Transcrição e Splicing

Prof. Dr. : Edson Lopes da Ponte

edson.ponte@unichristus.edu.br

FORTALEZA – CE
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 OBJETIVOS DE APRENDIZAGEM

1. - Compreender a finalidade da transcrição e do splicing para o

funcionamento celular.
2. - Saber diferenciar a transcrição em células procariontes e eucariontes
3. - Entender a estrutura e função dos íntrons e éxons
4. - Aprender a dinâmica da maquinaria enzimática para a ocorrência da
transcrição e splicing
5. - Aplicar os conhecimentos sobre transcrição e splicing na futura
atuação profissional
 SPLICING E TRANSCRIÇÃO

RNA: TRANSCRIÇÃO E PROCESSAMENTO

DNA  RNAm  SPLICING  RNAr  RNAt  PROTEÍNA

TRADUÇÃO
TRANSCRIÇÃO
RETIRADA DO ÍNTRONS
COMO PODE O SER HUMANO COM TODA A SUA COMPLEXIDADE
POSSUIR MENOS DO DOBRO DE GENES DE UMA MOSCA?

A PRESENÇA DE PARTES CODIFICANTES ÉXONS

A PRESENÇA DE PARTES NÃO-CODIFICANTES ÍNTRONS

REMOÇÃO DOS ÍNTRON SPLICEOSSOMOS

RECOMBINAÇÃO ALTERNATIVA 27.000 GENES  100.000 PROTEÍNAS

 PRINCÍPIOS FUNCIONAIS DO DNA E RNA

1 – COMPLEMENTARIEDADE DE BASES

2 – PROTEÍNAS SE LIGAM A UMA SEQUÊNCIA DE BASE ESPECÍFICA NO DNA

O RNA

CARACTERÍSTICAS DO RNA

NUCLEOTÍDEOS DE CADEIA DE NUCLEOTÍDEOS UNIFILAMENTAR

RNA ( A-U ; C-G; U-G) (MAIS FLEXÍVEL)
RIBOSE
RIBOZIMAS (IMPORTÂNCIA DA HIDROXILA)
 CLASSES DE RNA

DUAS CLASSES GERAIS:

1) RNAm

2) RNA FUNCIONAL

- NUNCA SÃO TRADUZIDOS

- RNAr (ESTÁVEIS E TRANSCRITOS EM MUITAS CÓPIAS)
- RNAt

- CODIFICADA POR UM PEQUENO NÚMERO DE GENES

- snRNA (COMPÕEM O SPLICEOSSOMO)

- MicroRNA (miRNA)  REGULAÇÃO DE EXPRESSÃO GÊNICA
- Pequenos RNA de interferência (siRNA) PROTEÇÃO

-CODIFICADA POR UM GRANDE NÚMERO DE GENES

 OBJETIVOS DE APRENDIZAGEM

- Compreender a finalidade da transcrição e do splicing para o funcionamento celular.

- Saber diferenciar a transcrição em células procariontes e eucariontes
- Entender a estrutura e função dos íntrons e éxons
- Aprender a dinâmica da maquinaria enzimática para a ocorrência da transcrição e
splicing
- Aplicar os conhecimentos sobre transcrição e splicing na futura atuação profissional
TRANSCRIÇÃO
 TRANSCRIÇÃO
VISÃO GERAL: O DNA COMO MOLDE PARA A TRANSCRIÇÃO

1 – SEPARAÇÃO DOS DOIS FILAMENTOS DA DUPLA HÉLICE DE DNA

2 – UM DOS FILAMENTO ATUA COMO MOLDE

3 – OS RIBONUCLEOTÍDEOS PAREIAM COM A FITA MOLDE E SE UNEM

COM AUXÍLIO DA RNA POLIMERASE

4 – O RNA TEM UMA PONTA 5’ E UMA PONTA 3’ ( A SÍNTESE É SEMPRE NO

SENTIDO 5’  3’)

5 – VISÃO GERAL DO PROCESSO  ANIMAÇÃO

DNA
5’-ATG AAG TTC TCC ACC TTT TTG GCA GTA GGG GCT GCC CTT GAA TAA-3’

