Identifikasi molekuler Eurytrema
Jurnal Bioteknologi Pertanian, sp. pada
Vol. 7, sapi di Indonesia
No. 1, 2002, pp. 25-31
Identifikasi molekuler Eurytrema sp. pada sapi di Indonesia
Molecular identification of Eurytrema sp. of cattle in Indonesia
Iskandar Mirza1 dan Kurniasih2
1
Balai Pengkajian Teknologi Pertanian Aceh, Jalan T.P. Nyak Makam Nomor 27, Banda Aceh 23125, Indonesia
2
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia
ABSTRACT
Identification of Eurytrema sp. based on morphological
characters is difficult due to the evolution process of the
characters. A study was conducted to identify the Eurytrema
sp. using molecular technique. The specimens of Eurytrema
sp. were obtained from the pancreatic duct of cattle
slaughtered in Makassar (M), Yogyakarta (J), and Aceh (A).
Six flukes of each cattle were fixated in absolute ethanol for
DNA extraction. DNA were extracted using the phenol/
chloroform and isoamylalcohol methods and amplified using
polymerase chain reaction (PCR) in the 5,8S region.
Endonuclease restriction was conducted using BamHI, EcoRI,
RsaI, and HindIII and the products were electrophoresed in
agarose gel and visualized on UV transiluminator. Separation
of 5,8S and ITS2 regions from 15 samples in 1% agarose gel
showed that there were two bands which had approximately
700 bp and 1500 bp. Results of the digestion using RsaI showed
that restriction occurred in all samples, whereas the number
of bands varied from two to three bands. The rDNA had no
restriction sites to BamHI, EcoRI, and HindIII enzymes. No
variation were found in nucleotide sequence between sample
J53, A21, and A25, where M1 had difference at three
nucleotide sites, M3 at one nucleotide site, and J61 at seven
nucleotide sites from 350 nucleotides compared. From the
DNA sequence it could be assumed that M3, J53, A21, and A25
were the same strain, and M1 and J61 were other strains of the
Eurytrema sp.
[Keywords: Eurytrema sp., cattle, DNA, nucleotide sequence,
PCR]
ABSTRAK
Identifikasi cacing Eurytrema sp. berdasarkan sifat-sifat
morfologis sukar dilakukan karena adanya proses evolusi dari
sifat-sifat tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
strain cacing Eurytrema sp. secara molekuler. Cacing dewasa
diperoleh dari sapi yang terinfeksi dari rumah potong hewan
Makassar (M), Yogyakarta (J), dan Aceh (A). Enam individu
cacing dari tiap contoh sapi difiksasi dalam larutan etanol
absolut untuk ekstraksi DNA. DNA diekstraksi dengan metode
fenol/khloroform/isoamil alkohol dan diamplifikasi meng-
gunakan polymerase chain reaction (PCR) pada daerah 5,8S.
Restriksi endonuklease dilakukan dengan menggunakan enzim
restriksi BamHI, EcoRI, RsaI, dan HindIII. Hasil pemotongan
25
dielektroforesis pada gel agarose dan hasilnya divisualisasikan
pada UV transiluminator. Hasil amplifikasi PCR pada daerah
5,8S dan ITS2 terhadap 15 sampel cacing pada gel agarose 1%
menghasilkan pita yang mengandung + 700 pb dan 1500 pb.
Enzim restriksi RsaI dapat memotong semua sampel dengan
jumlah pita yang dihasilkan bervariasi dari 2 sampai 3 pita.
DNA genom tersebut tidak mempunyai sisi pemotongan
terhadap enzim restriksi Bam-HI, EcoRI, dan HindIII. Sampel
J53, A21, dan A25 mempunyai urutan nukleotida yang sama,
dengan M1 berbeda pada 3 tempat, M3 pada 1 tempat, dan J61
berbeda pada 7 tempat dari 350 nukleotida yang dianalisis.
Berdasarkan urutan tersebut diduga bahwa sampel M3, J53,
A21, dan A25 merupakan strain yang sama, sedangkan M1 dan
J61 merupakan strain yang berbeda dari spesies Eurytrema.
[Kata kunci: Eurytrema sp., sapi, DNA, restriksi endo-
nuklease, PCR]
PENDAHULUAN
Eurytrema pancreaticum termasuk dalam kelas Tre-
matoda, subkelas Digenea, famili Dicrocoeliidae,
genus Eurytrema. Genus ini terdiri atas tujuh spesies,
yaitu E. pancreaticum, E. coelomaticum, E. parvum,
E. rebelle, E. dajii, E. tonkinense, dan E. satoi
(Yamaguti, 1958). Cacing ini ditemukan dalam pankreas
sapi, kerbau air, domba, kambing, marmut, babi, unta,
monyet, dan manusia (Tang, 1950). Cacing menyebab-
kan penyakit yang disebut zoonosis, yang diketahui
juga dapat menyerang manusia (Tang, 1950; Ishii et al.,
1983).
