台灣農業化學與食品科學（中華民國一○五年四月／第五十四卷第二期：第九十八至一○六頁）

98 農化與食科 顏威揚　孫舜國　陳淑德 民國 105 年第 54 卷第 2 期

Taiwanese Journal of Agricultural Chemistry and Food Science (April, 2016) 54(2): 98-106

猴頭菌固態發酵產物之萃取物對斑馬魚胚胎腦細胞保護及修復之效果

顏 威 揚　孫 舜 國　陳 淑 德 *
國立宜蘭大學 食品科學系

（接受刊載日期：中華民國一○五年八月十五日）

猴頭菇是一種眾所周知的食用和藥用真菌。它的子實體和菌絲體含有豐富的活性成分，包括多醣、萜類
化合物、猴頭素及猴頭酮等，具有免疫調節、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、神經保護及增強記憶力等功效。故本
研究之目的為測試猴頭菌固態發酵大豆薏仁產物之水萃取物與乙醇萃取物是否對1%乙醇損傷的斑馬魚胚胎腦
神經細胞具有保護及修復作用。結果顯示，猴頭菌固態發酵大豆薏仁產物之水萃取物中含有65.18%粗多醣，
且其乙醇萃取物中含有10.85%粗三萜，分別為猴頭菇子實體的6.87倍和3.97倍。將斑馬魚胚胎先浸泡不同濃度
(50、100及200 ppm) 猴頭菌固態發酵產物之水及乙醇萃取物24 h，再浸泡於1%乙醇24 h後，則其可減少因1%乙
醇損傷所造成腦細胞死亡數量，且呈現劑量依賴性，以200 ppm效果最佳，已達控制組的水平。此外，猴頭菌
固態發酵產物的200 ppm之水萃取物及乙醇萃取物皆能顯著修復先浸泡1%乙醇4 h所造成斑馬魚胚胎腦細胞之
損傷，且它們的效果顯著比猴頭菇子實體萃取物佳。

關鍵字：猴頭菌，固態發酵，斑馬魚，細胞保護，細胞修護。

Effects of Extracts from Hericium erinaceus Solid-state Fermented Products

on Protection and Repair of Brain Cells in Zebrafish Embryos

Wei-Yang Yen, Shun-Kuo Sun and Su-Der Chen*

Department of Food Science, National Ilan University, I-Lan, Taiwan, R.O.C.

(Accepted for publication: August 15, 2016)

Hericium erinaceus is a well-known edible and medicinal mushroom. Its fruiting bodies and mycelia
exhibit various bioactive components including polysaccharides, terpenoids, erinacines, and hericenones.
It also have various pharmacological activities, such as immunomodulation, antitumor, antioxidant, anti-
microbe, neuroprotection and enhancing memory functions. The objective of this study was to investigate
protection and repair functions of brain cells in zebrafish embryos by treatment of hot water and ethanol
extracts from Hericium erinaceus solid-state fermented soybean and adlay mix products. The results showed
that the crude polysaccharide and crude triterpenoids contents in water and ethanol extracts from Hericium
erinaceus solid-state fermented soybeans and adlay mix product were 65.18% and 10.85%, respectively.
They were 6.87 and 3.97 folds fruiting body extracts. Zebrafish embryos pre-soaking 24 h in different
concentrations (50, 100 and 200 ppm) of water and ethanol extracts of Hericium erinaceus solid-state
fermented product significantly reduced the number of died brain cells impaired by 1% ethanol soaking 24 h
in a dose-dependent, 200 ppm extract had the best protection effect as the control. Moreover, both 200 ppm
water and ethanol extracts from Hericium erinaceus solid-state fermented product had significantly better
repair effects in brain cells of zebrafish embryo impaired by 1% ethanol pre-soaking 4 h; they also had better
effects than extracts from Hericium erinaceus fruiting body.
Key words: Hericium erinaceus, Solid-state fermentation, Zebrafish, Cell protection, Cell repair.

