21/3/2015 Oomycetes

APS > Education > Introductory > Laboratory Exercises > Oomycetes Share
Introduction to
the Pathogen Oomycetes
Heffer Link, V., M.L. Powelson, and K.B. Johnson. 2002. Oomycetes. The Plant Health Instructor. DOI: 10.1094/PHI­I­2002­
Groups 0225­01
Updated 2012

Plant Disease Virginia Heffer Link1, Mary L. Powelson2, and Kenneth B. Johnson2. 

Lessons 1
Former graduate student, Oregon State University; currently Clinical Microbiology Institute, Wilsonville, OR and

Laboratory 2Department of Botany and Plant Pathology, Oregon State University.

Exercises
Cytology of Fungal
OBJECTIVES:
Infection To observe symptoms and signs of representative diseases caused by the
Synthesis and Oomycete pathogens.
Bioassay of a
Volatile Fungistatic
Agent To become familiar with vegetative and reproductive structures of the
Oomycetes, and their role in disease development.
Oomycetes
Screening for Active INTRODUCTION:
Ingredients in Plant
Extracts that Inhibit The Oomycetes, also known as water molds, are a large group of terrestrial and
the Growth of
Agrobacterium aquatic eukaryotic organisms. Although they superficially resemble fungi in
tumefaciens mycelial growth and mode of nutrition, molecular studies and distinct
Identification of morphological characteristics place them in the kingdom Chromalveolata
Powdery Mildew (phylum Heterokontophyta, the 'stramenopiles') with brown and golden algae and
Fungi
diatoms.
Following the
disease progression
of an ectotrophic
root­infecting fungus
Basic Microscopy­
An Important Skill
for Plant
Pathologists
Microscopía Básica
– Una Destreza
Importante para
Fitopatólogos ­
Español
Use of Selective
Media and Baiting
to Detect and
Phylogenetic tree illustrating the approximate relationship between oomycetes and
Quantify the fungi (For further detail, see "Why are Phytophthora and other Oomycota not true
Soilborne Plant Fungi?"
Pathogen
Thielaviopsis The terrestrial Oomycetes are primarily parasites of vascular plants, and include
basicola on Pansy several very important plant pathogens. Aphanomyces, in the order
Saprolegniales, causes a root rot of a wide range of hosts, including pea, snap
An Active Learning
Lab on a Selection bean, and sugar beet.
of Ascomycete
Reproductive
Structures and their
use in Disease
Diagnosis

Topics in Plant
Pathology
Case Studies
Hungry Planet:
Stories of Plant
Diseases
APSnet Feature Root rot of pea, caused by Aphanomyces euteiches. (Courtesy D. Hagedorn)

Articles The order Peronosporales contains three families of plant pathogens. In the

http://www.apsnet.org/edcenter/intropp/LabExercises/Pages/Oomycetes.aspx 1/7
21/3/2015 Oomycetes

Resource Guide family Peronosporaceae, Plasmopara, Peronospora, Pseudoperonospora,
Sclerospora, and Bremia are obligate parasites that cause serious foliar diseases
known as downy mildews on many host plants such as grape, broccoli, onion,
cucurbits, sorghum, and lettuce.

Broccoli leaf with signs of downy mildew, caused by Peronospora
parasitica.(Courtesy G.A. Payne)

The family Pythiaceae contains obligate and nonobligate parasites, and includes
the important pathogen genera Pythium and Phytophthora. Pythium species
cause a variety of diseases including root rots of numerous plant species,
Pythium blight of turf, and damping­off, which involves seed rot and pre­ and
post­emergence seedling death. Phytophthora species cause late blight of potato
and tomato, foliar blights on peppers and cucurbits, and root or stem rots of
many plant species. Phytophthora ramorum is a newly identified foliar pathogen
that causes a disease called sudden oak death (also known as ramorum blight)
on many trees and shrubs, and is a serious threat to forests and nurseries.
Lessons on several diseases caused by oomycetes are available.

