PCR em Tempo Real na Gentica Forense

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SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms)

Os SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) de grande importncia em: casos forenses; investigao biolgica de parentesco; na rea da criminalistica biolgica.

Os SNPs so variaes individuais num ponto particular do genoma, podendo consistir em inseres, deleces ou substituies nucleotdicas. So muito abundantes, com uma frequncia de cerca de 1%, existindo cerca de um milho ou mais por indivduo.

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Vantagens dos SNPS na Gentica Forense:

Permite efectuar mais facilmente, a distino entre uma mistura de amostras e uma amostra nica; Permite a automatizao do processamento das amostras e a posterior anlise dos resultados (polimorfismos binrios); Os produtos de PCR resultantes da anlise de SNPs podem ter um tamanho inferior a 100 pb, o que significa que so excelentes candidatos a marcadores nas situaes em que o material gentico est degradado; Possuem baixas taxas de mutao, factor muito importante em estudos de filiao; No existem artefactos associados caracterizao dos alelos, o que simplifica a interpretao dos resultados; possvel predizer a origem tnica e determinar caracterstica fisionmicas, o que pressupe a seleco de determinados SNPs.

Desvantagem

O elevado nmero de SNPs a estudar (quatro vezes superior ao nmero de STRs utilizados);

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O uso da PCR em Tempo Real um bom mtodo para a caracterizao de SNPs, na medida que: Requer um tempo reduzido para a realizao da anlise, uma tcnica reprodutvel, precisa e especfica, evitando as dificuldades inerentes ao estabelecimento das condies ideais 5/5/12 de amplificao e anlise dos

Monitorizao de populaes de animais selvagens

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Amostragem Gentica no invasiva

Permite o estudo de muitos indivduos e populaes sem contactar, perturbar ou mesmo ver os animais.
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Amostragem Gentica no invasiva

Importante para: Identificao dos indivduos para estudos de tamanho da populao e de movimento dos indivduos Casos forenses da vida selvagem Parmetros genticos das populaes (estrutura, fluxo gentico, bottleneck,) Determinao de sistemas de acasalamento e ecologia comportamental.

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Amostragem Gentica no invasiva

DNA extrado de fezes, pelo, urina, saliva de material mastigado, marcas odorferas, cascas de ovos, mudas de pele

Baixa quantidade de DNA neste tipo de amostras torna a amplificao difcil e potncia a ocorrncia de erros de genotipagem. O PCR em tempo real permitir identificar as amostras com

DNA alvo com qualidade e quantidade suficientes. 5/5/12

Genotipagem de locus de microssatlites em chimpanzs Amostras sem DNA ou com baixa quantidade (< 5pg/L) foram excludas e nova extraco feita.

Permitiu reduzir o nmero de PCRs

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Fonte: Morin et al. 2001

Monitorizao de uma populao de

lobos recorrendo a anlise gentica de DNA contido em amostras de urina.

Uso de qPCR para determinar a

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Outras aplicaes do PCR em Tempo Real

Quantificao da telomerase humana para deteco de tumores

J. Shay and S. Bacchetti, A survey oftelomerase activityinhumancancer.Eur. J. Cancer,33(1997), pp. 787791. J. de Kok,et al.Real-timequantification ofhumantelomerase reverse trancriptase mRNA in tumors and healthy tissues.Clin. Chem.,46(2000), pp. 313318.

Na microbiologia alimentar atravs da deteco e quantificao da carga bacteriologica de bacterias como: Listeria, Salmonella,Campylobacter

Belgrader, P. et al. (1999) PCR detection of bacteria in seven minutes. Science 284, 449450 Hein, I. et al. (2001) Detection and quantification of the iap gene of Listeria monocytogenes and Listeria innocua by a new real-time quantitative PCR assay. Res. Microbiol. 152, 3746

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Bibliografia:
Cludia Alexandra Moreira de Carvalho, Tese de Mestrado- Aplicao MdicoLegal da PCR em Tempo Real na Caracterizao de SNPs (2007) Faculdade de Medicina da Universidade do Porto. Dieter Klein, Quantification using real-time PCR technology: applications and limitations, Trends in Molecular Medicine, Volume 8, Issue 6, 1 June 2002, Pages 257-260, ISSN 1471-4914, 10.1016/S1471-4914(02)02355-9.

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