COMPOSICIN QUMICA Y DIGESTIBILIDAD IN VIVO DE ENSILAJE DE BALLICA ITALIANA (L. multiflorum Lam., cv.

Concord) EN CUATRO ESTADOS FENOLOGICOS 1

Daniel Alomar, Ren Anrique, Pablo Meissner y Vctor H. Moreira Universidad Austral de Chile Facultad de Ciencias Agrarias Instituto de Produccin Animal Casilla 567, Valdivia, Chile Juan Carlos Dumont C.R.I. Remehue, Instituto de Investigaciones Agropecuarias
1

Proyecto FONDECYT 1930380 Recepcin de originales: Junio 29, de 1996

ABSTRACT
Chemical composition and in vivo digestibility of italian ryegrass (L. multiflorum Lam. cv. Concord) at four phenological stages. Key words: Silage, nutritive value, energy content, phenological stage. The purpose of this study was to evaluate the effect of the phenological stage at harvesting on the chemical composition and in vivo digestibility of dry matter (DMD) and both digestible (DE) and metabolizable (ME) energy content of silage made from a sward of Italian ryegrass (Lolium multiflorum, cv. Concord). Grass was harvested at four stages: preinflorescence emergence, early spike emergence, early flowering (anthesis) and milky grain. Four male calves of ca. 200 kg liveweight were used in sequential metabolic trials, with intake restricted to 70% of ad. lib. and with total collection of faeces and urine. Fresh grass and silages were analysed for dry matter (DM), crude protein (CP), neutral detergent fibre (NDF), acid detergent fibre (ADF) and ME estimated in vitro. As fresh grass matured, its DM concentration increased from 13.6 to 29.5%, NDF from 50.8 to 60.9% and ADF from 30.6 to 39.5%. CP and ME were reduced from 13.4 to 7.8% and from 2.44 to 2.19 Mcal/kg DM, respectively. The resulting silage increased DM (from 14.4 to 25.2%, oven basis) and decreased CP (from 12.9 to 9.1%). NDF varied from 58.7 to 63.3% and ADF from 39.3 to 41.1 %. Both fibre fractions failed to exhibit a consisten! trend with maturty. ME estimated in vitro changed from 2.25 to 2.16 Mca/kg DM. In vivo DMD decreased as growing period of pasture increased, from 65.4 to 54.2%. Same trend was found for DE which decreased from 2.91 to 2.31 Mcal/ kg DM (oven basis) and for ME which declined from 2.23 to 1.82 Mcal/kg DM (oven basis). Both DE and ME presented higher values (ca. 0.3 Mcal/kg DM) when expressed on a toluene DM basis. ME/DE ratio was slighty lower in an earlier (0.78) compared to a later (0.81) growth stage. It is concluded that silage harvesting should not exceed the spike emergence stage.

RESUMEN
Este trabajo se hizo con el propsito de evaluar el efecto del estado fenolgico al corte, sobre la digestibilidad de la materia seca (DMS) y contenido de energa digestible (ED) y metabolizable (EM) in vivo, de ensilaje de ballica italiana (Lolium multiflorum, Cv. Concord). El forraje se cosech a cuatro estados: preemergencia de espigas (bota), emergencia temprana de espigas (espiga), inicio de floracin (flor) y grano lechoso (grano). Se utilizaron cuatro terneros machos de ca. 200 kg en ensayos sucesivos de digestibilidad con consumo restringido al 70% de ad libitum y coleccin total de fecas y orina. El material original y los ensilajes se analizaron para materia seca (MS), protena bruta (PB), fibra detergente neutro (FDN), fibra detergente cido (FDA) y EM in vitro. Al aumentar la madurez (tiempo de rezago) el forraje original aument su concentracin de MS (de 13,6 a 29,5%), FDN (de 50,8 a 60,9%), FDA (de 30,6 a 39,5%) y redujo su concentracin de PB (de 13,4 a 7,8%) y de EM (de 2,44 a 2,19 Mcal/kg MS). El ensilaje resultante aument su MS (de 14,4 a 25,2%, base estufa) y redujo su contenido de PB (de 12,9 a 9,1 %). El contenido de FDN y FDA fluctu en forma poco consistente, variando la primera entre 58,7 y 63,4%; y la segunda entre 39,3 y 41,1 %. La EM estimada in vitro vari entre 2,3 y 2,2 Mcal/kg MS. La DMS in vivo de los ensilajes baj al aumentar el periodo de rezago, de 65,4 a 54,2%. El nivel de ED in vivo tambin se redujo, desde 2,9 a 2,3 Mcal/kg MS (base estufa). La EM baj desde 2,2 a 1,8 Mcal/kg MS (base estufa). Tanto ED como EM presentaron valores ms elevados al ser expresadas base tolueno (ca. 0,3 Mcal/kg MS). La relacin entre EM/ED fue levemente menor en el estado ms temprano (0,78) en relacin a los ms tardos (0,81). Se concluye que el corte para ensilaje no debera exceder al estado de emergencia de espigas.

