Đánh giá hấp thụ muối

Ba thí nghiệm khác nhau đã được thực hiện để đánh giá mức độ hấp thụ muối trong ống
nghiệm trong quần thể TG2-4. Trong các thử nghiệm này, các nguồn khác nhau của mô và nồng
độ NaCl đã được nghiên cứu. Trong thử nghiệm đỉnh chồi, sự tăng trưởng của cây được đánh
giá bằng cách đo khả năng ra rễ, chiều cao chồi, số lượng lá và tổng trọng lượng tươi (FW) và
khô (DW) của cây sau 28 ngày trên môi trường nuôi cấy có hoặc không có NaCl.

Mặc dù tất cả nồng độ NaCl làm giảm đáng kể sự phát triển chồi, khả năng ra rễ chỉ giảm ở 175
mM . Ở nồng độ này, các thế hệ con cháu TG2-4 cho thấy khả năng chịu mặn cao hơn với 67%
của chồi gốc (Bảng I ). Liên quan đến chiều dài chồi và số lá, không có hoặc chỉ có sự khác biệt
nhỏ giữa các dòng được tìm thấy. Ngược lại, bất kể mức độ muối được áp dụng (125 hoặc 175
mM ), cả FW và DW đều cao hơn đáng kể đối với các chồi từ quần thể TG2-4. Do đó, mức độ
giảm FW là 60% đối với đối chứng và 37% đối với dòng biến đổi gen ở mức 125 mM NaCl
Bảng 1: Các dòng được đánh giá: đối chứng (cv P-73) và thế hệ con của cây chuyển gen 4 (TG2-
4)

Ở cấp độ tế bào (tăng trưởng mô sẹo), sự khác biệt giữa cây chuyển gen và cây đối chứng là rõ
ràng hơn. Trong thí nghiệm hypocotyl, sự khác biệt về tốc độ tăng trưởng mô sẹo giữa thân
mầm của loại-1 và loại -2 được lấy (Bảng II ). Tuy nhiên, bất kể loại mô nào, sự khác biệt đáng kể
giữa các dòng được quan sát ở 125 mM . Do đó, ở nồng độ này, FW của mô sẹo có nguồn gốc
từ quần thể chuyển gen đã tăng (+ 22%, mô loại -1) hoặc bị ức chế một chút (−1,5%, mô loại -2),
trong khi những mẫu trong nhóm đối chứng bị ức chế tăng trưởng trong điều kiện nhiễm mặn
(lần lượt là −31% và −39% đối với loại -1 và loại -2). Số liệu DW chứng thực cho điều này (Bảng
II).

Bảng 2: Mô loại 1 (gần đỉnh); 2, mô loại 2 (thấp hơn). Các dòng được đánh giá: đối chứng (cv P-
73) và TG2-4

