Nucl. Med. Bml. Vol. 21, No. 3. pp.

287-295,

Pergamon

1994

Copyright
0 1994 Elsevier Science Ltd
Printed in Great Britain.
All rights reserved
0969-X051/94
$6.00 + 0.00

0969-8051(94)E0007-6

STATE OF THE ART LECTURE

Information et communication

cellulaires : les rtkepteurs

protbines G

CouplCs aux

Pierre CORVOL
Chaire de Mbdecine Experimentale, Colkge de France, Paris, France

ABSTRACT

A general model for membrane receptor action mechanisms

by receptors

in the cell plasma

membrane

mediated by coupling

elements. Seven-site

likely

most

represent

Information

the

transfer

conserved

effector

that regulates

messages
proteins.

Structures

which

protein exchanges

odorant

a-helices

is stimulated

diversified
medium

molecules,

peptide

proteins

include

and an intracellular

receptors.

three

membrane

GTP during its cycle), andan

messengers.
hormones,

They detect various

neurotransmitters

an extracellular

C-terminal

upon ligand-induced

normally

N-terminal

and
part,

part. They are coupled to a

receptor activation.

This activated

G-

a GDP molecule for a GTP molecule which in turn acts on the effector. The

etc.). Recognition

following

amplification

effector,

thus

intercellular

of membrane

to the cell involves

effector is an enzyme (adenylate cyclase, phospholipase

channels,

category

ion levels or second

of these membrane

seven transmembrane
G-protein

and

effecters,

detected

receptors coupled to G-proteins

(which binds and hydrolyzes

intracellular

: light emissions,

is transmitted to biological
transmembrane

from the extracellular

proteins : a receptor, a G-protein

indicates that information

of the message (which is specified by the membrane

through

leads to cellular

communication

C, etc.) or an ionic channel (K+, Ca++

activation

of several catalytic

events : modification

and modulation

cycles

of genetic

of the membrane

of G-proteins

transcription,

potential.

and the

cell growth,

The present article

All correspondence should be addressed to: P. Corvol, Chaire de Medecine

Experimentale, College de France, 3 rue dUlm, 75005 Paris, FRANCE.
287

receptor),

288

PIERRECORVOL

briefly summarizes results on this topic with special stress on the angiotensin II receptor which
is currently being investigated in our laboratory.

Le

modele

membranaires

general

du

mecanisme

implique que linformation

daction

des

recepteurs

perCue par le recepteur au

niveau de la membrane plasmique cellulaire soit transmise a un effecteur

biologique, habituellement par lintermediaire dun element de couplage.
Les recepteurs

a sept domaines

transmembranaires,

couples

aux

proteines G, representent probablement la categoric la plus conservee et

la plus diversifiee
transfert

de lensemble

de linformation

des recepteurs

membranaires.

du milieu extracellulaire

Le

a la cellule fait

intervenir trois prot6ines membranaires : le recepteur, une proteine G

(qui fixe et hydrolyse le GTP au tours de son cycle de fonctionnement), un
effecteur

qui regule

messagers.

le taux intracellulaire

Les messages

lumineuses,

quils percoivent

molecules

odorantes,

dions

ou de seconds

sont varies

hormones

emissions

peptidiques,

neurotransmetteurs et proteines. Leur structure comporte une partie Nterminale extracellulaire, sept helices a transmembranaires et une
partie C-terminale intracellulaire. 11s sont couples a une proteine G qui
est mise en jeu lors de lactivation

du recepteur par son ligand. La

proteine G ainsi activee Bchange une molecule de GDP pour une molecule
de GTP et agit a son tour sur un effecteur. Leffecteur est un

enzyme

(adenylate cyclase, phospholipase C, . ..> ou un canal ionique (canal K+,

Ca++ , . ..I. La reconnaissance du message dont la specificit
par le recepteur

membranaire

aboutit

est assuree

ainsi, apres un phenomene

damplification d$ a la mise en jeu de plusieurs cycles catalytiques des

proteines G et de leffecteur, a des Bvenements cellulaires : modification
de la transcription

genique,

croissance

cellulaire,

communication

intercellulaire, modulation du potentiel membranaire. Cet article resume

brievement

letat

de nos connaissances

en faisant

une mention

particuliere au recepteur de langiotensine II actuellement Btudie dans

notre laboratoire.