INTRODUCCION
En zonas hmedas como el sur de Chile, se recomienda la conservacin de forraje como enslale (Torres, 1994), que permite una mayo independencia de las condiciones climticas y as, cosechar el pasto para conservar cuando ste posee un buen valor nutritivo. La calidad del enslale es dependiente de la calidad del forraje al momento del corte, establecindose una relacin inversa entre la cantidad cosechada, que aumenta, y la calidad nutricional, que se reduce, a medida que avanza la madurez del forraje (Spedding y Diekmahns, 1972; Cuevas et al., 1982 Teuber y col., citados por Torres, 1994). Este cambio se asocia a cambios relativos entre componentes morfolgicos, aumentando los tallos en desmedro de las hojas (Tilley y Terry, 1964; Spedding y Diekmahns, 1972). Esto a su vez se acompaa de cambios en la proporcin de tejidos vegetales, aumentando aquellos del tipo esclernquima (Osbourn, 1980) de baja degradabilidad a nivel ruminal por un incremento gradual en el contenido de pared celular y en la lignificacin de sta (Buxton, 1989). Las ballicas de rotacin (L multiflorum) constituyen un recurso forrajero de rpido establecimiento, alta tasa de crecimiento invernal y buena calidad, que permite un importante aporte invernal a travs del pastoreo y elaboracin de ensilaje en la primavera (Demanet, 1994). Un aspecto relevante en estas forrajeras estriba en que si bien hay una reduccin en su calidad a medida que avanza su fenologa, sta tendera a ser menos marcada que la que se observa en otras gramneas (Munro y Walters, 1986; Alomar, 1996).

El objetivo del presente trabajo fue el de evaluar el efecto de ensilar una pradera de ballica italiana (Lolium multiflorum Lam.) cv. Concord, a diferentes estados fenolgicos, sobre la composicin qumica, digestibilidad aparente y valor energtico para bovinos, del forraje conservado.

MATERIALES Y METODOS
Pradera utilizada. El trabajo se realiz en la Estacin Experimental "Vista Alegre", de la Universidad Austral de Chile, ubicada en Valdivia. Se ensil una pradera de ballica italiana, establecida junto con trbol rosado, a fines de marzo de 1994. La fertilizacin fue de 50,110 y 48 kg/ha de N, P2O5 y K2O, respectivamente. La pradera se utiliz en invierno mediante pastoreo de vacas lecheras con cerco elctrico. El rezago para el corte de ensilaje se inici el 27 de agosto, en que se fertiliz con 40 kg/ha de N. Al momento del corte correspondiente a cada tratamiento, la presencia de trbol y otras especies era despreciable, dominando ampliamente la ballica italiana. Confeccin de ensilajes. Los cortes se realizaron entre noviembre y diciembre de 1994, utilizando una cosechadora marca Gehl y conservando el forraje en forma directa en silos experimentales tipo parva, con ca. 3.000 kg de pasto verde en cada uno. El sellado se efectu con polietileno negro y se cubri con una capa de tierra. Al ensilar, se tom y congel una muestra compuesta del forraje cosechado en cada estado, para anlisis qumicos posteriores. Los estados fenolgicos determinados segn el criterio de Montaldo y Paredes (1981) y las respectivas fechas de corte (y das de rezago), fueron: bota o preemergencia de espigas, 9/11/94 (75 das); inicio de espigadura, 16/ 11/94 (82 das); inico de floracin, 22/11/94 (88 das); y grano lechoso, 22/12/94 (118 das). Los silos comenzaron a abrirse en enero de 1995, para desarrollar las pruebas de metabolismo. Pruebas de metabolismo. Los ensayos in vivo se desarrollaron de acuerdo a un protocolo definido previamente, que se explica a continuacin, ya que este estudio forma parte de un proyecto ms amplio sobre valoracin de ensilajes. Como ani-males experimentales se utilizaron terneros de ca. 200 kg, utilizndose 4 animales por cada ensilaje. Los ensilajes se evaluaron en perodos consecutivos, de acuerdo al orden de confeccin. En el primer periodo (ensilaje del corte ms temprano), los animales se adaptaron al consumo de ensilaje durante una fase de 8 das en corral, registrndose el consumo voluntario promedio en los ltimos 3 das. Luego se ubicaron en jaulas metablicas, donde se registr el consumo voluntario individual por 2 das. A partir de entonces, el consumo se restringi a un 70% de ad libitum, ms 50g de sales minerales al da, dndose una fase de 5 das de adaptacin a este rgimen, el que se mantuvo hasta el final del ensayo. El primer perodo preexperimental fue por lo tanto de 15 das. Luego se procedi a la fase experimental o de coleccin, que tuvo una duracin de 6 das. En los 3 perodos siguientes, el perodo preexperimental de adaptacin al nuevo ensilaje se redujo a 5 das, luego de los cuales hubo 6 das de coleccin. La alimentacin se realiz dos veces al da (9,30 y 15,30 hs) y se ofreci agua ad libitum en baldes. En cada perodo experimental se colect y congel diariamente una muestra de ensilaje ofrecido, elaborando una muestra compuesta para anlisis qumicos. Previo a la alimentacin de la maana y diariamente, se colect y pes el total de fecas y orina (esta ltima recogida sobre 6 ml de formalina), guardndose en congelador

