Potential of Cultivated Ganoderma lucidum

Mushrooms for the Production of Supplements

Enriched with Essential Elements
Abstract: Ganoderma lucidum is an important medicinal mushroom species and there is continuous interest in its bioactive

properties. This study evaluated whether it may additionally serve as a nutritional supplement for the trace elements: selenium
(Se), copper (Cu), and zinc (Zn). Mushrooms were cultivated on substrates enriched with 0.1 to 0.8 mM of inorganic Se alone
or in combination with Zn and/or Cu. Supplementation increased accumulation of the ele-ments in fruiting bodies regardless
of the applied cultivation model. G. lucidum demonstrated the ability to accumulate signicant amounts of organic Se,
maximally amounting to (i) over 44 mg/kg when the substrate was supplemented only with Se, (ii) over 20 mg/kg in the
Se+Cu model, (iii) over 25 mg/kg in the Se +Zn model, and (iv) 15 mg/kg in the Se+Cu+Zn model. The accumulation of Cu
and Zn steadily increased with their initial substrate concentra-tions. Maximum concentrations found after supplementation
with 0.8 mM amounted to over 55 mg/kg (Se+Zn) and 52 mg/kg (Se+Cu+Zn) of Zn, and 29 mg/kg (Se+Cu) and over 31
mg/kg (Se+Cu+Zn) of Cu. The greater the supplemented concentration and number of supplemented elements, the lower the
biomass of G. lucidum fruiting bodies. Nevertheless, it still remained high when the substrate was supplemented up to 0.4
mM with each element. These results highlight that G. lucidum can easily incorporate elements from the substrate and that,
when biofortied, its dried fruiting bodies may serve as a nutritional source of these essential elements.
Keywords: copper, Ganoderma lucidum, medicinal mushroom, selenium, zinc

Practical Application: The Ganoderma lucidum fruiting bodies biofortied with essential elements, such as Se, Cu, and Zn

in this study may have potential value for both nutritional and medicinal use. As shown, cultivation of this mushroom species
with substrates enriched with Se, Se and Cu, Se and Zn or Se, Cu and Zn is uncomplicated, inexpensive, and leads to the
production of relatively high biomass of fruiting bodies. Considering the popularity of G. lucidum, its biofortication with
Se, Cu, and Zn may be of commercial interest.

Introduction
For centuries mushrooms have been collected for consumption
and health benets, the latter originating mainly from traditional
eastern medicine (Ferreira and others 2010). Nowadays, global
interest in the pharmaceutical and dietary use of cultivated mushrooms is on the rise. This is largely due to an increasing number of
studies providing convincing evidence of their nutritional and
therapeutic value, but also as a result of the commercialization of
automated and relatively inexpensive methods of mushroom cultivation (Valverde and others 2015). Unlike collected mushrooms,
in which accumulation of toxic substances in edible parts cannot be
controlled (Kalac 2013; Mleczek and others 2015a), cultivation can
ensure supervised and high-quality conditions enabling the nal
product to be standardized and safe for consumers (Chang and
Wasser 2012; Cleaver and others 2012).
Nutritional deciencies are a worldwide problem, they not only
lead to the development of serious health disorders, but also generMS 20151668 Submitted 10/7/2015, Accepted 12/12/2015. Author Rzymsk is with Dept.
of Environmental Medicine, Poznan Univ. of Medical Sciences, Poznan, Poland.
Authors Mleczek and Gasecka are with Dept. of Chemistry, Poznan Univ. of Life
Sciences, Poznan, Poland. Author Niedzielski is with Faculty of Chemistry, Adam
Mickiewicz Univ. in Poznan, Poznan, Poland. Author Siwulski is with Dept. of
Vegetable Crops, Poznan Univ. of Life Sciences, Poznan, Poland. Direct inquiries to
author Rzymski (E-mail: rzymskipiotr@ump.edu.pl).

C
R

2016 Institute of Food Technologists

doi: 10.1111/1750-3841.13212

Further reproduction without permission is prohibited

ate signicant medical costs (Ames and Wakimoto 2002). Therefore, the need to develop successful methods of prevention is an
urgent necessity. Se and Cu deciencies usually occur in regions
where their content in the soil is extremely low (Ge and Yang 1993;
Rayman 2009). It is estimated that 17% of the human pop-ulation is
currently at risk of developing of Zn deciency (Wessells and Brown
2012). Mushrooms have a particular potential in the eld of
preventing deciencies because (i) they represent natural products
of wide and traditional use in various cuisines (Kalac 2013); (ii)
they have been shown to take up various essential el-ements from
substrate and to further accumulate them in their edible parts
(Mleczek and others 2015b); and (iii) their commer-cial cultivation
can be made cost- and time-effective (Valverde and others 2015).

G. lucidum (known as Chinese Lingzhi) is one of the most

promising fungal species, its medicinal properties have long
been acknowledged (Bishop and others 2015). Its extracts are
known for their hypoglycemic effects, maintenance of gut
microbiota, reduction of hypertension, and control of cholesterol
level (Berger and others 2004; Delzenne and Bindels 2015; Ma
and others 2015). The evidenced biological activity of G.
lucidum has led to its increasingly popular use as a nutraceutical
and to the establishment of a market segment of over 2.5 billion
U.S. dollars (Li and others 2013).

Vol. 81, Nr. 3, 2016 Journal of Food Science

C587

C: Food Chemistry

Piotr Rzymski, Mirosaw Mleczek, Przemysaw Niedzielski, Marek Siwulski, and Monika Gasecka

G. lucidum enriched with trace elements . . .

C: Food Chemistry

Recent studies have demonstrated that G. lucidum can be successfully enriched with selenium (Se), but also that it may biotransform inorganic Se salts through their integration into proteins and
polysaccharides (Niedzielski and others 2014). This nding is important if one considers that the biological role of Se is mainly
mediated by its organic form, particularly selenoproteins. For example, Se is known to be a reducing cofactor for some antiox-idant
enzymes and as a catalyst for the synthesis of active thy-roid
hormone (Schomburg and Kohrle 2008). It is also required for
proper immune response (Hawkes and others 2001) and reproductive function (Ahsan and others 2014). Importantly, it has
been demonstrated that polysaccharides (for example, SeGLP-2B-1)
isolated from Se-enriched G. lucidum showed antitumor activ-ity
through inducement of apoptosis in breast cancer cells (Shang and
others 2011), whereas proteins isolated from Se-supplemented
mushrooms exhibited signicant immunomodulatory properties
(Min-Chang and others 2014).
Although cultivation of G. lucidum supplemented with selected
elements has been a subject of previous investigations (Matute and
others 2011; Niedzielski and others 2014), no study has so far
evaluated its growth and bioaccumulation when cultivated on
substrates enriched with more than 1 element. The enrichment of a
medicinal mushroom with 2 or even 3 essential minerals may
signicantly increase the nutritional and pharmaceutical value of the
nal product and broaden its application. This is particularly
important if one considers that mineral deciencies have become an
increasing nutritional issue among many human populations and
may contribute to the development of chronic diseases (Ames and
Wakimoto 2002). For example, the decreased status of copper (Cu)
and zinc (Zn), both elements pivotal for the regulation of cellular
functions, has been linked to an impairment of reproduc-tive and
immune system functions and to neuropathology (Kumar and others
2004; Fukada and others 2011).
This study evaluated whether G. lucidum can be successfully supplemented with Se in combination with Cu and/or Zn and how such
supplementation affects the growth of this mushroom species. Our
study extends the body of information on the biofortication
potential of G. lucidum with essential trace elements.

constituted 3% in relation to the wet weight of the substrate, and

placed in polypropylene bags (20 35 cm) with a microlter. Each
bag contained 450 g of the substrate. Mycelium incubation was
allowed at 25 C and a relative humidity of 80% to 85%. Once the
substrate was totally covered with the mycelium, it was trans-ferred
to the cultivation chamber in which the temperature was maintained
at 25 C and relative humidity of air of 85% to 90%. The cultivation
was additionally irradiated with uorescent light of 500 lx intensity
for 12 h a day. The growth facility was aerated in such a way as to
maintain CO2 concentration below 1000 ppm. The yield included
whole fruiting bodies harvested successively as they matured: after
50 d (control), 53 d (Se+Cu), 58 d (Se+Zn), or 59 d (Se+Cu+Zn).