Euro-Immunoanalyse

Caractkristiques

structurales

93

289

des rkepteurs

2Lsept domaines

transmembranahs
Les recepteurs a sept domaines transmembranaires ont en commun
un certain nombre de caracteristiques structurales : ils ne possedent pas
de peptide signal, ils ont une chaine polypeptidique unique denviron 400 a
600 acides amines, leur partie N-terminale est glycosylee, leur partie Cterminale comporte des sites de phosphorylation et, le cas BchBant,de
palmitoylation.

11 existe

des homologies

importantes

de structure

primaire de ces recepteurs a linterieur des sous-familles telles que celles

des recepteurs a-, et &adrenergiques, des recepteurs a la serotonine ou a
la dopamine. Ces ressemblances ont Qte mises a profit pour cloner par
analogie

divers sous-types

de recepteurs

appartenant

a une mQme

famille. Par contre, il nexiste que peu dhomologie entre les differentes
familles entre elles, en dehors de lorganisation canonique des sept
helices a transmembranaires. Lorganisation genique de ces recepteurs
est relativement simple : la plupart de ces recepteurs ne possedent pas ou
peu dintrons. Un certain nombre dentre eux subissent un epissage
differentiel aboutissant a la generation de sous-types de recepteurs, par
exemple dans le cas du recepteur D2 de la dopamine.
La structure

tridimensionnelle

transmembranaires,
reconstructions

dune proteine a sept domaines

la bacteriorhodopsine,

est connue

dimages obtenues par cryomicroscopie

grace

aux

electronique

haute resolution. Les sept helices transmembranaires sont rassemblees

sous la forme dun faisceau et participent, pour cinq dentre elles,a la
liaison du retinal, le ligand de la rhodopsine. Lactivation photonique de
la bacteriorhodopsine provoque la formation dune base de shiff au niveau
du retinal et aboutit a lexpulsion dun proton du milieu intracellulaire
vers le milieu extracellulaire. Les coordonnees tridimensionnelles

de la

bacteriorhodopsine ont ete utilisees pour construire des modeles dautres

recepteurs a sept domaines transmembranaires, notamment des opsines
de mammiferes dont la structure primaire est relativement proche de la
bacteriorhodopsine.

La

rhodopsine,

transmembranaires

present

recepteur

a sept

domaines

dans les cellules a batonnets, impliquees

dans la vision nocturne, et les iodopsines responsables de la vision des

couleurs

rouge,

dyschromatopsies,
structurales

bleu

et vert,

ont

des

structures

voisines.

Les

telles que le daltonisme, sont liees a des anomalies

de leurs genes (deletions,

crossing-over).

Les retinites

pigmentaires, maladies autosomiques dominantes pouvant aboutir a une

PIERRECORVOL

290

degenerescence

retinienne

photorecepteurs,

sont en partie expliquees

mutations ponctuelles

secondaire

la

destruction

par differents

des

types de

sur le gene codant pour la rhodopsine

ou les

iodopsines. Elles aboutissent a des recepteurs incapables detre excites

par les photons ou incompletement matures. Jusqua present, il nexiste
pas dautres

mutations

connues

des recepteurs

a sept domaines

transmembranaires responsables dune pathologie humaine.

Les proteines G, auxquelles sont couples les recepteurs a sept

domaines transmembranaires sont des heterotrimeres de sous-unites 01,
l3 et y. 11 existe une grande diversite des proteines G puisquil existe plus
dune vingtaine de sous-unites a et plus de 4 sous-unites S et y. Certaines
sous-unites a peuvent stimuler ladenylate cyclase (a,) ou linhiber (ai),
stimuler la phospholipase C (a,), etc.... Les proteines G peuvent aussi
stimuler

directement

differents

canaux (Ca++, K+, . ..>. Une grande

diversite des mecanismes de transduction du message est possible car un

recepteur peut activer plusieurs proteines G differentes, une proteine G
peut r&tiler plusieurs effecteurs, et enfin un effecteur peut etre r&u16
par differentes proteines G.
Lors de lactivation du recepteur, la sous-unite a se dissocie des sousunites I3 et y qui restent associees a la membrane.