alcuotas de 5% y 1% del total producido de fecas y orina, respectivamente. Se confeccion asi una muestra compuesta al final del perodo, para realizar los anlisis de laboratorio. Determinaciones de laboratorio. Se determin materia seca en estufa a 105C (MS) en el material original, ensilajes y fecas y tambin por destilacin a reflujo con tolueno (MStol) en el ensilaje. La MS de la orina se determin por refractometra. Al material original y ensilajes, se les determin protema bruta (PB), segn AOAC (1984); fibra detergente neutro (FDN) y fibra detergente cido (FDA) por el mtodo de Goering y Van Soest (1972). El contenido de energa bruta (EB) en ensilaje y orina se determin con bomba calorimtrica en el material previamente liofilizado y la energa metabolizable in vitro (EM vitro), se estim mediante la ecuacin de Garrido y Mann, (1981) a partir del contenido de materia orgnica digestible en la MS ("valor D") determinada por el mtodo de dos etapas con licor ruminal-pepsina (Tilley y Terry, 1963). Determinaciones in vivo. Se calcul la digestibilidad aparente de la MS (DAMS) y el contenido de energa digestible (ED) y metabolizable (EM vivo)del ensilaje. Para esto, el consumo de ensilaje se expres en base a MStol y a fin de llevar las prdidas fecales a una base comparable, se multiplic el contenido de MS fecal obtenido en estufa por el factor 1,09 y el contenido de EB de las fecas secadas en estufa, por el factor 1,03. Estos factores de correccin se obtuvieron paralelamente en nuestro laboratorio con muestras diferentes (Anrique et al., no publicado). Las prdidas de energa como metano se estimaron a partir de la ED in vivo, a partir de la ecuacin de Blaxter y Clapperton, (1965). Anlisis estadstico. Para evaluar el efecto de estados fenolgicos (tratamientos) sobre la DAMS, EDvivo y EMvivo se utiliz el Anlisis de la Varianza de acuerdo a un diseo completamente al azar, de 4 tratamientos (estados fenolgicos) con 4 repeticiones. Al existir diferencias entre tratamientos (P < 0,05), se emple la prueba de Tukey para comparar los promedios. Los valores de composicin qumica del forraje fresco y ensilaje no se compararon estadsticamente, por carecerse de repeticiones (muestras compuestas). PRESENTACION Y DISCUSION DE RESULTADOS Composicin del material original. La composicin del material original cosechado para confeccionar los ensilajes en los distintos cortes y estados fenolgicos, se presenta en el Cuadro 1. De acuerdo a lo esperado, el contenido de MS tiende a aumentar en forma consistente a medida que el forraje madura. El nivel de materia seca al corte influye en el proceso de conservacin y en el escurrimiento de efluentes durante el proceso fermentativo temprano, ya que aquellos forrajes cosechados con niveles de MS cercanos o mayores a 25% presentan escurrimientos mnimos o nulos, dependiendo de otros factores (Alomar, 1995).