Damping­off of bedding plant seedlings Conifer seedlings on the left are stunted and
due to Pythium. (Courtesy M.Daughtrey, yellowed due to Phytophthora root rot.
copyright­free) (Courtesy P.B. Hamm)

Symptoms and signs of late blight, caused by Advanced symptoms of sudden oak death in
Phytophthora infestans, on a potato leaf. tanoak caused by Phytophthora ramorum
(Courtesy M. Powelson) (Courtesy E. Hansen)
The family Albuginaceae includes Albugo, an obligate parasite that produces a
generally mild disease called white rust (not a true rust) on the stems, leaves,
and fruit of cruciferous plants such as radish, horseradish, and several weed
species.

White rust on leaf of cruciferous plant, caused by Albugo candida.
(Courtesy P.A. Williams, copyright­free)
Although Oomycetes have previously been referred to as "lower fungi," they
http://www.apsnet.org/edcenter/intropp/LabExercises/Pages/Oomycetes.aspx 2/7
21/3/2015 Oomycetes

differ from fungi in several features. Oomycete cell walls contain cellulose, beta
glucans, and the amino acid hydroxyproline, but do not contain chitin, which
occurs in the cell walls of true fungi. The vegetative state of Oomycetes is
diploid, whereas true fungi are haploid or dikaryotic. Oomycetes produce hyphae
that are nonseptate (coenocytic), i.e. lacking in cross walls.

Asexual reproduction occurs in most Oomycetes by the formation of a structure
called a sporangium (pl. sporangia) that arises on a specialized hypha termed a
sporangiophore. Sporangia differ among various Oomycetes pathogens with
respect to the shape of the sporangium, its mode of germination, the location of
sporangia with respect to the host tissue, and the structure of the
sporangiophores. In Aphanomyces, sporangia are filamentous and resemble
vegetative hyphae. In Peronospora and other genera causing downy mildews,
sporangiophores are branched and tree­like, with a single sporangium at the tip
of each branch, and are often found emerging from the stomates.

Sporangia and sporangiophore of Peronospora parasitica, causal
agent of downy mildew of cabbage. (Courtesy G.A. Payne)
Sporangial shape in Pythium ranges from filamentous in some species to round
in other species. Sporangia of Phytophthora species are often lemon­shaped.

Lemon­shaped sporangia  of Phytophthora megasperma. (Courtesy
F.A. Gray)
In Albugo, an unbranched sporangiophore produces a chain of sporangia.
Clusters of sporangia beneath the plant epidermis form blisters that rupture as
sporangia are released.

Sporangia of Albugo candida are produced on short sporangiophores
beneath the epidermis of a mustard leaf. (Courtesy M.F. Brown and
H.G. Brotzman)

Two mechanisms for germination of sporangia are known. The type of
mechanism is often species­specific; however, some species can germinate by
either mechanism depending on temperature or moisture conditions. In many of
the foliar pathogens (e.g. Peronospora), sporangia germinate directly on the
surface of a susceptible plant by the formation of a germ tube. A sporangium
that germinates in this way is often referred to as a spore or conidium. Wind
dispersion of sporangia of foliar pathogens is common.

Direct germination of a sporangium by germ tube in Phytophthora
infestans. (Courtesy H.D. Thurston)

http://www.apsnet.org/edcenter/intropp/LabExercises/Pages/Oomycetes.aspx 3/7
21/3/2015 Oomycetes

In most of the soil­ and water­inhabiting genera, sporangia germinate indirectly
by producing zoospores, which are asexual spores that are motile by means of
two dissimilar flagella. The presence of a fibrous, anteriorly directed "tinsel"
flagellum with hairs and a posteriorly directed "whiplash" flagellum also
differentiates oomycetes from fungi, and supports their classification in the
Kingdom Stramenopila.

In Aphanomyces and species of Phytophthora, differentiation of zoospores
occurs in the sporangium. In contrast, in many Pythium species, the sporangium
produces a short tube to which is connected a secondary structure referred to as
a vesicle. Zoospores are partially differentiated in the sporangium, and
transferred through the tube into the vesicle for final development and release.