La sous-unite

echange une molecule de GDP pour une molecule de GTP qui sera ensuite
hydrolysee toujours par la sous-unite a en GDP. Cette activite GTPasique
de la sous-unite a regule ainsi le cycle de la prot6ine G. La sous-unite a,
peut etre activee constitutivement par ADP ribosylation lorsquelle est
incubee avec la toxine de cholera. Une arginine en position 201 est
impliquee dans cette ADP ribosylation. Une activation permanente de la
sous-unite a peut etre aussi obtenue par des analogues non clivable du
GTP. Dans les deux cas, il en resulte une activation permanente de la
sous-unite a, avec stimulation continue de leffecteur. Une cysteine, en Cterminal,

est le site dune autre modification

induite par la toxine

diphterique qui bloque la catalyse de lechange GTP/GDP dans la sousunite ai.

Les rhodopsines sont couplees a une proteine G appelee transducine.
La sous-unite a de la transducine activee par la rhodopsine va a son tour
activer une phosphodiesterase aboutissant a une diminution du taux du
GMP cyclique intracellulaire

provoquant

une fermeture

des canaux

Euro-Immunoanalyse

93

291

sodiques, une hyperpolarisation et la generation dun influx nerveux. Le

phenomene damplification

dans cet exemple a pu etre calcule : une

molecule de rhodopsine stimulee par absoption dun photon active 9 son

tour 100 a 500 molecules de transducine ; une molecule de transducine
activee aboutit a lhydrolyse de 3700 molecules de GMP cyclique par
seconde.
La structure primaire des proteines de la famille des sous-unites a
des proteines G est remarquablement conservee. Les sous-unites (31des
proteines G interagissent avec les sous-unites R et y par leur partie Nterminale, avec les recepteurs a sept domaines transmembranaires

par

leur partie C-terminale. La liaison du GTP fait intervenir plusieurs sites

discontinus de contacts, dont larginine en position 201 de la sous-unit6 a,
qui est le siege de 1ADP ribosylation induite par la toxine de cholera.
Des mutations ponctuelles des proteines G peuvent aboutir a une
croissance tumorale de certaines glandes endocrines : une mutation de
larginine 201 de la sous-unite a, par une glutamine aboutit & une
activation constitutive de cette sous-unite. Cette mutation somatique est
presente dans environ 40 % des adenomes hypophysaires secretant de
lhormone de croissance, et, a une moindre frequence, dans certaines
tumeurs thyroidiennes. Lhypothese que la croissance tumorale etait bien
due a cette mutation
dexperiences
differents

somatique

a et6 Btablie par plusieurs

par mutagen&se dirigee et

composants

des proteines

types

reconstitution in vitro des

G, on a pu montrer

que la

substitution de larginine 201 par une cysteine et de la glutamine 227 par

une arginine provoquait

une stimulation

constitutive

de ladenylate

cyclase. Les proteines ainsi mutees ne sont plus capables dhydrolyser le

GTP en GDP. In uiuo, une pathologie analogue a et6 produite chez des
souris transgeniques :?a fusion du promoteur de lhormone de croissance
avec une sous-unite a, mutee aboutit a la production dadenomes
hypophysaires experimentaux. Les proteines G mutees peuvent ainsi se
comporter comme des oncogenes (oncogene gsp). I1 faut dailleurs noter
lhomologie structurale des sous-unites a avec loncogene rus et le facteur
bacterien

delongation

TU. Alors que a, hydrolyse le GTP de facon

invariable, grace a son activite GTPasique intrinseque, p2lra.s et EF-TU

hydrolysent le GTP avec une effkacite

qui depend essentiellement

de

leffet dautres proteines (GAP) qui augmentent leur activite catalytique.

Un autre oncogene Gip2 correspond a une mutation ponctuelle au niveau
de ai2.