Reagents
All reagents, phosphoric acid, sodium hydroxide, disodium hydrophosphate, and potassium dihydrophosphate (for phosphate
buffer preparation), were of analytical grade (Merck, Darm-stadt,
Germany). Water was puried with a Milli-Q Advantage A10Water
Purication System (Merck Millipore, Darmstadt, Ger-many).
Compressed argon gas of N-5.0 purity (99.999%) was obtained from
Linde (Poznan, Poland). For Cu, Zn, and Se spec-trometric
determinations commercial standards (Merck) were ap-plied. The
standard stock solutions were stored in glass bottles at 4 C in
darkness. Low concentration standards obtained by dilu-tion of the
stock solutions were prepared daily. Palladium solution was
prepared from commercial palladium (as nitrate) chemical modiers
(Merck).

Mushroom sample collection and preparation

Mushrooms were collected when their biomass no longer
showed signs of further increase. The fruiting bodies were then
weighed, dried using an electric drier SLW 53 STD (Pol-Eko,
Wodzisaw Slaski, Poland) at 50 2 C for 48 h, weighed again to
determine the dry weight, and then ground in a Cutting Boll Mill
200 (Retsch GmbH, Haan, Germany) for 1 min.
The powdered samples were sieved through a 0.02 mm sieve,
and a 1.000 0.001 g sample was extracted by 1 mol/L phosphoric acid in an ultrasonic bath at an ambient temperature for
30 min. Samples were then passed through lter paper (washed
with 200 mL water and 20 mL phosphate buffer). Sample pH
Materials and Methods
was adjusted to 6.0 to 6.5 by the addition of 10 mol/L of sodium
hydroxide solution and nally the samples were diluted to 20 mL
Experimental design
The substrate for G. lucidum was prepared from a mixture of with phosphate buffer.

beech, birch, and oak sawdust (3:1:1). The mixture was supplemented with 25% of wheat bran, 2% of corn our, and 1% of CaSO4 Instruments
For Cu and Zn determination ame, atomic absorption specand moistened to 60% of water content using distilled wa-ter and
then sterilized at 121 C for 1 h. The following salts were used in the trometry (FAAS) SpectrAA 220 FS (Varian, Australia) was apexperiment: sodium selenite (Na2SeO3 (IV)), sodium selenate plied with stoichiometric ame acetylene (2.0 L/min) and air

(13.5 L/min). Hollow cathode lamps (Varian, Australia) were

(Na2SeO4 (VI)) supplied by Acros Organics (Morris Plains, N. J., used with the following parameters for Cu: wavelength 324.8
U.S.A.), copper (II) selenate (CuSeO42H2O), and zinc nitrate nm, slit 0.5, lamp current 10 mA, and for Zn: wavelength 213.9
hexahydrate (Zn(NO3)2 6H2O) supplied by Sigma-Aldrich (St.
Louis, Mo., U.S.A.). These salts were dissolved in such an amount
of sterile distilled water sufcient to obtain appropriate
concentrations of 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, and 0.8 mM for all elements in
the substrate after they had been added to it. Following the addition
of the salt solution, the substrate water content reached
approximately 60%. Accumulation of the 3 elements and growth of
the mushroom fruiting bodies were determined in 5 different
systems: (1) the reference (control - c) system without Cu, Se, and
Zn salts, (2) Se addition, (3) Se+Cu addition, (4) Se+Zn addition,
and (5) Se+Cu+Zn addition to the substrate. The substrate was then
mixed with spawn (on sawdust) of G. lucidum GL01, which
C588 Journal of Food Science
2016

Vol. 81, Nr. 3,

nm, slit 1.0, lamp current 5 mA, both with background correction
with a deuterium lamp. Calibration was provided for water-based
stan-dard solution without matrix matching using commercial
standards (Merck). The coefcients of variation (r2) for
calibration curves exceeded 0.99. The determination limits were
0.1 mg/kg with an uncertainty of about 5.0% (measured as RSD)
for both determined elements.
For Se determination, electrothermal atomic absorption spectrometry (ETAAS) SpectrAA 280Z (Agilent Technologies, Mulgrave, Victoria, Australia) with Zeeman background correction

G. lucidum enriched with trace elements . . .

Table 1Content (mg/kg dry weight) of particular Se forms in G. lucidum growing on substrates with Se(IV)/Se(VI)/Cu/Zn addition.

Elements addition (mM)

Se

Se+Cu

Se+Zn

ab

2.8

control
0.1
0.2

0.1 0.5ab 0.3

2.4 8.7 b 1.8
22.3a 1.6 11.8b 2.0

0.4

31.8a 1.2

0.6
0.8

Elements addition (mM)

control

0.1
0.2

0.2a
12.6a

19.6a
23.0

0.7

4.7

4.5

4.4

Se

ab

1.5
8.2bc 2.7
9.6 b 2.4
ab

9.9

2.4

ab
12.4ab
13.7

0.7
3.9b 1.4
1.7 b
2.2c

2.5

3.2

2.7

0.5

1.4

c
2.7b
4.3

1.5
3.2

Se
0.1

ab

12.7

8.5

11.6

2.2

34.6a 1.1 14.0

ab
4.9
2.5

ab
23.4 4.8 16.8
4.4 14.8 2.6
Se total
24.3a

15.9ab

9.1a

27.4a
39.5a
48.1a
50.1a

68.2

1.0

2.5
2.7
4.0
2.5
5.6

Se+Cu

0.0

0.1a 0.0
0.2a 0.1
a

2.9
4.6

0.7

0.4

0.4

0.2

0.2

Se+Zn
0.1

3.1

1.6

c
3.1b

4.8
+

1.6

3.2

Se
a
8.8a

14.7a 2.7

16.9a 1.0
17.2

0.1a 0.0
0.4a 0.2
2.8

4.5
ab 0.5
0.4 0.1

3.7

1.7

Se

Se Cu
+
8.9a 1.9
9.2a 0.7
12.9a 1.2
a

15.3

1.8

17.5a
2.4
bc 0.6
44.8 4.3 20.9 1.6
Cu
a

Se

Cu

ab

ab

17.4a

3.3

29.0

24.6a
33.7a
25.9a
27.2a

3.2
5.5
4.2
2.7
4.2

Se

0.0

0.2a 0.1
0.5a 0.2

1.5

Se+Cu+Zn

0.2

0.3

3.6
a
1.1

0.7
0.3

0.0

0.1a 0.0

0.2b 0.1

0.7

ab

0.5

0.2

Se Zn

Se Cu

+a
7.9a

6.6a

0.4

2.1

8.6c

Se Cu

31.3
22.7a
36.0a
27.5a
26.7a

6.6
5.0
11.1
15.2
12.9

0.2

2.4 15.0 2.1

Zn

26.0

Se Zn

1.8

Zn
+

9.4a 1.2 11.5a 4.2

12.1a 2.8 13.1a 2.7
16.4
2.3
20.6ab 2.5 11.4c 0.9

15.1a

0.1

Cu Zn
a

0.2

b
0.5

org

25.9a

Se Cu
Se
Zn
Se Cu Zn
9.7 2.3 9.6 1.2 9.8 0.6
18.1 b 2.4 17.8 b 3.9 13.9b 4.9
25.1b 2.2 22.3b 5.3 17.2b 3.7
28.0b 7.7 28.0b 4.1 14.6c 3.0
31.5b 4.7 36.5b 2.8 11.8c 2.5
37.7 4.0 40.8 3.9 19.8 1.8

1.0

0.2

inorg

0.0

Se
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8

9.4ab
16.4

Se+Cu+Zn

Se Cu
Se Cu Zn
+
+
Sea+Zn
ab
+
0.8 abab 0.4
3.0
1.5
1.9 b
0.5
12.7a 2.4 8.9 b 1.8 8.4bc 2.8 2.3c 0.7
22.5a 1.7 12.2b 2.2 10.2 b 2.5 4.1b 1.4
b

control

7.0

bc

Se

0.3

0.5

0.4
0.6
0.8
Elements
addition (mM)

9.9

Se(VI)

5.8a

28.1a
34.6a
36.0a
51.8a

55.1

1.0

5.5
4.8
4.4
3.3
4.9

+
a

5.2a

Zn

1.3

29.1a
31.5a
37.3a
49.7a

14.9
13.4
12.3
15.5
52.5 10.9

Mean values (n = 3) standard deviations; identical superscripts denote no signicant (P < 0.05) difference between mean values in rows according to Tukeys HSD
test (MANOVA) for particular Se forms, Cu and Zn determined in mushrooms.
Se means the nal concentrations of both selenium salts (Se(IV) and Se(VI)).