前　　　　　言 於北半球溫帶國家，其子實體與菌絲體皆具
有 許 多 生 理 活 性 成 分 (1)， 如 ： 多 醣 (2-4)、 萜 類
猴頭菌(Hericium erinaceus)為東亞常見的 化合物 (5)、猴頭素 (6-10)、猴頭酮 (11,12) 等，亦有
一種藥用真菌，其子實體為白色，多半分布 著 各 種 不 同 生 理 功 效 像 是 抗 氧 化 (13-16) 、 抑 制

* Corresponding author. E-mail: sdchen@niu.edu.tw

 猴頭菌固態發酵產物之萃取物對斑馬魚胚胎腦細胞保護及修復之效果 99

食道癌 (17) 及胃腸癌 (18)、免疫調節 (19)、促進神 斑馬魚為動物模式的研究中也證實乙醇會造成

經生長因子(Nerve growth factor, NGF)生長 胚胎之脊椎畸形，還會造成生長遲緩 (33)，且記
(7,9,10,20,21,22)
、預防缺血灌流的中風 (23) 和預防治 憶功能也會受到影響 (34)，也可透過染色進行各
療老年癡呆症 (24-26) 等。 部位死亡細胞的觀察 (35)，故斑馬魚可作為一種
在上述功能中較特別的是和神經細胞 神經研究上之實驗動物模式。
的 生 長 和 保 健 有 關 ， 如 ： NGF是 一 種 維 持 神 在本實驗室的研究中，曾分析猴頭菌液態
經細胞組織的調節因子稱為神經營養因子 發酵米漿清除DPPH能力和螯合亞鐵離子皆比發
(Neutrophlic factors, NTFs)， 包 括 NGF、 酵 前 米 漿 還 高 (19) 。 猴 頭 菌 液 態 發 酵 米 漿 及 猴
brain-derived neutrophlic factor (BDNF)、 頭菇的熱水萃取物濃度為5及50 μg/mL均可促使
NT-4和neurotrophin-3 (NT-3)，它們可以誘導 巨噬細胞增加NO、TNF-α、IL-4及IL-10的生成
神經纖維及神經軸突、樹突的發育生長，此和 量，且猴頭菌發酵米漿及猴頭菇子實體皆具有
治療智力衰退和神經衰弱等疾病有著密切的關 調 節 免 疫 之 效 果 (19)。 另 外 猴 頭 菌 固 態 發 酵 小
係 (27)。 日 本 多 位 學 者 (6,7,9) 將 分 離 純 化 後 的 猴 麥之乙醇萃取物具有猴頭素對神經生長因子生
頭素溶液培養星狀神經細胞，其所分泌的NGF 成 (20,21) 和對斑馬魚胚胎腦細胞具有保護和修復
量，較腎上腺素正對照組為高。Mori等人 (28) 測 的效果 (36)。由於過去使用單一穀物作為猴頭菌
試不同菇蕈類(猴頭菇、杏鮑菇、舞菇、姬松 固態發酵的基質，但此無法同時提供猴頭菌生
茸)對於1321N1星狀細胞產生NGF之影響，結果 長的碳源和氮源，可能造成發酵時間增長，故
發現只有猴頭菇乙醇萃取物具有促使1321N1星 本研究將微波萃取猴頭菌固態發酵大豆薏仁混
狀細胞產生NGF之能力，且劑量在150 μg/mL達 合 產 物 和 猴 頭 菇 子 實 體 ， 以 製 備 200 ppm水和
到顯著差異。 何 等 人 (21) 研 究 猴 頭 菌 固 態 發 酵 乙醇的萃取物，再用於浸泡斑馬魚胚胎，以探
小麥產物的乙醇萃取物對大鼠腎上腺髓質嗜鉻 討 其 對 於 1%乙 醇 損 傷 之 斑 馬 魚 胚 胎 腦 神 細 胞
細 胞 (PC12)產 生 NGF之 影 響 ， 結 果 顯 示 經 過 加 的保護及修復效果。
藥處理的PC12細胞，其軸突比起控制組有明顯
的生長，且有 加 藥 處 理 所 分 泌 NGF含 量 皆 高 於 材料與方法
控制組，故由細胞實驗可證明猴頭菌乙醇萃取
物可顯著促進神經細胞產生NGF之效果。
一、材料
在動物及臨床實驗方面，Shimbo等人 (10) 以
猴頭素A管餵大鼠，並觀察大鼠腦中大腦嗅球 猴 頭 菌 Hericium erinaceus (BCRC 36470)
(嗅覺)、大腦藍斑(情緒控制)、大腦海馬迴 購自食品工業發展研究所生物資源保存及