3’-TAC TTC AAG AGG TGG AAA AAC CGT CAT CCC CGA CGG GAA CTT ATT-5’

FILAMENTO CODIFICANTE Qual das 2 fitas

Transcrição
foi a molde ???
mRNA
5’-AUG AAG UUC UCC ACC UUU UUG GCA GUA GGG GCU GCC CUU GAA UAA-3’

Síntese Protéica (Tradução)

M K F S T F L A V G A A L E stop

N-terminal Proteína C-terminal

 ESTÁGIOS DA TRANSCRIÇÃO

COMO O SEGMENTO APROPRIADO É TRANSCRITO EM UMA MOLÉCULA

UNIFILAMENTAR DE RNA DE TAMANHO E SEQUÊNCIA DE NUCLEOTÍDEOS
CORRETOS?

INÍCIO DO GENE  TRANSCREVER  TERMINAR

INICIAÇÃO

ALONGAMENTO

TÉRMINO
 TRANSCRIÇÃO EM PROCARIONTES

COMO A RNA POLIMERASE ENCONTRA O PONTO CORRETO DE INÍCIO

PARA TRANSCRIÇÃO?

LIGA-SE A UMA SEQUÊNCIA DE DNA ESPECÍFICA CHAMADA DE PROMOTOR

- LOCALIZADO NA PONTA 5’  REGIÃO REGULADORA 5’

PRIMEIRA BASE TRANSCRITA  SÍTIO INICIADOR

SEQUÊNCIA CONSENSO
-N +1 +N

PROMOTOR
SÍTIO DE INICIAÇÃO

ANTECEDENTE AO
SÍTIO DE INICIAÇÃO
A RNA POLIMERASE BACTERIANA

- BUSCA UM SEQUÊNCIA PROMOTORA

- CHAMADA DE:

HOLOENZIMA RNA POLIMERASE

COMPLEXO MULTISSUBUNITÁRIO

5 SUBUNIDADES
2a
1b
ESSENCIAL PARA O INÍCIO DA 1 b’
TRANSCRIÇÃO EM PROCARIONTES Fator sigma (s)
 ALONGAMENTO

RNA POLIMERASE SE DESLOCA NO DNA

DESENROLA  A FRENTE
ENROLA  ATRÁS

BOLHA DE TRANSCRIÇÃO
 MECANISMOS DE TÉRMINO: INTRÍNSECOS E DEPENDENTE DE RÔ

INTRÍNSECO  TÉRMINO DIRETO

SEQUÊNCIA DE TÉRMINO COM 40 PARES DE BASES

SEQUÊNCIA RICA EM G-C SEGUIDO POR 6 OU + A
SEGUIDO DE CERCA DE 8 U

DEPENDENTE DE RÔ  REQUER A AJUDA DE UM PROTEÍNA CHAMADA RÔ

RECONHECE SINAIS DE TÉRMINO

RNA COM SINAIS DE TÉRMINO DEPENDENTE DE RÔ

RICO EM UM SEQUÊNCIA DE C E POBRE EM G

SEQUÊNCIA rut  aonde se liga a proteína RÔ

 TRANSCRIÇÃO EM EUCARIONTES

SEMELHANÇAS COM A TRANSCRIÇÃO PROCARIONTE, PORÉM É

MAIS COMPLEXO

PORQUE?

1 – MAIOR QUANTIDADE DE GENES

2 – DNA NÃO-CODIFICANTE
3 – DIFICULDADE DE ENCONTRAR O PROMOTOR

- DIVISÃO DAS TAREFAS DE RNAs POLIMERASES

4 – PRESENÇA DO NÚCLEO
5 – O DNA EUCARIÓTICO NA FORMA DE CROMATINA
 Enzima Localização Produto Atividade
Relativa