Perbedaan antara satu spesies dengan spesies
lainnya pada cacing ini didasarkan atas ciri-ciri
morfologi seperti ukuran tubuh, telur, serta per-
bandingan ukuran batil isap perut dan batil isap mulut
(Neveu-Lemaire, 1936). Meskipun demikian, identifi-
kasi hubungan antarspesies yang didasarkan pada
ciri-ciri morfologi sulit dilakukan (Adlard, 1993) dan
tidak dapat diaplikasikan secara tetap, karena adanya
proses evolusi dari ciri-ciri morfologi dan siklus hidup
cacing. Oleh karena itu, identifikasi dengan urutan
26
nukleotida sering dipertimbangkan sebagai sumber
utama dari informasi filogenetik (Barker et al., 1993).
Ribosomal DNA sering digunakan untuk penelitian
genetik, dan bagian internal transcribed spacers
(ITS1 dan ITS2) yang terletak pada daerah 18S, 5,8S,
dan 28S telah digunakan untuk mengidentifikasi
cacing pada tingkat spesies (Adlard, 1993). Variasi
molekuler ini selanjutnya digunakan untuk tujuan
taksonomi dan diagnostik (Blair, 1993).
Penelitian tentang molekuler Eurytrema sp. belum
pernah dilakukan di Indonesia, kecuali penelitian
tentang morfologi oleh Handoko (1976) serta pre-
valensi dan patologi pankreas oleh Wiroreno et al.
(1987), Gatenby et al. (1992), Graydon et al. (1992),
Wilson dan Beriajaya (1992), Hill et al. (1994), dan
Dorny et al. (1996). Dengan demikian, sampai saat ini
belum diketahui gambaran molekuler dari Eurytrema
sp. yang ada di Indonesia. Taksonomi cacing pan-
kreas Eurytrema sp. sampai saat ini masih tetap
kontroversial (Moriyama, 1982).
Ada dua cara yang umum digunakan untuk pe-
ngurutan molekul dioksiribonukleat, yaitu metode
kimia oleh Maxam dan Gilbert dan metode enzimatik
oleh Sanger dan Coulson. Kedua metode ini mem-
punyai prinsip yang berbeda, tetapi keduanya
menghasilkan oligonukleotida berlabel radioaktif
yang dimulai dari titik tertentu dan berakhir di
sembarang titik pada residu atau kombinasi residu
tertentu. Metode Sanger memerlukan target DNA
untai tunggal, primer oligonukleotida spesifik, dan
preparasi enzim DNA polimerase. Namun, dengan
perkembangan reaksi pengurutan maka dikenal
metode dideoksi yang berasal dari pengembangan
metode Sanger. Hasilnya dapat dilihat dalam bentuk
urutan nukleotida maupun grafik alogram (Ausubel et
al., 1995).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui gambaran
molekuler cacing Eurytrema sp. pada sapi di In-
donesia. Data yang diperoleh diharapkan dapat
digunakan sebagai acuan dan sumber informasi bagi
penelitian selanjutnya.
BAHAN DAN METODE
Bahan cacing
Penelitian menggunakan cacing Eurytrema sp. dewasa
yang diperoleh dari 13 ekor sapi yang dipotong di
rumah potong hewan (RPH) Makassar (kode M), RPH
Ngampilan, Yogyakarta (kode J), dan RPH Keudah,
Nangroe Aceh Darussalam (kode A). Sampel dari
Iskandar Mirza dan Kurniasih
Makassar berasal dari sapi Bali, Yogyakarta dari cross
breed, dan Aceh sapi lokal (sapi Aceh).
Ekstraksi DNA
Enam individu cacing yang digunakan untuk ekstraksi
DNA diperoleh dari sampel pankreas sapi yang positif.
Cacing dibilas dengan akuades, difiksasi dalam la-
rutan etanol absolut, dan selanjutnya disimpan pada
suhu 4oC. Ekstraksi DNA, elektroforesis, amplifikasi
DNA, dan restriksi endonuklease dilaksanakan di
Laboratorium Biokimia Pusat Antar Universitas (PAU)
Universitas Gadjah Mada. Ekstraksi DNA genom
dilakukan dengan metode fenol khloroform/isoamil
alkohol yang sudah dimodifikasi oleh Kurniasih
(komunikasi pribadi).
