See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/44140383

Analysis Of Protein Fas Expression And Caspase 3 Activated At The Supression

Phase To Sperm Quantity By Androgen/Progestin Combination

Article
Source: OAI

CITATION READS

1 2,423

1 author:

Syafruddin Ilyas
University of Sumatera Utara
51 PUBLICATIONS   73 CITATIONS   

SEE PROFILE

All content following this page was uploaded by Syafruddin Ilyas on 03 June 2014.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

 Jurnal Biologi Sumatera, Juli 2007, hlm. 45 – 47 Vol. 2, No. 2
ISSN 1907-5537

ANALYSIS OF PROTEIN FAS EXPRESSION AND CASPASE 3 ACTIVATED

AT THE SUPRESSION PHASE TO SPERM QUANTITY BY
ANDROGEN/PROGESTIN COMBINATION

Syafruddin Ilyas
Departemen Biologi FMIPA Universitas Sumatera Utara, Jl. Bioteknologi No. 1,
Padang Bulan, Medan 20155

Abstract

Analysis studied to Fas protein expression and caspase 3 activated at the Sprague Dawley rat.
Administration of Androgen/Progestin was done at the suppression phase of sperm. I used experiment method
and completely randomized design with 4 treatments (0, 6, 12, 18 and 24 weeks) and 5 replications. Androgen
(2,5 mg) and progestin (1,25mg) combination injection with interval of 6 and 12 weeks respectively. Result of
research during 24 weeks was found tend to increase Fas protein expression and Caspase 3 activated. Between
Fas protein and caspase 3 activated was strong correlation (r=0,92) and difference significantly (P<0,01). Sperm
concentration tend to decreased because increased of Caspase 3 activated and Fas protein of germ cell.

Keywords: fas protein, caspase 3 activated, androgen/progestin, sperm quality

PENDAHULUAN androgen/progestin yang dapat mengaktivasi caspase

Peran spermatogenesis dalam pembentukan
spermatozoa tidak dapat dilepaskan dengan peran aksi
metabolit yang ada di dalam testis tersebut. Ada dua
fungsi utama testis, yakni spermatogenesis (eksokrin)
dan biosintesis androgen (endocrin). Fungsi kedua hal
tersebut melalui pengaturan yang sangat rumit dan
sangat kompleks. Studi tentang spermatogenesis
selalui berhubungan dengan aksi androgen.
Keberadaan androgen terututama pada hipofise dan
sel Leydig.
Ada tipe sel yang berbeda pada testis, yakni
sel Sertoli, Leydig, peritubular myoid dan sel
germinal pada beberapa tahap diferensial
spermatogenik. Spermatogenesis sangat tergantung
pada komunikasi autokrin dan parakrin antara tipe sel
berbeda dalam testis. Umpan balik negatif testosteron
pada poros hipotalamus-hipofisis-testis merupakan
suatu sistem komunikasi penting dari sel testis.
Pemberian kombinasi hormon androgen/progestin
telah banyak dibuktikan dapat menekan testosteron
intratestikular sehingga mengganggu spermatogenesis
yang menyebabkan rendahnya produksi spermatozoa.
Menurunnya produksi spermatozoa dapat terjadi
karena pengaruh apoptosis sel germinal. Aktivasi
caspase 3 merupakan jalur eksekutor sebelum terjadi
apoptosis (Kim et al., 2001; Said et al., 2004).
Aktifitas caspase 3 yang lama secara tidak langsung
dapat menyebabkan azoospermia. Untuk
pengembangan hormon yang dijadikan pilihan untuk
kontrasepsi pada pria, tentu harus diperhatikan
keamanan dan reversibelitasnya ketika pemberian
hormon dihentikan. Pemberian hormon
3 begitu lama, memungkinkan terjadinya gangguan
(disregulasi) pada gen atau aktifitas caspase 3
tersebut. Sulpizi et al., (2003) menyatakan bahwa
disregulasi caspase-3 adalah faktor kunci
perkembangan berbagai penyakit, seperti Alzheimer,
Parkinson, dan kanker. Winter et al., (2001)
menyatakan bahwa, ekspresi caspase-3 menjadi marka
bermakna untuk pemantauan penyakit kanker seperti
kanker prostat. Oleh sebab itu perlu analisis ekspresi
gen caspase-3 terhadap ekspos kombinasi
androgen/progestin pada proses kematian apoptosis
jangka panjang sel germinal tikus (Rattus sp.).
BAHAN DAN METODE
Digunakan metoda eksperimen dan rancangan
acak lengkap dengan delapan puluh ekor tikus jenis
Sprague Dawley (dari Balai POM Depkes Jakarta)
dibagi dalam kelompok perlakuan dan control.
Kelompok perlakuan dibagi 5 kelompok. Kelompok
pertama (minggu ke -4 s/d 0; kedua (minggu ke 6);
ketiga (12 minggu), keempat (18 minggu), kelima (24
minggu). Penyuntikan androgen (TU) 2,5 mg dengan
interval 6 minggu dan progestin (DMPA) 1,25 mg
serta dilakukan selama 24 minggu. Penghitungan
spermatozoa kauda epididimis dilakukan dengan
mengambil dan diencerkan dengan menambahkan 250
μL NaCl 0,95%. Kemudian dilarutkan 1:20 dengan
larutkan George dan diambil 1 tetes untuk dihitung
pada kamar hitung Neubaeur. Hasil hitungan (dari 10
kotak kecil kamar hitung) dijumlahkan dan dikali
dengan faktor pengalinya, yakni 2,5x20x10.000x4.