RNA pol I Nucléolo rRNA 50-70%

RNA pol II Nucleoplasma mRNA 20-40%

RNA pol III Nucleoplasma tRNA; rRNA ~10%

5S e
pequenos
RNAs
nucleares
 TRANSCRIÇÃO EM EUCARIONTES

ANTES QUE O RNAm DEIXE O NÚCLEO ELE PRECISA SER PROCESSADO

RNA ANTES DO PROCESSAMENTO  pré-RNAm

RNA PROCESSADO  RNAm - maduro

A RNA POLIMERASE II 

- COORDENA A SÍNTESE E O PROCESSAMENTO DO RNAm

- MULTISSUBUNITÁRIA MAIS COMPLEXA DO QUE

A DOS PROCARIÓTICOS
 INÍCIO DA TRANSCRIÇÃO EM EUCARIOTOS

ASSIM COMO OS PROCARIONTES PRECISAM DO FATOR s

OS EUCARIONTES PRECISAM DO FATORES GERAIS DE TRANSCRIÇÃO (GTF)

A RNA POLIMERASE II PRECISA DA GTF PARA SE LIGAR AO PROMOTOR

OS GTF SÃO: TF II A, TF II B etc.

GTF + RNA POLIMERASE II = COMPLEXO DE PRÉ-INICIAÇÃO

CONTÉM: 6 GTF ( COM VÁRIAS SUBUNIDADES CADA)

CERNE RNA POLIMERASE II ( FEITO DE 12 OU MAIS SUBUNIDADES)
 INÍCIO DA TRANSCRIÇÃO EM EUCARIOTOS

COMO O CERNE DE RNA POLIMERASE II É CAPAZ DE SE SEPARAR

DOS GTF E COMEÇA A TRANSCRIÇÃO?

DOMÍNIO DE CAUDA DE CARBOXILA (CTD)

- A FASE DE INICIAÇÃO TERMINA QUANDO FOSFORILAÇÃO DO CTD PELAS GTF

- FOSFORILAÇÃO DO CTD ENFRAQUECE A LIGAÇÃO DA RNA POLIMERASE II A OUTRAS

PROTEÍNAS DO COMPLEXO DE PRÉ-INICIAÇÃO.
 ALONGAMENTO, TÉRMINO E PROCESSAMENTO DE PRÉ-RNAm
EM EUCARIONTES

OCORRE DENTRO DA BOLHA DE TRANSCRIÇÃO COMO NOS PROCARIOTOS

MAS OS DESTINOS DO RNA NASCENTES SÃO DIFERENTES

O RNA NASCENTE DO EUCARIOTO PASSAR POR UM PROCESSAMENTO

CO-TRANCRICIONAL, VEJA:
1 – A ADIÇÃO DE UM REVESTIMENTO (CAP) NA PONTA 5’

2 – RECOMPOSIÇÃO PARA ELIMINAR OS ÍNTRONS

3 – ADIÇÃO DE UMA CAUDA 3’ DOS NUCLEOTÍDEOS ADENINA

(POLIADENILAÇÃO)
 ALONGAMENTO, TÉRMINO E PROCESSAMENTO DE PRÉ-RNAm
EM EUCARIONTES

A SEQUÊNCIA CTD E O PROCESSOS CO-TRANSCRICIONAIS:

- SERVE DE SÍTIO PARA ALGUMAS PROTEÍNAS QUE FARÃO

O REVESTIMENTO DO RNA, RECOMPOSIÇÃO E POLIADENILAÇÃO

PROCESSAMENTO DAS PONTAS 5’ E 3’

QUANDO O RNA NASCENTE EMERGE:

- ADICIONA-SE A PONTA 5’  REVESTIMENTO (cap)  7-metilguanosina

junto com 3
grupos fostatos

- FUNÇÃO: PROTEÇÃO DE DEGRADAÇÃO

NECESSÁRIO NA TRADUÇÃO
 ALONGAMENTO, TÉRMINO E PROCESSAMENTO DE PRÉ-RNAm
EM EUCARIONTES

PROCESSAMENTO DAS PONTAS 5’ E 3’