Ekstraksi DNA genom dilakukan terhadap 15
individu cacing dewasa yang berasal dari Makassar,
Yogyakarta, dan Aceh. Cacing dibilas dengan etanol
dan dikeringkan dengan menggunakan kertas tisu,
kemudian dimasukkan ke dalam mortar dingin steril
dan digerus bersama dengan nitrogen cair hingga
halus. Hasil gerusan dipindahkan ke dalam eppendorf
1,5 ml, ditambahkan 0,5 ml ekstrak bufer dan 0,05 ml
SDS 10% dan 10 ml proteinase K 1%, dan digoyang
dengan hati-hati. Sediaan diinkubasi dalam waterbath
pada suhu 56oC selama 5 jam hingga 1 malam sambil
dihomogenkan secara periodik dengan cara memukul-
mukul bagian dasar eppendorf secara lembut dengan
menggunakan salah satu jari.
Larutan selanjutnya dipisahkan dengan sentrifugasi
selama 5 menit pada 3000 rpm. Lapisan paling atas
dipindahkan ke eppendorf baru, ditambahkan 0,5
volume fenol khloroform/isoamil alkohol dan dihomo-
genkan secara periodik dengan cara seperti tersebut di
atas. Sesudah dipisahkan dengan sentrifugasi selama
5 menit pada 10.000 rpm, lapisan bagian atas di-
pindahkan ke eppendorf baru, ditambahkan 0,5
volume khloroform/isoamil alkohol, dan dihomogen-
kan. Selanjutnya, larutan disentrifugasi selama 5 menit
pada 10.000 rpm, lapisan atas dipindahkan ke
eppendorf baru, ditambahkan sodium khlorida 0,2 M,
dan 2 volume awal larutan etanol absolut dingin,
digoyang secara perlahan-lahan, dan dipresipitasi
selama 1 jam pada -20oC. Setelah disentrifugasi selama
5 menit pada 10.000 rpm, cairan bagian atas dibuang
dan pelet yang menempel pada dasar eppendorf
dicuci dengan larutan etanol 70% dingin dua kali, dan
dibiarkan sampai mengering. Pelet DNA diresuspensi
dalam 30 µl bufer TE, diinkubasi dalam waterbath
selama 1 jam pada 60oC sambil dihomogenkan secara
periodik, selanjutnya disimpan pada suhu -20oC.
Identifikasi molekuler Eurytrema sp. pada sapi di Indonesia
Gel elektroforesis
Hasil ekstraksi DNA genom diperiksa dengan elektro-
foresis menggunakan gel agarose 1% yang telah
diberi etidium bromida 10 mg/ml sebanyak 10 µl.
Elektroforesis dilakukan dengan menggunakan bufer
TAE 1x (40 mM Tris-asetat, 1 mM EDTA pH 8,0).
Sebanyak 3 µl hasil ekstraksi dan 2 µl loading dye (6x)
ditempatkan pada parafilm dan dihomogenkan de-
ngan cara memipet secara berulang sebanyak 2-3 kali
dan selanjutnya dipipet ke dalam sumuran gel. Elek-
troforesis dilakukan pada beda potensial 100 volt
selama + 40 menit. Pengamatan pita DNA divisuali-
sasikan pada UV transiluminator, dan hasilnya
didokumentasi dengan film polaroid 667. Jika hasilnya
positif, selanjutnya DNA genom diamplifikasi dengan
menggunakan PCR.
Amplifikasi DNA
Hasil ekstraksi DNA ribosom diamplifikasi dengan
menggunakan PCR pada daerah 5,8S dan ITS2. Reaksi
polimerisasi ini menggunakan PCR-kit Ready-To-
Go TM dan ditambahkan 100 µg DNA genom, reverse
primer JB9 neu (5'-GCT GCA TTC ACA AAC AAC
CCG-3') dan forward primers 3SC (5'-CGG TGG ATC
ACT CGG CTC G-3') yang telah dianalisis dan
ditentukan berdasarkan Gene Bank oleh Kurniasih
(komunikasi pribadi) masing-masing 1 µl (dengan
konsentrasi masing-masing 20 pm/µl), serta 20 µl dH2O
steril. Sebelum dimasukkan ke dalam alat pengatur
suhu thermocycler, ke dalam tabung ditambahkan
minyak mineral 25 µl untuk mencegah penguapan
selama proses polimerisasi.
