EMB AGAR ( LEVINE) - BK056HA

I. Mục đích:

EMB Agar được giới thiệu đầu tiên bởi Levine, được dùng để phân lập và nhận biết
enterobacteria (đặc biệt là Escherichia coli và Enterobacter aerogenes) trong dược phẩm,
mỹ phẩm, thực phẩm cũng như trong nước.

Nó cũng được dùng như môi trường xác nhận Escherichia coli trong mỹ phẩm.

Thành phần chính được định nghĩa trong tiêu chuẩn NF EN ISO 21150.

II. Lịch sử:

Năm 1916 Holt-Harris và Teague dùng kết hợp eosin và Methylene xanh để phân biệt vi
sinh vật có hoặc không có khả năng lên men lactose. Levine sau đó sửa đổi công thức
bằng cách loại bỏ đường sucrose và tăng nồng độ lactose dẫn đến phân biệt dễ dàng giữa
Escherichia coli và Enterobacter aerogenes.

III. Nguyên tắc hoạt động:

- Eosin Y và Methylene xanh có khả năng chọn lọc thấp, vì chúng chỉ ức chế một phần sự
phát triển của vi khuẩn Gram dương như enterococci.
- Màu sắc cho thấy sự khác biệt giữa vi khuẩn dương tính với lactose và âm tính với
lactose. Chủng Coliform tạo khuẩn lạc màu tím đến nâu trong khi salmonella không màu
trong suốt hoặc có màu hổ phách.
- Escherichia coli tạo khuẩn lạc có màu kim loại sáng bóng dưới đèn nghiêng.
I. Thành phần môi trường: ( Có thể được điều chỉnh để có được hiệu suất tối ưu)
Trong 1 lit môi trường:
- Pancreatic digest of gelatin............................................................10.0 g
- Lactose...................... ......... ......... ......... ......................................10.0 g
- Dipotassium phosphate ...................................................................2.0 g
- Eosin Y.............................................................................................0.4 g
- Methylene blue............................................................................65.0 mg
- Bacteriological agar .......................................................................15.0 g
pH của môi trường hoàn chỉnh ở 250 C: 7,1 ±0.2

II. Chuẩn bị
- Hòa tan 37,5 g môi trường BK056 vào 1 lít nước cất hoặc nước đã khử ion.
- Đun sôi từ từ, khuấy liên tục cho đến khi tan hoàn toàn.
- Phân vào các ống nghiệm hoặc chai.
Trụ sở chính: Văn Phòng Hà Nội:
17 Đường B6, P.12, Q. Tân Bình, Tp. Hồ Chí Minh 242H Minh Khai, Phường Minh Khai, Quận Hai Bà Trưng, Hà Nội
Điện thoại: (08). 6292.3745; Fax: (08). 6292.3750 Tel/Fax: 0978 782 147
Email: info@dongnamlab.com.vn Email: info@dongnamlab.com.vn
Website:www.dongnamlab.com
 - Hấp khử trùng ở 121°C trong 15 phút.
- Làm nguội và duy trì ở 44-47 °C.
- Trộn đều để oxi hóa methylen xanh và đảm bảo đồng nhất chất kết tủa.
- Đổ vào đĩa petri vô trùng và để rắn lại trên bề mặt nhẵn, lạnh.
- Làm khô trong tủ ấm bằng cách mở hé đĩa
III. Hướng dẫn sử dụng:
Xác nhận Escherichia coli, mỹ phẩm (NF EN ISO 21150)
- Cấy một khuẩn lạc đặc trưng lên MacConkey agar và cô lập bằng cách streak lên EMB
agar được chuẩn bị như trên.
- Ủ ở 30-35o C từ 24 đến 48 giờ.
Chú ý: Cho mục đích khác, ủ khoảng từ 18 đến 24 giờ ở 37 ± 1o C.

IV. Kết quả:

Khuẩn lạc có dạng như sau:

Đặc tính Microorganisms

Khuẩn lạc màu tím đen, lồi, hơi dày, đường Escherichia coli
kính 2-3 mm với tâm đen chiếm hơn 3/4 đường
kính và có ánh kim hơi lục trong ánh sáng phản
chiếu và xanh-đen trong ánh sáng trực tiếp.
Khuẩn lạc màu xanh, tương đối dày, đường Enterobacter aerogenes
kính 4 – 6 mm với tâm màu nâu đen, đôi khi có
ánh kim
Khuẩn lạc màu tím với chút ánh kim Citrobacter
Khuẩn lạc màu nâu nhầy Klebsiella
Khuẩn lạc màu hổ phách trong suốt Salmonella và Shigella

V. Quản lí chất lượng:

- Môi trường bột khô: bột màu tím, chảy tự do và đồng nhất.
- Môi trường chuẩn bị: thạch màu rượu vang đỏ, có thể chứa một chất kết tủa nhẹ sau khi
hấp khử trùng.
- Phản ứng nuôi cấy sau 24 giờ ủ ở 30-35°C (NF EN ISO 21150):

VI. Đóng gói và bảo quản:

Môi trường dehydrated: 2 – 30 °C.

- Ngày hết hạn được ghi trên nhãn

Môi trường prepared ( giá trị chuẩn)

Trụ sở chính: Văn Phòng Hà Nội:
17 Đường B6, P.12, Q. Tân Bình, Tp. Hồ Chí Minh 242H Minh Khai, Phường Minh Khai, Quận Hai Bà Trưng, Hà Nội
Điện thoại: (08). 6292.3745; Fax: (08). 6292.3750 Tel/Fax: 0978 782 147
Email: info@dongnamlab.com.vn Email: info@dongnamlab.com.vn
Website:www.dongnamlab.com
 - Môi trường trong lọ: 6 tháng ở 2 - 8°C
- Môi trường trong đĩa: 1 tháng ở 2 - 8°C

MÃ BAO BÌ CODE

Môi trường dehydrated:

- 500 g/ chai BK056HA

Trụ sở chính: Văn Phòng Hà Nội:

17 Đường B6, P.12, Q. Tân Bình, Tp. Hồ Chí Minh 242H Minh Khai, Phường Minh Khai, Quận Hai Bà Trưng, Hà Nội
Điện thoại: (08). 6292.3745; Fax: (08). 6292.3750 Tel/Fax: 0978 782 147
Email: info@dongnamlab.com.vn Email: info@dongnamlab.com.vn
Website:www.dongnamlab.com