Zoospores are cleaved in sporangia borne at
terminal ends of hyphae of Aphanomyces
euteiches. (Courtesy M.F. Heimann,
copyright­free)
Zoospores being released from a
sporangium of Phytophthora. (Used
by permission of F.W. Schwenk,
Kansas State University)

Pythium undulatum, with round sporangia and
thin vesicle surrounding zoospores just prior
to release. (Courtesy P.B. Hamm)

Sporangia of some species are capable of germinating either by direct germ tube
formation or indirectly by zoospore formation. The type of germination is
influenced most strongly by temperature; for example, in Phytophthora infestans
(the cause of late blight), cooler temperatures favor the formation of zoospores.
For some soil­inhabiting species (e.g. Phytophthora cryptogea), the type of
sporangial germination is also influenced by soil moisture; in general, very wet or
saturated soil conditions induce zoospore formation, whereas slightly drier
conditions favor direct germination.

Dispersion of zoospores occurs as they swim in water through soil pores or on
the soil surface. They are often attracted by sugars and amino acids exuded by
plant roots. Zoospores also can be dispersed passively in flowing water over
longer distances, contaminating streams, canals, and ponds used for irrigation
water. On susceptible plant surfaces, zoospores encyst and then germinate by
producing a germ tube.

Sexual reproduction in Oomycetes occurs between two dissimilar gametangia: a
large round oogonium containing one to several eggs, and a smaller
antheridium that fertilizes the oogonium. If the antheridium is located at the side
of the oogonium, the arrangement is termed paragynous. In an amphigynous
arrangement, the oogonium grows through the antheridium, which remains as a
collar at its base.

http://www.apsnet.org/edcenter/intropp/LabExercises/Pages/Oomycetes.aspx 4/7
21/3/2015 Oomycetes

Paragynous arrangement of oogonium and Amphigynous arrangement of oogonium and
antheridia in Pythium. (Courtesy P.B. Hamm) antheridium in Phytophthora cambivora.
(arrows indicate antheridia) (Courtesy P.B. Hamm) (arrows indicate
antheridia)

In homothallic species, fertilization can occur in a single strain. In heterothallic
species, two strains of opposite mating types are required for fertilization. In both
homothallic and heterothallic species, fertilization results in a thick­walled zygote
called an oospore. Oospores function as resting spores. They are produced in
infected plant tissue, and are released into soil as the plant tissue degrades.
They germinate either directly by a germ tube with or without a sporangium on
the end, or indirectly by the formation of a vesicle with zoospores. As with
sporangia, the type of germination is species and environment dependent.

Mature oospores of Aphanomyces within Disease cycle of Phytophthora cactorum. (Courtesy Jennifer Parke)
an infected root. (Courtesy Jennifer Parke) Click image for an enlarged view.

MATERIALS
Fresh specimens of downy mildew, late blight or other foliar blights,
damping­off, and white rust, labeled with disease name and pathogen
genus
Grass leaves inoculated with Pythium spp.
Dissecting microscopes
Compound microscopes
Razor blades
Lactophenol cotton blue stain
Clear Scotch tape (single­ or double­sided)
Microscope slides
Coverslips
Cultures and/or baits of Oomycetes showing sexual and asexual
structures
Prepared microscope slides (Plasmopara, Peronospora, Albugo)
Pea or alfalfa seedlings
Aqueous suspension of zoospores of Aphanomyces or Pythium

CLICK HERE FOR INSTRUCTOR'S NOTES

PROCEDURES
A. Examination of fresh diseased material for symptoms of disease.

Examine disease specimens macroscopically. Record the disease
name and pathogen genus on the following chart. Describe the
symptoms you observe. Which physiological function(s) of the plant
are most likely impaired by the disease?

