Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2007

PENGARUH PENAMBAHAN GLUTATHIONE DAN

KOLESTEROL PADA PEMISAHAN SPERMATOZOA X
DAN Y DENGAN METODE KOLOM ALBUMIN TELUR
(Effect of Glutathione and Cholesterol Addition on Sperm Quality
after Separation Process Using Albumin Column)
R.G. SIANTURI, P. SITUMORANG, E. TRIWULANNINGSIH dan D.A. KUSUMANINGRUM

Balai Penelitian Ternak, PO Box 221, Bogor 16002

ABSTRACT

A study was done to investigate the effect of glutathione and cholesterol addition into diluter on sperm
quality after X and Y separation process using albumin column. This study was done based on completely
randomized design, the treatmen was 4 different diluter namely: I (control/Tris-citrate buffer + 20% eggs
yolk), II (control + 0.5 mM glutathione), III (control + mg/cc cholesterol), and IV (control + 0.5 mM
glutathione +1 mg/cc cholesterol). Parameter observed were semen quality before and after separation process
including motility (%M), life and dead (%LD) intact acrosome and plasma membrane (%TAU) and sperm
concentration. There was not significantly different (P > 0.05) condition of % LD, % TAU and % M before
and after separation process, whereas for % M was 84.4 86.7% vs 65.6 75.2%; and the lowest % was
resulted from control (I). Sperm quality after 2 hours of separation decreased by 20% and the sperm quality of
control was significantly lower (P < 0.05) than that of the others. Sperm concentration was lower after
separation due to washing process. In general, the semen quality after separation was sustained and it could
be frozen afterward. It is concluded that glutathione and cholesterol addition into the diluter can maintain
semen condition during X Y separation process.
Key Words: Glutathione, Cholesterol, Sperm Quality, Sperm Separation

ABSTRAK

Pemisahan spermatozoa dengan metode kolom albumin adalah menggunakan kolom media pemisah yang
mengandung albumin telur yang berbeda viscositasnya, sehingga spermatozoa yang mempunyai motilitas
tinggi (Y) akan mampu menembus medium yang lebih pekat, sedangkan spermatozoa X akan tetap berada
pada medium yang mempunyai viscositas lebih rendah. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui
efek penambahan kolesterol dan glutathione pada media pemisahan sperma terhadap kualitas sperma hasil
pemisahan dan efektivitas metode pemisahan. Rancangan penelitian adalah rancangan acak lengkap dengan 4
perlakuan media pemisahan dan pengencer, yaitu: I) kontrol (Tris citrat buffer + 20% KT(kuning telur)); II)
kontrol + 0,5 mM glutathione; III) kontrol + 1 mg/ml kolesterol; dan IV) kontrol + 0,5 mM glutathione + 1
mg/ml kolesterol. Parameter yang diukur adalah kualitas sebelum dan sesudah pemisahan meliputi persentase
motil (%M), sperma yang hidup (%LD), persentase sperma dengan tudung akrosom utuh (%TAU) dan
konsentrasi spermatozoa. Setelah mengalami pemisahan, persentase motilitas, sperma hidup dan TAU sedikit
mengalami penurunan apabila dibandingkan dengan sperma sebelum dipisahkan namun tidak berbeda nyata,
dan ada tendensi peningkatan motilitas dan sperma hidup dengan adanya penambahan kolesterol, glutathione
dan kombinasinya. Penurunan motilitas sperma sesaat setelah pemisahan adalah dari 84,4 86,7% menjadi
65,6 72,2%, dan motilitas terendah terjadi pada perlakuan kontrol (I). Kualitas sperma hasil pemisahan yang
didiamkan selama 2 jam pada suhu ruang menurun motilitasnya sekitar 20%. Motilitas terendah dari ke empat
perlakuan adalah pada media kontrol yaitu 55%, yaitu menurun secara nyata (P < 0,05) dibandingkan dengan
ke-3 perlakuan media lainnya yang mendapat tambahan glutathion dan kolesterol atau kombinasinya.
Persentase spermatozoa hidup dan tudung akrosom utuh (TAU) masih berkisar di atas 80% dimana hanya
mengalami sedikit penurunan. Konsentrasi sperma dari hasil semen yang dipisahkan, mengalami penurunan
yang sangat besar, terutama pada fraksi bawah, hal ini dikarenakan banyak spermatozoa yang hilang dalam
proses pemisahan. Secara umum kualitas semen setelah pemisahan masih layak untuk diproses lebih lanjut
yaitu dibekukan. Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa penambahan glutathion dan kolesterol

