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茶树油粕水粗提物控制香蕉采后炭疽病害的研究
李 俊 1,2,孟祥春 1,*,张爱玉 1,毕方铖 1,张昭其 2,易干军 1
(1.农业部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点实验室,广东省农业科学院果树研究所,广东 广州
510640;2.华南农业大学园艺学院,广东 广州 510642)
摘 要 : 为探明茶树油粕提取物对香蕉采后主要病害炭疽病的防治作用,通过正交试验优化茶树油粕
粗提物的水提取方法,并以茶皂素为对照,研究提取物对香蕉炭疽病菌离体生长和香蕉果实活体接种
致病斑的作用效果。 结果显示,以料液比 1∶7(m∶V ),在 85 ℃条件下,将干燥的茶树油粕浸提 2~2.5 h ,或
95 ℃条件下浸提 1.5 h,粗提物的提取率较高,可达 50%以上。 获得的水粗提物可抑制离体培养的香蕉
炭疽病菌的生长,且浓度越高,抑制效果越明显,当浓度 ≥0.2 mg·mL -1 时,抑制率可达 100% ;而其 10
倍浓度的茶皂素(2 mg·mL-1)才具 100%的完全抑制效果。 茶树油粕水粗提物处理香蕉果实后,可显著
抑制活体接种果实炭疽病病斑的扩展,而同浓度的茶皂素没有明显抑制效果。 初步研究表明,茶树油
粕水粗提物对香蕉炭疽病菌的离体和活体控制效果显著优于茶皂素, 说明粗提物中含有除茶皂素之
外的抑菌活性组分,且起主要的抑菌作用。
关键词:茶树油粕;水粗提物;茶皂素;香蕉;炭疽菌
Abstract : In order to develop the use of Camellia semiserrata Chi oil residua on fruit postharvest disease controlling,
extracting methods of water crude extractum was firstly screened and determined through an orthogonal experiment, then
effects of the extractum on controlling Colletotrichum musa in vitro growth and in vivo anthracnose developing was
investigated by taking tea saponin as control. Results revealed that the best extracting method, getting the higher
extracting efficiency(the rate of extraction was above 50%), was making material liquid ratio as 1∶7(m∶V), then 2~2.5 hours
for extraction process under 85 ℃, or 1.5 hours for extraction process under 95 ℃. Crude water extractum from Camellia
semiserrata Chi oil residua under the above conditions could inhibit the in vitro growth of Colletotrichum musae, the
inhibitory effects increase stronger with the increase of extractum concentration. Concentration at 0.2 mg·mL-1 and above
had a completely 100% inhibitory effect, while tea saponin at the concentration of 2 mg·mL -1 could have the similar
effects. Banana fruits treated with water crude extractum and inoculated by Colletotrichum musae showed decreased
基金项目:广东省科技攻关项目(2012A020100007 )
作者简介:李 俊(1983 —),男,汉族,在读硕士,研究方向:水果采后病害防控。
*通讯作者:孟祥春,博士,副研究员,研究方向:热带亚热带水果采后生理学及贮运保鲜技术。
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保鲜与加工
联系邮箱:bxyjg@163.com Storage and Process 2014 年第 4 期
anthracnose disease development compared to non -treated water control, but fruits treated with tea saponin had no
detected difference with the water control during storage. This results showed that effects in controlling in vitro
Colletotrichum musae growth and in vivo disease development were much better than that of tea saponin, indicating other
active antifungal components existing in the crude water extractum of Camellia semiserrata Chi oil residua except tea
saponin and had the main inhibitory effect.