Restriksi endonuklease
Restriksi endonuklease dilakukan dengan meng-
gunakan enzim restriksi BamHI, EcoRI, RsaI, dan
HindIII. Untuk enzim RsaI, reaksi dilakukan pada
volume reaksi 8 ml yang terdiri atas 2 ml produk PCR,
4 ml enzim, dan 2 ml bufer, sedangkan untuk enzim
BamHI, EcoRI, dan HindIII volume reaksi adalah 10 ml
yang terdiri atas 2 ml produk PCR, 4 ml enzim, dan 4 ml
bufer. Selanjutnya, larutan diinkubasi selama 5 jam
pada 37oC. Semua hasil pemotongan dielektroforesis
pada gel agarose 0,7% (BamHI, EcoRI, HindIII) dan
1,4% (RsaI) dalam bufer TAE 1x. Elektroforesis
dilakukan pada beda potensial 50 volt selama + 2 jam.
Untuk mengetahui proses pemotongan digunakan
penanda GeneRuler TM DNA Ladder Mix. Hasil
elektroforesis divisualisasikan pada UV transilumi-
nator dan didokumentasi dengan film polaroid 667.
27
Pengurutan DNA
Pengurutan DNA dilakukan di Laboratorium Eijkman
Institute for Molecular Biology, Jakarta menggunakan
DNA Sequencer ABI Prism 377. Analisis dilakukan
terhadap dua sampel dari masing-masing daerah
dengan kombinasi forward primer 3SC yang telah
diberi label dengan empat termination (A, C, G, T) dan
Taq DNA polymerase untuk menghasilkan urutan dari
satu DNA templat. Pengurutan dilaksanakan me-
ngikuti metode Sanger, menggunakan terminator dye
berupa fluorescent dyes rhodamin (PRISM reaction
dyedeoxy terminator cycle sequencing kit). Hasil
pemeriksaan molekuler dianalisis secara deskriptif.
HASIL DAN PEMBAHASAN
DNA dari semua sampel cacing berhasil diekstraksi.
Hasil pengujian kualitatif terhadap hasil ekstraksi
DNA tersebut dengan gel agarose 1% dan pewarnaan
etidium bromida memperlihatkan pita yang jelas.
Amplifikasi pada daerah 5,8S dan ITS2 terhadap 15
sampel cacing pada gel agarose 1% memperoleh pita
yang mengandung + 700 pb dan 1500 pb (Gambar 1).
Pita yang hanya mengandung 700 pb dijumpai pada
sampel M1, M1, M2, M2, M3, J51, J54, J61, J63, A15,
A22, A25, A27, M1, dan J51, sedangkan pita yang
mengandung 700 pb dan 1500 pb terdapat pada sampel
M1 M1 M2 M2 M3 P J 5 1 J 5 3 J 5 4 J 6 1 J 6 3 A 1 5 A 2 1 A 2 2 A 2 5 A27 M1 J 5 1
Gambar 1. Hasil amplifikasi DNA genom pada gel agarose
1% dengan pewarnaan etidium bromida; M1 pada lajur 1, 2,
dan 17 serta M2 pada lajur 3 dan 4 berasal dari sampel yang
sama. P adalah penanda.
Fig. 1. Result of genomic DNA amplification in 1% gel aga-
rose with ethidium bromide; M1 at columns 1, 2, and 17 and
M2 at columns 3 and 4 is the same sample. P is a marker.
28 Iskandar Mirza dan Kurniasih

J53 dan A21. Hasil pemecahan dengan enzim restriksi
endonuklease RsaI disajikan pada Gambar 2 dan
secara skematis pada Gambar 3.
Hasil pengujian menunjukkan bahwa pemotongan
hanya terjadi dengan enzim restriksi RsaI. Pemotong-
an terjadi pada semua sampel, dengan jumlah pita
yang dihasilkan bervariasi dari dua sampai tiga pita.
Sampel M1 pada lajur 2, M2, dan J54 hanya meng-
hasilkan dua pita DNA yang mengandung masing-
masing 100 dan 300 pb. Sampel M1 pada lajur 3, M3,
M3, J51, J53, J61, J63, A7, A22, A25, dan A27
menghasilkan tiga pita DNA yang mengandung
masing-masing 100, 300, dan 600 pb. Sampel A15 juga
menghasilkan tiga pita DNA, namun ukuran DNA
yang teramplifikasi berbeda dengan sampel lainnya
karena salah satu pitanya mengandung 500 pb. Dua
pita lainnya masing-masing mengandung 100 dan 300
pb.