Universitas Sumatera Utara

 46 ILYAS J. Biologi Sumatera

Pembuatan preparat testis dilakukan dengan Hasil uji perbandingan rata-rata (Mann-
metode paraffin dengan larutan fiksatif Bouin. Testis Whitney U) antara perlakuan (pemberian
dipotong setebal 6 μm dan ditempelkan pada frosted androgen/progestin) dan kontrol diperoleh adanya
slide yang telah di coated dengan poly-l-lysine perbedaan yang signifikan (P<0,05).
(Sigma) untuk pengecatan caspase 3 aktif (Cat no.
C8487 Sigma - Active antibody produced in rabbit). - Konsentrasi Spermatozoa
Sedangjan untuk analisis ekspresi protein Fas Konsentrasi spermatozoa setelah perlakuan
digunakan Antibodi primer Fas (Monoclonal Mouse, dapat dilihat pada Gambar 2 di bawah ini. Gambar 2
anti-human CD95, APO1/Fas, Clone DX2, Code merupakan konsentrasi spermatozoa setelah
M3654-DakoCytomation Denmark). Jaringan testis di pemberian androgen/progestin selama 24 minggu
counterstain dengan haematoxylin mayer’s. Untuk merupakan data yang dikumpulkan berdasarkan
visualisasi digunakan diaminobenzidin (DAB) dan sel kelompok perlakuan.
germinal yang positif caspase 3 aktif akan berwarna
coklat. Penghitungan caspase 3 aktif dan protein Fas

Pemberian Androgen/Progestin
sel germinal dilakukan pada ±200 tubulus
seminiferus. Data dikalkulasi sebagai rata-rata dari
jumlah total dan dihitung rata-rata±SEM nya.

(Minggu)
HASIL PENELITIAN

Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan,

didapatkan hasil sebagai berikut:
- Caspase 3 Sel Germinal
Pada Gambar 1 telihat peningkatan caspase 3 Konsentrasi Spermatozoa (jt/mL)
aktif sel germinal mulai dari minggu ke 12 sampai
Gambar 2. Rata-rata konsentrasi spermatozoa selama
minggu ke 24 (A) dan (B) jika data dikelompokkan
pemberian androgen/progestin
menjadi 3 kelompok yakni praperlakuan, penekanan
dan pemeliharaan.
Hasil uji perbandingan rata-rata (Mann-
Pemberian Androgen/Progestin

