UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICAS
CARRERA DE BIOQUÍMICA
CATEDRA: MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
TEMA: 2 12-03-21
DR: DR. MIGUEL ESTENSSORO
DEFINICION: Los bacilos grampositivos
formadores de esporas son de las especies de
Bacillus y Clostridium. Estos bacilos son
ubicuos y, debido a su capacidad para formar
esporas, pueden vivir en el ambiente por varios
años. Si bien las especies de Bacillus son
aerobias, las especies de Clostridium son
anaerobias.
Clostridium botulinum, que produce el
botulismo, con una parálisis flácida. Clostridium
tetani, que produce una hiperreflexia, al
contrario de Clostridium botulinum.
Ahora se hablará de Clostridium perfringens, es
un bacilo gram positivo, productor de esporas,
con característica de producir lo que se llama la
gangrena gaseosa, y la mionecrosis por
clostridios y se lo clasifica también dentro del
grupo de clostridium que produce infecciones
invasoras. El prototipo de este tipo de
infecciones, es el Clostridium perfringens, pero
pueden haber otros clostridium que se
relacionan con la gangrena gaseosa, y con el
clostridium perfringens, o pueden participar en
infecciones mixtas produciendo este tipo de
enfermedad.  perfringens
Este MO tiene bordes redondeados, la
característica del clostridium perfringens, es
que es más grueso que el clostridium tetani y el
botulinum y a veces las esporas no logran
alterar la morfología de este bacilo a diferencia
de los otros clostridium que si llegaba a alterar
la morfología, como en el clostridium  tetani que
adquiria la forma de un palillo de tambor.  en una potente neurotoxina, que produce
Clostridium perfringens y clostridium
relacionados producen infecciones invasoras:
Mionecrosis y Gangrena gaseosa
Bacilos Gram positivos
productores de esporas
Se ha visto que alrededor de 30 especies
diferentes de clostridios pueden producir estas
enfermedades. Pero normalmente es el
Clostridium perfringens en el 90% de los casos,
que producen estas patologías. Esto también
produce una enterotoxina que produce
intoxicaciones alimentarias, pero en una
frecuencia muy baja.
Este MO es muy toxigénico, produce gran
cantidad de toxinas, que tiene muchas
funciones, destruyen completamente el tejido.
Por ejemplo el avance de la gangrena que
puede llegar a la amputación por la destrucción
del tejido, ya que hay ausencia de músculo, si
no se retira el tejido muerto o gangrenado, la
persona puede sufrir una toxemia,  llegando a
fallecer.
estas toxinas se clasifican en dos grupos:
1. Toxinas mayores, producen más daño
se producen en mayor cantidad, estas
son: 
Toxina alfa: Produce hemólisis incompleta del
PAS
        Es positivo prueba de CAMP
reversa con S. agalactiaea
        Fosfolipasa C (se comporta como
una lecitinasa, esfingomielinasa)
        Produce: Citotoxicidad,
Necrosis y Hemólisis
Esta toxina alfa es considerada como el
principal factor de virulencia  del Clostridium
Toxina beta: Dos tipos B1 y B2, produce
necrosis hemorragica por produccion de poros
en la membrana celular.
Toxina epsilon: La célula bacteriana la
sintetiza dentro de la célula bacteriana  como
una pretoxina esta es activada por
desaminaciones y fosforilaciones y se convierte
edema cerebral.
Toxina iota: Produce citotoxicidad, diarrea en
mamíferos con tratamiento antibiótico
prolongado.
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1. Toxinas menores  mixta, entran cocos, bacilos gram negativos
Toxina delta: Letal hemolítica
Toxina Theta: Perfringolisina O (PFO) ,
responsable del halo de hemólisis, citolisina.
Toxina Kappa: Gelatinasa, colagenasa
letal, necrosante.Produce destrucción del
músculo.
Toxina lambda: Metaloproteasa, colagenasa.
Produce la invasión intersticial de tejidos.
Rompe el colágeno y se disemina el MO y se
va destruyendo la arquitectura del tejido
permitiendo su invasión.
 También hay otras toxinas adicionales:
Toxina gamma y eta
Toxina nu y nu
Sialidasas
Enterotoxina: Produce intoxicación
alimentaria, esta se produce en el intestino
grueso durante la esporulación del MO. Es
citotóxica porque altera la permeabilidad de la
membrana.