Pemotongan yang menghasilkan dua sampai tiga
pita DNA menunjukkan bahwa DNA genom tersebut
mempunyai lebih dari satu sisi pemotongan untuk
enzim RsaI. Tidak terjadinya pemotongan dengan tiga

M1 M1 M2 M3 M3 P J51 J53 J54 J61 J63 A7 A15 A22 A25 A27

Gambar 2. Hasil pemecahan dengan enzim restriksi RsaI pada gel agarose 1,4% dengan pewarnaan etidium bromida. M1 pada
lajur 1 dan 2 serta M3 pada lajur 4 dan 5 berasal dari sampel yang sama. P adalah penanda.
Fig. 2. Result of digestion using RsaI enzyme restriction at 1.4% gel agarose with ethidium bromide. M1 at columns 1 and 2 and
M3 at columns 4 and 5 originated from the same sample. P is a marker.

bp P M1 M1 M2 M3 M3 J51 J53 J54 J61 J63 A7 A15 A22 A25 A27

10000
8000
6000
5000
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1200
1031
900
800
700
600
500
400
300
200
100

Gambar 3. Skematis hasil digesti dengan enzim restriksi RsaI pada gel agarose 1,4% dengan pewarnaan etidium bromida. M1 pada
lajur 1 dan 2 serta M3 pada lajur 4 dan 5 berasal dari sampel yang sama. P adalah penanda.
Fig. 3. Schematic result of digestion using RsaI enzyme restriction at 1.4% gel agarose with ethidium bromide. M1 at columns
1 and 2 and M3 at columns 4 and 5 originated from the same sample. P is a marker.
Identifikasi molekuler Eurytrema sp. pada sapi di Indonesia
enzim restriksi lainnya ditunjukkan oleh ukuran pita
yang sama dengan ukuran pita produk PCR. Dengan
demikian dapat dikatakan bahwa DNA genom tersebut
tidak mempunyai sisi pemotongan terhadap enzim
restriksi BamHI, EcoRI, dan HindIII.
Blair dan McManus (1989) dalam Adlard (1993)
menggunakan enzim restriksi pada rDNA untuk
membandingkan spesies Fasciola. Adlard (1993)
menemukan sisi pemotongan untuk keterangan spe-
sies Fasciola dengan menggunakan enzim restriksi,
tetapi sisi pemotongan tersebut tidak ditemukan pada
daerah ITS2. Blair dan McManus (1989) dalam Blair
(1993) melaporkan bahwa pemotongan dengan enzim
restriksi tidak menunjukkan variasi intraspesifik pada
rRNA F. hepatica (11 isolat dari enam negara yang
berbeda) dan F. gigantica (dua isolat dari negara yang
berbeda). Namun, terdapat perbedaan sisi restriksi
dari F. hepatica, Fascioloides magna, dan Fasciola
sp. (isolat Jepang).
Laporan tersebut menunjukkan bahwa tidak ada
variasi sisi restriksi pada spesies yang sama meskipun
isolat berasal dari negara yang berbeda, sebaliknya
variasi terjadi pada spesies yang berbeda. Pada
penelitian ini diduga ada tiga sisi restriksi yang
berbeda dari 14 sampel yang dianalisis. Sisi restriksi
sampel M1 (lajur 1) sama dengan M2 dan J54, tetapi
berbeda dengan sampel lainnya. Sisi restriksi sampel
M1 (lajur 2) sama dengan M3, J51, J53, J61, J63, A7,
A22, A25, dan A27, tetapi berbeda dengan sampel
lainnya. Sisi restriksi sampel A15 berbeda dengan
semua sampel lainnya. Berdasarkan hasil tersebut
diduga bahwa dari 14 sampel yang dianalisis terdapat
tiga strain yang berbeda dari spesies yang sama.
Hasil pengurutan terhadap enam sampel rDNA yang
mewakili tiap-tiap daerah dengan menggunakan DNA
Sequencer ABI Prism 377 disajikan pada Gambar 4.
Urutan nukleotida yang sama dijumpai pada sampel
J53 dan A21. Perbedaan urutan dari nukleotida
pertama sampai dengan nukleotida ke-150 dijumpai
pada sampel M1 pada nukleotida ke-13 (berbeda pada
satu tempat) dan sampel M3 pada nukleotida ke-40
(berbeda pada satu tempat). Pada nukleotida ke-151
sampai dengan ke-300, perbedaan urutan hanya
dijumpai pada sampel J61, yaitu pada nukleotida ke-
197, 244, dan 256 (berbeda pada tiga tempat). Pada
nukleotida ke-301 sampai dengan ke-350, perbedaan
urutan dijumpai pada sampel J61 yaitu pada nukleotida
ke-313, 320, 330, dan 336 (berbeda pada empat tempat)
dan sampel M1 pada nukleotida ke-349 dan ke-350
(berbeda pada dua tempat). Pada sampel A25, dari 200
nukleotida yang dapat dianalisis, urutannya sama
29
dengan sampel M3, J53, J61, dan A21, dan berbeda
satu tempat dengan sampel M1 pada nukleotida ke-13.