was applied. A selenium hollow cathode lamp (wavelength 196.0

nm, slit 1.0 nm, and current 10 mA) was used and a temperature
program was optimized as follows: drying 85 to 120 C for 55 s;
ashing 1000 C for 8 s; atomization 2600 C. Pyrolitic graphite
tubes and palladium solution as a chemical modier (10 L of
500 mg/L for 20 L of sample) were used. Calibration of this
method was provided for water-based standard solution without
matrix matching using commercial standards (Merck). The r2 for
calibration curves exceeded 0.99. The limit of detection was 0.01
mg/kg and the uncertainty of results was obtained (measured as
RSD) at a level of 5.0%.
The uncertainty of results was mainly produced by the sample
preparation step and was generally similar for FAAS and ETAAS.
The traceability of both analytical procedures was controlled by
certied reference material analysis (CS-M-1, Inst. of Nuclear
Chemistry and Technique, Warsaw Poland, distributed by LGC
Standards, U.K.) after phosphoric acid extraction. The obtained
values were 8.63 0.45, 55.78 2.34, and 1.22 06 mg/kg for
certied values: 9.12 0.83, 60.94 4.62, and 1.37 0.11 mg/kg
for Cu, Zn, and Se, respectively. The recoveries were 95% for Cu,
92% for Zn, and 89% for Se, and were similar to those obtained in
previous studies (Gonzalvez 2009).
In the case of Se species analysis, hyphenated high-performance
liquid chromatography, with hydride generation atomic absorp-tion
spectrometry detection (HPLC-HG-AAS) systems was ap-plied as
described in previous papers (Kozak 2012; Niedzielski and others
2015). The hyphenated analytical system consisted of a Shimadzu
(Kyoto, Japan) liquid chromatograph (LC-10A) equipped with an
HPLC pump (LC-10AT), a vacuum degasser unit (GT-104),
Rheodyne PEEK valve (IDEX, Lake Forest, IL, U.S.A.) and an
anion-exchange column Supelco (Bellefonte, Pa., U.S.A.) LCSAX1 (250 mm, 4.6 mm i.d., resin particle size 5 m) thermostatted
by a column oven (CTO-10ASvp). The chromato-graphic run was
isocratic at 3 mL/min with an injection volume

of 200 L. The measurements were performed with a Model

SpectraAA 220FS spectrometer (Varian, Australia) equipped
with an UltrAA selenium hollow cathode lamp.
The selenium species Se(VI) does not form a volatile hydride, so
in order to receive an analytical signal in the HG-AAS system, it was
necessary to perform a preliminary reduction of Se(VI) to Se(IV).
The reduction was carried out on-line by heating the sam-ple (90 to
100 C) with the reducing agent: 0.5 mol/L thiourea solution in 10
mol/L hydrochloric acid (Kozak 2012). The elu-ate from the
chromatographic column was joined to the stream of the reducing
agent (ow rate 1 mL/min from the peristaltic pump) through a Tshape coupling and directed to the Tygon capillary loop (inner
diameter 0.82 mm) heated in a water bath. The capillary loop outlet
was connected to the hydride generation system. For both analytical
systems PEEK transfer tubing of the eluent from the LC column to
the hydride generation unit was inserted into a Tygon sleeve. The
continuous hydride generation system (model VGA-77; Varian,
Australia) consisted of a manually controlled 4-channel peristaltic
pump with Tygon tubing (0.6 mm i.d.), one reaction coil (PTFE
tubing 0.8 mm i.d., 75 cm length), and 3-way connectors. The
gasliquid separator was made of glass and the interior dead volume
was 3 mL. For the atomization of the selenium hydrides (detected at
196.0 nm), a heating controller, an electrothermally heating mantle,
and a quartz tube (model ETC-60; Varian, Australia) heated to 900
C, were used.
A number of validation parameters characterizing the analyti-cal
method were determined. Calibration was provided for water-based
standard solution prepared in-laboratory from solid selenium salts:
sodium selenite (Na2SeO3) and sodium selenate (Na2SeO4) for
2

Se(IV) and Se(VI), respectively (Merck). The r for calibration

curves exceeded 0.99. Limits of detection of 0.01 mg/kg for both
Se(IV) and Se(VI) and the uncertainty of results (measured as relative standard deviation) at a level of 10% for both selenium forms
were obtained. As it was impossible to estimate the measurement
Vol. 81, Nr. 3, 2016 Journal of Food Science

C589

C: Food Chemistry

Se(IV)

G. lucidum enriched with trace elements . . .

traceability, owing to the lack of any certied reference mateThe concentrations of the organic Se fraction were calculated
rials for determining inorganic Se species, the recovery of each as the difference between total Se concentration determined usselenium species was determined by using the standard-addition ing ETAAS and concentration of inorganic selenium compounds
method. A recovery of 96% to 105% of each species was determined using HPLCHGAAS.
considered as satisfactory.

Statistical analysis and calculations

C: Food Chemistry

The results were analyzed using STATISTICA 10.0 software

(StatSoft, Tulsa, U.S.A.). Because the data met the assumption on
Gaussian distribution (analyzed with the Shapiro-Wilks test),
comparison of element accumulation and yielded biomass be-tween
cultivation models was assessed with multivariate analyses of
variance (MANOVA) with the Tukey HSD method as a post hoc
test. P < 0.05 was considered as statistically signicant.

Results
Accumulation of trace elements in fruiting bodies
Substrate supplementation with Se, Se+Cu, Se+Zn, and
Se+Cu+Zn caused a signicant increase in Se accumulation in the
fruiting bodies in a concentration-dependent manner (Table 1). Even
the addition of 0.1 mM led to a signicant increase in the total
content of Se, regardless of the cultivation model. De-spite the
supplementation of substrates with inorganic Se salts, G. lucidum
fruiting bodies accumulated signicant amounts of organic Se form
(Table 1). After supplementation with 0.8 mM of inor-ganic Se salts,
its organic fraction amounted to 509% of the control level of organic
Se in the Se model, 235% in the Se + Cu model, 394% in the Se+Zn
model, and 190% in the Se+Cu+Zn model.

Increased bioaccumulation of Cu and Zn in G. lucidum fruiting

bodies was observed after these elements had been added to the
substrate, in both the Se+Cu/Se+Zn and Se+Cu+Zn models
(Table 1). Supplementation with the lowest assayed
concentration (0.1 mM) caused a signicant increase of Cu (by
41% in Se+Cu and 50% in Se+Cu+Zn) and of Zn (by 384% in
Se+Zn and 460% in Se+Cu+Zn). The greatest concentration was
in turn, noted after supplementation with 0.8 mM, regardless of
the cultivation model (Table 1).

Biomass of yield fruiting bodies

The applied cultivation model had a signicant effect on the
biomass of G. lucidum fruiting bodies (Figure 1). Generally, the
greater the concentration of trace elements (regardless of their
combination) added to the substrate, the lower the biomass yield.
The greatest biomass was observed after supplementation only with
Se, the lowest after the addition of Se, Cu, and Zn. Im-portantly, the
biomass of fruiting bodies did not decrease below 60 g dry weight
in any cultivation model when the concentration of elements was 0.4
mM (Figure 1). Supplementation, particu-larly at higher
concentration, caused the fruiting bodies to grow thinner. No
changes in color were observed (Figure 2).

Discussion
There is a growing interest in investigating the biofortication of
cultivated mushrooms with trace elements. Generally, the substrate used
for cultivation is only supplemented with one element at a same time.
Under such conditions, various mushroom species, including Pleurotus
eryngii, Pleurotus ostreatus, and Pholiota nameko
Figure 1The biomass (mean SD) of G. lucidum cultivated in Se, (Niedzielski and others 2015), have been shown to signicantly take
Se+Cu, Se+Zn, and Se+Cu+Zn models (n = 3). Identical super-scripts up and accumulate Se in their edible parts. Moreover, our pilot study
denote no significant (P < 0.05) difference between mean values
has shown that G. lucidum may take up decidedly greater Se
according to Tukeys HSD test (MANOVA).