207
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2007
pada media pemisahan spermatozoa dengan metode kolom albumin dapat memepertahankan kualitas
spermatozoa setalah mengalami proses pemisahan dan layak untuk dibekukan.
Kata Kunci: Pemisahan Sperma, Spermatozoa X dan Y, Glutathione, Kolesterol, Kolom Albumin
PENDAHULUAN
Teknologi pemisahan sperma dengan
metode kolom albumin merupakan metode
yang murah dan mudah dilakukan, namun
keberhasilan pemisahan sperma ini belum
optimum karena volume yang digunakan,
perlakuan sentrifugasi dan penambahan putih
telur sebagai media pemisahan dapat
mempengaruhi viabilitas spermatozoa. Metode
pemisahan dengan menggunakan kolum
albumin didasarkan pada perbedaan motilitas
spermatozoa X dan Y. Prinsip dari metode ini
adalah membuat medium yang berbeda
konsentrasinya, sehingga spermatozoa yang
mempunyai motilitas tinggi (Y) akan mampu
menembus konsentrasi medium yang lebih
pekat, sedangkan spermatozoa X akan tetap
berada pada medium yang mempunyai
konsentrasi rendah.
Pemisahan spermatozoa dengan
menggunakan kolom albumin dari putih telur
ayam kampung telah dilakukan oleh SAILI
(1999) dan metode ini mudah sekali diterapkan
di lapang karena putih telur mudah diperoleh
dan terjangkau. Kombinasi medium pemisah
yang digunakan adalah konsentrasi 10 persen
albumin telur pada lapisan atas dan 30 persen
pada lapisan bawah. Hasil penelitian tersebut
menunjukkan, konsentrasi albumin 10 persen
dan 30 persen mampu mengubah proporsi
perolehan spermatozoa dari kondisi alamiah.
Hasil penelitian yang dilakukan oleh
PANCAHASTANA (1999) menunjukkan bahwa
pemisahan spermatozoa dengan putih telur
diperoleh rata-rata persentase spermatozoa Y
pada lapisan atas adalah 36,80 8,06 dan
untuk lapisan bawah yaitu 77,20 4,09.
Ada kecenderungan bahwa persentase
spermatozoa dengan tudung akrosom utuh
menurun dengan meningkatnya waktu
pemisahan dan daya hidup spermatozoa beku
setelah thawing cenderung lebih rendah pada
spermatozoa yang mengalami pemisahan
(SITUMORANG et al., 2002). DOW dan
BAVISTER (1989) melaporkan bahwa serum
albumin mempunyai peranan penting dalam
proses penghilangan kolesterol dan ion zink
208
yang berfungsi menstabilkan membran plasma
spermatozoa. Tiga aspek utama yang
berhubungan dengan terjadinya perubahan
secara molekuler selama proses kapasitasi
adalah konsentrasi intraseluler kalsium dan ion
lain, perubahan distribusi dan serta perubahan
komposisi protein fosfolipid dan aktivin. Selain
ion natrium dan kalium yang berfungsi
menjaga integritas fungsional membran plasma
sel spermatozoa, kolesterol juga ikut menjaga
integritas membran plasma.
Kandungan kolesterol yang rendah dalam
plasma semen dan spermatozoa sebagai salah