Whitney U) antara perlakuan (pemberian

androgen/progestin) dan kontrol tidak diperoleh
adanya perbedaan yang signifikan (P<0,05), namun
(minggu)

sebenarnya telah terlihat adanya kecenderungan

penurunan konsentrasi sperma setelah pemberian
androgen/progestin.
A
- Korelasi antar Caspase 3 Aktif Sel Germinal,
Protein Fas Sel Germinal, dan Kosentrasi
Rata2 sel germinal caspase 3 aktif(+)/200 tub.seminiferus
Sperma
Pada Tabel 1 dapat dilihat korelasi antara
Pemberian Androgen/Progestin

caspase 3 aktif sel germinal, protein Fas sel germinal

dan konsentrasi spermatozoa.
(minggu)

Correlations

CASPASE3 FAS KONS_SP

CASPASE3 Pearson Correlation 1.000 .922* -.360
B Sig. (2-tailed) . .026 .552
N 5 5 5
FAS Pearson Correlation .922* 1.000 -.204
Rata2 sel germinal protein Fas/200 tub.seminiferus Sig. (2-tailed) .026 . .742
N 5 5 5
Gambar 1. (A) Rata-rata sel germinal caspase 3 aktif KONS_SP Pearson Correlation -.360 -.204 1.000
atau protein Fas (B) per 200 tubulus Sig. (2-tailed) .552 .742 .
seminiferus selama pemberian androgen/ N 5 5 5
progestin (minggu) dan (B) Data A *. Correlation is significant at the 0.05 level (2-tailed).
dikelompokkan berdasarkan tahap perlakuan