concentrations than other medicinal mushroom species

C590 Journal of Food Science

2016

Vol. 81, Nr. 3,

G. lucidum enriched with trace elements . . .

The co-occurrence of equal levels of Se, Zn, and Cu may potentially induce various interactions between these elements and alter
their uptake by cultivated mushrooms. Although, in this study, the
simultaneous presence of Cu and Zn decreased the accumulation of
Se in the fruiting bodies, its content in every studied model was still
high enough to represent a signicant source of this element for
human nutrition. Importantly, even though some competitive
sequestration between Cu and Zn may have occurred, the con-tent
of these elements in G. lucidum generally increased with its
concentration in the substrate.
Our study supports the view that G. lucidum biotransforms inorganic Se into organic forms. As observed, the inorganic Se content
(particularly Se(IV) form) increased with the degree of its concentration added to the substrate, but it was generally lower than the
organic Se share. In turn, increased inorganic Se content in the
substrate was followed by greater organic Se content in G. lu-cidum
fruiting bodies. Analyses of Se distribution in this mushroom
revealed that over 50% of incorporated Se is integrated with proteins and over 10% with polysaccharides (Zhao and others 2004). It
was further indicated that enrichment of G. lucidum with Se (up to
100 g/g) enhanced polysaccharide and protein synthesis (Zhao and
others 2004). Therefore, biofortication of this mush-room species
with Se may lead to an additionally increased level of other
nutritional components. It is, however, unknown whether the cooccurrence of Cu and/or Zn in substrate may have any impact on
protein and polysaccharide content. This issue requires further
investigation.
An important nding of this study concerns the effect of supplementation on G. lucidum biomass. The substrate addition, partic-

ations. The appearance of bio-fortied products is usually an important feature for potential consumers and alterations may even
decrease the value of the marketed product (Nestel and others 2006).
However, G. lucidum is usually used as a powder or extract, forms
in which observed changes should not have any economic impact on
the nal product. The decrease in G. lucidum biomass with
increasing substrate element concentration highlights that inorganic
Se can also exert toxic effects on mushrooms. It was previously
demonstrated that increased environmental concentra-tions of the
studied minerals can alter the growth of higher plants through
generation of reactive oxygen species, lipid peroxidation, and
decline in sulfur metabolism (Hawrylak Nowak 2013). The
involvement of oxidative stress in the adverse response of mushroom growth to mineral supplementation is supported by a recent
nding that accumulation of Se and Zn in P. ostreatus and P. eryngii is followed by increased synthesis of phenolic compounds and
ascorbic acid (Gasecka and others 2015). Further research is necessary to fully elucidate the effects of Se, Cu, and Zn on the
metabolism of cultivated mushrooms.
It is worth noting that despite the decrease in G. lucidum biomass,
it remained at a satisfactory level once the substrate was supplemented up to a level of 0.4 mM of each element. At this level, the
Se+Cu+Zn cultivation model produced fruiting bodies contain-ing
over 10 mg/kg of organic Se, over 27 mg/kg of Cu and over 37
mg/kg of Zn. For adult individuals, the recommended daily
allowance values have been set at 55 g for Se, 900 g for Cu, and
11 mg (for males) and 8 mg (for females) for Zn (FNB 2001; Hu and
others 2012). Even if one considers the partial loss of trace elements
which may occur during mushroom processing, such as

Figure 2G. lucidum grown on substrates

supplemented with different concentrations
and combinations of trace elements.

Vol. 81, Nr. 3, 2016 Journal of Food Science

C591

C: Food Chemistry

such as Agrocybe aegerita, and Hericium erinaceus (Niedzielski ularly at higher concentrations, caused slight macroscopic changes
in the fruiting bodies (thinner fruiting bodies), but no color alterand others 2014).

G. lucidum enriched with trace elements . . .

C: Food Chemistry

washing or cooking (Kalac and Svoboda 2000), the G. lucidum

grown on substrate supplemented with 0.4 mM of each element
represents a highly nutritional source of Se, Cu, and Zn. Its use in
various forms may be potentially benecial in maintaining trace
element homeostasis and prevent or treat deciencies and related
disorders. Moreover, considering that other compounds found in G.
lucidum exhibit signicant anti-inammatory activities (Bhard-waj
and others 2014) and that Se has the ability to decrease thyroid
peroxidase antibody titers (Drutel and others 2013), the consumption of bio-fortied mushrooms may also be benecial in the treatment of Hashimoto or Graves disease a use which would need
to be further investigated. Nevertheless, it should be emphasized that
the use of bio-fortied G. lucidum, just as with every other mineral
supplement, should be preceded by an evaluation of body mineral
status to avoid overloading and its adverse consequences.
Importantly, the obtained results of biomass and accumulated
levels of elements in fruiting bodies of G. lucidum exhibited low
variability. This highlights that cultivation of G. lucidum for the
purpose of diet supplementation with Se, Cu, and Zn enables high
reproducibility and quality standardization of the nal prod-uct. This
is a denite advantage over the commercial production of some other
naturally-based products such as algae whose min-eral content
largely depends on a culturing and harvesting model (Rzymski and
others 2015). Nevertheless, to ensure the quality of cultivated
species and the safety of the nal food product to hu-man health,
only high-quality substrates should be used as mush-rooms are
known to take up and accumulate signicant amounts of toxic
compounds if they are present in the ambient environment (Mleczek
and others 2015c).

Conclusion
This study highlights for the rst time that G. lucidum could be
utilized to produce dietary supplements enriched with Se, Cu, and
Zn through a biofortication process. To maintain cultivation on a
satisfactory level and to yield sufcient biomass, the substrate
supplementation should not exceed 0.4 mM of each element. Given
that the benecial health effects of this mushroom species have been
shown to be wide-ranging, G. lucidum grown on sub-strate
supplemented with trace elements may represent a versatile
biopharmaceutical product with a broad application spectrum.

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Potencial de hongos Ganoderma lucidum cultivadas

para la produccin de suplementos Enriquecido con
elementos esenciales
Resumen: El Ganoderma lucidum es una importante especie de hongo medicinal y hay un inters continuo en sus propiedades
bioactivas. Este estudio evalu si podra servir, adems, como un suplemento nutricional para los oligoelementos: el selenio
(Se), cobre (Cu) y zinc (Zn). Las setas se cultivan en sustratos enriquecidos con 0,1 a 0,8 mM de Se inorgnico solo o en
combinacin con Zn y/o Cu. La suplementacin aumento de la acumulacin de los elementos en cuerpos fructferos con
independencia del modelo de cultivo utilizada. G. Lucidum demostr la capacidad de acumular cantidades significante de Se
orgnico, como mximo un importe de (i) ms de 44 mg / kg cuando el sustrato se complement solamente con Se, (ii) ms
de 20 mg / kg en el modelo Se + Cu, ( iii) ms de 25 mg / kg en el modelo Se + Zn, y (iv) 15 mg / kg en el modelo Se + Cu
+ Zn. La acumulacin de Cu y Zn aument de manera constante con su sustrato Concentra-ciones iniciales. Las
concentraciones mximas se encuentran despus de la suplementacin con 0,8 mM ascendieron a ms de 55 mg / kg (Se +
Zn) y 52 mg / kg (Se + Cu + Zn) de Zn, y 29 mg / kg (Se + Cu) y ms de 31 mg / kg (Se + Cu + Zn) de Cu. Cuanto mayor es
la concentracin complementado y el nmero de elementos complementados, menor es la biomasa de los cuerpos fructferos
lucidum G., Sin embargo, todava sigue siendo alta cuando el sustrato se complement hasta 0,4 mm con cada elemento.
Estos resultados ponen de manifiesto que G. lucidum puede incorporar fcilmente los elementos del sustrato y que, cuando
biofortifica sus cuerpos fructferos secas puede servir como una fuente nutricional de estos elementos esenciales.
Palabras clave: cobre, Ganoderma lucidum, hongo medicinal, selenio, zinc
Aplicacin Prctica: Los cuerpos fructferos de Ganoderma lucidum biofortied con los elementos esenciales, tales como Se,
Cu y Zn en este estudio pueden tener un valor potencial tanto para uso alimenticio y medicinal. Como se muestra, el cultivo
de esta especie de hongo con sustratos enriquecidos con Se, Se y Cu, Se y Zn o Se, Cu y Zn es sencillo, barato, y conduce a
la produccin de biomasa relativamente alto de los cuerpos fructferos. Teniendo en cuenta la popularidad de Ganoderma
lucidum, su biofortificacion con Se, Cu y Zn puede ser de inters comercial.

Diario de Ciencia de los Alimentos una publicacin

Del instituto de tecnologa de alimentos

Introduccin
Durante siglos, los hongos han sido recogidos para el consumo y
beneficio de la salud, este ltimo se origina principalmente de la
medicina tradicional oriental (Ferreira y otros, 2010). Hoy en da, el
inters mundial del uso farmacutico y diettico de ruido de fondo salas
de cultivo est en aumento. Esto no solo es en gran parte debido a un
nmero creciente de estudios que proporcionen pruebas convincentes
de su valor nutricional y teraputico, sino tambin como resultado de la
comercializacin de los mtodos automatizados y relativamente baratas
de setas cultivacin (Valverde y otros 2015). A diferencia de las setas
recogidas, en el que la acumulacin de sustancias txicas en las partes
comestibles no puede ser controlada (Kalac 2013; Mleczek y otros
2015A), el cultivo puede garantizar unas condiciones controladas y de
alta calidad que permitan el producto Thnal a ser estandarizada y segura
para los consumidores (Chang y Wasser 2012; Cleaver y otros 2012).
Las deficiencias nutricionales son un problema en todo el mundo, no
slo conducen al desarrollo de trastornos graves de salud, sino tambin
generan

MS Enviado 20151668 10/07/2015, 12/12/2015 Aceptado.

