.Tap chi phan tich Héa, Ly va Sink Hoe, Tap 11, S62 - 2006 XAC BINH HAM LUONG CAFFEIN TRONG SAN PHAM CHE VA CA PHE BANG PHUONG PHAP SAC KY LONG CAO AP (HPLC) Déh toa soan ngay: 20 - 4 - 2006 Nguyén Ngoc Tuan. Vién Nghién citu hat nhdn Da Lat Pham Thi Thay Trang Trung tam Y té du phong, Sd ¥ té Lam Dong SUMMARY DETERMINATION OF CAFFEINE IN TEA AND COFFEE PRODUCTS BY HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC) The High Pressure Liquid Chromatography method for the determination of caffeine in tea and coffee samples has been studied. The contents of caffeine in tea and coffee products of Bao Loc and Di Linh Districts of Lam Dong Province are not so much different; the ranges of caffeine in tea and coffee products are 1,63-2,42 % and 1,85 - 2,64% respectively. The analytical results have shown that the concentrations of caffeine in tea and coffee products in Lam Dong province are the same as in Daklak province. They are in the ranges of caffeine in tea and coffee products in the world. . DAT VAN DE TAT sé din dén bi nghién; sit dung thuéng Caffein 1A mét hoat chat c6 hoat tinh sinh hoc cao, c6 tac dung kich thich hé thin kinh trung udng; kich thich hé h&p, tng nhip tim va Igi tiéu. Vi vay, caffein duge sit dung nhiéu trong y duge nhu mét chat tr¢ tim. Tuy nhién, néu lam dung caffein xuyén sé g4y mat nga. Khi ding véi liéu cao c6 thé din dén bi bj kfch déng, héi hép, run, buén nén, tiéu chay; véi liéu cao trén 1000 mg cé thé gay dot quy va tit vong. Liéu gay chét ngudi JA khi sit dung trén 10 gam caffein. Do tinh ch&t hai mat 31nay ma caffein thudng duge T6 chite Y t Thé giéi (WHO) dua ra nhiing khuyén céo khi sit dung va liét ké vao nhiing loai duge ch&ét phai ban theo don[1, 2]. _ Cha va cd phé 18 hai logi cfy duge tréng kha phé bién 4 nviée ta; dic biét 1a céc tinh mién nti phfa bic, cdc tink Tay Nguyén. Trong nhiing pam gdn day, Vigt Nam tré thanh nude xugt khdu ca phé dimg thit hai trén thé gidi. Ca phé 1a mét trong nhiing mat hang xudt khdu chi lye, gép phan thiic ddy sy phat trién kinh té cha dat nude. Caffein c6 nhiéu trong ché va cd phé; ‘chting 1a hai logi thitc ung phé bién nhat trén thé gidi, c6 tac dung tang liu thong mau, kich thich than kinh, tang kha ndng bai tiét rugu va cdc chat cé hai khéc nhu chat béo, nicotin ra khéi co thé, Caffein 14 mét trong sau chi tiéu ma Tiéu chudin Viét Nam 5251-90 ding dé dénh gid ch&t lugng san phéim ché va cd phé. Chinh vi vay, trong céng trinh nay, ching téi nghién cttu sit dung phuong phap sic ky léng cao 4p dé ‘phan tich ham lugng caffein trong mét 6 loai ché va cd phé hién dang duge tring phd bién trén dia ban tinh Lam Déng 13,45). IL THYC NGHIEM 1. Héa chat va dung cy a. Hod chét 32 - Caffein tinh thé, P.A. - Metanol’ (MeOH) loai LiChrosolv cia hang Merck dimg cho HPLC - Acetonitril CH,CN logi LiChrosolv ca hang Merck ding cho HPLC - Bot MgO, P.A. - Kaliferocianua, K,[Fe(CN),].3H.0; PA. - Kém acetat, Zn(CH;COO),. 