Cuadro 1. Composicin qumica de ballica Concord a diferentes estados fenolgicos (base MS). Chemical composition of Concord ryegrass at different phenoiogical stages (DM basis). Corte Bota 9/11/94 Espiga 16/11/94 Flor 23/11/94 Grano 22/12/94 MS % 13,6 15,9 19,2 29,5 PB % 13,7 11,7 12,2 7,8 FDN % 50,8 52,4 56,0 60,9 FDA % 30,6 31,3 34,7 39,5 EM (Mcal/kg MS) 2,44 2,49 2,46 2,19

El contenido de PB es mximo en el estado ms temprano y mnimo en el estado de grano, pero no muestra una tendencia regular en los estados intermedios. Las fracciones fibrosas y valor energtico, son consistentes en aumentar y disminuir respectivamente, a medida que progresa la fenologa. Composicin de ensilajes. La composicin de los ensilajes se presenta en el Cuadro 2, expresada en base a MS. Se aprecia que el contenido de MS (secado en estufa) tiende a aumentar con la madurez, lo que es esperable, pues refleja lo que sucede con el material original. Los valores presentan una diferencia positiva o negativa de 2 a 3 unidades porcentuales respecto del forraje fresco. Las diferencias positivas pueden deberse a escurrimiento de efluentes y las negativas, a prdidas fermentativas de materia seca, unidas (ambas) a posibles efectos de muestreo. Al relacionar el contenido de MS obtenido mediante estufa con la MS obtenida al determinar el contenido de agua por destilacin a reflujo con tolueno, se obtuvo un aumento de la MS mediante el ltimo mtodo, en trminos relativos, de un 10,42; 14,26; 12,53 y 13,89%.

Cuadro 2.

Composicin qumica (base MS estufa) del ensilaje de ballica Concord a diferentes estados fenolgicos. Chemical composicion (oven DM basis) of silage from Concord ryegrass at different phenological stages. MS (%) 14,4 15,4 19,2 25,2 PB (%) 12,9 11,8 11,0 9,1 FDN (%) 58,7 59,9 58,9 63,4 FDA (%) 40,0 40,0 39,3 41,1 EM (Mcal/kg MS) 2,33 2,40 2,25 2,16

Estado Bota Espiga Flor Grano

El contenido de PB tiende a reducirse al avanzar la madurez, tendencia que es coherente con lo esperado y que no se observa claramente en el caso del material fresco. El contenido de paredes celulares (FDN) es ms elevado en los ensilajes del material ms maduro, pero sin una tendencia tan definida como la que se presenta en el material fresco. Adems, tanto FDN como FDA son ms elevadas que las que presenta el pasto al corte. Esto podra deberse a que en el proceso fermentativo ocurre una cantidad variable de prdidas, que afecta preferentemente a los compuestos ms solubles (contenido celular), siendo menos fermentables los componentes de la pared celular, la que en trminos relativos, tiende a concentrarse. El contenido de EM tiende a reducirse con la madurez, aunque no sigue un patrn tan definido como el del forraje al corte. El ensilaje al estado de "espiga" es el que distorsiona la tendencia, al presentar un valor levemente superior al de "bota". Esto podra ser el resultado de mayor acumulacin de carbohidratos no estructurales en este perodo. La calidad del ensilaje correspondiente al corte ms temprano es inferior a lo que podra esperarse. Sin embargo, datos publicados en la UACH indican para ensilajes de ballicas bianuales, valores promedio de PB, FDA y EM, de 11,9%, 45,4% y 2,17 Mcal/kgMS, respectivamente (Anrique et al, 1995). Estos valores son comparables a aquellos de los estado ms tardos del presente trabajo. La calidad del proceso fermentativo de los ensilajes fue satisfactoria, ya que para los cuatro silos, el pH fluctu entre 3,8 y 3,9; en tanto que el nitrgeno amoniacal, como porcentaje del N total se mantuvo entre 8,6% (corte ms temprano) y 7,3% (corte ms tardo). De acuerdo a esto, se podra sostener que la cosecha al momento de emergencia de espigas permitira contar con un ensilaje de calidad aceptable, teniendo la precaucin de aplicar una buena tcnica de confeccin de ensilaje, a fin de evitar los riesgos de calidad fermentativa asociados a un bajo contenido de MS a la cosecha. Digestibilidad in vivo. Los valores de digestibilidad aparente obtenidos con los terneros, se muestran en el Cuadro 3.