B. Observation of fresh diseased material for signs of disease.

1. When foliar (disease) symptoms of late blight or downy mildew are
present, examine diseased leaf tissue with a dissecting microscope to
locate areas of sporulation (production of sporangia). Use the Scotch

http://www.apsnet.org/edcenter/intropp/LabExercises/Pages/Oomycetes.aspx 5/7
21/3/2015 Oomycetes

tape technique to make a spore mount. Touch the sticky side of a
piece of clear Scotch tape to the sporulating area. Apply the tape,
sticky­side down, to a drop of water on a microscope slide. Single­
sided tape functions as its own coverslip; if double­stick tape is used,
place a coverslip on top of it. Examine first under low, then under high
power using a compound microscope. Observe the shape of the
sporangia and their arrangement on the sporangiophore. Note the
characteristic branching patterns of sporangiophores associated with
different genera. Note also the nonseptate (coenocytic) hyphae
typical of Oomycetes.

2. Use the lactophenol cotton blue stain to observe Pythium­
infected grass leaves for oospores. With a razor blade slice thin
sections of plant tissue from the advancing margin of a lesion. Place
the tissue in a drop of lactophenol cotton blue on a microscope slide.
Apply a coverslip, and examine first under low, then under high power
using a compound microscope. Look for round, thick­walled oospores
within the cells of the leaf tissue.

3. Record and diagram your observations on the chart.

C. Observation of reproductive structures in prepared cultures and slides.

1. Examine prepared cultures of Oomycetes under a dissecting
microscope for oogonia, antheridia, and oospores. Note the location
of the antheridium in relation to the oogonium. How do oospores differ
from oogonia?

 2. Examine prepared slides using a compound microscope. Look for
sporangia and sporangiophores.

a. Plasmopara viticola, cause of downy mildew of grape

b. Albugo candida, cause of white rust of crucifers

c. Peronospora parasitica, cause of downy mildew of broccoli

D. Observation of zoospores and their characteristics.

1. Zoospore motility: Sporangia in an aqueous preparation have been
placed in water, chilled, and then warmed to induce the formation of
motile zoospores. Observe the release of zoospores with a dissecting
microscope or videoscope.

2. Attraction of zoospores to plant roots: Place the roots of a pea or
alfalfa seedling into an aqueous suspension of Aphanomyces or
Pythium zoospores in a petri dish, and let stand for 5­10 minutes.
Observe the suspension with a dissecting microscope or videoscope
for the accumulation of zoospores around the root zone of elongation.

 LAB SHEETS
[TO BE PRINTED AND FILLED OUT BY STUDENTS]

OBSERVATIONS
A. Disease specimens: Record and diagram your observations of diseased plants.   Click here
for an editable and printable copy of the PROCEDURES, OBSERVATIONS, and CONCLUSIONS
and QUESTIONS sections.

B. Diagram your observations from the prepared cultures and slides:

1. Sporangia and zoospores (include vesicles if observed)

2. Oogonia and antheridia

3. Oospores

http://www.apsnet.org/edcenter/intropp/LabExercises/Pages/Oomycetes.aspx 6/7
21/3/2015 Oomycetes
C. 1. Record your observations of zoospores:

a. as they were released from sporangia or vesicles.

b. as they reacted to plant roots in water.

C. 2. What characteristics of zoospores did you observe?

CONCLUSIONS and QUESTIONS
1.     a. How may environment play a role in the type of germination
        of sporangia?

b. How does the type of sporangial germination relate to the mechanism by which
spores are dispersed in the environment?

2. What fungal structure differentiates species of Pythium from species of Phytophthora? What is
the location of this structure and its role in the Pythium life cycle?

3. How can wet, poorly drained soil contribute to root rots caused by Pythium and Phytophthora?

4. In the U.S. and Europe, sexual reproduction in Phytophthora infestans, the cause of late blight
of potato and tomato, was for many years absent because only one mating type was present in the
pathogen population. Recently, however, both mating types have been found. If you suspected that
both mating types were present in your potato field:

a. Where would you look to determine if sexual reproduction was occurring?

b. What fungal structure would be evidence of sexual reproduction?

© 2015 The American Phytopathological Society. All rights reserved.  |  Contact Us ­ Report a Bad Link

http://www.apsnet.org/edcenter/intropp/LabExercises/Pages/Oomycetes.aspx 7/7