Autor Rzymsk es con el Departamento de Medicina
Ambiental, Poznan Univ. De Ciencias Mdicas, Poznan,
Polonia. Autores Mleczek y Gasecka estn con
Departamento de Qumica, Universidad de Poznan. De
Ciencias de la Vida, Poznan, 'Polonia. Autor Niedzielski es
la Facultad de Qumica de la Universidad Adam Mickiewicz.
En Poznan, 'Poznan,' Polonia. Autor Siwulski es con el
Departamento de Cultivos Vegetales, Poznan Univ. De
Ciencias de la Vida, Poznan, 'Polonia. Dirija sus preguntas
al autor Rzymski (E-mail: rzymskipiotr@ump.edu.pl).

2016 Instituto de Tecnlogos de Alimentos R doi:

10.1111 / 1750-3.841,13212
Adems se prohbe la reproduccin sin permiso

Significan gastos mdicos (Ames y Wakimoto 2002). Hay tanta, la

necesidad de desarrollar mtodos eficaces de prevencin, es una
necesidad urgente. La deficiencias de Se y Cu por lo general ocurren en
las regiones donde su contenido en el suelo es extremadamente baja (Ge
y Yang 1993; Rayman 2009). Se estima que el 17% de la poblacin
emergente humana se encuentra actualmente en riesgo de
desarrollardeficiencia de Zn (Wessells y Brown 2012). Las setas tienen
un potencial particular de prevenir deficiencies debido a: (i) que
representan los productos naturales de uso de ancho y tradicional en
varias cocinas (Kalac 2013); (ii) que se ha demostrado que tomar hasta
varios elementos esenciales del sustrato y de acumular an ms en sus
partes comestibles (Mleczek y otros 2015b); y (iii) su cultivo comercial se puede hacer de costo y tiempo efectivo (Valverde y otros 2015).
G. lucidum (conocido como Chinese Lingzhi) es una de las especies
de hongos ms prometedores, sus propiedades medicinales durante
mucho tiempo han sido reconocidos (Bishop y otros 2015). Sus
extractos son conocidos por sus efectos hipoglucemiantes, el
mantenimiento de la flora intestinal, la reduccin de la hipertensin, y
el control del nivel de colesterol (Berger y otros, 2004; Delzenne y
Bindels 2015; Ma y otros 2015). La actividad biolgica se evidencia de
Ganoderma lucidum ha llevado a su uso cada vez ms popular como un
nutracutico y para el establecimiento de un segmento de mercado de
ms de 2,5 mil millones de dlares estadounidenses (Li y otros, 2013).

Vol. 8, Nr. 3, 2016

Diario de Ciencia de Alimentos

C587

C Qumica de
Alimentos

Piotr Rzymski, Mirosaw Mleczek, Przemysaw Niedzielski, Marek Siwulski, and Monika Gasecka

Ganoderma lucidum enriquecida con oligoelementos. .

C Qumica de
Alimentos

Estudios recientes han demostrado que el Ganoderma lucidum puede

ser enriquecida exitosamente con selenio (Se), sino tambin para que d
Biotransformacion de sales inorgnicas de Se a travs de su integracin
en protenas y polisacridos (Niedzielski y otros 2014). Este es importante si se considera que el papel biolgico de Se est mediada
principalmente por su forma orgnica, en particular selenoprotenas. Por
ejemplo, el Se es conocido por ser un cofactor para la reduccin de
algunas enzimas Antioxtioxidante y como catalizador para la sntesis de
la hormona esteroide activa (Schomburg y Kohrle 2008). Tambin se
requiere para la respuesta inmune apropiada (Hawkes y otros 2001) y re
productiva funcin (Ahsan y otros 2014). Es importante destacar que se
ha demostrado que los polisacridos (por ejemplo, SeGLP-2B-1)
aisladas de Se enriquecido en G. lucidum mostraron antitumoral activdad a travs de la induccin de la apoptosis en clulas de cncer de
mama (Shang y otros 2011), mientras que las protenas aisladas de setas
complementados se exhibieron significativamente propiedades
inmunomoduladoras (Min-Chang y otros, 2014).
Aunque el cultivo de Ganoderma lucidum complementado con
elementos seleccionados ha sido objeto de investigaciones anteriores
(Matute y otros 2011; Niedzielski y otros 2014), ningn estudio ha
evaluado hasta ahora su crecimiento y bioacumulacin cuando se
cultivan en sustratos enriquecidos con ms de 1 elemento. El
enriquecimiento de un hongo medicinal con 2 o incluso 3 minerales
esenciales puede aumentar significativamente el valor nutricional y
farmacutica del Thnal y ampliar su aplicacin. Esto es particularmente
importante si se considera que deficientes minerales se han convertido
en un problema nutricional cada vez mayor entre muchas poblaciones
humanas y pueden contribuir al desarrollo de enfermedades crnicas
(Ames y Wakimoto 2002). Por ejemplo, el estado de disminucin de
cobre (Cu) y zinc (Zn), ambos elementos fundamentales para la
regulacin de las funciones celulares, se ha relacionado con un deterioro
de las funciones reproductivas y del sistema inmunolgico y de
neuropatologa (Kumar y otros, 2004; Fukada y otros 2011).
Este estudio evalu si Ganoderma lucidum puede ser implementada con
xito con Se en combinacin con Cu y / o Zn y cmo dicha
suplementacin afecta el crecimiento de esta especie de hongo. Nuestro
estudio se extiende el cuerpo de informacin sobre el potencial
biofortificacion de Ganoderma lucidum con elementos traza esenciales.

Materiales y mtodos
Diseo experimental
El sustrato para G. lucidum se prepar a partir de una mezcla de madera
de haya, abedul, roble y aserrn (3: 1: 1). La mezcla se suplemento con
25% de salvado de trigo, 2% de our maz, y 1% de CaSO4 y
humedecido al 60% de contenido de agua usando agua destilada y luego
se esteriliz a 121 C durante 1 h. Las siguientes sales se utilizaron en
el experimento: selenito de sodio (Na2SeO3 (IV)), selenato de sodio
(Na2SeO4 (VI)) suministrado por Acros Organics (Morris Plains, NJ,
EE.UU.), cobre selenato (II) (CuSeO4 2H2O), y nitrato de cinc
hexahidrato (Zn (NO3) 2 6H2O) suministrado por Sigma-Aldrich (St.
Louis, Missouri, EE.UU.). Estas sales se disolvieron en una cantidad
suficiente de agua destilada estril para obtener las concentraciones
adecuadas de 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, y 0,8 mM para todos los elementos en el
sustrato despus de que se haba aadido a la misma. Despus de la
adicin de la solucin de sal, el contenido de agua del sustrato alcanz
aproximadamente 60%. La acumulacin de los 3 elementos y el
crecimiento de los cuerpos fructferos de hongos se determinaron en 5
sistemas diferentes: (1) la referencia (control - c) sistema sin Cu, Se, y
sales de Zn, (2) la adicin de Se, (3) Se + Adems Cu, (4) adicin Se +
Zn, y (5) Se + Cu + Zn Adems del sustrato. El sustrato se mezcl
entonces con la freza (en serrn) de G. lucidum GL01, que constituido
3% en relacin con el peso hmedo del sustrato, y se coloca en bolsas
de polipropileno (20 x 35 cm). Cada bolsa contena 450 g de sustrato.
incubacin micelio se dej a 25 C y una humedad relativa de 80% a
85%. Una vez que el sustrato estaba

C588

Diario de ciencia de Alimentos Vol. 81, Nr. 3, 2016

totalmente cubierto con el micelio, que era transferido a la cmara de

cultivo en la que se mantuvo la temperatura a 25 C y la humedad
relativa del aire de 85% a 90%.

El cultivo se irradi con luz, adems, fluorecente de 500 lux de

intensidad durante 12 horas al da. El servicio para el crecimiento se
aire de una manera tal como para mantener la concentracin de CO2
por debajo de 1000 ppm. El rendimiento incluye cuerpos fructferos
enteras cosechadas sucesivamente a medida que maduraban: despus de
50 dias (control), 53 d (Se + Cu), 58 d (Se + Zn), o 59 d (Se + Cu + Zn).

