47 DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECTIILOR PRODUSE DE ROTAVIRUSURI 47.1. DATE GENERALE. 47.1.1. O minidefinitie Rotavirusurile (lat, rota = roata; dupa aspectul electronomicroscopic de roti mici cu bbucs masiva, spife scurte si obada fina) au virionul cu dubla capsida, dar lipsit de anvelopa, si un diamotru de 65—75 am. Genomul este ARN d.., liniar, cu 10-12 seg mente. Sunt rezistente la eter, detergenti si pH 3,0. 47.1.2. Repere taxonomice Genul Rotavirus face parte din familia Reoviridae impreund cu genurile Reovirus si Orbivirus. ‘Au un antigen specific de grup localizat in capsida interna si antigeni specifici de tip localizati in capsida externa. Exist cel pusin 6 serovaruri ale rotavirusurilor umane. 47.1.3. Habitat Rotavirusurile grup A infecteazA omul. Alte serogrupe infecteaz’, cu tropism de specie, animalele (rotavirusuri simiene, bovine, porcine etc.). 47.1.4, Factori de patogenitate capsida externa fixeazA rotavirusurile pe enterocitele din varful vililor intestinului subtire, in care sunt replicate. Lezarea acesior cclule producatoare de dizaharidaze deprima absorbjia lactozei, care, fermentaté de microflora intestinal’, genereaza acumulare de produsi acizi, osmotic activi, care, prin aflux hidroelectrolitic, determina diaree. Liganzii di 47.1.5. Receptivitatea la infectia cu rotavirus Receptivitatea la infectia cu rotavirus este mai mare in primil trei ani de vias. Adulfii sunt rar infectati, 37347.1.6. Gastroenterita rotavirala Gastroenterita rotavirala apare dupa o incubatie de 1—3 zile, Debutul este acut, cu diaree, vom, grefuri si dureri abdominale. Scaunul apare abundent, apos, spumos, de culoare galbend, uneori alburie. Caracteristic este garguimentul intestinal. 47.2.INVESTIGATIA ETIOLOGICA A GASTROENTERITEI VIRALE Diagnosticul direct. Prelevatele patologice. Se recolteaz aseptic materii fecale si se transport la laborator in container cui gheaja carbonic. Se pregiteste o suspensie 10—20% de materii fecale in solusie Hanks, care se centrifugheaza 20 minute la 10 000 rpm. ‘Se decanteaza, se transporteaza supernatantul clarificat cu antibiotice (penicilina 1000 UI/ml si streptomicina 500 g/ml) si se mensine la frigider 10—12 ore. ‘Diagnosticul rapid. Depistam virionii in materiile feéale ale bolnavilor prin imuno- microscopic electronica, ART sau ELISA. In primele zile de boala, cand concentrafia virusului in materii fecale ajunge la 10° * virioni/g, poate fi depistat virusul si prin microscopie electronica simpla cu marire de 50 000X." Pentru aceasta se coloreaza negativ o picituré din supernatant cu acid fos- fotungstic 2% (pH 6,5), se pregateste preparatul si se examineaza. Imunomicroscopia electronica. Se amestect 0,1 ml ser imun antirotavirus in dilutie 1:5 cu 0,4 ml din suspensia de fecale. Se incubeazd amestecul o ora la temperatura camerei si 12 ore la frigider, apoi se centrifugeazd 90 minute la 15000 rpm. La sediment se adaug’ cateva picaturi de apa distilatd, se coloreazd negativ cu acid fosfotungstic 2% si se ex- amineazi. La microscopul electronic depistim agregate de virioni tipici. Pentru coloratia imunofluorescenta se pregateste 0 suspensie 2% de materii fecale, se centrifugheaza si se filtreaza supernatantul prin filtru cu diametrul porilor de 1,2 jum. Se amesteca apoi 0,2 mil filtrat cu 0,2 ml ser imun, Se incubeazd amestecul o ora la 37°C, dupa care se centrifugheaz8 o ord la 12.000 rpm. Se resuspendeaza sedimentul in 0,2 mil tampon fosfat si se adaugi 0,2 ml de imunoglobuline fluorescente. Dupa 10 minute de incubajie, se centrifugheaza amestecul 10 minute la 2000 rpm, se decanteazi si se resuspendeaz’ sedimentul in tampon fosfat, apoi se examineaza intre lama si lamela la ‘microscopul luminescent cu obiectivul de imersic. Metode mai sensibile sunt: ELISA, ARI sau RIHAL Rotavirusurile umane nu pot fi cultivate in laborator. Diagnosticul serologic. Se urméreste cresterea titrului_anticorpilor specifici in serurile pereche recoltate in primcle 3—4 zile de boala si dupa 2 saptamani. Se determind anticorpii prin imunomicroscopie electronic’, utilizand_antigen preparat din fecale cu o concentrajie mare de rotavirus. Putem recurge si la RFC, RIHA, RIF, ARI sau ELISA. Preparate biotogice pentru diagnosticul gastroenteritelor rotavirale: 1 Seruri imune antirotavirus pentru IME, RIF. 1 Truse pentru depistarea rotavirusurilor prin ELISA, ARI, RIHAL. = Antigeni rotavirali pentru RFC, RIHA, RIF, ARI sau ELISA. Preparate pentru profilaxia si terapia specific’ nu sunt elaborate.