satu penyebab kerentanan spermatozoa
terhadap cold shock dan kehilangan viabilitas
spermatozoa setelah pembekuan. Tingginya
kerusakan membran plasma spermatozoa
selama proses pembekuan semen juga
berhubungan dengan rendahnya kandungan
kolesterol membran plasma (WHITE, 1993).
Molekul-molekul lipid dari membran sel
tersusun dari tiga jenis, yaitu: 1) fosfolipid, 2)
kolesterol, dan 3) glikolipid. Pada membran
plasma sel eukariotik perbandingan molekul
kolesterol dengan posfolipid adalah 1:1. Makin
banyak molekul kolesterol, membran plasma
bersifat makin cair. Selain memberikan sifat
fluiditas, kolesterol juga menjaga kestabilan
membran plasma (SUBOWO, 1995). Efek
stabilisasi kolesterol terhadap fosfolipid bilayer
telah diketahui, dan sejumlah laporan
menunjukkan bahwa kehilangan kolesterol dari
membran plasma sperma mempunyai efek
destabilizing dan capacitating terhadap sperma
dan kemungkinan merupakan bagian dari
mekanisme molekuler kapasitasi in vivo
(PARKS dan EHRENWALD, 1990 dalam FOOTE
dan PARKS, 1993). Sebaliknya, penambahan
kolesterol dapat meningkatkan stabilitas
membran dan pengaturan kapasitasi dan
induksi reaksi akrosom dalam saluran
reproduksi betina. Penambahan kolesterol
dalam media akan menghambat terjadinya
reaksi akrosom (ZARINTASH et al., 1996) dan
spermatozoa dengan rasio kolesterol/
phospolipid (C/PL) tinggi lebih lambat
kapasitasinya dibanding rasio yang lebih rendah
(HOSHI et al., 1990).
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2007
Untuk mendukung pengawetan semen yang
telah mengalami pemisahan, mengingat
kualitasnya yang menurun dengan adanya
proses pemisahan, perlu dilakukan penelitian
untuk mempertahankan kualitas semen. Seperti
telah diketahui, pengawetan semen pada suhu
5C atau di dalam nitrogen cair yang bersuhu
196C, dapat menurunkan daya fertilitasnya
akibat proses pendinginan atau pembekuan
tersebut. Salah satu penyebabnya adalah adanya
radikal bebas yang dapat merusak sel
spermatozoa. Berdasarkan sifat antioksidan
yang dapat menetralkan radikal bebas, maka
penambahan glutathione sebagai antioksidan
primer diharapkan dapat mengurangi kerusakan
membran plasma. WIJAYA (1996) menyatakan
bahwa glutathione adalah antioksidan primer
yang bekerja dengan cara mencegah
pembentukan radikal bebas baru. Antioksidan
ini mengubah radikal bebas yang ada menjadi
molekul yang kurang mempunyai dampak
negatif sebelum radikal bebas tersebut
mempunyai kesempatan untuk bereaksi.
Penambahan glutathione di dalam medium
pemisahan spermatozoa X dan Y diharapkan
dapat mengurangi atau mencegah timbulnya
radikal bebas yang akan merusak membran
plasma, sehingga daya fertilitas sperma beku
pasca pemisahan dapat dipertahankan yang
pada akhirnya dapat meningkatkan derajat