O ALONGAMENTO CONTINUA ATÉ QUE A SEQUÊNCIA

- AAUAAA OU AUUAAA  SEJA RECONHECIDA POR UM ENZIMA

QUE CORTA A PONTA DO RNA 20 BASES DEPOIS

É ADICIONADO A ESSA PONTA UMA SEQUÊNCIA DE 150 A 200 NUCLEOTÍDEOS

ADENINA  POLIADENILAÇÃO ( CAUDA POLI-A)

A SEQUÊNCIA DE AAUAAA  SINAL DE POLIADENILAÇÃO

ALONGAMENTO, TÉRMINO E PROCESSAMENTO DE PRÉ-RNAm
EM EUCARIONTES

RECOMPOSIÇÃO (SPLICING) DO RNA, A REMOÇÃO DO ÍNTRONS

EM MAMÍFEROS A MAIOR PERCENTAGEM DE DNA CODIFICA ÍNTRONS, E

NÃO ÉXONS

RECOMPOSIÇÃO (SPLICING) ALTERNATIVA

EXITEM MAIS PROTEÍNAS DO QUE GENES?

COMO?

RECOMPOSIÇÃO ALTERNATIVA
ALONGAMENTO, TÉRMINO E PROCESSAMENTO DE PRÉ-RNAm
EM EUCARIONTES
RECOMPOSIÇÃO (SPLICING) ALTERNATIVA (RA)

70% DOS GENES HUMANOS  SOFREM RECOMPOSIÇÃO ALTERNATIVA

ERROS DURANTE A RECOMPOSIÇÃO ALTERNATIVA  MUTAÇÕES

15% DAS MUTAÇÕES QUE ORIGINAM DOENÇAS GENÉTICA  ERROS NO RA

AS PROTEÍNAS PRODUZIDAS ATRAVÉS DA RA SÃO

- BEM HOMÓLOGAS
- USADA EM CÉLULAS DIFERENTES OU ESTÁGIO DIFERENTES DE
DESENVOLVIMENTO
 OBJETIVOS DE APRENDIZAGEM

- Compreender a finalidade da transcrição e do splicing para o funcionamento celular.

- Saber diferenciar a transcrição em células procariontes e eucariontes
- Entender a estrutura e função dos íntrons e éxons
- Aprender a dinâmica da maquinaria enzimática para a ocorrência da transcrição e
splicing
- Aplicar os conhecimentos sobre transcrição e splicing na futura atuação profissional
DNA molde
Pré-mRNA
OS RNA FUNCIONAIS E O MECANISMO DE RECOMPOSIÇÃO
PEQUENOS RNA NUCLEARES (snRNA): O MECANISMO DE RECOMPOSIÇÃO
DOS ÉXONS

RIBONUCLEOPROEÍNAS  U1 A U6  snRNP

- COM 100 PROTEÍNAS ADICIONAIS

SPLICEOSSOMO

“MAQUINA MOLECULAR QUE RETIRA ÍNTRONS E UNE ÉXONS”

COMPONENTES DO SPLICEOSSOMO INTERAGEM COM CTD

 OBJETIVOS DE APRENDIZAGEM

- Compreender a finalidade da transcrição e do splicing para o funcionamento celular.

- Saber diferenciar a transcrição em células procariontes e eucariontes
- Entender a estrutura e função dos íntrons e éxons
- Aprender a dinâmica da maquinaria enzimática para a ocorrência da transcrição e
splicing
- Aplicar os conhecimentos sobre transcrição e splicing na futura atuação profissional
Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henrique Ferreira ... [et al.]. - Porto
Alegre: Artmed Editora, 2001.

Alberts et al. (2002) Molecular Biology of THE CELL, 4nd edition, GS Garland Science
Taylor & Francis Group.

Lodish et al. (2000) Molecular Cell Biology, 4nd edition, Freeman and Company, New York.

Berg et al. (2002) Biochemistry, 5th edition, Freeman and Company, New York. (5a edição
do Stryer)

Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition,
Worth Publishers.

Voet, D. & Voet, J. (1995) Biochemistry, 2nd edition, Wiley-Liss (A John Wiley & Sons, Inc.,
publication).

Griffiths, A.J.F. et al. (2008) Introdução à Genética, 9ª edição, Guanabara Koogan