(記憶)及大腦皮層(學習功能) NGF之含量，則 研 究 中 心 (Hsinchu, Taiwan)。 大 豆 購 自 興 發
在藍斑及海馬 迴 的 NGF含 量 顯 著 較 高 ， 此 說 明 米 行 (Ilan, Taiwan)。 薏 仁 購 自 日 豐 行 (Ilan,
猴頭素A對於情緒控制及記憶改善是有所幫助 Taiwan)。95%乙醇、氫氧化鈉(NaOH)、酚試劑
的。Hazekawa等人 (1) 讓小鼠以自由採食的方式 (Phenol)、硫酸鎂、磷酸氫二鉀、葡萄糖購自
餵食猴頭菇水萃物14天後，停止採食一天在進 和光純藥工業株式會社(Osaka, Japan)。酵母
行取樣，結果顯示在紋狀體及海馬迴的NGF含 抽出物(yeast extract)、馬鈴薯葡萄糖洋菜培
量皆有顯著上升，表示能夠改善肌肉運動及記 養基(potato dextrose agar, PDA)、馬鈴薯液體
憶功能。而Mori等人 (25) 所做阿茲海默病人的四 培養基(potato dextrose broth, PDB)購自Difco
週臨床實驗中，也發現以猴頭菇錠劑治療組之 Co. (Sparks, MD, USA)。濃硫酸、醋酸購自聯工
認知功能評量表分數持續上升，且皆顯著高於 公司(Taipei, Taiwan)。橙啶(Acridine Ornge,
安慰劑組，此證明猴頭菇對於人類的記憶功能 AO)、香草醛、齊敦果酸、過氯酸、DPPH、維
之改善是有所幫助的。 他命C、BHA購自Sigma Chemical Co(St. Louis,
斑馬魚(Danio rerio)是屬於鯉魚科，又稱 MO, USA)。試藥級99%乙醇購自島久藥品株式會
藍條魚，壽命約為3年半左右，常被用來作為 社 。 野 生 種 斑 馬 魚 (AS-AB)購 自 台 灣 斑 馬 魚 中
實驗動物模式的一種，和其他動物在分子、細 心中央研究院分支(TZCAS, Taipei, Taiwan)。
胞及生理特性上很相似，故常被拿來作為分子
生物學、神經及遺傳學之研究 (29-31)，其具有胚 二、設備
胎透明易於觀察、胚胎發育快且子代量大(70-
300顆)等優點，便於遺傳學之研究 (32)，而在以 2 5 ℃ 震 盪 恆 溫 培 養 箱 (YIH DER, LM-600R,
100 農化與食科 顏威揚　孫舜國　陳淑德
USA)。 分 光 光 度 計 。 離 心 機 (Hermle Z300,
Germany)。 高 溫 蒸 氣 直 立 式 滅 菌 釜 (TM-329,
Tomin medical equipment Co., Ltd., USA)。烘箱。
電子精秤。高速粉碎機(柯化，RT-40, Taipei,
Taiwan)。 無 菌 操 作 台 。 微 波 萃 取 裝 置 為 本 實
驗室自行組裝，包含可調整微波功率之微波爐
(妍華生技公司，新北市，台灣)、冷凝管、
冷 水 循 環 裝 置 (Firstek, 8402H， 一 升 科 技 公
司 ， 新 北 市 ， 台 灣 ) 。 減 壓 濃 縮 機 (Eyela Oil
Bath Osb-2000, Tokyo, Japan)。倒立式螢光顯
微鏡(Model CKX41SF, Olympus Optical Co. Ltd.,
Tokyo, japan)。立體顯微鏡HG208194 (太陽光學
公司)。
三、試驗方法
1.猴頭菌之培養與活化
將 猴 頭 菌 Hericium erinaceus (BCRC
36470)置 於 PDA平 板 中 以 25℃ 培 養 ， 並 每 月
繼代一次，並將長滿菌絲之平板，取3塊1
cm × 1 cm之PDA菌塊接種至500 mL具有擋板
之 錐 形 瓶 中 ， 內 含 5%葡 萄 糖 培 養 液 ( 5%葡
萄糖、0.1%酵母萃取物、0.1%磷酸氫二鉀及
0.05%硫酸鎂，並以蒸餾水定量至150 mL)，
以25℃ 、150 rpm預活化7天後即可使用。