2H,O - NH,OH cia hang Merck - Acid acetic ca hang Merck, pha dung dich 1M - NaOH, P.A, pha dung dich 1M + Nude c&t siéu sach 6. Dung cu Cac dung cu thay tinh thi nghiém duge sit dung J& logi thiy tinh Pyrex; cac bink dinh mite va pipet thugc nhém AISO. 2. Thiét bj - May xay mdu Ultra pax T20 cia hang IKA + Can phan t{ch 10% cha hing Satorius, Cong héa lién bang Dite - May li tam Hermle 6000 vong/phuit = B6 loc mAu 0.45 ym i - Hé thong sdc ky léng. 4p sudt cao Model: PROSTAR. 240 cia hang VARIAN, MJ; c6 trang bi detector UV;c6t Cy, pha dao, may tinh xit ly va hu trii sé liéu. 3. Thu thap mau Mau ché va ca phé duge lay, dong géi va bao quan theo tiéu chuan Viét TCVN 6539:1999. (dso 4072:1982). Mau duge ly vao tui PE, ghi ly lich mAu: ngay lay mau, thdi gian lay.mau, dia diém lay mau va Nam khéi ligng mau; sau dé mang mau vé bao quan trong tu lanh cua phong thi nghiém. . IIL. KET QUA VA BIEN LUAN 1, Khao sat céc diéu kién téi wu dé xde dinh caffein Dé tim dude cdc diéu kién téi uu cho qué trinh séc ky déi véi caffein, ching t0i da khao sat buée song hap phu téi uu, thanh phan pha déng, tée dé dong pha dong, nhiét dQ cia qué trinh sic ky cfing nhu chon loai eft phi hgp déi véi caffein. K8t qué duge trinh bay 4 bang 1. Tuy nhién, do gié thanh cia acetonitril cao hon nhiéu so véi metanol; mit khae hiéu sudt tach 1A tuong dudng nhau; Vi vay, chting t0i sit dung céc thong sé téi uu cita h@ dung mdi pha dng metanol: nuéc trén’ dé tién hanh cdc thi nghiém tip theo. Bang 1. Két qud khdo sdt cde diéu kién t6i wu dé xde dink caffein sTt Théng sé khdo sat _ 1 _| Thé tich tiem mdu: 50p1 2_| Nhiét dg chay oft: _ 30% 3 | Logicét: Cre (250 mm x 4 mm x 5um) 4 | Pha dong: metanol : nuée (80:20) hoge acetonitril : nuée (60:40) 5 | Tée ag dong: - 1,3 m/phit (Khi sit dung pha 49ng 1A metanol : nuée) 1,0 mV/phit (Khi sit dung pha | | dong lA acetonitril : nude) 6 _| Bude sing do: 273,24 nm 2. X4y dung duwong chudn Cn chinh xéc 500mg caffein dang bét da duge sy 4 80°C tdi trong lugng khéng déi cho vao binh dinh mite 500 ml. Ding hé pha déng metanol: nude theo ty 1é 80:20 dé héa tan lugng caffein trong binh va dinh mite téi vach, ta duge dung dich chudn caffein Img/ml. Loc 50 ml dung dich trén qua giy loc whatman 0,2 um vao lo PE; day n&p, ghi nbn, bo quan trong ti lanh. Pha cac dung dich chudn caffein trong binh dinh mttc 50m! dé cé cac néng dj nhu sau: 5 ppm, 20ppm, 40ppm, 60ppm, 80ppm va 100ppm bing hé metanol : nuée (80 :20) tix dung dich chudn géc caffein c6 néng 46 Lmg/ml. Dat cde binh vao trong bé vita siéu 4m, dun trong 10 phtit ; ding bém tiém Init 50 pl cac dung dich chudn nay bom 33vao hé sic ky léng cao 4p. Két qua caffein dude trinh bay 6 bang 2 va s&c ky thu dude va dudng chudn cha hinh 1. Bang 2. Két qué xy dung duing chudn caffein Néng a6 Dién tich Pic Dién tich Pic (ppm) trung binh Lan1 Laén2 Lén3 | 5 3105125 3039862. 