Machine Translated by Google

Lihat diskusi, statistik, dan profil penulis untuk publikasi ini di: https://www.researchgate.net/publication/32039552

Teknik Inokulasi dalam Uji Tantangan Mikrobiologi

Metode · November 2014

DOI: 10.13140, / RG.2.2.17433.93286

KUTIPAN BACA

0 12,331

1 penulis:

Grzegorz Rachon
Campden BRI - Nutfield

16 PUBLIKASI 91 KUTIPAN

LIHAT PROFIL

Beberapa penulis publikasi ini juga mengerjakan proyek terkait ini:

Askospora ragi Lihat proyek

Semua konten yang mengikuti halaman ini diunggah oleh Grzegorz Rachon pada 13 November 2017.

Pengguna telah meminta peningkatan file yang diunduh.

Machine Translated by Google

Teknik Inokulasi dalam Uji Tantangan Mikrobiologi

Grzegorz Rachon MSc

Validasi inokulasi Dilema

utama saat melakukan uji tantangan mikrobiologi, adalah pemilihan dan validasi metode inokulasi. Strain bakteri
yang dipilih untuk uji tantang harus selalu dikaitkan dengan produk yang diuji, idealnya dengan menjadi isolat
alami, misalnya dari wabah sebelumnya atau strain yang diisolasi dari produk serupa, yang diproses secara
serupa. Persiapan inokulum bakteri juga sangat penting; strain harus disiapkan dalam kondisi yang dipilih
dengan cermat sehingga tekanan saat memasuki lingkungan baru, diminimalkan. Metode inokulasi harus selalu
divalidasi dan tidak boleh mengubah struktur produk atau karakteristik kimia atau fisik, misalnya aktivitas air, pH,
gas dalam kemasan. dll. Untuk mencapai inokulasi yang memuaskan, banyak metode telah dikembangkan dan
digunakan secara umum: inokulasi langsung, menggunakan mikro-pipet umumnya digunakan untuk sampel cair
di mana bakteri terdispersi dalam produk yang diuji: teknik penyemprotan, penyebaran bakteri pada permukaan
produk dapat digunakan: MAP atau produk kemasan vakum, biasanya diinokulasi menggunakan jarum suntik
dan jarum suntik melalui pita inokulasi atau menginokulasi kemasan terbuka dan pengemasan ulang setelah
inokulasi: produk dengan aktivitas air rendah, di mana penambahan fase cair tidak dapat diterima, diinokulasi
menggunakan manik-manik kaca yang dilapisi biofilm, atau pasir silikon, kapur atau debu produk dapat
digunakan sebagai pembawa bakteri; metode terakhir ini sering digunakan untuk inokulasi bubuk, biji dan biji
kacang, mentransfer bakteri ke dalam produk atau menyebarkannya pada permukaan produk. Jumlah dan
distribusi sel yang diinokulasi harus ditentukan sebelum melanjutkan dengan uji tantang.

Tingkat Inokulasi Tingkat

inokulasi juga sangat penting; terlalu tinggi jumlah bakteri yang ditambahkan ke produk dapat mengganggu mikroflora
alami produk yang diuji dan oleh karena itu tidak dapat digunakan, dan tingkat awal yang terlalu rendah mungkin tidak
dapat bertahan dari fase adaptasi setelah inokulasi. Dengan demikian, jumlah sel yang layak dalam koktail mikroba yang
dicuci dan siap digunakan sangat penting dan harus diperoleh sebelum inokulasi. Karena koktail sel yang digunakan
untuk uji tantang harus selalu dilakukan pada hari inokulasi, pencacahan menggunakan metode cepat alternatif, sangat
penting. Hanya satu pengecualian dari aturan ini yang dapat diterima yang mengacu pada spora bakteri yang cukup
stabil bila disimpan dalam kondisi dingin dan dapat disiapkan dan dihitung beberapa hari sebelum inokulasi, menggunakan
teknik penghitungan standar yang layak. Pencacahan cepat mikroskopis dari ragi atau spora kapang dapat dilakukan
dengan menggunakan ruang hitung (ruang Fuchs-Rosenthal) dan digunakan secara luas dan selalu memberikan hasil
yang memuaskan dibandingkan dengan hasil yang diperoleh dari teknik penghitungan yang layak; hanya satu batasan
dari metode ini adalah ukuran mikroorganisme karena sel-sel kecil dapat dengan mudah terlewatkan selama penghitungan
dan berkontribusi pada kesalahan pembacaan yang besar. Untuk bakteri kecil (Salmonella, E.coli, Listeria, Lactobacillus,
dll.) pencacahan cepat sel menggunakan pengukuran kepadatan optik (OD) telah diperkenalkan dan digunakan di
Leatherhead setiap hari. Dalam metode ini Densitas Optik koktail dan pengencerannya diukur dan jumlah sel dihitung dari ku
Konsentrasi Sel (cfu/mL).

Densitas optik suspensi bakteri pada 350 nm

2.00E + 09

1.90E+09

1.80E+09

1.70E+09 y = 3E+08x 3 + 4E+08x 2 + 1E+09x + 1E+07 R² =

0,9998

1.60E+09

1.50E+09

1.40E+09

y = 1E+09x 4 - 2E + 09x 3 + 2E + 09x 2 + 6E + 08x + 3E + 07

1.30E+09
R² = 0,9997

1.20E+09

1.10E+09
Salmonella
1,00E + 09 E.coli

9.00E + 08
Staph
y = 3E+08x 2 + 5E+08x - 3E+06 R²
= 0,9997 kokus
8.00E + 08
Lactobacillus
7.0E + 08

6.00E + 08

y = 3E+08x 3 - 1E+08x 2 + 5E+08x + 282875

5.00E + 08 R² = 0,9995

4.00E + 08

3.00E + 08

2.00E + 08
y = 2E+08x 2 + 4E+07x + 2E+07 R²
= 0,9517
1.00E + 08

0,00E + 00
0.00 0,05 0,10 0.15 0,20 0,25 0,30 0.35 0,40 0,45 0,50 0,55 0,60 0,65 0,70 0,75 0,80 0,85 0,90 0,95 1.00 1.05 1.10 1.15 1.20

DARI

Jika Densitas Optik dibaca, jumlah sel dapat dibaca langsung dari grafik atau dengan perhitungan
sederhana dari persamaan kurva. Misalnya, persamaan untuk E.coli y = 1E+09x4 - 2E+09x3 +
2E+09x2 + 6E+08x + 3E+07 dapat diubah menjadi rumus Excel: y=1E+09*POWER(x,4)2E
+9*POWER(x,3)+2E+09*POWER(x,2)+6E+08*x+3E+07 dan jumlah sel akan dihitung secara
otomatis.

Untuk informasi lebih lanjut silahkan hubungi Grzegorz Rachon,

Email: grzechoo2@hotmail.com
Lihat statistik publikasi