Kisela fosfataza ili AcP, KP

E.C. 3. 1. 3. 2.

1. Uvod
AcP za svoju optimalnu aktivnost zahtjeva aktivnosti in vitro u pH
kiselom podruju oko 4.
Potjee iz epitelnih stanica prostate, eritrocita i trombocita, a malo je
ima u jetri i slezeni.
Pokazuje nisku katalitiku aktivnosti u serumu zdravih osoba, ali je
tijeku karcinoma prostate katalitike aktivnost AcP u serumu izrazito visoka.

1.1. Laboratorijski postupci u odreivanju katalitike aktivnosti AcP

Odreivanje katalitike aktivnosti enzima osniva se na sposobnosti

0
enzima da u kiselom mediju (pH 5,2) na 37 C hidrolizira supstrat
naftilamin fosfat do naftola koji s fast red TR (*diazo-2-klor-5-toluen)
daje boju. Mjerenje katalitike aktivnosti enzima provodi se metodom
mjerenja brzine reakcije, mjerenjem brzine stvaranja boje brzinom porasta
apsorbancije u vidljivom podruju koja je razmjerna aktivnosti enzima.

Oekivane katalitike vrijednosti enzima su :

0
Oekivane vrijednosti (37 U/L nkat/L
C)
Mukarci Do 7,0 Do 117
ene Do 6,0 Do 100
Prostatina Do 2,8 Do 47
 Odreivanje AcP
E.C. 3. 1. 3. 2.

METODA : kontinuiranog mjerenja

PRINCIP :

UZORAK ZA ANALIZU: Svjei, nehemolizirani serum

Uzorak stabilizirati sa 3 mol/L octenom kiselinom: 10 l octene kiseline + 1 ml seruma.

UVJETI ODREIVANJA :

Valna duljina : 405 nm

Temperatura : 37 0 C
Kiveta : 10 mm
0- : Destilirana voda
instrumenta

POSTUPAK ODREIVANJA :

RAUN
:

OEKIVANE VRIJEDNOSTI :

Napomene :
- Kisela fosfataza se brzo inaktivira na sobnoj temperaturi i kod alkalnog pH.
- U stabiliziranom uzorku seruma enzim je stabilan 2 dana na 2 8 oC.
- Plazma se ne koristi kao uzorak (oksalat i fluorid inhibiraju kiselu fosfatazu, a heparin i EDTA uzrokuju zamuenje).
- Jaa hemoliza ometa tonost odreivanja, dok lipemini serumi nemaju utjecaja na odreivanje katalitike
koncentracije kisele fosfataze.
- Bilirubin interferira u reakciji odreivanja pa konc. direktnog bilirubina > 50 mol/L, snizuje vrijednost kisele
fosfataze.
 Laboratorijska dijagnostika hitnih stanja srani
biljezi

Pretrage laboratorijske dijagnostike hitnih stanja moraju biti nuno

dostupne u kratkom vremenskom roku zbog potrebe brze procjene statusa
razliitih vitalnih funkcija kod akutno ugreoenog bolesnika. Prihvatljivo
vrijeme potrebno od uzimanja uzorka do dobivanja nalaza (turnaround
time, TAT) ze hitne pretrage iznosi 1 sat.
Pretrage koje se u suvremenom klinikom laboratoriju mogu
primjenjivati kao hitne u svrhu promptne obrade akutnog ugruenog
bolesnika su :
Amilaza Aminotransfer Bilirubin Biljezi infarkta Erc, Lkc, DKS, Broj stanica u
aze miokarda Trombociti drugim tjel.
(CK MB, troponim) Hematokrit/hemoglo tek.
bin
Karboksihemogl Elektroliti Glukoza hCG Koagulacija Kreatinin
obin (K, Na, Cl, Ca) (PV,APTV, Ureja
fibrinogeni,antitrom
bin)
Kvalitativna Laktat Lijekovi Lipaza Okultno krvarenje Plinovi u krvi
analiza (digoksin, (stolica, eluani
Urina teofilin) sok)
Saturacija Ksenobiotici : Acetilsalicilna kiselina, fenobarbital, etanol
kisikom

1. Biljezi akutnog oteenja miokarda

Kardiovaskularne bolesti akutni infarkt miokarda (AIM) i inzult, vodei

su uzroci smrtnosti u razvijenim zemljama.

1.1. Biokemijski biljezi oteenja miokarda

1.1.1. Zastarjeli
Prvi biokemijski biljeg opisan davne 1954. godine bio je AST.
Specifinost AST a za infarkt miokarda vrlo je niska, jer drugi poremeaji
takoer uzrokuju povienje AST a u serumu. Ovu pretragu nije potrebno
raditi u bolesnika s sumnjom na AIM. Isto vrijedi i za LDH, jer je njegov
kardijalni izoenzim u plazmi s dugim poluivotom zamijenio specifiniji
troponim.