konsepsi (C/R) dan persentase kebuntingan.
Menurut KARYADI (1997) radikal bebas
merupakan atom atau molekul yang sifatnya
sangat tidak stabil karena mempunyai satu
elektron atau lebih yang tidak berpasangan.
Untuk memperoleh pasangan elektron,
senyawa ini bereaksi dengan atom atau
molekul lain seperti asam lemak tidak jenuh,
protein, asam nukleat dan lipopolisakarida,
yang berakibat akan menimbulkan senyawa
yang tidak normal. Pengaruh negatif dari
peroksida lemak terhadap sel somatic antara
lain menghambat metabolisme oksidatif dan
glikolisis, lisis pada eritrosit, oksidasi pada
sulfhydril dan menghambat kerja enzim-SH,
modifikasi protein dan asam amino, kerusakan
membran, inaktivasi enzim pengikat membran
dan denaturasi DNA (WHITE, 1993).
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui
pengaruh penambahan kolesterol dan
glutathione pada pemisahan spermatozoa X
dan Y terhadap viabilitas sperma pasca
pemisahan dan efektifitas pemisahan sperma
dengan metode kolom albumin.
MATERI DAN METODE
Koleksi semen
Sumber semen sapi pada penelitian ini,
adalah seekor sapi pejantan FH, di Kandang
Ruminansia Besar Balai Penelitian Ternak -
Ciawi, yang dikoleksi seminggu sekali dengan
menggunakan vagina buatan. Sapi pejantan
tersebut ditempatkan pada kandang individu
dan diberi pakan rumput dan minum secara ad
libitum serta konsentrat sebanyak 8 kg/hari/ekor
sebagai suplementasi. Segera setelah
penampungan, semen dievaluasi kualitasnya
dan hanya semen dengan kualitas baik saja
yang digunakan dalam penelitian ini.
Pembuatan media dan kolom pemisah
Media pengencer dasar yang digunakan
adalah Tris Citrat Buffer dengan 20% (v/v)
kuning telur (KT) (SITUMORANG et al., 2000).
Untuk media pengenceran dan pemisahan
semen dipersiapkan 4 perlakuan media yaitu :
I) kontrol (Tris citrat buffer + 20% KT(kuning
telur)); II) kontrol + 0,5 mM glutathione
(GSH); III) kontrol + 1 mg/ml kolesterol; dan
IV) kontrol + 0,5 mM GSH + 1 mg/ml
kolesterol.
Media pemisahan yang dipakai untuk
pembuatan kolom albumin adalah media
pengencer sesuai perlakuan yang ditambahkan
putih telur dari telur ayam kampung yang
masih segar dan sudah disaring. Pembuatan
kolom yaitu sebanyak 2 ml tiap-tiap media
perlakuan yang mengandung 30% v/v albumin
telur dimasukkan pada tabung gelas dengan
diameter 1 cm kemudian diikuti dengan 2 ml
media yang mengandung 10% v/v albumin
telur. Fraksi atas adalah kolom yang
mengandung 10% (v/v) putih telur, sedangkan
untuk fraksi bawah adalah kolom yang
mengandung 30% (v/v) putih telur. Lapisan
kolom dibuat dengan cara memasukkan 2 ml
fraksi bawah dan diikuti dengan 2 ml fraksi
atas secara perlahan-lahan.
209
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2007