2.猴頭菌固態發酵大豆薏仁混和產物之製備
將預活化7天後之猴頭菌菌液接種10 mL
至500 g已殺菌之大豆薏仁混和基質(水分含
量約為50%)太空包中，於25℃ 恆溫培養箱中
培養，培養第14天後菌絲即長滿培養基，即
收取太空包，並以殺菌釜滅菌(121℃ ，1 hr)
後，以50℃ 烘箱熱風乾燥，磨粉備用。
3.猴頭菌固態發酵產物之粗多醣分析 (37)
取 乾 燥 完 之 猴 頭 菌 固 態 發 酵 產 物 2.5 g
並加入50 mL蒸餾水，以微波萃取機在微波
功率為300 W下萃取5 min，離心後取上清液
0.3 mL並加入1.2 mL 95%乙醇沉澱多醣，離
心後去除上清液，並重複此步驟2次，之後
以60℃ 乾浴將乙醇揮發至乾，加入1 mL 1 N
NaOH於80℃ 下回溶多醣。將回溶完之多醣溶
液稀釋200倍，取稀釋完之多醣溶液1 mL加
入1 mL 5%酚溶液及5 mL濃硫酸震盪均勻後
冰浴2 min在波長488 nm下以分光光度計測其
吸光值，並帶入葡萄糖標準曲線中以求得樣
品之粗多醣含量。
4.猴頭菌固態發酵產物之粗三萜分析 (38)
取乾燥完之猴頭菌固態發酵產物2.5 g並
加入50 mL 95%乙醇，以微波萃取機在微波
民國 105 年第 54 卷第 2 期
功率300 W下萃取5 min，離心後取上清液0.1
mL以 60℃ 乾 浴 使 乙 醇 揮 發 後 ， 加 入 0.4 mL
5%香草醛-醋酸溶液以及1 mL過氯酸溶液，
於60℃ 乾浴15 min回溶，冰浴至室溫後加入
5 mL醋 酸 並 震 盪 均 勻 ， 於 室 溫 靜 置 反 應 1 5
min，在波長548 nm下以分光光度計測其吸
光值，並帶入齊墩果酸標準曲線中即可求得
樣品之粗三萜含量。
5.斑馬魚飼養與受精卵之收集 (39)
野生種之斑馬魚飼養於外掛式循環水系
統之魚缸中，公魚及母魚分缸飼養，水溫維
持在28 ± 2℃ ，並調節光週期為14 hr小時光
照，10 hr小時黑暗，每天給予兩次飼料。欲
收 集 受 精 卵 時 ， 在 前 一 天 1 0 hr小 時 黑 暗 之
前，將一母魚及兩公魚置於相同之魚缸中，
底部鋪彈珠以保護剛生下之魚卵，並於次日
光照30 min後開始收集已受精之魚卵。
6.斑馬魚胚胎腦細胞的保護作用 (36)
將收集之受精卵去除雜質後立即浸泡
200 ppm基質或猴頭菌固態發酵大豆薏仁產
物萃取液，控制組則浸泡蒸餾水，於28℃ 下
培 養 2 4 hr後 ， 去 除 萃 取 液 ， 並 以 蒸 餾 水 清
洗胚胎3次，再浸泡1%乙醇於28℃ 下培養24
hr， 將 乙 醇 去 除 後 以 蒸 餾 水 清 洗 胚 胎 3 次 備
用。
7.斑馬魚胚胎腦細胞的修復作用 (36)
將收集之受精卵去除雜質並分組後，先
於28℃ 下培養24 hr，之後浸泡1%乙醇4 hr，
去除乙醇，並以蒸餾水清洗胚胎3次，再浸
泡200 ppm基質或猴頭菌固態發酵大豆薏仁
產物萃取液，控制組則浸泡蒸餾水，於28℃
下培養20 hr後，去除萃取液，並以蒸餾水清
洗胚胎3次備用。
8.斑馬魚胚胎腦細胞螢光染色法 (40)
將藥物處理完之48 hpf (發育48小時)的
斑馬魚胚胎以解剖顯微鏡去除卵殼後，將其
浸泡於5 μg/mL之acridine orange (AO)螢光染
劑中，避光染色60 min，染色完畢後以蒸餾
水清洗胚胎3次，每次浸泡5 min，清洗完將
小魚固定於挖洞之agar中(每個洞以CMC溶液
固定小魚)，並以螢光顯微鏡綠色FITC濾鏡
(激發：488 nm，發射：515 nm)下拍攝記錄
死亡的腦細胞數目。
9.統計分析
實驗結果以平均值±標準偏差表示之，
並以Statistical Package for Social Science
(SPSS, SPSS INC. 宏德國際軟體諮詢顧問有限
公 司 ) 14.0版 統 計 套 裝 軟 體 進 行 統 計分析，
 猴頭菌固態發酵產物之萃取物對斑馬魚胚胎腦細胞保護及修復之效果 101