Cette

mutation

a et6 trouvee

dans

certaines

tumeurs

PIERRE CORVOL

292

surrenaliennes et ovariennes et pourrait &r-e, comme Gsp, responsable de

la transformation oncogenique de ces tissus.
lIMsensibil.isation
des rbcepteurs
La desensibilisation

B sept domainestransmem-

des recepteurs couples aux proteines G a et6

particulierement etudiee dans le cas des recepteurs J32-adrenergiques. La

desensibilisation se traduit par une diminution de la reponse maximale
et/au de la sensibilite a un agoniste comme lisoproterenol.
Bvenements

sont

impliques

dans

cette

Plusieurs

desensibilisation

une

sequestration des recepteurs, une baisse de la transcription du gene,mais

le phenomene le plus Btudie a et6 celui de la desensibilisation ultra-rapide
des recepteurs

I3-adrenergiques

lice a leur phosphorylation.

Deux

mecanismes principaux de phosphorylation ont et4 mis en evidence dans

les recepteurs ha-adrenergiques : une phosphorylation par une proteine
kinase A, dependant de 1AMP cyclique, et une phosphorylation par une
kinase specifique du recepteur, la kinase du recepteur R-adrenergique
(BARK). La phosphorylation du recepteur f3-adrenergique par la proteine
kinase A intervient a de faible concentration de ligand. Elle implique des
sites consensus de phosphorylation bien identifies grace aux experiences
de mutagen&e dirigee. Le recepteur l32-adrenergique contient deux sites
de phosphorylation
intracellulaire,

de la PKA situ& lun dans la troisieme

lautre

dans la partie

proximale

boucle

de lextremite

C-

terminale intracellulaire.
La phosphorylation du recepteur I32par la BARK intervient pour des
concentrations plus elevees dagoniste, de lordre de la micromole. Les
sites de phosphorylation de la BARK sont distincts de ceux de la prot6ine
kinase A et se situent au niveau de lextremite C-terminale du recepteur.
Ces phosphorylations du recepteur interviennent done dans des regions
adjacentes a celles impliquees dans linteraction des sous-unites a, avec
le recepteur et pourraient ainsi bloquer le couplage. La proteine kinase A
peut

aussi

phosphoryler

dautres

recepteurs

(desensibilisation

heterologue). La phosphorylation par la proteine kinase A, qui intervient

a des concentrations nanomolaires dagonistes, pourrait sobserver dans
les tissus a innervation B-adrenergique, tandis que celle induite par la
IjARK sobserverait dans les jonctions neuronales ou les concentrations
de catecholamines sont proches de la micromole. Laction de la rjARK est
potentialisee par laction dune autre proteine, la B-arrestine qui se lie au
recepteur dont la partie C-terminale a et6 prealablement phosphorylee

Euro-Immunoanalyse

93

293

par la BARK. Un systeme homologue existe au niveau des rhodopsines

avec une kinase specifique de la rhodopsine dont laction est completee
par larrestine.

Outre cette desensibilisation

rapide des recepteurs l3-

adrenergiques qui intervient en quelques minutes, existe une regulation

transcriptionnelle,
autoregulation

intervenant

negative

entraine une diminution

en quelques

linteraction

heures.

I1 existe

un

du ligand avec son recepteur

du niveau de la transcription

du gene du

recepteur, mediee par 1AMP cyclique.

Caractirlsation

et strucb

de langlotensineII

des dcepteurs

Deux types de recepteurs de langiotensine II ont Bte mis en evidence

par des inhibiteurs peptidiques et non peptidiques de langiotensine II. Le
recepteur AT1 de langiotensine
transmembranaires,

couple

II est un recepteur h sept domaines

a au moins

deux protdines

G : Gi

(inhibition de ladenylate cyclase) et Gq (activation de la phospholipase C

produisant linositol 1,4,5 triphosphate (IP3) et du diacylglycerol).
Lactivation du recepteur de langiotensine II conduit a une stimulation
des phospholipases D et A2, des canaux Ca++ et K+. Le recepteur AT1 est
sensible au DTT, inhibe par des produits non-peptidiques tels que le DUP
753 dont le Ki est de lordre de lo-sM.
dautres

