(Si 13 – DH ) Câu 1.

Một thí nghiệm được thực hiện để tạo ra ADN tái tổ hợp giữa
plasmid X và đoạn ADN (Y). Plasmid X chứa gen Leu2 quy định tổng hợp Leucine, đoạn
ADN Y có chứa gen KanR- kháng kanamycin. Biểu đồ cấu trúc của X và Y được thể
hiện dưới đây:

Plasmid X và đoạn ADN (Y) được thêm vào hỗn hợp phản ứng có chứa các enzim
giới hạn Bglll (5'-A * GATCT-3 '), BamHI (5'-G * GATCC-3'). Sau đó, các sản phẩm
được chuyển sang hỗn hợp phản ứng mới có chứa ligase. Các phân tử ADN được biến
nạp vào vi khuẩn Z nhạy cảm với Kanamycin và không thể sống sót trong môi trường
không có Leucine. Sau đó nuôi cấy các vi khuẩn Z trong môi trường chứa Kanamycin và
không chứa Leucine để chọn lọc tế bào Z có chứa plasmid tái tổ hợp. Plasmid tái tổ hợp
sau đó đã được phân lập từ môi trường nuôi cấy. Các phát biểu sau đúng hay sai, giải
thích.
a. Nếu cắt plasmid sau khi chèn đoạn ADN Y bằng EcoRI sau đó đem điện di sẽ chỉ thu
được một băng điện di chứa các đoạn ADN kích thước 2800 bp.
b. Nếu trong hỗn hợp phản ứng, HindIII (5'-A * AGCTT-3 ') được sử dụng thay cho
BglII, vi khuẩn biến đổi có khả năng phát triển trên môi trường có chứa Kanamycin.
c. Đoạn ADN (Y) 500 bp có thể được loại bỏ khỏi plasmid tái tổ hợp bằng cách sử dụng
enzim giới hạn BglII.
Hướng dẫn trả lời:
a. Sai vì đoạn ADN thu được có kích thước lớn hơn 2800 bp do có chứa thêm đoạn Y
b. Sai do đoạn ADN (Y) không thể chèn vào plasmid
c. Sai do vị trí cắt giới hạn của enzim HglII đã bị thay đổi.