Pemisahan spermatozoa Hasil pengamatan morfometri terhadap

semen segar, menunjukkan persentase
Semen segar yang telah dievaluasi dan spermatozoa X dan Y mendekati 50 : 50% (X :
layak untuk dipisahkan, dibagi menjadi empat Y yaitu 49,75 : 50,25%), hal ini sesuai dengan
bagian dan diencerkan 1 : 1 masing-masing teori yang sesuai dengan teori umum bahwa
dengan ke-4 media pengencer sesuai komposisi spermatozoa X dan Y dalam semen
perlakuan. Sebanyak 1 ml suspensi diletakkan adalah 50 : 50% sehingga dari proses
di atas permukaan lapisan kolom albumin, pembuahan umumnya 50% zigot akan menjadi
kemudian dibiarkan selama 15 menit. Untuk jantan dan 50% menjadi betina (MC DONALD,
pemanenan, 2 ml dari suspensi teratas dari 1989).
permukaan di ambil sebagai hasil pemisahan
fraksi atas dan 2 ml lapisan terbawah sebagai Tabel 1. Kualitas semen segar hasil penampungan
hasil pemisahan fraksi bawah, sedangkan 1 ml sebelum dilakukan pemisahan*)
suspensi yang ada ditengah atau diantaranya di
buang. Hasil pemisahan fraksi atas dan bawah
Penilaian Rata-rata SD
di encerkan dan disentrifus (2500 rpm) selama Makroskopik
5 menit untuk mencuci sperma dari larutan Volume (ml) 8,0 1,6
putih telur. Pellet hasil sentrifus diencerkan
kembali dengan pengencer sesuai perlakuan Warna krem keputihan
dan dievaluasi kualitasnya serta diamati Konsistensi agak kental
morfometri sperma dari tiap-tiap fraksi untuk Mikroskopik
masing-masing perlakuan. Konsentrasi (juta/ml) 1942,2 470,2
Gerakan massa* +++
Rancangan penelitian Persentase motilitas (%) 87,0 5,3
Persentase sperma hidup (%) 88,4 3,6
Rancangan penelitian adalah rancangan
acak lengkap dengan 4 perlakuan media Persentase tudung akrosum 86,7 4,7
utuh (%)
pemisahan dan pengencer, yaitu: I) kontrol
(Tris cutrat buffer + 20% KT(kuning telur); II) Pesentase spermatozoa 49,8 3,1
kontrol + 0,5 mM glutathione; III) kontrol + 1 pembawa kromosom X (%)
mg/ml kolesterol; dan IV) kontrol + 0,5 mM Persentase spermatozoa 50,2 3,1
glutathione + 1 mg/ml kolesterol. Data yang pembawa kromosom Y (%)
diamati adalah kualitas sebelum dan sesudah +++ sangat baik; *) hasil dari 8 kali ulangan
pemisahan meliputi persentase motil (%M),
sperma yang hidup (%LD), persentase sperma Data-data yang ditampilkan pada Tabel 2.
dengan tudung akrosom utuh (%TAU) dan adalah merupakan data kualitas semen segar
konsentrasi spermatozoa. Perolehan setelah diencerkan 1 : 1 dengan empat media
spermatozoa X dan Y setelah pemisahan perlakuan pengencer yang dipakai untuk
berdasarkan morfometri luas kepala. Seluruh pemisahan sperma. Hasil pengamatan
data dianalisa secara statistik mengikuti STEEL menunjukkan penambahan kolesterol,
dan TORRIE (1993). glutathione maupun kombinasi keduanya tidak
berpengaruh nyata terhadap persentase
HASIL DAN PEMBAHASAN motilitas, sperma hidup dan TAU, walaupun
ada tendensi sedikit peningkatan motilitas dan
Hasil pemeriksaan semen segar yang sperma hidup dengan adanya penambahan
dipakai dalam penelitian ini baik secara kolesterol, glutathione dan kombinasinya.
makroskopik maupun mikroskopik Kualitas sperma yang telah diencerkan 1 : 1
menunjukkan gambaran karakteristik semen dengan 4 macam macam pengencer juga
sapi yang normal (Tabel 1). Data-data yang menunjukkan kualitas semen sangat memadai
dicantumkan adalah merupakan nilai hasil rata- untuk dilakukan pemisahan dengan metode
rata semen sapi segar yang dipisahkan dengan kolom albumin. Kualitas sperma setelah
metode kolom albumin dari 8 kali ulangan. dipisahkan dengan 4 media pengencer tertera