Reactivos
Todos los reactivos, cido fosfrico, hidrxido de sodio, disodico hidro fosfato, y ortofosfato de potasio (para la preparacin de tampn de
fosfato), fueron de grado analtico (Merck, Darm-stadt, Alemania). El
agua se purifico con un sistema Advantage A10Water Purication
Milli-Q (Millipore Merck, Darmstadt, Ger-muchos). Gas argn
comprimido de N-5,0 pureza (99,999%) se obtuvo de Linde (Poznan,
Polonia). Para Cu, Zn y determinaciones de Se- espectrofotometra,
normas comerciales (Merck) fueron IMPLCITA. Las soluciones de
reserva estndar se almacenaron en botellas de vidrio a 4 C en la
oscuridad. Normas de baja concentracin obtenidos por Dilucin de las
soluciones madre se prepararon diariamente. Solucin Palladium se
prepar a partir de paladio comercial (como nitrato) modifiados
qumicos (Merck).

Recogida de muestras y preparacin de setas

Las setas se recogieron cuando su biomasa ya no mostraba signos de
aumento adicional. Los cuerpos fructferos se pesaron, se secaron
usando un secador elctrico SLW 53 enfermedades de transmisin
sexual (Pol-Eko, Wodzisaw Slaski, Polonia ) a 50 2 C durante 48
h, se pes de nuevo para determinar el peso seco, y luego se muelen en
un molino de corte Boll 200 (Retsch GmbH, Haan, Alemania) durante
1 minuto.
Las muestras en polvo se tamizaron a travs de un tamiz de 0,02 mm, y
una muestra de 1,000 g 0,001 se extrajo por el cido fosforico / L 1
mol en un bao de ultrasonidos a una temperatura ambiente de 30 min.
Las muestras se pasaron luego a travs de papel (lavado con 200 ml de
agua y tampn fosfato 20 ml). PH de la muestra se ajust a 6,0-6,5
mediante la adicin de 10 mol / L de solucin de hidrxido de sodio y
finalmente las muestras se diluyeron a 20 ml con tampn de fosfato.

Instrumentos
Para Cu y Zn ame determinacin, la absorcin atmica especespectrometra (FAAS) SpectrAA 220 FS (Varian, Australia) fue apbandas de capas con acetileno estequiomtrica ame (2,0 l / min) y aire
(13,5 L / min). Lmparas de ctodo hueco (Varian, Australia) se
utilizaron los siguientes parmetros para Cu: longitud de onda de 324,8
nm, raja 0,5, lmpara de 10 mA, y para el Zn: longitud de onda de 213,9
nm, raja 1.0, lmpara corriente de 5 mA, ambos con correccin de fondo
con una lmpara de deuterio. La calibracin se proporciona para
solucin estandar a base de agua y no correspondan a la matriz usando
estndares comerciales (Merck). Los coeficientes de variacin (R2)
para las curvas de calibracin super 0,99. Los lmites de determinacin
fueron 0,1 mg / kg con una incertidumbre de aproximadamente el 5,0%
(medido como RSD) para ambos elementos determinados.
Para la determinacin de Se, de absorcin atmica electrotrmica especespectrometra (ETAAS) SpectrAA 280Z (Agilent Technologies, Multumba, Victoria, Australia) con correccin de fondo Zeeman

Ganoderma lucidum enriquecida con oligoelementos. .

Tabla 1-Contenido (mg / kg de peso seco) de determinadas formas de Se en G. lucidum que crece en sustratos con Si (VI) / Se (VI) / adicin de
Cu / Zn.

Elementos adicion

(mM)

Se

Se+Cu

control
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8

Elementos adicion(mM)
control

0.1
0.2

0.1 0.5ab 0.3

12.6a 2.4 8.7 b 1.8
22.3a 1.6 11.8b 2.0
19.6a
23.0

0.7

4.7

7.0

bc

1.5
8.2bc 2.7
9.6 b 2.4
ab

9.9

9.4ab
16.4

4.5

4.4

Se

ab

2.4

ab
12.4ab
13.7

2.2c 0.7
3.9b 1.4
1.7 b

2.5

3.2

2.7

0.5

1.4

c
2.7b
4.3

1.5
3.2

Se
0.1

Se Cu
Se Cu Zn
+
+ab
ab
Sea+Zn
+
0.0
0.8
3.0
a
ab
0.4
1.5
1.9 b
0.5
12.7a 2.4 8.9 b 1.8 8.4bc 2.8 2.3c 0.7
22.5a 1.7 12.2b 2.2 10.2 b 2.5 4.1b 1.4
ab

12.7

8.5

11.6

2.2

34.6a 1.1 14.0

ab

ab
4.9
2.5
23.4 4.8 16.8
4.4 14.8 2.6
Se total
24.3a

9.1a

27.4a
39.5a
48.1a
50.1a

68.2

3.1

1.0

2.5
2.7
4.0
2.5
5.6

1.6

15.9ab

Se+Cu

0.0

0.1a 0.0
0.2a 0.1
a

2.9

4.6

0.7

0.4

0.4

0.2

Se+Zn
0.1

0.1a 0.0
0.4a 0.2
2.8

0.4

ab

3.1b

4.8

1.6

3.2

Se
a

1.0
8.8a
14.7a 2.7
16.9a 1.0

1.7

0.5
0.1

Se

Se Cu
+
8.9a 1.9
9.2a 0.7
12.9a 1.2
a

15.3

1.8

17.5
2.4
bc 0.6
44.8 4.3 20.9 1.6
Cu
a

Se

Cu

ab

ab

17.4a

3.3

29.0

24.6a
33.7a
25.9a
27.2a

3.2
5.5
4.2
2.7
4.2

Se

0.3

3.6

1.1

0.2

0.7

0.3

0.0

0.1a 0.0

0.2b 0.1

0.7

0.5

ab

0.2

Se Zn
a

Se Cu

6.6a

0.4

+a
7.9a

20.6

ab
b

26.0

2.3

2.5 11.4c 0.9

2.1

2.4 15.0 2.1

Zn
8.6c

Se Cu

31.3
22.7a
36.0a
27.5a
26.7a

6.6
5.0
11.1
15.2
12.9

0.2

12.1a 2.8 13.1a 2.7

16.4

Se Zn

1.8

Zn
+

9.4a 1.2 11.5a 4.2

+
a

0.1

Cu Zn
15.1a

0.2

b
0.5

org

25.9a

Se Cu
Se
Zn
Se Cu Zn
9.7 2.3 9.6 1.2 9.8 0.6
18.1 b 2.4 17.8 b 3.9 13.9b 4.9
25.1b 2.2 22.3b 5.3 17.2b 3.7
28.0b 7.7 28.0b 4.1 14.6c 3.0
31.5b 4.7 36.5b 2.8 11.8c 2.5
37.7 4.0 40.8 3.9 19.8 1.8

3.7

0.0

0.2a 0.1
0.5a 0.2

1.5

Se+Cu+Zn

4.5
0.2

17.2

0.2

inorg

0.1
0.2
0.4
0.6
0.8

9.9

Se+Cu+Zn

Se

0.3

Se
control

2.8

0.2a

0.5

0.4
0.6
0.8
Elementos
adicion (mM)

Se+Zn

ab

31.8a 1.2

Se(VI)

C Qumica de
Alimentos

Se(IV)

5.8a

28.1a
34.6a
36.0a
51.8a

55.1

1.0

5.5
4.8
4.4
3.3
4.9

+
a

5.2a

Zn

1.3

29.1a
31.5a
37.3a
49.7a

14.9
13.4
12.3
15.5
52.5 10.9

Los valores medios (n = 3) desviaciones estndar; superndices idnticas designan sin significancia de diferencia (P <0,05) entre los valores medios en filas segn la
prueba HSD Tukeys (MANOVA) para determinadas formas de Se, Cu y Zn determin en los hongos. Se significa que las concentraciones Thnal de ambas sales de
selenio (Se (IV) y Se (VI)).