Key words : Camellia semiserrata Chi oil residua; crude water extractum; tea saponin; banana; Colletotrichum musae
本研究通过正交试验确定用水提取茶树油粕中 首先往茶树油粕细粉中加入相应体积的蒸馏水,
有效物质的最优条件,并以茶皂素作为对照,研究茶 不同温度下浸提 1.5~2.5 h 后过滤得滤液;然后将所
树油粕水粗提物对离体培养香蕉炭疽病菌生长和活 得滤液用两层纱布过滤,接着采用石油醚萃取法去除
体接种果实病斑的抑制效果,以期为茶树油粕的有效 滤液中多余的油脂即得茶树油粕提取液;最后将所得
利用及新型植物源果蔬防腐保鲜剂的开发利用提供 茶树油粕提取液经旋转浓缩和恒温干燥即得茶树油
理论依据。 粕固体提取物。
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2014 年第 4 期 李 俊,等 :茶树油粕水粗提物控制香蕉采后炭疽病害的研究 投稿平台:www.bxyjg.com
提取率计算公式为: B>A,即料液比对提取率的影响最大,其次是浸提时
提取率 = 茶树油粕提取物质量 ×100%。 间,温度的影响最小;最佳提取工艺条件组合为
茶树油粕粉末质量 A2B3C(即温度 85 ℃,浸提时间 2.5 h,料液比 1∶7)。而
3
在同等条件下,试验重复三次,采用 DPS 统计软 正交试验表中没有这一条件组合,因此对 A2B3C3 组
件分析正交试验结果。 合条件进行了单独试验验证,提取率结果为 52.7%,
1.2.2 平板抑菌试验方法 该值与正交试验组合中的 A2B2C(即温度 85 ℃,浸提
3
香蕉炭疽病菌接种于 PDA 培养基上,在 25 ℃下 时间 2.0 h,料液比 1∶7)及 A3B1C(即温度 95 ℃,浸提
3
培养 7 d 后备用。用无菌蒸馏水将茶树油粕水粗提物 时间 1.5 h,料液比 1∶7)的提取率在同一水平,均大于
及茶皂素分别配为 2 mg·mL-1 和 20 mg·mL-1 的水溶 50%。从节约能效出发,确定 A2B2C3 为茶树油粕水粗
液,加入到 PDA 培养基中,配成水粗提物浓度为 提物的最佳提取工艺条件。
0.01~0.50 mg·mL-1,茶皂素浓度为 0.2~5.0 mg·mL-1 表2 优化水浸提茶树油粕粗提物提取条件的 L9(34)
的培养基,混合均匀后铺板,待静置凝固后,从上述培 正交试验结果
养好的菌块上取直径 5 mm 的菌块置于平板中央,带 Table 2 Results of L9(34) orthogonal test of extraction efficiency of
crude extractum of Camellia semiserrata
菌丝的一面朝下,在 25 ℃下培养 3 d 和 5 d 后,分别
因素
用十字交叉法测定菌落直径,计算抑菌率,计算公式 序号 提取率 /%
A B C
为:抑菌率 = CK 净生长量 - 处理净生长量 ×100%。 1 1 1 1 26.1
CK 净生长量 2 1 2 2 30.0
以纯 PDA 培养基平板作为空白对照(CK),每个处理 3 1 3 3 45.0
6 皿, 试验重复三次。 4 2 1 2 31.2
5 2 2 3 54.6
1.2.3 人工接种处理方法 6 2 3 1 32.6
1.2.3.1 蕉果实先用 500 mg/L 乙烯利浸泡 30 s 进行 7 3 1 3 54.4
催熟处理,晾干后,用 1%NaClO 溶液浸泡 2 min 进行 8 3 2 1 12.4
9 3 3 2 46.5
消毒处理, 置于室温下风干水分备用。
K1 101.1 111.7 71.1
1.2.3.2 将香蕉炭疽病菌接种于 PDA 培养基上,在 K2 118.4 97.0 107.7
25 ℃下培养 7 d 后,用蒸馏水冲洗分生孢子,配置 K3 113.3 124.1 154.0
1×106 个孢子 /mL 的孢子悬浮液备用。 R 17.3 27.1 82.9
1.2.3.3 用直径 3 mm 的消毒钉子在每个香蕉果实中 2.1.2
不同工艺条件下提取的茶树油粕水粗提物对
间及两端三个部位分别刺三个 3 mm 深、3 mm 宽的 离体培养香蕉炭疽病菌菌丝生长的影响
伤口。在伤口处分别滴入不同浓度的茶树油粕水粗提 采用平板抑菌试验法,研究以上各提取条件下获得
物 20 μL (处理组)、 500 mg/L 茶皂素 20 μL (对照组 的茶树油粕水粗提物对香蕉炭疽病菌的离体抑制效果。
1)、无菌水 20 μL(对照组 2)。12 h 后,在各处理果实
0.5 mg·mL-1 1 mg·mL-1
的伤口处接种 10 μL 1×10 个孢子 /mL 的香蕉炭疽
6
100
菌孢子液, 晾干。
80
菌圈扩展抑制率 /%
0
2 结果与分析 1 2 3 4 5 6 7 8 9
L9(34)正交试验提取工艺条件编号
2.1 茶树油粕水粗提物提取工艺条件的确定
图1 不同正交试验条件下获得的茶树油粕粗提物对离体培
2.1.1 不同工艺条件对水浸提茶树油粕中有效物质
养香蕉炭疽菌生长的影响
提取率的影响 Fig.1 Effects of Camellia semiserrata crude extractum under
根据表 2 的正交试验结果及极差分析可知,影响 different extracting conditions on inhibitory rate of Colletotrichum