Cuadro 3. Digestibilidad in vivo promedio ( desviacin estndar) de la materia seca de los ensilajes (%). Average ( standard deviation) in vivo dry matter digestibility of silages (%). Estado Bota Espiga Flor Grano BMS estufa 65,4a 64,3a 61,0b 54,2c 1,68 0,69 1,06 1,23 BMS tolueno 65,8a 1,66 65,9a 0,66 62,2b 1,03 56,1c 1,18

Las letras diferentes acompaan a promedios distintos (P < 0,05).

Existe una clara tendencia a la reduccin de la digestibilidad con los rezagos ms prolongados y el avance de la fenologa. Esto est de acuerdo a lo esperado, ya que la mayor proporcin de tallos respecto de las hojas y el aumento en los compo-nentes de las paredes celulares que acompaa a la madurez, -que aqu se apreci ms claramente en el material original que en el ensilaje- es un hecho bien documentado (Spedding y Diekmahns, 1972; Munro y Walters, 1986; Alomar, 1996). Los valores de digestibilidad determinados son bastante homogneos, ya que la desviacin estndar de los datos representa coeficientes de variacin inferiores al 5%. No se detectaron diferencias importantes por el hecho de corregir el contenido de humedad por tolueno. Valores energticos in vivo. Resulta de particular inters evaluar componentes de valor nutricional del forraje, dentro de los cuales el valor de energa til, ya sea como energa digestible (ED) o EM, constituye un elemento muy relevante, pues es el nutriente que presenta mayores limitaciones en los sistemas intensivos de produccin. En el Cuadro 4 se presentan los valores de ED y EM para los ensilajes de cada tratamiento. Los valores corresponden a determinaciones base MS estufa y base MS tolueno.

Cuadro 4. Contenido de ED y EM (Mcal/kg MS) in vivo de los ensilajes. In vivo digestible (ED) and metabolizable (EM) energy (Mcal/kg MS) content of silages. Estado fenolgico Bota Espiga Flor Grano ED BMS est* 2,91a 2,83a 2,64b 2,31c BMS tol** 3,18a 3,14a 2,93b 2,63c BMS est 2,23a 2,21a 2,09b 1,82c EM BMS tol 2,50a 2,53a 2,38b 2,13c

Letras diferentes acompaan a promedios distintos ( P < 0,05) * : Base MS estufa ** : Base MS tolueno

El contenido energtico de los ensilajes se afecta por el avance de la madurez, notndose una reduccin significativa desde el estado de floracin, para ambas formas de expresin. Sin embargo, es posible que la EM no siga estrictamente la misma tendencia que la ED, en algunos casos. Al respecto, se ha demostrado que la prdida de energa por la orina aumenta con la digestibilidad del ensilaje (Givens et al, 1989), lo que tiene efecto en la determinacin de EM, pero no de ED. Dichas diferencias fueron confirmadas en el presente trabajo, ya que las prdidas urinarias de energa fueron menores a medida que se alarg el perodo de rezago. As, estas prdidas expresadas como porcentaje de la EB consumida

(base MS tol), para los cuatro estados consecutivos, fueron de 6,26; 5, 16; 4,21 y 6,45% respectivamente. Lo anterior afecta la relacin EM/ED, que si bien en este caso (datos BMS tol.) present una variacin leve, fue algo menor en el ensilaje de corte ms temprano (0,786) y algo mayor en el ms tardo (0,81). Cabe mencionar que el corte ms temprano aqu estudiado, corresponde a un estado de pre-emergencia de espigas. Es probable que en un estado vegetativo, con mayor contenido de protena, se presenten mayores alteraciones en este aspecto. Al contrastar los valores de EM in vivo (Cuadro 4) con los estimados in vitro a travs de licor ruminal-pepsina (EM en Cuadro 2), se aprecia una pequea diferencia en un rango de 1 a 7%, en trminos relativos, entre ambas estimaciones. De los resultados obtenidos se puede concluir que a medida que aumenta la madurez del forraje desde la preemergencia de espigas (bota), se produce una reduccin del valor nutricional del ensilaje obtenido de L. multiflorum cv. Concord, que se manifiesta significativamente (P < 0,05) slo desde el inicio de la floracin aproximadamente, por lo que el corte para ensilaje debera ser previo a dicho estado, aunque el bajo contenido de materia seca del perodo previo (inicio de emergencia de espigas) aconseja extremar el cuidado en la tcnica de ensilaje, para obtener un adecuado proceso fermentativo.