210
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2007

pada Tabel 3, dimana dibagi dalam dua fraksi
yaitu fraksi atas dan fraksi bawah. Persentase
motilitas, sperma hidup dan TAU sedikit
mengalami penurunan apabila dibandingkan
dengan dengan sperma segar sebelum
dipisahkan (Tabel 2). Penurunan kualitas
sperma selama proses pembuatan semen cair,
beku maupun pemisahan adalah hal yang
umum terjadi, karena secara alami daya hidup
spermatozoa post-ejaculat sangat terbatas.
Hasil penurunan terbesar terjadi pada motilitas
yaitu mencapai sekitar 20%. Hal ini
kemungkinan karena proses pemisahan
berdasarkan motilitas, dimana yang
spermatozoa dan motilitas tinggi dapat
menembus media dengan konsentrasi albumin
telur lebih tinggi (30%) dan ini tentunya sangat
menguras energi spermatozoa serta ditambah
lagi proses sentrifus juga menambah
penurunan kualitas spermatozoa khususnya
untuk motilitas. Untuk persentase spermatozoa
hidup dan tudung akroson utuh (TAU) masih
berkisar di atas 80% dimana hanya mengalami
sedikit penurunan. Lain halnya dengan
konsentrasi sperma dari hasil semen yang
dipisahkan, mengalami penurunan yang sangat
besar. Hal ini dikarenakan banyak spermatozoa
yang hilang dalam proses pemisahan. Namun
secara umum kualitas semen setelah pemisahan
masih layak untuk diproses lebih lanjut yaitu
dibekukan.
Kualitas sperma hasil pemisahan yang
didiamkan selama 2 jam pada suhu ruang
tersaji dalam Tabel 4. Persentase motilitas
berkisar dari 55% sampai dengan 67%.
Motilitas terendah dari ke empat perlakuan
adalah pada media kontrol yaitu 55%, menurun
secara nyata (P < 0,05) dibanding dengan ke
tiga perlakuan media lainnya yang mendapat
tambahan glutathione dan kolesterol atau
kombinasinya pada media pemisahan dan
pengencernya. Dari hasil tersebut dapat dilihat
bahwa bahwa penambahan kolesterol atau
glutathione dapat mempertahankan kualitas
spermatozoa yang mengalami proses pemisahan
dan dibiarkan selama 2 jam pada suhu ruang.

Tabel 2. Kualitas semen setelah diencerkan dalam 4 macam pengencer

+ Kolesterol
Penilaian semen Kontrol + Kolesterol + Glutathione
+Glutathione
Gerakan massa +++ +++ +++ +++
Motilitas (%) 84,44 7,3 86,1 4,9 85,56 7,3 86,67 5,0
Konsentrasi (juta/ml) 1077,1 395,0 1057,1 337, 1 1045,7 341,5 1097,1 147,6
Spermatozoa hidup (%) 88.9 3,3 89,0 4,5 90,1 4,7 90,3 3,3
Tudung akrosom utuh (%) 85,7 4,9 85,6 6,19 81,1 15,7 79,0 26,0

+++ menggambarkan gerakan massa yang sangat baik

Tabel 3. Kualitas sperma setelah pemisahan

+Kolesterol
Penilaian semen Kontrol +Kolesterol +Glutathione
+Glutathione
Fraksi atas
Motilitas (%) 65,6 13,1 72,2 6,7 71,1 7,9 69,4 5,3
Konsentrasi (juta/ml) 310,0 149,3x 350,0 260,8x 320,0 156,8x 290,0 102,0x
Spermatozoa hidup (%) 84,9 5,2 88,1 5,7 89,3 4,3 86,2 6,0
Tudung akrosom utuh (%) 82,3 4,1 84,8 4,4 84,9 2,9 83,6+5,0
Fraksi bawah
Motilitas (%) 65,0 14,1 65,6 6,8 67,2 8,3 65,0 5,0
Konsentrasi (juta/ml) 137,5 52,8y 275,0 198,8x 315,0 171,6x 152,5 78,5y
Spermatozoa hidup (%) 86,3 10,2 86,2 6,4 86,8 5,6 85,7 5,2
Tudung akrosom utuh (%) 80,9 6,8 82,8 2,8 84,0 4,3 83,0 2,8
xy
superskrip yang berbeda pada baris yang sama berbeda nyata (P < 0,05)