Secara keseluruhan, urutan nukleotida sampel M1 ber-
beda pada tiga tempat, sampel M3 pada satu tempat,
sampel J61 pada tujuh tempat, dan J53 tidak berbeda
dengan A21 dari 350 nukleotida yang dianalisis.
Adlard (1993) melaporkan bahwa empat isolat F.
hepatica dari negara yang berbeda mempunyai variasi
urutan nukleotida pada daerah ITS2 yang sangat kecil,
yaitu hanya berbeda 1 basa (pada isolat Meksiko) dari
263 nukleotida yang dianalisis. Selanjutnya dilapor-
kan bahwa tidak ada variasi urutan nukleotida di
antara dua isolat F. gigantica (isolat Malaysia dan
Indonesia) dari 213 nukleotida yang dibandingkan;
demikian juga dari dua spesies genus digenea
Dolicosaccus (Luton et al. dalam Adlard, 1993).
Adlard (1993) melaporkan adanya perbedaan urutan
basa antara DNA F. hepatica dan F. gigantica pada
enam tempat dari 231 nukleotida yang dianalisis.
Selanjutnya antara F. hepatica dan Fascioloides
magna urutannya berbeda pada 38 tempat dari 289
nukleotida yang dibandingkan, antara F. gigantica
dan F. magna berbeda pada 34 tempat, antara Fasciola
sp. (isolat Jepang) dan F. hepatica berbeda pada 7
tempat dari 214 nukleotida yang dibandingkan.
Dari laporan tersebut dapat diketahui bahwa urutan
nukleotida dari spesies yang sama tidak menunjukkan
perbedaan, tetapi spesies yang berbeda memiliki
urutan yang berbeda pula. Berdasarkan hasil
penelitian ini, terdapat tiga strain Eurytrema dari
spesies yang sama. Urutan nukleotida M3 memiliki
variasi sangat kecil, yaitu berbeda pada satu tempat.
Dengan demikian M3 dianggap sama dengan J53, A21
dan A25, sedangkan M1 dan J61 merupakan dua
strain yang berbeda dengan lainnya. Dengan demikian
dapat disimpulkan bahwa masing-masing strain
Eurytrema berbeda urutan nukleotidanya.
Variasi intraspesifik pada E. pancreaticum dan E.
coelomaticum juga pernah dilaporkan oleh Inoue et
al. (1986) dengan melihat aktivitas enzim cacing
tersebut. Di antara 10 enzim yang diteliti, hanya enzim
glucosephosphatase isomerase (GPI) dan phospho-
glucomutase (PGM) yang menunjukkan variasi intra-
spesifik, sedangkan alkaline phosphatase (ALP),
esterase (EST), hexokinase (HK), lactate dehy-
drogenase (LDH), leucine aminopeptidase (LAP),
leucylglycylglycine aminopeptidase (LGG), NADH-
diaphorase (DIA), dan tetrazolium oxidase (TO),
tidak memperlihatkan variasi individu, atau dengan
kata lain dalam keadaan monomorfisme. Dilaporkan
pula bahwa enzim PGM bersifat polimorfik terhadap E.