BIBLIOGRAFIA
ALOMAR, D. 1995. Efluentes de ensilajes: caractersticas, aspectos productivos e impacto ambiental. Sociedad Chilena de Produccin Animal. Serie Simposios y Compendios, 3: 6791. ALOMAR, D. 1996. Efecto del estado fenolgico sobre la composicin qumiconutricional de tres gramneas forrajeras. AgroSur, 24: 14-22. ALOMAR, D. y R. ANRIQUE. 1986. Valor nutritivo de praderas. In: Produccin de forrajes. L. Latrille (Ed.), Valdivia, Chile. Universidad Austral de Chile, Facultad de Ciencias Agrarias, Instituto de Produccin Animal; pp 228-247. ANRIQUE, R., X. VALDERRAMA y R. FUCHSLOCHER. 1995. Composicin de alimentos para el ganado en la zona sur. Fundacin Fondo de Investigacin Agropecuaria, Ministerio de Agricultura, 57 p. AOAC (ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS). 1984. Official methods of analysis of the Association of Official Analytical Chemists. Sydney Williams, editor. Arlington, Va., 1141 p. BLAXTER, K. L. and J. L. CLAPPERTON. 1965. Prediction of the amount of methane produced by ruminants. Br. J. Nutr. 19: 511-522.

BUXTON, D. R. 1989. In Vitro Digestion kinetics of Temperate Perennial Forage Legume and Grass Stems. Crop. Sci. 29: 213-219. CUEVAS, E; O. BALOCCHI, R. ANRIQUE y M. JORQUERA. 1982. Valor nutritivo de las principales especies de una pradera permanente en la Dcima Regin. Protena y pared celular. AgroSur, 10: 79-83. DEMANET, R. 1994. Produccin de forrajes en base a ballicas. In: Produccin Animal, L. Latrille (Ed.), Instituto de Produccin Animal, Facultad Ciencias Agrarias, Universidad Austral de Chile, Valdivia, pp: 116-132. GARRIDO, O y E. MANN. 1981. Composicin qumica, digestibilidad y valor energtico de una pradera permanente de pastoreo a travs del ao. Tesis Ing. Agr., Valdivia, Universidad Austral de Chile, Facultad de Ciencias Agrarias, 59 p. GIVENS, D. L, J. M. EVERINGTON and A. H. ADAMSON. 1989. The Digestibility and Metabolisable Energy Content of Grass Silage and their Prediction from Laboratory Measurements. Anim. Feed Sci. and Technol., 24: 27-43. GOERING, H. K. and P. VAN SOEST. 1972. Forage fiber analysis. ARS-USDA Agriculture Handbook N 379. Washington D. C. MONTALDO, P. y F. PAREDES. 1981. Observaciones fenolgicas en praderas antropognicas en dos localidades de la Provincia de Valdivia, Chile. AgroSur, 43-54. MUNRO, J. M. M. and R.J. K. WALTERS. 1986. The feeding value of grass. In: J. Frame (Ed.), Grazing, Occasional Symposium N 19, British Grassland Soc., Lavenham Press, Suffolk; pp: 65-78. OSBOURN, D. F. 1980. The feeding value of grass and grass products. In: W. Holmes (Ed.), Grass, its production and utilization. Blackwell, Oxford, pp: 70-124. SPEDDING, R. and C. DIEKMAHNS. 1972. Grasses and legumes in British agriculture. Commonwealth Bureaux of Pasture and Field Crops. Bull. 49. 511 p. TILLEY, J. and R. TERRY. 1964. The digestibility of leaves and stems of perennial ryegrass, cocksfoot, timothy, tall fescue and lucerne, as measured by an in vitro procedure. J. Br. Grassl. Soc. 19: 363-372. TILLEY, J. and R. TERRY. 1963. A two stage technique for the in vitro digestion of forage crops. J. Br. Grassl. Soc. 18: 104-111. TORRES, A. 1994. Praderas destinadas a ensilaje. In: Produccin y utilizacin de ensilajes de pradera para agricultores de la zona sur. M.Gonzlez y G.Bortolameolli (Eds.), Instituto de Investigaciones Agropecuarias, Est. Exp. Remehue, Serie Remehue N 52, pp: 119-143.