1.1.2. Aktualni
 Aktualni su kreatin kinaza (CK) i izoenzim CK MB za koje je
tipian porast ukupne aktivnosti CK uz istodoban porast aktivnosti MB
izoenzima u serumu prilikom infarkta miokarda. Problem koji je prisutan je da
ukupna aktivnost CK u serumu nije specifina za miokard i moe biti
posljedica bilo koje bolesti skeletnih miia ili zbog fizikog napora, zbog ega
je vano visok nalaz CK aktivnosti razjasniti anamnestiki. Odreivanje
aktivnosti ukupne CK i postotka CK MB vie nije preporuljivo za
dijagnostiku infarkta miokarda, ali ima smisla u svakodnevnom praenju
bolesnika s dokazanim infarktom, bez daljnjih klinikih dogaanja, jer
kontinuirani pad ovih biljega upuuje na uredan oporavak.
Dijagnostiki je bolje mjerenje (imunokemijsko) koncentracije u g/L,
nego aktivnost enzima (U/L) jer je dijagnostiki vea specifinost i osjetljivost
za izoenzim CK MB.
Troponim je proteinski kompleks smjeten na aktinskom filamentu
poprenoprugastih miia i njegov sadraj u tkivu miokarda bitno je vei
nego sadraj CK - MB. Koncentracija troponima u serumu osjetljiviji je
pokazatelj oteenja sranog miia. Aminokiselinski slijed sranog
troponima karakteristian je iskljuivo za miokard, za razliku od CK - MB koji
se nalazi i u skeletnim miiima. Dijagnostika prednost je to se troponim
otputa vrlo rano, ve pri minimalnom oteenju miokarda, za razliku od
ostalih sranih biljega ija koncentracija u serumu raste zbog nekroze
(dugotrajnije).
Mioglobin je protein, slii hemoglobinu, ini sastavni dio skeletnih i
sranog miia. Njegova funkcija je vezanje kisika. Kao mala molekula, zbog
sranog oteenja, vrlo se rano pojavljuje u veoj koncentraciji u serumu prije
CK MB i troponima. Rani je biljeg AIM, ali nedostatak ove pretrage je
nedostatna dijagnostika specifinost jer mioglobin u serumu raste i nakon
bilo kakvog oteenja ili traume skeletnih miia. Stoga je mioglobin pogodan
za iskljuenje infarkta miokarda, ali se ne moe koristiti za definitivnu
dijagnozu.
 CK (Kreatin kinaza ili kreatin fosfokinaza )
E.C.

1. Uvod
Enzim citoplazme koji sudjeluje u fosforilaciji kreatina u
poprenoprugastim miiima, a nalazi se jo i u mozgu. Sastavljen je od dvije
podjedinice : M (miina ) i B ( iz mozga) pa zbog toga ima tri izoenzima
izoenzimi MM, MB i BB.
Odreivanje katalitike aktivnosti CK primijenjuje se u dijagnostici i
prognozi sranog infarkta te kod tekih miinih bolesti (miina distrofija).
U fiziolokim uvjetima poveana katalitika aktivnost ovog enzima
javlja se nakon ozljede ili masae miia, intenzivnog napora nepripremljene
osobe i intramuskularnih injekcija.

1.1. Laboratorijski postupci u odreivanju katalitike aktivnosti CK

Odreivanje katalitike aktivnosti enzima osniva se na sposobnosti

0
enzima da u blago kiselom mediju, na 37 C, prenese fosfat s kreatin
fosfata na ADP. ATP e predati fosfat glukozi uz glukoza heksokinazu (HK)
stavrajui glukoza 6 fosfat. Od glukoza 6 fosfat uz glukoza 6 fosfat
dehidrogenazu (G-&-PDH) i NADPH nastaje 6 fosfoglukonat i NADP.
Mjerenje katalitike aktivnosti enzima provodi se mjerenjem brzine
reakcije, i to brzine nestajanja NADPH u UV podruju.

Oekivane katalitike vrijednosti enzima su :

0
Oekivane vrijednosti (37 U/L nkat/L
C)
Mukarci Do 205 Do 3 417
ene Do 175 Do 2 917
 Odreivanje CK (IFCC)
E.C. 2. 7. 3. 2.

METODA : UV; IFCC

PRINCIP :

UZORAK ZA ANALIZU: Svjei, nehemolizirani serum, plazma sa heparinom ili EDTA

UVJETI ODREIVANJA :

Valna duljina : 340 nm

Temperatura : 37 0 C
Kiveta : 10 mm
0- : Destilirana voda
instrumenta

POSTUPAK ODREIVANJA :

Uzorak 25 L
Radni reagens 0,5 ml
- Promjeati, inkubirati 2 minute i oitati apsorbanciju
- Ponoviti oitavanje apsorbancije kroz 3 minute
- izraunati srednju vrijednost A/min.

RAUN :
U/L = A/min x 3333
kat/L = A/min x 55,56

OEKIVANE VRIJEDNOSTI :

Mukarci < 200 U/L

ene < 180 U/L
_______________________________________________________________________________________Medicinska biokemija
vjebe

Odreivanje CK - MB
E.C.

METODA : UV; Imunoinhibicija

PRINCIP :

UZORAK ZA ANALIZU: Svjei, nehemolizirani serum

UVJETI ODREIVANJA :

Valna duljina : 340 nm

Temperatura : 37 0 C
Kiveta : 10 mm
0- : Destilirana voda
instrumenta

POSTUPAK ODREIVANJA :

Proba
Uzorak 25 L
Radni reagens 0,5 ml
- promjeati
- oitati porast apsorbancije nakon 1,2 i 3 minute
- izraunati srednju vrijednost A/min.

RAUN :

OEKIVANE VRIJEDNOSTI :

_______________________________________________________________________________________ 8