Universitas Sumatera Utara

 Vol. 2, 2007
PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil penelitian telah
diperlihatkan efektifitas androgen/progestin karena
adanya penekanan terhadap konsentrasi spermatozoa
(Gambar 2). Hal ini berhubungan dengan
meningkatnya aktivasi caspase 3 sel germinal
(Gambar 1A) dan ekspresi protein Fas (Gambar 1B)
mulai dari awal perlakuan (6 minggu) sampai
perlakuan berakhir (minggu ke 24). Caspase 3 aktif
lebih jelas terlihat meningkat ketika data digambarkan
dengan garis eksponensial (Gambar 1A). Aktivitas
caspase 3 ternyata dipengaruhi secara nyata oleh
pemberian kombinasi hormon yang diberikan
(P<0,05). Kemungkinan juga diakibatkan oleh
peningkatan ekspresi protein Fas yang mulai dari awal
perlauan sampaia akhir (P<0,05). Ternyata
penyuntikan kombinasi hormon tersebut menimbulkan
negatif feed back dari poros hipotalamus-hipofisis dan
testis, sehingga testosteron intratestikular menurun.
Hal ini menyebabkan terganggunya proses
spermatogenesis. Seperti laporan Meistrich and Shetty
(2003) bahwa, rendahnya testosteron dapat
menghambat penyempurnaan spermatogenesis. Said
et al, (2004) dan Tesarik et al., (2002) menyatakan,
pengujian jaringan testikular telah membuktikan
adanya reduksi konsentrasi testosteron intratestikular
yang dapat mempengaruhi caspase 3 menjadi caspase
3 aktif.
Pemberian hormon dapat menyebabkan
rendahnya testosteron intratestikular sehinggan dapat
mengiduksi ekspresi protein Fas pada sel germinal.
Seperti yang dinyatakan oleh Nair, R and Chandrima
Shaha (2003), bahwa penurunan hormon testikular
dapat menimbulkan peningkatan ekspresi protein Fas.
Akibatnya terjadi peningkatan aktivitas caspase 3
melalui jalur apoptosis. Hal ini dibuktikan dengan iji
korelasi yang signifikan (P<0,01) dan sangat kuat
(r=0,92) antara ekspresi protein Fas dengan Caspase 3
aktif. Sehingga deoksiribonuklease (caspase-activated
deoxyribonuclease, CAD) teraktivasi pada nukleus
yang akhirnya menginduksi apoptosis sel germinal.
Ekspresi protein Fas dan Caspase 3 aktif sel germinal
terlihat pada hampir seluruh tahap sel germina
(spermatogonia, spermatosit dan spermatid).
Kemungkinan besar ini pemicu yang kuat sehingga
produksi sperma menjadi menurun.
J. Biologi Sumatera 47
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dikemukakan
bahwa peningkatan eskpresi protein Fas menimbulkan
aktivitas caspase 3 sel germinal setelah pemberian
androgen/progestin dan akhirnya menurunkan
konsentrasi spermatozoa. Ekspresi protein Fas dan
Caspase 3 aktif sel germinal dapat terjadi pada
spermatogonia, spermatosit dan spermatid. Adanya
regresi linear dan korelasi positif yang nyata antara
protein Fas dan Caspase 3 aktif sel germinal
mendorong kecendrungan turunnya konsentrasi
spermatozoa.
DAFTAR PUSTAKA
Kim, J.M., et al., 2001. Caspase-3 and caspase-
activated deoxyribonuclease are associated
with testicular germ cell apoptosis resulting
from reduced intratesticular testosterone,
Endocrinology 142; 3809– 3916.
Meistrich, M.L and Gunapala Shetty. Inhibition of
Spermatogonial Differentiation by
Testosterone. Journal of Andrology,
March/April 2003. Vol. 24, No. 2.
Nair, R and Chandrima Shaha. Diethylstilbestrol
Induces Rat Spermatogenic Cell Apoptosis in
Vivo through Increased Expression of
Spermatogenic Cell Fas/FasL System. J Bio
Chem. 2003; Vol. 278, No. 8, Issue of
February 21, pp. 6470–6481.
Said, T.M., Uwe Paasch, Hans-Juergen Glander and
Ashok Agarwal. Role of caspases in male
infertility. Human Reproduction Update,
2004; Vol.10, No.1 pp. 39-51.
Sulpizi, M., U. Rothlisberger dan P. Carloni. 2003.
Molecular Dynamics Studies of Caspase-3.
Biophysical Journal 84:2207-2215.
Tesarik J, Martinez F, Rienzi L, Iacobelli M, Ubaldi
F, Mendoza C and Greco E. In-vitro effects of
FSH and testosterone withdrawal on caspase
activation and DNA fragmentation in
different cell types of human seminiferous
epithelium. Hum Reprod, 2002; 17,1811-
1819.
Winter, R.N., Andrew Kramer, Andrew Borkowski