Khi sự tăng trưởng của chế phẩm từ calli gốc trên môi trường chứa NaCl được đo (kiểm tra mô
sẹo gốc), mối tương quan giữa khả năng chịu mặn và dòng chuyển gen là nổi bật. Được thể hiện
trong Bảng III , ở mức 125 mM NaCl, DW của calli biến đổi gen đã tăng (+ 13%), trong khi mức
giảm (−39%) được quan sát thấy trong dòng đối chứng. Ngoài ra, ở 175 mM NaCl, trọng lượng
của calli từ quần thể chuyển gen không khác biệt đáng kể so với điều kiện không có muối, trong
khi sự tăng trưởng của calli đối chứng bị ức chế mạnh (−45%).
Một đánh giá sơ bộ in vivo trong các điều kiện được kiểm soát cũng đã được thực hiện. Ở nồng
độ muối vừa phải (75 mM ), một phản ứng tương tự với độ mặn trong dòng gốc (cv P-73) và
trong các họ chuyển gen đã được tìm thấy. Tuy nhiên, ở nồng độ muối cao hơn (150 mM NaCl),
tổng DW (tăng trưởng tương đối) không giảm đáng kể (+ 3%) bởi độ mặn trong quần thể
chuyển gen TG2-4, trong khi tốc độ tăng trưởng giảm (−52%) được quan sát ở mẫu đối
chứng(Bảng IV ). Những kết quả này phù hợp với những gì được quan sát trong ống nghiệm
(Bảng I - III). Trong điều kiện không quy định, dòng TG2-4 cho thấy tốc độ tăng trưởng chậm
hơn so với đối chứng cả trên FW và một cơ sở DW (Bảng IV ).
Kết quả thu được với thí nghiệm nêu trên cho thấy mức độ hấp thụ muối trong thế hệ con cháu
TG2-4 cao hơn so với mẫu đối chứng. Để chứng thực tác dụng của gen HAL1 đối với khả năng
chịu mặn, một thí nghiệm mới bao gồm TG2-4 và thế hệ con của một cây chuyển gen khác
(TG2-6) đã được thực hiện. Mô sẹo có nguồn gốc từ hypocotyl đã được sử dụng và như mong
đợi, sự tăng trưởng của calli (cả FW và DW) từ các dòng biến đổi gen cao hơn trên môi trường
bổ sung NaCl. Ngược lại, tốc độ tăng trưởng từ thân mầm của dòng untransformed bị suy giảm
nghiêm trọng ở 125 mM muối (-31% và ức chế tăng trưởng% -33 cho FW và DW, tương ứng;.
Hình 3 ).
Hình 3: Sự phát triển của mẫu cấy hypocotyl (type-1) sau 28 ngày nuôi dưỡng trong NB2020
trung bình (như mô tả trong “Vật liệu và phương pháp”) bổ sung với 0 hoặc 125 mM NaCl
(thanh màu trắng và đen, tương ứng). Các dòng được đánh giá: đối chứng (cv P-73) và các thế
hệ chuyển gen (TG2-4 và TG2-6). Mỗi thanh tương ứng với giá trị trung bình được tính từ 24
mẫu mô của ba dòng khác nhau.

Phản ứng sinh lý Invivo

Ba thế hệ chuyển gen (TG2-4, TG3-4-8 và TG3-4-14) và đối chứng (cv P-73) được trồng với điều
kiện thủy canh trong điều kiện muối hoặc không muối. Hàm lượng nước và nồng độ ion (Na +
và K + ) được đo trong rễ và lá sau 15 hoặc 30 ngày xử lý.

Sau 15 ngày xử lý, hàm lượng nước trên một đơn vị DW không khác biệt trong điều kiện có
muối hoặc không muối giữa các dòng ở lá, trong khi ở rễ nó giảm trong quần thể TG3-4-14
(Bảng V ). Tuy nhiên, trong dòng này, hàm lượng nước tăng lên trong rễ và lá sau 30 ngày xử lý.
Vào thời điểm này, hàm lượng nước gốc cũng tăng đáng kể trong TG3-4-8.

Trong điều kiện không căng thẳng, nồng độ Na + rất giống nhau ở rễ và lá thuộc các dòng khác
nhau (2.2 -2.6 mM ). Mặt khác, nồng độ K + của các dòng khác nhau trong các điều kiện này
thay đổi nhiều hơn (90-130 mM trong rễ và 120-150 nM trong lá). Vì vậy, để so sánh một cách
chính xác sự thay đổi nồng độ ion giữa các dòng thì hàm lượng ion tương đối đã được tính toán
(Hình 4 ). Sau 15 ngày , K + giảm gây ra bởi độ mặn trong cả lá và rễ trong các dòng biến đổi gen
là ít hơn đáng kể trong dòng đối chứng, đặc biệt là trong rễ (Hình 4A). Ngược lại, Na + tích lũy
trong dòng đối chứng là cao hơn so với dòng biến đổi gen ở cả rễ và lá (Hình 4 B). Tỷ lện K+ Na+
tương đối, cao hơn trong các dòng chuyển gen, K+cao hơn duy trì trong điều kiện mặn (Hình 4
C). Ở những cây được thu hoạch sau 30 ngày xử lý muối, kết quả về mặt chất lượng tương tự
với những gì thu được sau 15 ngày.