30 Iskandar Mirza dan Kurniasih

M1 TGAACATCGACTGCTTGAACGCATATTGCGGCCATGGGTTAGCCTGTGGC 50
M3 TGAACATCGACTTCTTGAACGCATATTGCGGCCATGGGTAAGCCTGTGGC
J53 TGAACATCGACTTCTTGAACGCATATTGCGGCCATGGGTTAGCCTGTGGC
J61 TGAACATCGACTTCTTGAACGCATATTGCGGCCATGGGTTAGCCTGTGGC
A21 TGAACATCGACTTCTTGAACGCATATTGCGGNCATGGGTTAGCCTGTGGC
A25 TGAACATCGACTTCTTGAACGCATATTGCGGCCATGGGTTAGCCTGTGGC

M1 CACGCCTGTCCGAGGGTCGGCTTATGAAATATCACGACGCCCAATAAGTC 100
M3 CACGCCTGTCCGAGGGTCGGCTTATGAAATATCACGACGCCCAATAAGTC
J53 CACGCCTGTCCGAGGGTCGGCTTATGAAATATCACGACGCCCAATAAGTC
J61 CACGCCTGTCCGAGGGTCGGCTTATGAAATATCACGACGCCCAATAAGTC
A21 CACGCCTGTCCGAGGGTCGGCTTATGAAATATCACGACGCCCAATAAGTC
A25 CACGCCTGTCCGAGGGTCGGCTTATGAAATATCACGACGCCCAATAAGTC
M1 GTGGCTTGGGTTTTGCCAGCTGGCTATGATCCCCCAGCTTTAGTTGGGGG 1 5 0
M3 GTGGCTTGGGTTTTGCCAGCTGGCTATGATCCCCCAGCTTTAGTTGGGGG
J53 GTGGCTTGGGTTTTGCCAGCTGGCTATGATCCCCCAGCTTTAGTTGGGGG
J61 GTGGCTTGGGTTTTGCCAGCTGGCTATGATCCCCCAGCTTTAGTTGGGGG
A21 GTGGCTTGGGTTTTGCCAGCTGGCTATGATCCCCCAGCTTTAGTTGGGGG
A25 GTGGCTTGGGTTTTGCCAGCTGGCTATGATCCCCCAGCTTTAGTTGGGGG
M1 TGTCAGATCTATGGCGTTTCCCTAATGTATCCGGATACACGCATCTGGTT 2 0 0
M3 TGTCAGATCTATGGCGTTTCCCTAATGTATCCGGATACACGCATCTGGTT
J53 TGTCAGATCTATGGCGTTTCCCTAATGTATCCGGATACACGCATCTGGTT
J61 TGTCAGATCTATGGCGTTTCCCTAATGTATCCGGATACACGCATCTTGTT
A21 TGTCAGATCTATGGCGTTTCCCTAATGTATCCGGATACACGCATCTGGTT
A25 TGTCAGATCTATGGCGTTTCCCTAATGTATCCGGATACACGCATCTGGTT

M1 GTACCAGGTGGAGATGTGTCGACGGAGTCGTGGCTCAGTACTGGTTATGC 2 5 0
M3 GTACCAGGTGGAGATGTGTCGACGGAGTCGTGGCTCAGTACTGGTTATGC
J53 GTACCAGGTGGAGATGTGTCGACGGAGTCGTGGCTCAGTACTGGTTATGC
J61 GTACCAGGTGGAGATGTGTCGACGGAGTCGTGGCTCAGTACTGTTTATGC
A21 GTACCAGGTGGAGATGTGTCGACGGAGTCGTGGCTCAGTACTGGTTATGC

M1 GCGCTCCGTTT-CCATTTCGTGTGGCAATGTCCGATGAAAATCCAATCAA 3 0 0
M3 GCGCTCCGTTTACCATTTCGTGTGGCAATGTCCGATGAAAATCCAATCAA
J53 GCGCTCCGTTTACCATTTCGTGTGGCAATGTCCGATGAAAATCCAATCAA
J61 GCGCTGCGTTTACCATTTCGTGTGGCAATGTCCGATGAAAATCCAATCAA
A21 GCGCTCCGTTTACCATTTCGTGTGGCAATGTCCGATGAAAATCCAATCAA

M1 ACCTGACCTCGGATCAGACGTGATTACCCCGCTGAACTTAAACATATCCT 3 5 0
M3 ACCTGACCTCGGATCAGACGTGATTACCCCGCTGAACTTAAACATATCAC
J53 ACCTGACCTCGGATCAGACGTGATTACCCCGCTGAACTTAAACATATCAC
J61 ACCTGACCTCGGCTCAGACCTGATTACCCTGCTGACCTTAAACATATCAC
A21 ACCTGACCTCGGATCAGACGTGATTACCCCGCTGAACTTAAACATATCAC

Gambar 4. Hasil pengurutan rDNA Eurytrema sp. pada daerah 5,8S dari sampel asal Sulawesi (M1 dan M3), Jawa (J53 dan J61),
dan Sumatera (A21 dan A25). Urutan yang ditandai dengan penebalan dan digarisbawahi merupakan urutan yang berbeda.
Fig. 4. Result of rDNA sequencing at 5.8S region of Eurytrema sp. originated from Sulawesi (M1 and M3), Java (J53 and J61),
and Sumatra (A21 and A25). Sequences printed in bold, underlined are different sequences.

pancreaticum dan E. coelomaticum, sedangkan GPI KESIMPULAN

hanya bersifat polimorfik terhadap E. pancreaticum.
Variasi genetik cukup rendah, dengan nilai rata-rata P
(lokus polimorfik) dan H (rasio heterozigot) untuk E.
pancreaticum masing-masing 15,4% dan 2,4% dan
untuk E. coelomaticum 7,7% dan 2,7% (Inoue et al.,
1986).