and Natasha Kyprianou. 2001. Loss of
Caspase-1 and Caspase-3 Protein Expression
in Human Prostate Cancer. Cancer Research
61, 1227-1232.
Universitas Sumatera Utara
 JURNAL BIOLOGI SUMATERA (J Biol Sum)
Sumatran Journal of Biology
PEDOMAN PENULISAN
Naskah: Jurnal Biologi Sumatera menerima naskah
dari berbagai bidang ilmu biologi baik murni maupun
terapan. Naskah yang dipublikasi di Jurnal Biologi
Sumatera (J. Biol. Sum.) merupakan naskah yang
belum pernah diterbitkan dalam jurnal lainnya.
Naskah dapat berupa artikel hasil penelitian (Original
Article), ulas balik (Review/Minireview) dan
komunikasi singkat (Rapid Communication). Panjang
maksimum naskah adalah 6, 8, dan 3 halaman cetak
masing-masing untuk artikel hasil penelitian, ulas
balik dan komunikasi singkat. Naskah dapat ditulis
dalam bahasa Indonesia atau bahasa Inggris. Naskah
yang isinya tidak sesuai dengan pedoman penulisan
dan penulisannya tidak sesuai dengan kaidah bahasa
Indonesia dan bahasa Inggris tidak akan dipublikasi
dan Editor tidak berkewajiban mengembalikan naskah
bersangkutan.
Format: Seluruh isi naskah termasuk abstrak, isi,
daftar pustaka, tabel, gambar dan keterangan gambar
diketik pada kertas ukuran HVS A-4 dengan jarak dua
spasi dengan menggunakan huruf Times New Roman
ukuran 12 point. Setiap lembarnya diberi nomor
halaman. Abstrak, isi, ucapan terima kasih, daftar isi,
tabel, gambar, dan keterangan gambar harus dimulai
dari halaman baru. Tabel, gambar, dan keterangan
gambar diletakkan pada akhir naskah. Standar
abreviasi dan unit harus menggunakan standar
internasional. Abreviasi harus ditulis penuh untuk
pertama kali muncul dan penggunaan kependekan
dalam judul dan abstrak harus dihindari. Nama
generik zat kimia yang digunakan harus ditulis.
Penggunaan nama genus dan spesies ditulis cetak
miring.
Judul: Judul harus singkat, spesifik, dan informatif.
Pada bagian judul harus terdapat jenis naskah, nama
lengkap, dan alamat penulis, dan catatan kaki terhadap
koresponden harus ditujukan lengkap dengan nomor
telepon, faksimili, dan/atau e-mail.
Abstrak: Abstrak ditulis dalam bahasa Inggris
(Abstract) dan tidak lebih dari 250 kata. Dalam
abstrak harus terkandung tujuan, metode, hasil, dan
kesimpulan. Data yang terdapat dalam abstrak
merupakan data yang sangat penting. Aspek-aspek
yang baru dan penting harus tercermin dalam abstrak.
Maksimum lima kata kunci dalam bahasa Inggris
ditulis di bawah abstrak.
Tulisan: Tulisan untuk naskah artikel hasil penelitian
terdiri dari Pendahuluan, Bahan dan Metode, Hasil,
dan Pembahasan. Hasil dan Pembahasan juga dapat
digabung. Untuk Ulas Balik dan Komunikasi Singkat
ditulis sebagai naskah sinambung tanpa sub judul
bahan dan metode, hasil dan pembahasan.
Pendahuluan memberikan latar belakang yang cukup
agar pembaca memahami dan memperkirakan hasil
yang akan dicapai tanpa harus merujuk pada
penerbitan-penerbitan sebelumnya. Cara penulisan
rujukan dalam teks dengan menyebutkan penulis
diikuti tahun penerbitan (contoh: bila di akhir teks
ditulis [Munir & Suryanto 2004) dan bila di awal teks
ditulis Munir & Suryanto (2004)]. Bila penulis lebih
dari dua, ditulis nama penulis pertama saja dan diikuti
dengan kata et al. yang dicetak miring (contoh
Suryanto et al. 2001). Pendahuluan juga harus
berisikan latar belakang beserta tujuan dari penelitian.
Pada bagian Bahan dan Metode harus berisikan
informasi teknis sehingga peneliti lain dapat
mengulangi berdasarkan teknik percobaan yang
dikemukakan. Untuk kondisi tertentu nama dan merek
alat beserta kondisi percobaan harus dicantumkan.
Hasil dapat disajikan dalam bentuk tabel, gambar atau
langsung dalam tubuh tulisan. Hasil yang disajikan
dalam naskah merupakan hasil yang signifikan dan
berarti penting bagi naskah. Hindari penggunaan
grafik atau gambar yang berlebihan bila dapat
disajikan dalam tubuh tulisan dengan singkat.
Pembahasan berisikan interpretasi terhadap hasil
penelitian dan dikaitkan dengan hasil-hasil yang