以 多 元 全 距 檢 定 分 析 (Duncan's Multiple 效 果 ， 且 呈 現 劑 量 依 賴 性 ， 以 200 ppm效果最

Range Test)，以顯著水準α = 0.05比較其差異 佳。
之顯著性。 為證實由於猴頭菌固態發酵所造成產物之
水和乙醇萃取物對斑馬魚胚胎腦細胞的保護和
結果與討論 修護效果，故亦以水或乙醇萃取未發酵的大豆
薏 仁 基 質 ， 以 配 製 成 200 ppm之 熱 水 萃 取物及
為探討猴頭菌固態發酵大豆薏仁混合產物 乙醇萃取物，予以浸泡斑馬魚胚胎，測試其對
的熱水萃取物(HEWE)與乙醇萃取物(HEEE)是否 1 %乙 醇 損 傷 斑 馬 魚 胚 胎 腦 細 胞 保 護 及 修 復 作
具有斑馬魚胚胎腦細胞保護的效果，並找出最 用的影響(圖三)，結果顯示未經發酵之純基
適合的濃度，故圖一、圖二分別為先以不同濃 質萃取液並無保護及修復斑馬魚胚胎腦細胞
度(50、100及200 ppm)猴頭菌固態發酵產物之 之 效 果 ， 因 為 其 與 1 %乙 醇 損 傷 組 皆 無 顯 著 性
熱水萃取物及乙醇萃取液浸泡斑馬魚的胚胎以 差異，故很明確知道大豆與薏仁需經猴頭菌固
預先保護胚胎24小時後，然後再將斑馬魚的胚 態發酵後才具有此斑馬魚胚胎腦細胞保護的效
胎 以 1 %乙 醇 浸 泡 2 4 小 時 以 進 行 損 傷 ， 則 未 先 果。
保 護 的 斑 馬 魚 的 胚 胎 當 浸 泡 1 %乙 醇 會 損 傷 其 圖 四 為 200 ppm猴 頭 菌 固 態 發 酵 產 物 及 猴
腦部細胞，使其螢光亮點顯著性增加，而先浸 頭菇子實體之熱水及乙醇萃取物對斑馬魚胚胎
泡50及100 ppm水及乙醇萃取物比起1%酒精損 乙 醇 損 傷 之 保 護 影 響 ， 結 果 顯 示 200 ppm的猴
傷組的腦細胞死亡數量有些稍微下降之趨勢， 頭菌固態發酵大豆薏仁產物之乙醇萃取液效果
且兩個劑量無 顯 著 差 異 ， 以 浸 泡 在 200 ppm水 最好，其死亡細胞的數目與控制組已無顯著差
及乙醇萃取物對斑馬魚胚胎腦細胞的保護效果 異 ， 且 200 ppm猴 頭 菌 固 態 發 酵 大 豆 薏仁產物
最 佳 ， 其 可 使 腦 細 胞 不 受 後 來 浸 泡 1 %乙 醇 而 之熱水萃取物顯著較猴頭菇子實體之熱水萃取
損傷，且已和控制組無明顯差異，此即證實猴 物及乙醇萃取物效果佳。由於此次的猴頭菌固
頭菌固態發酵大豆薏仁混合產物的水萃取物和 態發酵產物由於採用大豆和薏仁混合基質，充
乙醇萃取物也和猴頭菌固態發酵小麥產物乙醇 分提供碳源和氮源，可使固態發酵製程由原先
萃 取 物 (36) 一 樣 具 有 保 護 斑 馬 魚 胚 胎 腦 細 胞 之 發酵35天的產物，可縮短到只發酵14天即長滿