3072495 3072494 20 6509518 6185654 6615477 6436883 40 12576530 12995677 12786105 12786104 60 | 16870509 16461804 16666149 16666154 80 22451754 23811230 21631642 22631542 100 28517007 26750584 26283430 27183673 nnn Tif cdc két qua khao sat 4 trén, ching Dong chuda caf t6i dua ra quy trinh téch va xéc dinh caffeine bing phuong phap sic ky lng cao p theo sd dé & hinh 2. RBM SS Tis mien ple x MSc) om 8 OB mM | ROBE a | . [2 Reaser sar . ‘ Hinh 1. Dutng chudin caffein 34Hinh 2. Sa dé tach va xhe djnh oaffain trong che vd cd pha oo, ow 4 gam miu (che ho§e c& phe) 0,5 gam MgO 150 ml nuée cét di loai 6d ion Dun soi, khuay 20> phit | Djnh mic thanh 250 mi bang nude cf di Toai bé ion 3. Phan tich caffein trong ché va cA phé & mét sé dia phuong cia tinh Lam Déng Che va c& phé duge trong phé bién _ d hai huygn Bdo Lge va Di Linh cia tinh Lam Déng. Day 1a hai mat hang cht Iyc cia tinh; san phdm duge tiéu thu manh trong nuéc cing nhy tham gia xudt khdu. Ching t0i da tién hank thu thap mau sén phdm ché v4, ca phé tai hai dja phuong trén dé phan tich xée dinh ham htong caffein. Két qua duc trinh bay trong bang 3 Loc tho qua gidy loc bang vang Hitt 5 nil dich loc, dinh | mifc thanh 50 ml bang he pha dong Sieu am, loc tinh Dung bom tiém hut SO ul bom vao méy sc ky HPLC Ghi do, xirly s6 lieu Ham lugng caffein trong ché va ca phé 6 hai huyén Bao Léc va Di Linh khéng cé su chénh léch dang ké, caffein trong ché dao déng tu 1,63- 2,42%; ham lugng caffein trong cA phé “dao déng tit 1,85 dén 2,64%; diéu nay c6 thé duge gidi thich 1A do diéu kién thd nhuGng, khi hau va higng mua 6 hai ving nay khéng cé sit khdc biét nao dang ké. SO ligu ma ching tdi phan tich duge kha pha hgp véi sé ligu vé ham lugng caffein trong ché va c& phé 3 hai huyén nay trong nhiing nam truéc day. 35Bang 8. Ham long caffein trong ché va c& phé tai hai huyén Bao Lée vé Di Linh, Lam Déng st} Tén mu | Ky higu ja chi lay mu Tegan | Hae hers 1 |Traxanh | MTBL-01 | Léc Sen-Bao Lge 3/2005 1,98 40,20 2 |Trakhé | MTBL-02 | Lgc Son- Bao Lée 3/2005 2,40 + 0,22 3 |Tralai | MTBL-03: | Blao-Bao Ibe 3/2005 2,18 + 0,21 4 |Traxanh | MTBL-04 | Blao-Bao Léc 3/2005 1,62 + 0,18 5 |Tralai | MTBL05 | Blao-Bao Léc 3/2005 2,0940,22 | 6. | Traxanh | MTDL-06 | Kinh 1g-Di Linh 3/2005 1,63 0,17 | _7 |fyakhé | MTDL-07 | Thi tran -Di Linh 3/2005 