茶树油粕中有效物质提取率因素的主次顺序为 C> musa mycelial growth
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保鲜与加工
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100 A 100 B
80 80
菌圈扩展抑制率 /%
菌圈扩展抑制率 /%
60 60
40 40
20 20
0 0
0.01 0.05 0.10 0.20 0.50 0.2 0.5 1.0 2.0 5.0
茶树油粕水粗提物浓度 / (mg·mL-1) 茶皂素浓度 / (mg·mL-1)
水(CK)
图 3 茶树油粕水粗提物及茶皂素对离体培养香蕉炭疽病菌的抑制效果
Fig.3 Inhibitory effects of Camellia semiserrata crude extractum and tea saponin on Colletotrichum musa of banana
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2014 年第 4 期 李 俊,等 :茶树油粕水粗提物控制香蕉采后炭疽病害的研究 投稿平台:www.bxyjg.com
20 A 20 B
CK(无菌水) CK(无菌水)
16 16
1.0 mg·mL-1 1.0 mg·mL-1
病斑直径 /mm
病斑直径 /mm
5.0 mg·mL-1 5.0 mg·mL-1
12 12
8 8
4 4
0 0
6 9 12 6 9 12
贮藏时间 /d 贮藏时间 /d
第9天
A C E
第 12 天
B D F
图5 茶树油粕水粗提物及茶皂素对接种香蕉炭疽病的抑制效果
Fig.5 Inhibitory effects of Camellia semiserrata crude extractum and tea saponin on inoculated anthracnose of banana
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条件下提取 1.5 h,其水粗提物的提取率最高,可达 um musae as a crown rot pathogen on Windward Island bananas
50%以上。此工艺条件下浸提的茶树油粕水粗提物浓 [J]. Plant Pathology,1993, 42(1):67-74.
[7] Meng X, Tang Y, Zhang A, et al. Effect of oligochitosan on deve-
度≥0.2 mg·mL-1 即可完全抑制离体培养的香蕉炭疽
lopment of Colletotrichum musae in vitro and in situ and its role
病菌的生长,其有效抑制作用浓度远低于茶皂素。
in protection of banana fruits[J]. Fruits, 2012, 67(3): 147-155.
在活体接种条件下,采用 1.0 mg·mL-1 的茶树油粕水
[8] 欧雄常,柳 凤,何 红,等 . 红树内生细菌 AmS2 防治香蕉
粗提物预处理创伤口,显著控制了接种香蕉果实的发 采后炭疽病的研究[J].保鲜与加工,2013,13(5):15-19.
病程度;而同样浓度的茶皂素预处理后,对接种果实 [9] Sharma R R, Singh D, Singh R. Biological control of postharv-
的炭疽病斑扩展没有显著抑制效果。结果显示,水浸 est diseases of fruits and vegetables by microbial antagonists:
提的茶树油粕粗提物中含有除茶皂素之外的活性抑 a review [J]. Biological Control, 2009, 50(3):205-221.
菌组分,且起主要的抑菌作用。 [10] Khan S H, Aked J, Magan N. Control of the anthracnose pathog-
茶树油粕水粗提物的活性抑菌组分对采后贮藏 en of banana (Colletotrichum musae) using antioxidants alone
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·政策法规·
严防转基因品种冒充非转基因品种审定
日前,农业部发布《农业部关于进一步加强农业转基因生物安全监管工作的通知》,《通知》要求,各地农业
部门要加强组织领导,成立转基因生物安全管理领导小组,要把农业转基因生物安全监管纳入日常管理。
《通知》要求,各地农业部门要加强组织领导,成立转基因生物安全管理领导小组,主要负责同志负总责,分
管领导具体抓。 要把农业转基因生物安全监管纳入日常管理,进一步加强工作力量,保障工作经费,提升监管能
力,构建人财物支持体系。
《通知》表示,对违规开展田间试验、南繁、环境释放以及转让转基因材料等活动,造成非法扩散的研发单
位和研发者,取消承担转基因科研任务和申报安全评价的资格。 对以转基因品种冒充非转基因品种审定的,取
消申请资格。 对违规开展转基因种子生产经营等活动的企业,依法吊销证照,严厉打击。
来源:中国农业新闻网
2014-06-25
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