reactifs

pharmacologiques,

Le recepteur AT2, caracterise par

lie langiotensine

II de facon

similaire mais nest pas couple aux proteines G et son mecanisme de

couplage est actuellement inconnu. La signification physiologique

du

recepteur AT2 est actuellement inconnue. Les recepteurs AT1 sont situ&s
au niveau des muscles lisses vasculaires, de la zone glomerulee de la
surrenale, du cceur, du rein. Les recepteurs AT2 se trouvent dans la zone
medullaire

de la surrenale, lovaire et luterus. Le cerveau contient

environ 40 % de recepteurs AT1 et 60 % dAT2. Le recepteur AT2 se trouve

tres fortement exprime lors du developpement fetal, notamment dans des
zones oii aucun recepteur de langiotensine
evidence

chez ladulte

int&essant,

(muscles

II ne peut etre mis en

squelettiques,

graisse,

peau).

Fait

certains tissus ou cellules modifient le phenotype de leur

recepteur de langiotensine lors du developpement. Ainsi, laorte fcetale

contient proportionnellement beaucoup plus de recepteur AT2 que laorte
adulte.
Le clonage par expression du recepteur AT1 a montre lexistence de
sept domaines transmembranaires,
glycosylation,

de trois sites extracellulaires

dune partie C-terminale

riche en sites potentiels

de
de

PIERRECORVOL

294

phosphorylation . Deux sous-types du recepteur AT1 ont et6 recemment

individualises : le recepteur ATla present dans le rein et le muscle lisse
vasculaire et le recepteur ATlb, qui differe du precedent par 17 acides
amines, et situ6 dans les surrenales. Les deux recepteurs lient de faGon
similaire les differentes angiotensines et sont i&b&
non par les bloqueurs

specifiques

du recepteurs

par le DUP 753 mais

AT2. Le recepteur

recombinant exprime de facon stable dans des cellules CHO est couple a
la generation dIP3 et aux mouvements intracellulaires de calcium.
Voies de si~tion

du rbcepteurde langiote~

II

La stimulation du recepteur de langiotensine II surrenalien ou du

muscle lisse vasculaire fait intervenir plusieurs voies metaboliques : 1)
Generation dIP3 9 partir du phosphatidyl inositol 4,5-biphosphate

par

stimulation de la phospholipase C. Cette generation est precoce, fugace,

inhibee par les esters de phorbols et independante de linternalisation du
complexe recepteur-angiotensine

II. Lactivation de la phospholipase C

aboutit aussi a la generation de diacylglycerol qui, a son tour, stimule la

proteine

kinase C. La proteine kinase C

peut &re aussi activee

directement par les esters de phorbol. Sa stimulation par langiotensine

II dependrait de linternalisation du complexe recepteur-angiotensine II.
2)

Lactivation

du

recepteur

de

langiotensine

II

stimule

la

phospholipase D qui agit sur la phosphatidyl choline pour produire de

lacide

phosphatidique.

Ce dernier

peut, par lintermediaire

dune

phosphatidyl hydrolase, generer du diacylglycerol qui stimule la proteine

kinase C. La proteine kinase C est done un enzyme qui peut &re a la fois
stimule

par la voie de la phospholipase C et de la phospholipase D. Sa

stimulation aboutit Q la phosphorylation de substrats impliques dans la

generation

devenements

conduisant

la cellule

en mitose.

3) Le

recepteur de langiotensine II est couple negativement a ladenylate

cyclase par lintermediaire de Goi. Ce mecanisme est operationnel dans
lhypophyse anterieure, la surrenale et le foie, mais ne sobserve pas dans
les cellules musculaires

lisses vasculaires.

4) Enfin, lactivation

du

recepteur de langiotensine II agit sur different canaux, de facon directe

ou indirecte. Les canaux potassique ATP-dependants seraient bloques par
langiotensine
responsable
surrenale

II ce qui provoquerait
dune augmentation

une depolarisation

cellulaire,

de la secretion daldosterone

et dune vasoconstriction

par la

par les cellules du muscle lisse

vasculaire. Un canal calcium entrant, voltage-dependant,

serait active

Euro-Immunoanalyse

295

93

par le recepteur de langiotensine II. Enfin, la proteine kinase C stimule

la phospholipase

AZ, aboutissant a la production de prostacycline

qui

pourrait mettre tin a laction de langiotensine II, notamment dans la

surrenale.

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