Hasil pemotongan dengan enzim EcoRI, HindIII, dan
BamHI tidak menunjukkan adanya variasi, sedangkan
dengan RsaI tampak ada tiga kelompok cacing yang
berbeda, yaitu: (1) M1, M2, dan J54; (2) M1, M1, M3,
J51, J53, J61, J63, A7, A22, A25, dan A27; serta (3) A21.
Identifikasi molekuler Eurytrema sp. pada sapi di Indonesia
Hasil pengurutan juga menunjukkan adanya variasi
urutan nukleotida pada tiga kelompok cacing, yaitu:
(1) M3, J53, A21, dan A25 variasinya sangat kecil (M3
pada satu tempat); (2) M1 berbeda pada tiga tempat;
dan (3) J61 berbeda pada tujuh tempat dari 350
nukleotida yang dianalisis.
DAFTAR PUSTAKA
Adlard, R.D. 1993. Comparison of the second internal
transcribed spacer (ribosomal DNA) from populations and
species of fasciolidae (Digenea). Int. J. Parasitol. 51 (3):
423-425.
Ausubel, F.M., R. Brent, R.E. Kingston, D.D. Moore, J.G.
Seidman, J.J. Smith, and K. Struhl. 1995. Current protocol
in molecular biology. Vol 1. John Wiley & Soon, Inc.,
Canada.
Barker, S.S., D. Blair, A.R. Garrett, and T.H. Cribb. 1993. Utility
of the D1 domain of nuclear 28S rRNA for phylogenetic
inference in the Digenea. Systematic Parasitol. 181-187.
Blair, D. 1993. Molecular variation in fasciolids and
Paragonimus. Vet. Parasitol. 53: 277-289.
Dorny, P.A., A. Batubara, I. Mirza, and V.S. Pandey. 1996.
Helminth infections of sheep in North Sumatra, Indonesia.
Vet. Parasitol. 61 (3-4): 353-358.
Gatenby, R.M., E. Romjali, A.J. Wilson, M. Hutauruk, J.
Glenn, and A.D. Pitono. 1992. Comparison of three drugs
to control pancreatic fluke (Eurytrema pancreaticum) in
sheep. Working Paper No 137. SR-CRSP, SBPT, Deli
Serdang, North Sumatra, Indonesia.
Graydon, R.J., I.H. Carmichael, M.D. Sanchez, E. Wiedosari,
and S. Widjayanti. 1992. Mortalities and wasting in
31
Indonesia sheep associated with the trematode Eurytrema
pancreaticum. Vet. Res. 7: 443.
Handoko. 1976. Identifikasi cacing daun pada pankreas sapi
berdasarkan morfologi. Skripsi. Fakultas Kedokteran
Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Hill, T., I. Mirza, A. Batubara, R.M. Gatenbay, and A.J.
Wilson. 1994. Study of sheep with wasting disease and the
potential pathogenic fluke Eurytrema pancreaticum.
Working Paper No 163. SR-CRSP, SBPT, Deli Serdang,
North Sumatra, Indonesia.
Inoue, T., A. Takeshi, and H. Shigehisa. 1986. Electrophoretic
studies isozymes of two Japanese fluke, Eurytrema
pancreaticum and E. coelematicum. Jpn. J. Parasitol. 35 (2):
115-120.
Ishii, Y., M. Koga, T. Fujino, H. Higo, J. Ishibashi, K. Oka,
and S. Saito. 1983. Human infection with the pancreas
fluke, Eurytrema pancreaticum. Am. J. Trop. Med. Hyg.
32 (5): 1019-1022.
Moriyama, N. 1982. Karyological studies of bovine
pancreatic flukes (Eurytrema sp.) and their phenotypes. J.
Parasitol. 68 (5): 898-904.
Neveu-Lemaire, M. 1936. Traite D’helminthologie medicale
et veterinaire. V. Freres (Editeurs). Paris. p. 108-111.
Tang, C.C. 1950. Studies on the life history of Eurytrema
pancreaticum. J. Parasitol. 36: 559-573.
Wilson, A. and Beriajaya. 1992. Studies on the epidemiology
and control of the important disease constraints of sheep
at Sungei Putih, North Sumatra. Final Report. INI
ANSREDEF and RIVS, Bogor, Indonesia.
Wiroreno, W., W.P. Carney, and M. Anshori. 1987. Description
and growth pattern of Eurytrema pancreaticum from Bos
indicus from East Java. Proc. Helminth Society of
Washington 54 (1): 73-77.
Yamaguti, S. 1958. Systema helminthum. The digenetic
trematodes of vertebrates. Interscience Publisher, Inc. New
York, Interscience Publisher, Ltd. London. 1 (2): 835-836.