Se aplic. Una lmpara de ctodo hueco de selenio (longitud de onda de

196,0 nm, raja 1,0 nm, y la corriente 10 mA) y se utiliz un programa
de temperatura se ha optimizado de la siguiente manera: el secado de 85
a 120 C durante 55 s; calcinacin a 1000 C durante 8 s; atomizacin
de 2600 C. Se han usado tubos de grafito piroltico y la solucin de
paladio como un modificador qumico (10 l de 500 mg / L para 20 l de
muestra). Se proporcion calibracin de este mtodo para la solucin
estndar a base de agua sin juego de matriz utilizando estndares
comerciales (Merck). El r2 para curvas de calibracin excede 0,99. El
lmite de deteccin fue de 0,01 mg / kg y se obtuvo la incertidumbre de
losC:resultados
como RSD) a un nivel de 5,0%.
Qumica(medida
de los Alimentos
La incertidumbre de los resultados se produce principalmente por la
etapa de preparacin de la muestra y, en general fue similar para FAAS
y ETAAS. La trazabilidad de los dos procedimientos analticos se
control por anlisis de material de referencia certificadas (CS-M-1,
Inst. De Qumica Nuclear y Tcnica, Varsovia Polonia, distribuido por
las Normas LGC, Reino Unido) despus de la extraccin del cido
fosfrico. Los valores obtenidos fueron 8,63 0,45, 55,78 2,34 y 1,22
06 mg / kg para los valores certificados: 9,12 0,83, 60,94 4,62 y
1,37 0,11 mg / kg para el Cu, Zn y Se respectivamente. Las
recuperaciones fueron del 95% para el Cu, el 92% de Zn, y el 89% de
Se, y fueron similares a los obtenidos en estudios anteriores
(Gonzalvez 2009).
En el caso del anlisis de las especies de Se, cromatografa lquida de
alta resolucin con guiones, con generacin de hidruros atmica
ABSORCIN, deteccin por espectrometra de sistemas (HPLC-HGAAS) se manejaron como se describe en los documentos anteriores
(Kozak 2012; Niedzielski y otros 2015) . El sistema analtico guin
consista en un Shimadzu (Kyoto, Japn) cromatgrafo de lquidos (LC10A), equipado con una bomba de HPLC (LC-10AT), una

de aniones Supelco (Bellefonte, Pa., EE.UU.) LC-SAX1 (250 mm, 4,6

mm de dimetro, tamao de las partculas de resina 5 micras) con
termostato por un horno de columna (CTO-10ASvp). La carrera
cromatogrfico fue isocrtica a 3 ml / min con un volumen de inyeccin
de 200 l. Las mediciones se realizaron con un espectrmetro Modelo
SpectraAA 220FS (Varian, Australia), equipado con una lmpara de
ctodo hueco Ultraa selenio.
Las especies de selenio Se (VI) no forma un hidruro voltil, por lo que
con el fin de recibir una seal analtica en el sistema HG-AAS, fue
necesario llevar a cabo una reduccin preliminar de Se (VI) a Se (IV).
La reduccin se llev a cabo en lnea por calentamiento de la SAM-PLE
(90 a 100 C) con el agente reductor: solucin de tiourea / L 0,5 mol en
10 mol / L de cido clorhdrico (Kozak 2012). El eluato de la columna
cromatogrfica se uni a la corriente del agente (tasa ow 1 ml / min de
la bomba peristltica) reducir a travs de un acoplamiento en forma de
T y se dirige al asa capilar Tygon (dimetro interno de 0,82 mm) se
calienta en un bao de agua. La salida de bucle capilar se conecta al
sistema de generacin de hidruros. Por lo tanto la analtica tubo de
transferencia sistemas de PEEK del eluyente de la columna de LC a la
unidad de generacin de hidruro fue insertado en un manguito de
Tygon. El sistema de generacin de hidruros continua (modelo de
VGA-77; Varian, Australia) consista en una bomba de manguera de 4
canales controlados de forma manual con tubo Tygon (0,6 mm de
dimetro interno), una bobina de reaccin (PTFE tubo de 0,8 mm de
dimetro, 75 cm de longitud), y conectores de 3 vas. El separador gas
liquido estaba hecha de vidrio y el volumen muerto interior fue de 3 ml.
Para la atomizacin de los hidruros de selenio (detectado en 196,0 nm),
un controlador de calentamiento, una manta de calefaccin
electrotrmicamente, y un tubo de cuarzo (modelo ETC-60; Varian,
Australia) se calent a 900 C, fueron utilizados.

Vol. 8, Nr. 3, 2016

Diario de Ciencia de Alimentos

C589

Ganoderma lucidum enriquecida con oligoelementos. .

guiones denotan diferencias significativas (P <0,05) entre los valores
medios de acuerdo con la prueba HSD de Tukey (MANOVA).
Las concentraciones de la fraccin orgnica de Se se calcularon como
la diferencia entre el total de la concentracin de Se nos ETAAS y
concentracin de compuestos de selenio inorgnico determinado
determina utilizando HPLCHGAAS.

Anlisis estadstico y clculos

Los resultados fueron analizados utilizando el software STATISTICA
10.0 (StatSoft, Tulsa, EE.UU.). Debido a que los datos han cumplido el
supuesto de distribucin de Gauss (analizados con la prueba de ShapiroWilkos), la comparacin de la acumulacin de elementos y produjeron
biomasa como modelos de cultivo se evalu con el multivariado de
varianza (MANOVA) con el mtodo de Tukey HSD como post hoc
prueba. P <0,05 fue considerado estadsticamente significativo.

Biomasa (g)

Resultados

Biomasa (g)

Se(IV)/Se(IV) adicion (mM)

Se(IV)/Se(IV) adicion (mM)

La acumulacin de elementos traza en los cuerpos fructferos de

suplementacin sustrato con Se, Se + Cu, Se + Zn y Se + Cu + Zn caus
un aumento en la acumulacin de significante de Se en los cuerpos
fructferos de una manera dependiente de la concentracin (Tabla 1).
Incluso la adicin de 0,1 mM dio lugar a un aumento significante en el
contenido total de Se, independientemente del modelo de cultivo. Depesar la suplementacin de sustratos con sales inorgnicas de Se, G.
lucidum cuerpos fructferos acumulados cantidades significantet de
forma Se orgnica (Tabla 1). Despus de la suplementacin con 0,8 mM
de sales inorgnicas de Se, su fraccin orgnica asciende a 509% del
nivel de control de Se orgnico en el modelo de Se, 235% en el modelo
Se + Cu, 394% en el modelo Se + Zn, y 190% en el modelo Se + Cu +
Zn.
Se observ un aumento de bioacumulacin de Cu y Zn en cuerpos
fructferos lucidum G. despus de estos elementos se han aadido al
sustrato, tanto en el Se + Cu / Se + modelos Se + Cu + Zn (Tabla 1) y
Zn. La suplementacin con la concentracin ensayada ms baja (0,1
mM) produjo un aumento significante de Cu (por 41% en Se + Cu y
50% en Se + Cu + Zn) y de Zn (por 384% en Se + Zn y 460% en Se +
Cu + Zn). La mayor concentracin era a su vez, observ despus de la
suplementacin con 0,8 mM, independientemente del modelo de cultivo
(Tabla 1).

Biomasa (g)

La biomasa de los cuerpos fructferos de rendimiento

Se(IV)/Se(IV) adicion (mM)

Biomasa (g)

C Qumica de
Alimentos

Se determin un nmero de parmetros de validacin que caracterizan

el mtodo analitico. La calibracin se proporcionan para solucin a base
de agua estndar preparada en el laboratorio a partir de sales de selenio
slidos: selenito de sodio (Na2SeO3) y selenato de sodio (Na2SeO4)
para Se (IV) y Se (VI), respectivamente (Merck). El r2 para curvas de
calibracin excede 0,99. Se obtuvieron lmites de deteccin de 0,01 mg
/ kg tanto para Se (IV) y Se (VI) y la incertidumbre de los resultados
(medida como desviacin estndar relativa) a un nivel de 10% para
ambas formas de selenio. Como era imposible calcular la medicin de
trazabilidad, debido a la falta de cualquier referencia certificacin de
materiales para la determinacin de las especies de Se inorgnicos, la
recuperacin de cada especie de selenio se determin utilizando el
mtodo estndar de adicin. Una recuperacin de 96% a 105% de cada
especie se consider como satisfactoria.

Se(IV)/Se(IV) adicion (mM)

Figura 1-La biomasa (media DE) de Ganoderma lucidum cultivado

en Se, Se + Cu, Se + Zn y modelos Se + Cu + Zn (n = 3). IdnticossuperC590

Diario de ciencia de Alimentos Vol. 81, Nr. 3, 2016

El modelo de cultivo utilizada tuvo un efecto significante en la biomasa

de los cuerpos fructferos de Ganoderma G. (Figura 1). En general,
cuanto mayor es la concentracin de elementos traza
(independientemente de su combinacin) que se aade al sustrato,
menor es el rendimiento de la biomasa. Se observ que la mayor
biomasa despus de la suplementacin con solamente Se, los ms bajos
despus de la adicin de Se, Cu y Zn. En tono rinbombante, la biomasa
de los cuerpos fructferos no disminuy por debajo de 60 g de peso seco
en cualquier modelo de cultivo cuando la concentracin de los
elementos era de 0,4 mM (Figura 1). La suplementacin, particularmente a mayor concentracin, hizo que los cuerpos fructferos que se
hacen ms delgados. No se observo cambios en el color (Figura 2).

