‫الكشف عن مكونات مزيج من األحماض األمينية بطريقة الكروماتوغرافيا الورقية‬

‫مقدمة‪ :‬هي عبارة عن مركبات عضوية تحتوي على وظيفتين ( حمضية و آمينية) ‪.‬‬ ‫‪-1‬‬
‫الهدف‪:‬‬ ‫‪-2‬‬
‫يكشف على األحماض الأمينية في مزيج بالفصل الكروماتوغرافي‪.‬‬
‫المبدأ‪:‬‬ ‫‪-3‬‬
‫هي تقنية مستعملة بكثرة من أجل فصل األحماض األمينية باالعتماد على اختالف هجرة‬ ‫‪‬‬
‫المكونات بين طور ثابت هو الورق و طور متحرك عبارة عادة عن مزيج من المذيبات‬
‫العضوية‬
‫يوضع المزيج المراد فصله على الورق الكروماتوغرافي ( ورق واتمان او ورق السيليلوز)‬ ‫‪‬‬
‫ثم يغمس طرفه في المذيب بعد مدة يصعد المذيب و يجرف معه مكونات الخليط لتنتقل على‬
‫ماسافات مختلفة حسب نوع كل مكون و قابليته للذوبان في المذيب المستعمل‪ .‬فيكون لكل‬
‫حمض أميني معامل سريان خاص به نظرا للمسافة التي يقطعها خالل الهجرة‪.‬‬

‫‪l‬‬ ‫‪ : Rf -‬معامل السريان‬

‫‪R =f‬‬ ‫عالقة معامل السريان‪:‬‬
‫الحمض‬
‫‪d‬‬ ‫‪ : l -‬المسافة التي قطعها‬
‫اآلميني‬
‫‪ : d -‬المسافة التي يقطعها المذيب‬
‫‪ -4‬الوسائل و المواد‪:‬‬
‫‪ ‬أنابيب شعرية أو أنابيب باستور‬
‫‪ ‬وعاء الفصل الكروماتوغرافي‬
‫‪ ‬مجفف الشعر‬
‫‪ ‬ورق الترشيح‬
‫‪ ‬مذيب مساعد على الهجرة يتكون من‪:‬‬
‫‪70 -‬ملل بوتانول‬
‫‪ 18 -‬ملل حمض الخل الثلجي‬
‫‪12 -‬ملل ماء مقطر‬
‫* محلول العينة‬
‫* محاليل األحماض األمينية الشاهدة المشبعة في الماء المقطر( أالنين ‪،‬برولين ‪،‬لوسين ‪)...‬‬
‫مالحظة ‪:‬يتم تحضير محاليل األحماض األمينية بكميات قليلة جدا كما يمكن االحتفاظ بها في‬
‫الثالجة‬
‫الكاشف‪ :‬نينهيدرين ‪0.1‬غ وماء مقطر ‪10‬ملل‬ ‫‪‬‬
‫‪0‬‬
‫يحضر حديثا ويحفظ في قارورة زجاجية ملونة في درجة ‪4‬م‬
‫خطوات العمل‪:‬‬ ‫‪-5‬‬
‫وضع المذيب داخل وعاء الفصل يكون قبل ‪ 24‬ساعة من بداية التجربة وأن ال يكون مستوى‬ ‫‪‬‬
‫المذيب أعلى من الخط المرسوم على الورقة‬
‫قطع الورقة بعرض أقل من عرض وعاء الفصل‬ ‫‪‬‬
‫رسم خط في أسفل الصفيحة بقلم الرصاص يبعد عن الحافة بـ ‪2‬سم (التستعمل قلم الحبر)‬ ‫‪‬‬
‫أخذ محاليل األحماض األمينية الشاهدة و محلول العينة بأنابيب شعرية مختلفة‬ ‫‪‬‬
 ‫وضع قطرات المحاليل الشاهدة والعينة في أماكنها المخصصة تفصلها مسافات محددة على‬ ‫‪‬‬
‫خط البداية المرسوم بقلم الرصاص‬
‫جفف القطرة بعد وضعها مباشرة حتى التتسع في كل مرة مع تكرار العملي لعدة مرات‬ ‫‪‬‬
‫ضع الورقة داخل وعاء الفصل وأتركها لمدة ساعة لحدوث الهجرة‬ ‫‪‬‬
‫تجفيف الورقة داخل المدخنة ورشها بالكاشف ثم تجفف بمجفف الشعر حتى ظهور بقع ملونة‬ ‫‪‬‬

‫الكرواتوغرافيا‬
‫النتائج‪:‬‬ ‫‪‬‬
‫‪ 4 . 3 . 2 . 1 -‬األحماض اآلمينية الشاهدة‬
‫خط‬ ‫المعلومة‪.‬‬
‫النهاية‬
‫‪ M -‬مزيج األحماض اآلمينية لمحلول العين‬
‫في المثالو بعد رش ورقة الكروماتوغرافيابكاشف النينهيدرين و‬
‫تجفيفها ظهرة بقع ملونة باألزرق البنفسجي و إتضح أن‬
‫المزيج ‪ M‬يحتوي على األحماض اآلمينية ‪. 3 . 2 . 1‬‬
‫خط البداية‬