicei 3 perechi de probe / 24h)
- în puseu febril sau frison
- 20 mL de sânge în cazul adulților
- 1-5 mL sânge în cazul copiilor mici
- în unele cazuri (ex. endocardita bacteriană subacută), bacteriemia fiind continuă
sunt suficiente 2 hemoculturi / 24h
Frecvent hemoculturile trebuie realizate „în urgență”.
Sângele, fiind un produs biologic NORMAL STERIL, se izolează cel mai adesea un
singur agent infecțios (rareori există posibilitatea unor asocieri).
Hemocultura
! Atenţie la contaminare ! - cel mai frecvent cu:
- Staphylococcus epidermidis
- Staphylococcus hominis
- Corynebacterium spp. (altele decât C. diphteriae)
- Cutibacterium acnes

Agenții etiologici cu semnificație clinică, izolați mai frecvent în hemocultură:

- Pseudomonas aeruginosa
- streptococi hemolitici (inclusiv pneumococ = Streptococcus pneumoniae)
- enterococi
- Haemophilus influenzae (tip b)
- Neisseria meningitidis
- germeni anaerobi
Hemocultura
În sânge există factori anti-microbieni
- se adaugă substanțe neutralizante în mediul de cultură (ex. polianetol
sulfonat de sodiu)

Însămânțarea trebuie realizată imediat după recoltare la patul bolnavului

(sau recoltare direct în flaconul cu mediu de cultură).

Se folosesc medii lichide, îmbogățite.

Hemocultura

Examinarea flacoanelor de hemocultură se realizează:

- de 2 ori / zi în primele 3 zile
- apoi zilnic pentru minimum 7 zile
- în unele situații, flacoanele pot fi incubate mai multe săptămâni
Secreții recoltate de la nivelul aparatului genital
Secrețiile genitale feminine:

1. Secreția vaginală (în vaginite):

- se recoltează din fundul de sac vaginal
posterior, cu tampon steril, care se
introduce în tubul cu mediu de
transport
Secreții recoltate de la nivelul aparatului genital
Secrețiile genitale feminine:

2. Secreția cervicală (în cervicite):

- pe masa ginecologică, se vizualizează colul uterin
- cu un tampon steril se îndepărtează mucusul de la nivelul cervixului
- cu alt tampon cu vată se recoltează p.p. prin introducerea și rotirea în canalul
cervical (preferabil 2 tampoane cu vată - pentru frotiuri ȘI pentru cultivare)

La fetițe:
- tamponarea secreției de la nivelul vulvei
- cu ajutorul unui cateter se introduc în vagin 2 mL soluție salină fiziologică sterilă
- se colectează lichidul de spălătură
Secreții recoltate de la nivelul aparatului genital
Secrețiile genitale masculine:

În uretrite:
- dacă secreția se exteriorizează, se recoltează dimineața înainte de micțiune, sau
la cel puțin 2 ore după aceasta
- dacă secreția nu se exteriorizează, se recoltează cu un tampon steril introdus cu
blândețe în uretră, care apoi se include în mediu de transport
- se poate recolta urină din primul jet în absența oricărei secreții
Secreții recoltate de la nivelul aparatului genital

În prostatite:
- se recoltează secreție prostatică după masaj
prostatic, ejaculat în recipient steril

!!! Probele nu se păstrează la frigider !!!

Neisseria gonorrhoeae este foarte sensibilă la rece !

Produse patologice recoltate în infecții fungice
În micoze cutanate superficiale:
- antiseptizăm cu alcool, apoi raclăm tegumentul (p.p. = scuamele produse)
- p.p. se împachetează cu hârtie sterilă, se introduce în placă Petri și se
examinează în max. 48h

În micozele profunde, în funcție de localizare se pot recolta diverse p.p.

- se recomandă prelucrare și examinare imediată !