pernah dilaporkan. Hindari pengulangan metode dan
hasil penelitian serta hal-hal yang telah dicantumkan
dalam bagian Pendahuluan.
Daftar Pustaka: Daftar Pustaka ditulis memakai sistem
tahun nama (Harvard) dan diurut menurut abjad.
Ketepatan penggunaan Daftar Pustaka merupakan
tanggung jawab penuh penulis. Data yang tidak
dipublikasi tidak dapat digunakan sebagai sumber
kepustakaan, akan tetapi naskah yang sudah diterima
untuk publikasi tetapi belum terbit dapat dimasukkan
dalam Daftar Pustaka dengan menyebutkan nama jurnal
dan diikuti oleh kata diterima untuk publikasi atau in
press. Seluruh nama penulis dicantumkan dalam
daftar pustaka (tidak ada penggunaan et al dalam
Daftar Pustaka). Nama jurnal dipendekkan menurut
abreviasi yang lazim dari The List of Serial Title
Word Abreviation yang dikeluarkan oleh Pusat
Internasional ISSN dan dicetak miring. Cara penulisan
dapat mengikuti salah satu dari berikut:
Universitas Sumatera Utara
Jurnal:
Millar SL, Buyck B. 2002. Molecular phylogeny of
the genus Russula in Europe with a comparison
of modern infrageneric classification. Mycol Res
106:259-276.
Buku:
Boaden PJS, Seed R. 1985. An Introduction to Coastal
Ecology. New York: Blackie.
Bab dalam Buku:
Admassu W, Korus RA. 1998. Engineering of
bioremediation process: Need and limitations.
Di dalam Crawford RL, Crawford DL (ed).
Bioremediation: Principles and applications.
Cambridge: Cambridge University Press.
Abstrak
Priyani N, Simorangkir J, Flaherti V. 2003. The effect
of phosphor and nitrogen addition on crude
oil degradation by Candida sp. Abstrak
Seminar Nasional Kimia. Medan, 11 Oktober
2003. hlm 27.
Prosiding:
Nasution Z. 2004. The forest ecology in the Lake
Toba catchment area. Di dalam: Proceedings
of The 5th International Wood Science
Symposium JSPS-LIPI Core University
Program in the Field of Wood Science.
Kyoto, September 17-19. hlm 287-293.
Skripsi/Tesis/Disertasi:
Rahmawati S. 2003. Pengaruh pemberian ekstrak biji
pepaya (Carica papaya L.) terhadap
gambaran sel-sel Leydig mencit (Mus
musculus L.) jantan dewasa strain DDW.
[Skripsi]. Medan: Fakultas MIPA, Universitas
Sumatera Utara.
Internet:
Phetteplace H, Jarosz M, Uctuk R, Johnson D,
Sporleder R. 2000. Evaluation of single cell
protein as a protein supplement for finishing
cattle.
http://www.ansci.colostate.edu/documents/ren
ut/2000/pdf/hp001.pdf. [20 Maret 2003].
View publication stats
Tabel: Tabel diberi nomor secara berurutan
sebagaimana muncul dalam teks. Setiap tabel diberi
judul yang informatif. Bila dalam tabel terdapat
kependekan harus dijelaskan dengan catatan kaki.
Lebar maksimum tabel harus sesuai dengan lebar
maksimum area cetak yaitu 8,5 cm atau 18 cm.
Gambar: Seluruh gambar atau foto harus dirujuk di
dalam teks dan diberi nomor secara berurutan.
Gambar atau foto hanya yang berwarna hitam putih
dan harus jelas untuk dapat diperbanyak. Masing-
masing gambar harus diserahkan dalam lembaran
yang terpisah dan siap jadi tanpa perlu perubahan
ukuran dan bentuk dan masing-masingnya dilengkapi
dengan keterangan yang cukup. Lebar maksimum
gambar harus sesuai dengan lebar maksimum area
cetak yaitu 8,5 cm atau 18 cm.
Kontribusi Penerbitan: Setiap penulis dibebani
biaya cetak sebesar Rp. 100.000.- (seratus ribu rupiah)
untuk setiap artikel yang diterbitkan. Kelebihan
halaman dikenakan biaya tambahan sebesar Rp.
50.000.- (lima puluh ribu rupiah) per halaman cetak.
Penulis mendapatkan satu eksemplar terbitan dan 5
(lima) salinan artikel.
Pengiriman Naskah: Penulis diminta untuk
mengirimkan dua eksemplar asli beserta dokumen
(file) dalam disket atau compact disc (CD) dengan
program Microsoft Word. Pada disket atau CD
dituliskan nama penulis pertama dan nama
dokumennya. Naskah dikirimkan kepada:
Editor Jurnal Biologi Sumatera
Departemen Biologi, Fakultas MIPA,
Universitas Sumatera Utara,
Jln. Bioteknologi No. 1, Kampus USU,
Medan 20155.
File elektronik dapat dikirim ke:
biologi.usu@lycos.com
Universitas Sumatera Utara