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.,-
1989-
PRODUCCION,
CONSERVACION
Y
VIABILIDAD
DE
FILAMENTOSOS PARA LAS FERMENTACIONES SOLIDAS
S.
XNOCULO
BRIZUELA
DE
HONGOS
( 3 ) , A - OLMOS
(2)r
213 Rue
Cote
Si.
Roussos et al.
Er:
nuestros
~ . s p e r 3 i l l u s niger I
x.
Se cG5nocen diferentes tcnicas para La prGducCi6n de conidiosporas a nivel de planta piloto o industrial. Las ms antiguas se
refieren al U S G de botellas de Roux o de charolas (Vezini y Sing,
1,37".
,,l.
En los ltimcjs 10 azos, se propusieron varios procesos nuevos
en fermentadores lquidos (Broderick y Greenshields, 1982), en fermentadores de discos (Raimbault y R O U S S O S ~ 1 9 8 5 ) y sobre soporte
( R ~ i i s s sy Olmos I 1987 j .
La conservaci6n da conidiosporas Be hongos filamentosos para
cepas de colecciijn a nivel de laboratorio, se lleva a cabo mediante
congelacidn (-18C o -196C en nitrgeno lquido) y secado en suelo
r.
MATERIALES Y METODOS
Mi cr oorg an ismos
Se estudiaron en este trabajo Aspergillus niger van Tieghem, cepa
ORSTOM-10 (Raimbault, 1980); 4. terreus Thom, cepa del ICIDCA
(Roussos et al., 1987) y la cepa CCMF-470 (CCM= Czechoslovak
Collection- of
Microoganisms) de Trichoderma harzianum
Rifai
ampliamente descrita por R o u s s o s (1985).
Medios de cultivo y de esporulacin
Las cepas se resembraron cada 6 meses en papa dextrosa agar (PDA) y
se incubaron a 29% durante 7 das, para posteriormente conservarlas
en refrigeracin (4OC) durante mas o menos 6 meses.
Produccin de esporas en matraces
Se colocaron 20 q- de medio de cultivo con diferentes concentraciones
de fuentes de carbono, en matraces de 250 ml, los cuales se esterilizaron a llOC durante 3 0 minutos. La composicin del medio de
cultivo puede observarse en la Tabla 1. Las fuentes de carbono
estudiadas fueron glucosa, sacarosa, celulosa, harina de yuca y
melaza. Los medios de cultivo esterilizados, todava lquidos, se
inocularon en masa con 1 x 1 0 6 esporas/matraz y se incubaron durante
una semana a varias temperaturas (29OC para
harzianum, 35OC para
11- niqer, 30'~para A. terreus). Posteriormente, se agregaron loom1
de agua con Tween 80 y se contaron las esporas con una cmara de
Malassez. El indice de esporulacin (Ie) se determin como el nmero
de esporas producidas por gramo de fuente de carbono inicial.
r.
6
S.
Roussos et al.
Ii@iIiB
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O
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T
l
Inculo de hongos f i l a m e n t o s o s
Tabla 1. Composicin del medio de cultivo utilizado para la seleccin de la fuente de carbono mas adecuadar el cual se
ajust a un pH de 5.6.
SUBSTANCIA
CANTIDAD
Fuente de carbono*
KH2P04
(NH4)2SO4
Urea
Agar
Agua
4.00
0.16 g
0.32 g
0.08 g
15.00 g
1000 ml
adicionada
con
Tween
80(0.1%)
S.
Roussos et al.
r-
Tabla 2 - Indice de ssporulacien (Ie ~10'') y produccin de conidiosporas de Aspergillus terreus en matraces, utilizando
diferentes fuentes de carbono.
Indice de
e s p a r ill ac i;.' n
If?
LO?
F u e n t e de Carbono
c 1u c o3 a
20.3
S ac a ros a
Welaza
Yuca
Celulosa
14.1
41.6
26.7
2 7 * -10
Concentracin del
substrata* (g/l)
A. terreus
T. harzianum
1e x io9
Te x
1.95
9.95
14.20
10.80
8.32
0.76
0.73
0.33
5
10
20
25
40
50
100
Melaza p a r a A. t e r r e u s y h a r i n a de yuca p a r a
L.
io9
26.66
13.01
16.20
4.62
5.95
9.12
8.24
1.34
harzianum.
r.
Relacin
C/N
Indice de esporulacin
1e x 109
7 das de cultivo
7.1
14.2
20.9
27.4
32.53
7.71
7.38
14.80
7.18
0.16
20 das de cultivo
10.27
24.40
20.90
20.00
11.80
LO
s.
HousSOS e t a l .
A.
L;l c s n G c i c a d e e s p o r u 1 a c i S n d e
terreus, sobre diferentes
f l u e n t s s d e ~csrl3jono, m u e s t r a v a l o r e s d e I o d i f e r e n t e s p a r a c a d
s u b s t r a t a ( F i g . 2 ) - E l BTtimo d e e s p o r u l a c i n , s e o b t u , , o i e s p u s d e
1 5 d a s d e i n c u b a c i i n p a r a l o s s u b s t r a t o s e s t i l d i a d o s . Los mayores
,ralores dz:L I e , s e o b t u v z e r o n con m e l a z a , l u c a y c e l u l o s a ; m i e n t r a s
quz l o s n e n o c e s fuero^ s o b r e g l u c o s a y s a c a r , c o n f i r m i n d o s e l o s
resultados a n t e s p r e s e n t a d o s ( T a b l a 2).
rie e s p o c u l a c i d n d e A s p e r g i l l u s t e r r e u s
1. : i n S . t i c a s
d i f e r e n t e s f u s n t e s d e c a r b o n o ( c u l t i v o s en m a t c a c e s a ? O ' C ) .
sobre
11
3'
2'
6
7
8
Tiempo (das)
r.
12
S.
Roussos e t a l .
20
L
O
C l
a,
ir
O,
O
a,
Fig.
4.
Tiempo4 (das) 5
Cin6tica de esporulacitin de A s p e r g i l l u s t e r r e u s e n c u l t i v o
sobre m e l a z a , en u n f e r m t n t a d o r d e d i s c o s a 3 0 ' C .
13
26
53
-A.
niger
98.5
96.4
95.8
A. terreus
94.6
76.6
90.0
T. harzianum
92.3
83.2
84.4
ID
rt
W
P
80
Eumedad ( S )
Humedad ( % )
los
H
3
O\
o
C
O
1.0
Tiempo (das)
de
esporas
de
2.0 3 . a 4 . 0 5.0
Tiempo (dias)
Aspergillus
niger
Trichoderma
S. Roussos et al.
16
Temperatyra de
secado ( - C l
sin soporte
38.75
20.00
5.75
9.35
0.81
0.56
40
50
60
con soporte
cien abtenidos con los cultivos sobre soporte, fueron tambin altos.
De las tcnicas de conservacin experimentadas (secado, congelacin
y refrigeracin), se seleccion la de refrigeracin para mantener
las conidiosporas por un tiempo de dos meses, con un porcentaje de
:-labilidad importante del 85-95 %i.
LITERATURA CITADA
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z:
s:
s.
s.
17
s.