30
a

25
b
Number of died cells

20 b

15

10 c c

0
Control 1% EtOH 50 ppm HEWE 100 ppm HEWE 200 ppm HEWE
+1% EtOH +1% EtOH +1% EtOH

圖一　不同濃度之猴頭菌固態發酵大豆薏仁混合產物水萃取物對於1%乙醇損傷斑馬魚胚胎腦細胞之保護影響
 ffect of different concentration of water extracts from Hericium erinaceus solid-state fermented adlay and soybean
Fig. 1. E
mix products (HEWE) on the protection of brain cells of zebrafish embryo impaired by 1% ethanol.
* Data are expressed as mean ± S.D. (n = 6).
** a-c Means in the number of died cells with different letters are significantly different (p < 0.05).
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25

a
20
b
Number of died cells

b
15

10
c c

0
Control 1% EtOH 50 ppm HEEE 100 ppm HEEE 200 ppm HEEE
+1% EtOH +1% EtOH +1% EtOH

圖二　不同濃度之猴頭菌固態發酵大豆薏仁混合產物乙醇萃取物對於1%乙醇損傷斑馬魚胚胎腦細胞之保護影響
Fig. 2. E ffect of different concentration of ethanol extracts from Hericium erinaceus solid-state fermented adlay and
soybean mix products (HEEE) on the protection of brain cells of zebrafish embryo impaired by 1% ethanol.
* Data are expressed as mean ± S.D. (n = 6).
** a-c Means in the number of died cells with different letters are significantly different (p < 0.05).

40

35 b y y y
b b
30
Number of died cells

25

20

15

10
ax
5

0
H
l

EE
H
H

H
ro

W
O

O
O

O
nt

pm
Et

Et
Et

Et

pm
Co

1%

0p
1%
1%

1%

0p

20
20
+

+
E

+
EE

+
W

H
H
pm

O
pm

Et
Et
0p
0p

1%
1%
20
20

圖三　200 ppm未發酵大豆薏仁混合基質之水萃取物及乙醇萃取物對1%乙醇損傷斑馬魚胚胎腦細胞的之保護及修復
作用
 ffect of 200 ppm water extract (WE) and ethanol extract (EE) from unfermented adlay and soybean mix medium on
Fig. 3. E
the protection and repair brain cells of zebrafish embryo impaired by 1% ethanol.
* Data are expressed as mean ± S.D. (n = 8).
** a-b Means in the number of died cells vs control with different letters are significantly different (p < 0.05).
x-y
Means in the number of died cells vs control with different letters are significantly different (p < 0.05).
 猴頭菌固態發酵產物之萃取物對斑馬魚胚胎腦細胞保護及修復之效果 103

18
e
16 d

14
Number of died cells

12 c

10

8
b
ab
6

4 a

0
Control 1% EtOH 200 ppm HEWE 200 ppm HEEE 200 ppm FBWE 200 ppm FBEE
+ 1% EtOH + 1% EtOH + 1% EtOH + 1% EtOH

圖四　200 ppm猴頭菌固態發酵大豆薏仁混合產物及猴頭菇子實體之水萃取物及乙醇萃取物對1%乙醇損傷斑馬魚胚
胎腦細胞之保護作用
 ffect of 200 ppm water and ethanol extracts from Hericium erinaceus solid-state fermented adlay and soybean mix
Fig. 4. E
products and fruiting body on the protection of brain cells of zebrafish embryo impaired by 1% ethanol.
* Data are expressed as mean ± S.D. (n = 8).
** a-e Means in cell died values with different letters are significantly different (p < 0.05).
*** H  EWE: water extract from Hericium erinaceus solid-state fermented products, HEEE: ethanol extract from
Hericium erinaceus solid-state fermented products, FBWE: water extract from Hericium erinaceus fruiting body,
FBEE: ethanol extract from Hericium erinaceus fruiting body.