211
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2007

Tabel 4. Kualitas sperma 2 jam setelah pemisahan

+ Kolesterol
Penilaian semen Kontrol 1 +Kolesterol +Glutathione
+Glutahtion
Fraksi atas
Motilitas (%) 55,0 18,0b 66,7 8,7a 65,0 10,6a 67,2 5,7a
Spermatozoa hidup (%) 78,9 4,0 81,2 5,6 83,8 4,8 82,8 4,2
Tudung akros utuh (%) 76,3 5,0 79,9 3,4 81,0 2,8 80,3 3,7
Fraksi bawah
Motilitas (%) 60,0 12,3 62,2 4,4 63,9 4,9 62,2 6,7
Spermatozoa hidup (%) 78,8 8,4 81,9 3,8 82,7 4,8 82,2 5,5
Tudung akros utuh (%) 75,5 5,6 79,8 3,4 80,6 3,5 80,3 4,3
ab
superskrip yang berbeda pada baris yang sama berbeda nyata (P < 0,05)

Pengamatan terhadap perolehan sperma X
dan Y dilakukan melalui evaluasi morfometrik
sperma dengan cara mengukur panjang dan
bagian terlebar dari kepala sperma, yang
diamati di bawah mikroskop cahaya dengan
bantuan mikrometer. Untuk menentukan luas
kepala sperma sapi digunakan rumus metode
integral Reinmann (PURCELL dan VARBERG,
1987). Rata-rata persentase sperma X dan Y
pada fraksi atas dan bawah tertera pada Tabel
5. Pemisahan spermatozoa dengan metode
kolom albumin berhasil mengubah rasio X : Y
dari 49,8 : 50,2% menjadi 21,8 24,8 : 75,2
78,2% untuk albumin fraksi atas dan 82,0
87,5 : 12,5 18,0 pada albumin fraksi bawah.
Pada fraksi atas, didapatkan hasil
persentase perolehan spermatozoa X berkisar
dari 75,25 78,25%, dan hasil tertinggi pada
kelompok kontrol, namun tidak berbeda nyata
diantara ke-empat perlakuan media pemisah.
Sedangkan untuk fraksi bawah, persentase
perolehan sperma Y berkisar dari 82,0 87,5%.
Persentase perolehan sperma Y tertinggi terjadi
pada perlakuan media dengan penambahan
kolesterol. Hal ini kemungkinan disebabkan
penambahan jumlah kolom media albumin
dengan konsentrasi berbeda pada setiap fraksi,
menyebabkan hanya sperma yang mempunyai
motilitas tinggi yang mampu menembus
gradien media pemisah, yaitu sperma Y. Hal
ini sesuai dengan pernyataan ERRICSON et al.
(1973) bahwa sperma Y lebih motil dan lebih
mampu menembus gradien media pemisah.

Tabel 5. Persentase sperma X dan Y berdasarkan pengamatan morfometri pengukuran luas kepala sperma
pada fraksi atas dan bawah dari empat perlakuan

+ Kolesterol
Penilaian semen Kontrol + Kolesterol + Glutathione
+Glutathione
Fraksi atas
Sperma X 78,3 5,3 77,50 6,5 76,75 8,8 75,25 6,9
Sperma Y 21,8 5,3 22,50 6,5 22,75 8,0 24,75 6,9
Fraksi bawah
Sperma X 18,0 5,5 12,5 7,0 14,38 8,8 14,75 10,2
Sperma Y 82,0 5,5 87,5 7,0 85,62 8,8 85,25 10,2