Discusin
Hay un creciente inters en la investigacin de la biofortificaion de setas
cultivadas con oligoelementos. Generalmente, el sustrato utilizado para
el cultivo solamente se complementa con un elemento a la vez. En tales
condiciones, diversas especies de hongos, incluyendo Pleurotus eryngii,
Pleurotus ostreatus, y nameko Pholiota
(Niedzielski y otros 2015), han demostrado tener significancia y
acumular Se en sus partes comestibles. Por otra parte, nuestro estudio
piloto ha demostrado que el Ganoderma lucidum puede tardar hasta
decididamente mayores concentraciones de Se que otras especies de
hongos medicinales tales como: Agrocybe aegerita, y erinaceus
Hericium (Niedzielski y otros 2014).
La coocurrencia de los mismos niveles de Se, Zn, Cu y puede potencialmente inducir diversas interacciones entre estos elementos y alterar
su absorcin por hongos cultivados. Aunque, en este estudio, la
presencia simultnea de Cu y Zn disminuy la acumulacin de Se en los
cuerpos fructferos, su contenido en cada modelo estudiado era todava
suficientemente alta como para representar una fuente significante de
este elemento para la nutricin humana. Es importante destacar que, a
pesar de que algunos de secuestro de competencia entre Cu y Zn puede
haber ocurrido, en contienda de campaa de estos elementos en G.
lucidum generalmente aumenta con la concentracin en el sustrato.
Nuestro estudio apoya la opinin de que G. lucidum biotrans organica
de Se en formas orgnicas. Como se observa, el contenido de Se
inorgnico (particularmente Se (IV) forma) aument con el grado de su
concentracin aadi al sustrato, pero era generalmente ms baja que la
proporcin orgnica Se. A su vez, el aumento de contenido de Se
inorgnico en el sustrato fue seguido por un mayor contenido de Se
orgnico en cuerpos fructferos lucidum G.. Los anlisis de la
distribucin de Se en este hongo revelaron que ms del 50% de Se
incorporado est integrado con los pro-protenas y ms del 10% de
polisacridos (Zhao y otros, 2004). Se indic adems que el
enriquecimiento de Ganoderma lucidum con Se (hasta 100 mg / g) el
aumento de la sntesis de protenas y polisacridos (Zhao y otros, 2004).
Por lo tanto, biofortifiacion de esta especie papilla de estar con Se puede
llevar a un aumento adicional del nivel de otros componentes
nutricionales. Es, sin embargo, se desconoce si la co-ocurrencia de Cu
y / o Zn en el sustrato puede tener cualquier impacto en el contenido de
protenas y polisacridos. Este problema requiere ms investigacin.

Un importante de este estudio se refiere al efecto de suavementacin de

la biomasa lucidum G.. La adicin de sustrato, particialmente en
concentraciones ms altas, caus leves cambios macroscpicos en los
cuerpos fructferos (cuerpos fructferos) ms delgados, pero no hay
color alteraciones. La aparicin de productos biofortificados suele ser
una caracterstica importante para los consumidores potenciales y
alteraciones incluso puede disminuir el valor del producto
comercializado (Nestel y otros, 2006). Sin embargo, Ganoderma
lucidum se utiliza por lo general como un polvo o extracto, formas en
las que los cambios observados no deberan tener ningn impacto
econmico sobre el producto Thnal. La disminucin de la biomasa
Ganoderma lucidum con el aumento de concentracin de elementos
destacados sustrato que inorgnica Se tambin puede ejercer efectos
txicos sobre las setas. Se demostr previamente que el aumento de
Concentraciones ambientales de los minerales estudiados puede alterar
el crecimiento de las plantas superiores a travs de la generacin de
especies reactivas del oxgeno, la peroxidacin de lpidos, y la
disminucin en el metabolismo de azufre (Hawrylak Nowak 2013). La
implicacin del estrs oxidativo en la respuesta adversa de crecimiento,
papilla piezas a la suplementacin mineral es apoyada por una reciente
nding que la acumulacin de Se y Zn en P. ostreatus y P. GII es seguido
por aumento de la sntesis de compuestos fenlicos y cido ascrbico
(Gasecka y otros 2015). La investigacin adicional es NEC para
dilucidar plenamente los efectos de Se, Cu, Zn y en el metabolismo de
los hongos cultivados.
Vale la pena sealar que a pesar de la disminucin de la biomasa
lucidum G., se mantuvo a un nivel satisfactorio una vez que el sustrato
era flexiblementado hasta un nivel de 0,4 mM de cada elemento. En este
nivel, los cuerpos fructferos Se + Cu + Zn modelo de cultivo
producidas con una concentracion superior a 10 mg / kg de Se orgnico,
ms de 27 mg / kg de Cu y ms de 37 mg / kg de Zn. Para las personas
adultas, los valores de la cantidad diaria recomendada se han fijado en
55 mg de Se, 900 g de Cu y 11 mg (para los hombres) y 8 mg (para las
mujeres) de Zn (FNB 2001; Hu y otros, 2012). Incluso si se tiene en
cuenta la prdida parcial de elementos traza que pueden ocurrir durante
el procesamiento de hongos, tales como

Figura 2-G. lucidum

crecido en sustratos
suplementado con
diferentes concentraciones
y combinaciones de

Ganoderma
con oligoelementos.
Vol. 8, Nr. 3,lucidum
2016 enriquecida
Diario de Ciencia
de Alimentos . C591

C Qumica de
Alimentos

Ganoderma lucidum enriquecida con oligoelementos. .

Ganoderma lucidum enriquecida con oligoelementos. .

C Qumica de
Alimentos

lavado o coccin (Kalac y Svoboda 2000), el G. lucidum crecido en el

sustrato suplementado con 0,4 mM de cada elemento representa una
fuente altamente nutricional de Se, Cu y Zn. Su uso en diversas formas
puede ser potencialmente beneficas en el mantenimiento de la
homeostasis de elementos traza y prevenir o tratar deficiencias y
trastornos relacionados. Por otra parte, teniendo en cuenta que otros
compuestos que se encuentran en G. lucidum exhiben significantes
actividades anti-inflamatorias (bHard-waj y otros 2014) y que el Se
tiene la capacidad de disminuir los ttulos de anticuerpos contra la
peroxidasa tiroidea (Drutel y otros 2013), el consumo de setas
fortificadas tambin pueden ser beneficas en el tratamiento unificacin
de Hashimoto o enfermedad Graves un uso que tendra que ser
investigado ms a fondo. Sin embargo, hay que destacar que el uso de
bio-fortificacion de Ganoderma lucidum, al igual que con cualquier otro
suplemento mineral, debe ir precedida de una evaluacin de la
condicin del mineral hacia el cuerpo para evitar la sobrecarga y sus
consecuencias adversas.
Es importante destacar que los resultados obtenidos de la biomasa y los
niveles acumulados de los elementos de los cuerpos fructferos de
Ganoderma lucidum exhibieron una baja variabilidad. Esto pone de
manifiesto que el cultivo de G. lucidum para el propsito de la
suplementacin de la dieta con Se, Cu, Zn y permite una alta
reproducibilidad y normalizacin de la calidad de la Thnal . Esta es una
ventaja que define sobre la produccin comercial de algunos otros
productos a base de forma natural, tales como las algas cuya mineral
contenido depende en gran medida en un modelo de cultivo y cosecha
(Rzymski y otros 2015). Sin embargo, para asegurar la calidad de las
especies cultivadas y la seguridad del producto alimenticio Thnal para
la salud humana, slo sustratos de alta calidad deben utilizarse como
ruido de fondo, en habitaciones son conocidos para captar y acumular
cantidades significante de compuestos txicos si son presente en el
entorno ambiente (Mleczek y otros 2015c).

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Conclusin
Este estudio pone de manifiesto por el tiempo que rst G. lucidum
podra ser utilizado para producir suplementos alimenticios
enriquecidos con Se, Cu, Zn y a travs de un proceso de biofortificacion.
Para mantener el cultivo en un nivel satisfactorio y para producir
biomasa sufcient, la administracin de suplementos de sustrato no
debe exceder de 0.4 mM de cada elemento. Dado que los efectos en la
salud beneficial de esta especie de hongos han demostrado ser de gran
alcance, G. lucidum cultiva en el suplementado con elementos traza
puede representar un producto biofarmacutico verstil con un amplio
espectro de aplicacin.

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Diario de Ciencia de Alimentos

C593

C Qumica de
Alimentos

Ganoderma lucidum enriquecida con oligoelementos. .