2,34 20,24 8 |Traxanh | MTDL-08 | Lién Dam-Di Linh 3/2005 2,42 + 0,22 9 |Caphé bet | CPBL-01 | Tam Chéu, Bao Lge 3/2005 2,64 20,24 10 |Ca phe bat | CPBL-02 | Quée Théi-Blao, Bao Léc| 3/2005 2,16 + 0,19 11 |Ca phé bot } CPBL-03 | Léc Son, Bao Lge 3/2005 2,24 + 0,23 12 |Caphé bét | CPBL-04 | Léc Nga, Bao Lac 3/2005 1,86 + 0,20 13 |Caphe bot | CPBL-05 | Léc Phat, Bao Léc 3/2005 1,88 + 0,21 14 {Ca phe bét | CPDL-06 | Thi tran Di Linh 3/2005 1,85 + 0,20 15 |Ca phé bét | CPDL-07 | Lién Dam, Di Linh 3/2005 1,874 0,19 16 |Capha bgt | CPDL-08 | Chan Hung, Di Linh 3/2005 2,22 + 0,24 IV. KST LUAN - Phuong phép s&c ky Iéng cao ap dyge stt dung dé x4c dinh caffein trong ché va cd phé cho dé nhay va 6 chinh xc cao. Phugng-ph4p trén cing c6thé duge 4p dung dé x4c dinh caffein trong che loai sin phim khéc; dc biét 14 c&e loai dude ch&t 6 chita caffein v.v. 36 - Ham lugng caffein trong c4c m4u ché va ca phé 4 hai huyén Bao Léc va Di Linh thuéc tinh Lam Déng khéng cé sit khéc biét dang ké, kha phd hep vé6i sé liéu kiém.tra truée day va nim trong dai ham lugng caffein trong ché va ca phé ca thé gidi.TAI LISU THAM KHAO 1. ‘TCVN 6603-2000. Ca phé- xde dink ham long caphéin; Phuong phdp ding sie ky léng cao dp; Ha Noi (2000). 2. Huynh Kim Thoa, Phan Quéc Kin, Thai Duy Thin, Nguyén Dinh Hién, Nguyén Van Thue. Héa duge tap 1, B mén héa duge, trudng dai hoc dude Ha Noi; NXB Y hoc (1998). 3. Phyllis R. Brown, High Pressure Liquid Chromatography-Bioche- mical and Biomedical Application. Academic Press - Printed in the United States of America (1973) 4, Veronika R.Meyer. Practical High performance Liquid —_ chromato- graphy. Third edition. Copyright 1988, 1994, 1998 by John Willty & Son Ltd.; reprinted (2000). 5, Dang Van Heda. Banh gid quy trinh phén tich. Ky yéu cong trinh nghién citu khoa hoc, Phan viém Kiém nghiém duge Thanh phé Hé Chi Minh, trang 22-29 (1997). (Tigp theo trang 43) TAI LIQU THAM KHAO 1- Ngudi dich: Nguy&n Xuan Hign, Va Minh Kha, Nguyén Van. Uyén, Nguyén Thi Xuan, Va Hitu yém. Cée e nguyén t& vi lugng trong tréng trot. Nha xuat ban Khoa hoc va Ky thuat; trang 5-73, Ha N6i (1977) ‘Trdn Khai. Sé tay phan tich dat- nue vd phan bén cay tréng. NXB néng nghiép, trang 184-202 (1998) Lé Van Khoa, Nguyén Xuan Cy, Lé Dite. Phuong phdp phan tich ddt, nude, phan bén va edy tréng. NXB Gio due; trang 158-159 (1996) Ducng Van Dam. Nguyén t6' vi luong va phan vi luong. NXB _ KH&KT Ha Néi, trang 38-54 (1998) Nguyén Ngoc Tudn, Lé Van An. Dénh gid ham luong déng va kém trong dat va trong Id cao su tei Cong ty cao su Déng Nai. Tap phan tich Héa, Ly va Sinh hoc T9, sé 4, trang 39-42 (2004) A.K. Babko and A.T. Pilipenko Photometric analysis, Publishers Moscow p.p 47-76 (1975). 37