菌絲，且此次猴頭菌固態發酵大豆薏仁混合產 即 置 換 浸 泡 液 為 含 有 200 ppm的 猴 頭 菇 或猴頭

物的水萃取物中含有65.18%粗多醣，且其乙醇 菌固態發酵產物之熱水萃取物和乙醇萃取液，
萃取物中含有10.85%粗三萜，故其粗多醣和粗 浸泡20 hr，即進行螢光染色觀察斑馬魚腦細胞
三萜含量分別為猴頭菇子實體的6.87倍和3.97 的 死 亡 數 目 。 由 圖 五 是 200 ppm猴 頭 菌固態發
倍(表一)，故此可能造成猴頭菇子實體熱水和 酵產物及猴頭菇子實體之熱水及乙醇萃取物對
乙醇萃取物對斑馬魚胚胎腦細胞之保護效果較 斑馬魚胚胎腦神經細胞的修復作用，結果顯示
差。而不論水和乙醇萃取猴頭菌固態發酵產物 與保護作用一樣，不論是猴頭菇或猴頭菌固態
皆 可 保 護 斑 馬 魚 胚 胎 腦 細 胞 免 於 被 1 %乙 醇 損 發酵大豆薏仁混合產物之水及乙醇萃取物都能
傷，使死亡腦細胞數目顯著減少。 減 少 1 %乙 醇 所 造 成 斑 馬 魚 的 腦 細 胞 死 亡 的 數
參考何 (36)的神經修護實驗結果中是將發育 目，即有腦細胞的修復效果，且猴頭菌固態發
24 hr斑馬魚胚胎，先浸泡於1%乙醇中4 hr，立 酵產物萃取物之效果比猴頭菇子實體為佳，此

表一　猴頭菌固態發酵大豆薏仁混合產物及子實體之水或乙醇萃取物中粗多醣和粗三萜的含量
Table 1. Crude polysaccharide and triterpenoids contents in water or ethanol extracts from
Hericium erinaceus solid-state fermented soybean and adlay mix products and fruiting body
Hericium erinaceus Solvent Crude polysaccharide in water extract (%) Crude triterpenoids in ethanol extract (%)
Water 9.78 -
Fruiting body
Ethanol - 2.73
Water 67.18 -
Fermented product
Ethanol - 10.85
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c
20
Number of died cells

15

10 b b
a
a
5 a

0
Control 1% EtOH 1% EtOH + 1% EtOH + 1% EtOH + 1% EtOH +
200 ppm HEWE 200 ppm HEEE 200 ppm FBWE 200 ppm FBEE

圖五　200 ppm猴頭菌固態發酵大豆薏仁混合產物及猴頭菇子實體之水萃取物及乙醇萃取物對1%乙醇損傷斑馬魚胚
胎腦細胞之修復作用
 ffect of 200 ppm water and ethanol extracts from Hericium erinaceus solid-state fermented adlay and soybean mix
Fig. 5. E
products and fruiting body on the repair of brain cells of zebrafish embryo impaired by 1% ethanol.
* Data are expressed as mean ± S.D. (n = 8).
** a-d Means in cell died values with different letters are significantly different (p < 0.05).
*** H  EWE: water extract from Hericium erinaceus solid-state fermented products, HEEE: ethanol extract from
Hericium erinaceus solid-state fermented products, FBWE: water extract from Hericium erinaceus fruiting body,
FBEE: ethanol extract from Hericium erinaceus fruiting body.

