: BIOTECNOLOGIA AGRICOLA : PROTOPLASTOS Juan Alarcon Camacho Jose Antonio Aguilar Davalos Carlos Enrique Juro Basilio Niler

Hurtado

PROTOPLASTOS
Cultivo y aplicaciones

Protoplasto:
Clula vegetal desprovista de

pared celular, por proceso mecnico o enzimtico. Membrana plasmtica completamente expuesta. Estado transitorio, permite manipulacin de esas clulas. Mantiene potencialidades de clulas vegetales completas.

 1892 Primer aislamiento de protoplastos vivos de cebolla por mtodos mecnicos. 1919 Primer aislamiento enzimtico, clulas de levadura.

1960 Aislamiento de protoplastos de plantas superiores con degradantes de pared celular.

1971 Regeneracin de plantas a partir de

protoplastos de Nicotiana tabacum.

APLICACIONES
Produccin de hbridos por fusin de protoplastos. Manipulaciones genticas.
Estudio de procesos fisiolgicos y

bioqumicos.

METODOLOGA
1. Aislamiento y factores que lo afectan 2. Purificacin 3. Determinacin de viabilidad 4. Cultivo 5. Regeneracin

1) Factores que afectan la produccin y viabilidad

de los protoplastos
Fuente de material

Tratamientos pre-enzimticos
Tratamientos enzimticos Osmolaridad

2) Purificacin

3) Viabilidad
Toma de oxgeno

Actividad fotosinttica
Tinciones

4) Cultivo
Medio de cultivo: MS, B5 (lquido o slido)

Osmolaridad
Densidad de plaqueo Condiciones de almacenamiento

Material vegetal

5) Regeneracin
Organognesis/Embriognesis somtica

Eficiencia generalmente baja

REGENERACIN DE PLANTAS DE ARROZ POR CULTIVO DE PROTOPLASTOS.

Protoplastos aislados de hipoctilo de arroz

Primer divisin de un protoplasto, a los 4 das de cultivo.

Grupos de protoplastos creciendo en agarosa.

Bloques de agarosa flotando sobre medio de cultivo.

Plntula derivada de protoplasto, en tubo de ensayo.

HIBRIDACIN SOMTICA
Aislamiento de protoplastos

Fusin de protoplastos (fases)

Seleccin clulas hbridas

Cultivo de clulas hbridas

Regeneracin de plantas

Caracterizacin de las planas hbridas

HIBRIDACIN SOMTICA

MECANISMO DE FUSIN oTRES FASES: Aglutinacin Fusin de membranas Redondeamiento de protoplastos fusionados oTRATAMIENOS: PEG Alto pH Ca+2

PROTOPLASTO A

PROTOPLASTO B

HIBRIDACIN SOMTICA

AGREGACIN

FUSIN
DIVISIN CELULAR

CLULAS HBRIDAS

Hibridacin somtica en Dianthus

HIBRIDACION SOMATICA EN Dianthus

Hibridacion somatica entre D. Chinensis y D. caryophyllus

Problemas de la hibridacin somtica:

La regeneracin de plantas a partir de protoplastos es

difcil, y a partir de productos de fusin an ms. Ploida de los hbridos es impredecible. Dificultades para recobrar la ploida normal. Hbridos con frecuencia presentan problemas de esterilidad.

Logros de la hibridacin somtica:

Transferencia de esterilidad masculina de coliflor

(Brassica oleracea) a rbano (B. rapa) y a colza (B. napus). Earle y Dicson, 1994). Transferencia de resistencia a atrazina en Brassicas (Christey et al. 1991). Transferencia de esterilidad masculina en Nicotiana (Zelcer et al. 1978). Diversos hbridos somticos en especies ornamentales y flores de corte.

Lin et al, 1987

Gracias por su atencion