212
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2007
KESIMPULAN
Kualitas sperma hasil pemisahan yang
didiamkan selama 2 jam pada suhu ruang
menurun motilitasnya sekitar 20%. Motilitas
terendah dari ke empat perlakuan adalah pada
media kontrol yaitu 55%, yaitu menurun secara
nyata (P < 0,05) dibandingkan dengan ke tiga
perlakuan media lainnya yang mendapat
tambahan glutathione dan kolesterol atau
kombinasinya.
Penambahan glutathione dan kolesterol
pada media yang digunakan untuk pemisahan
spermatozoa dengan metode kolom albumin
dapat memepertahankan kualitas spermatozoa
setelah mengalami proses pemisahan
Pemisahan spermatozoa pada penelitian ini
dapat mengubah rasio X : Y dari 49,8 : 50,2%
menjadi 21,8 24,8 : 75,2 78,2% untuk
albumin fraksi atas dan 82,0 87,5 : 12,5
18,0 pada albumin fraksi bawah.
DAFTAR PUSTAKA
DOW, M.P.D. and B.D. BAVISTER. 1989. Direct
contact is required between serum albumin
and hamster spermatozoa for capacitation in
vitro. Gamete Research. (23): 171 180.
ERICSSON, R.J., C.N. LANGEVEIN and M. NISHINO.
1973. Isolation of Fractions Rich in Human Y
Sperm. J. Natutre. 246(5432): 421 424.
FOOTE, R.H. and E.J. PARKS. 1993. Factors affecting
preservation and fertility of bull sperm: a brief
review. Reprod. Fert. Dev. 5: 665 773.
KARYADI, E. 1997. Antioksidan resep sehat dan
umur panjang. http://www.indomedia.com/
intisari/1997/juni/antous.html. (Juni 1997).
MC. DONALD, L.E. 1989. Veterinary Endocrinology
and Reproduction. 3th Ed. Lea and Febiger,
Philadelpia.
DISKUSI
Pertanyaan:
1. Mengapa prosesnya setelah 2 jam pemisahan?
2. Mengapa tidak setelah thawing?
Jawaban:
1. Melihat viabilitas sperma setelah pemisahan.
2. Karena ini adalah semen cair.
PANCAHASTANA, H. 1999. Upaya Merubah Sex Rasio
Spermatozoa dengan Melakukan Pemisahan
Spermatozoa X dan Y Menggunakan Putih
Telur pada sapi Bali. Skripsi. Fakultas
Peternakan Universitas Brawijaya, Malang.
SAILI, T. 1999. Efektifitas Penggunaan Albumin
sebagai Medium Separasi dalam Upaya
Mengubah Rasio Alamiah Spermatozoa
Pembawa Kromosom X dan Y pada Sapi.
Tesis. Program Pascasarjana, Institut Pertanian
Bogor.
SITUMORANG, P., E. TRIWULANNINGSIH, A. LUBIS, T.
SUGIARTI dan W. CAROLINE. 2000.
Optimalisasi penggunaan chilling semen untuk
meningkatkan persentase kebuntingan sapi
perah. Laporan Penelitian Balitnak, Ciawi.
SITUMORANG, P., E. TRIWULANINGSIH, T. SUGIARTI,
D.A. KUSUMANINGRUM, R.G. SIANTURI, I. G.
PUTU, A. LUBIS, E. MARDIAH, I. ZURAIDA,
RESMI H. dan I K. PUSTAKA. 2002. Peningkatan
efisiensi produksi sapi melalui perbaikan
teknologi reproduksi. Laporan Akhir
Penelitian T.A. 2003 APBN. Balai Penelitian
Ternak, Ciawi, Bogor.
STEEL, R.G.D. and J.H. TORRIE. 1993. Prinsip dan
prosedur statistika. PT Gramedia Utama,
Jakarta.
SUBOWO. 1995. Biologi Sel. Penerbit Angkasa
Bandung. hlm. 41 64.
WHITE, I.G. 1993. Lipids and calcium uptake of
sperm in relation to cold shock and
preservation: A Review Reprod. Fert. Dev. 5:
639 658.
WIJAYA, A. 1996. Radikal bebas dan parameter
status antioksidan. Forum Diagnos-tikum
No.1. Lab.Klinik prodia.
ZARINTAS, R.J. and N.L. CROSS. 1996. The
unsterified cholesterol content of human
sperm regulates reponse of the acrosom to the
agonist, progesterone. Biol. Reprod. 55: 19
24 (Abstract).
213