可能因為猴頭菌固態發酵產物的萃取物之多醣 大鼠缺血性中風之神經保護效果，結果顯示
和三萜類化合物較子實體多，且修復的效果已 在猴頭菌菌絲體萃取物濃度50及300 mg/kg時，
和未經1%乙醇損傷的控制組水平。 其可有效降低腦部總梗塞體積22及44%，而猴
林 (19) 曾 分 析 猴 頭 菌 液 態 發 酵 米 漿 及 猴 頭 頭素A可有效降低急性炎症細胞因子，包含IL-
菇的熱水萃取物具有抗氧化活性，且濃度為5 1β、IL-6與腫瘤壞死因子，而其抑制發炎主要
及50 μg/mL均可促使巨噬細胞增加NO、TNF-α、 是 減 少 iNOS的 誘 導 以 及 硝 基 酪 胺 酸 的 產 生 。
IL-4及IL-10的 生 成 量 ， 具 有 調 節 免 疫 之 效 Shimbo等人 (10) 以8 mg/kg之猴頭素A連續餵食三
果 。 何 (34) 所 作 之 猴 頭 菌 固 態 發 酵 3 5 天 之 小 麥 週齡之大鼠的仔鼠14天後，發現其腦中海馬迴
產物對斑馬魚胚胎保護及修復結果趨勢相同， 及藍斑核NGF含量顯著上升，而在Hazekawa等 (1)
皆較為猴頭菇子實體效果佳，而此次大豆薏仁 之 實 驗 中 也 發 現 ， 若 是 腦 中 NGF含 量 增 加則可
混合基質比起單獨小麥基質發酵時間的35天可 保護腦部缺血所造成之神經損傷。
縮短至14天，且有效成分含量也較高，而此次 猴頭菌子實體及菌絲含有之猴頭素可促使
的實驗更說明200 ppm猴 頭 菌 固 態 發 酵 大 豆 薏 星狀細胞或PC12增加NGF的合成 (6,7,10)，而NGF可
仁產物的熱水萃取物和乙醇萃取物皆可保護和 治療智力衰退、神經衰弱及抗阿茲海默症等疾
修護斑馬魚腦細胞的效果。 病 (26)。 何 等 人 (21) 以 猴 頭 菌 固 態 發 酵 小麥產物
Wang等人 (41) 與Zhang等人 (16) 分別測試出 之乙醇萃取物的加藥處理PC12細胞，其軸突比
中草藥穀精草及益智仁之乙醇萃取物對斑馬魚 起 控 制 組 有 明 顯 的 生 長 ， 且 NGF分 泌 量 皆高於
多巴胺神經具有保護效果，其機制可能為透過 控制組。
抗發炎及抗氧化，減少IL-1b及TNF-α等發炎因 根據上述文獻得知猴頭菌發酵產物具有抗
子的表現，並降低NO及iNOS的產生達到神經保 氧 化 性 及 可 促 使 軸 突 增 長 和 NGF生 成 ， 進而達
護之效果。Lee等人 (23) 探討猴頭菌菌絲體萃取 到保護及修復神經細胞的效果。而此次研究是
物及其分離出來之二萜類化合物猴頭素A對於 以大豆薏仁作為猴頭菌固態發酵混合基質，不
 猴頭菌固態發酵產物之萃取物對斑馬魚胚胎腦細胞保護及修復之效果
只可以提早收成於14天收成，且水萃取物和乙
醇 萃 取 物 對 於 1 %乙 醇 所 造 成 的 斑 馬 魚 胚 胎 損
傷，均具有良好的腦細胞保護和修護效果。
結　　　　　論
針對斑馬魚胚胎浸泡在50、100和200 ppm
的猴頭菌固態發酵大豆薏仁混合產物之水萃取
物及乙醇萃取物，隨著濃度增加，其保護斑馬
魚 胚 胎 被 1 %乙 醇 所 造 成 之 腦 細 胞 損 傷 效 果 越
好，以在200 ppm時 達 到 最 好 之 保 護 效 果 。 且
以猴頭菌固態發酵大豆薏仁混合產物200 ppm
之熱水取萃物或乙醇萃取物皆能夠顯著保護及
修 復 1 %乙 醇 所 造 成 斑 馬 魚 胚 胎 腦 細 胞 損 傷 ，
且顯著比子實體萃取物效果佳。
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