Dos sucesos: Se une a la membrana
celular. calcio dependiente y cambio en la
permeabilidad celular, Ca independiente,
produce muerte celular
PATOGENIA DE LA GANGRENA GASEOSA:
Este MO se puede infectar por fuente
endogena o exogena, endógena normalmente
es a nivel del colon, normalmente este MO vive
en el colon, y cuando hay una necrosis en el
colon o cuando hay un cáncer de colon este
MO puede empezar a invadir y producir
gangrena, incluso también la gangrena se
presenta en pacientes que tienen diabetes,
porque la circulación no  es buena, y
principalmente en los miembros más alejados
como ser los dedos de lo pies empiezan
gangrenar, donde finalmente se amputa los
dedos o el pie, siendo esta un complicación.  Y posteriormente avanza, por ejemplo una
En la exógena por ejemplo es por una herida,
se da un fractura expuesta, el MO invade y va
desarrollando la gangrena o algún corte o
herida puede dar una contaminación de los
tejidos por este MO, y normalmente esta
contaminación es por una flora microbiana
principalmente enterobacterias, y estas hacen
que baje el potencial de oxido reduccion porque
consumen todo el oxígeno en el lugar de la
infección y esto promueve que empiecen a
desarrollar estos bacilos, por lo tanto empiezan
a producir toxinas, principalmente toxina alfa,
lesionando tejidos vecinos, necrosis, edema y
gas.
Es un MO proteolítico, además es fermentativo
entonces produce gas CO2, aminas aromáticas
como la cadaverina, putrescina y esas
empiezan a quedarse atrapadas en los tejidos y
eso hace que el tejido se hinche, y al tocarlo o
apretarlo crepita como si fuera papa frita,
porque hay gas que está siendo atrapado en el
tejido, este gas contribuye a que no llegue riego
sanguíneo, y esto provoca que ya no llegue
oxígeno, de esta manera se establece un bajo
potencial redox, esto va va avanzando y
posteriormente va afectando mucho más, para
al final llegar a una afectación mayor, primero
localmente, posteriormente las toxinas pasan a
la sangre y producen una toxemia, y esto
conduce a la muerte, 
DATOS CLÍNICOS DE LA GANGRENA
GASEOSA
De curso rápidamente progresivo, con necrosis
muscular y grave toxicidad
sistémica,taquicardia y fiebre.
El periodo de incubación es de 1 a 4 días
Esta enfermedad es de comienzo brusco,
fuerte dolor en el lugar del trauma.
Progresa en minutos u horas, se observa
alrededor de la herida edematosa con palidez
marmórea que cambia a color bronce.
La virulencia del MO produce un exudado
marrón, serosanguinolento con un olor dulzón. 
herida limpia, y por el MO la herida comienza a
gangrenarse, denotando ampollas debido al
edema, tambíen inflamación, con coloración
oscura, Otros factores predisponentes son la
aterosclerosis, se llenan los vasos de grasas, y
no hay flujo sanguíneo se detiene, y esto
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determina que el MO pueda desarrollar en
tejidos que ya no son irrigados con sangre;
también el cáncer de colon y la diabetes por la
característica de los miembros que están
afectados, empezando la gangrena en las
partes más alejadas del cuerpo principalmente
los dedos del pie se empiezan a dar la
característica de necrosis y se presenta la
gangrena gaseosa.  hemólisis es característico para este MO, en
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
Esta es una enfermedad muy grave, no se
puede esperar tiempo, por ejemplo esperar de
24 a 48 horas puede ocasionar que el paciente
pierda el miembro o fallezca. Dada la gravedad
de la enfermedad se debe actuar rápidamente
en base al diagnóstico clínico, lo cual es
esencial.
El diagnóstico se puede hacer por métodos:
A) Bacteriológicos
B) Histopatológicos
C) Inmunológicos
Esto para determinar la terapia adecuada para
cada caso
Para el método bacteriológico, se toma la
muestra de la parte profunda de la herida 
Se Procesa inmediatamente o se debe
Sembrar en medio de transporte de Stuart o
Cary Blair y refrigerarlos inmediatamente y
siempre cuidando de que no se pongan en
contacto con el oxígeno, porque está bacterias
son anaerobias.
Para el Procesamiento:
Examen directo: En este se observa se observa
a los bacilos gram positivos característicos o se
puede hacer inmunofluorescencia directa que
es un método que es un método más
específico y la observación de la cápsula en
MO. Tomando en cuenta que hay una infección
mixta  superficie terráquea en suelo, aguas naturales,
Entonces con inmunofluorescencia directa se
observa: T. Gram, IFD, Coloración de cápsula.
Se observa presencia de infecciones mixtas.
CULTIVO:
Se cultiva la muestra en: Tioglicolato, Cook
Meet, Tarozzi. ANAEROBIOSIS.
Resiembra en PAS: Sistema Gas Pack,
Presencia de doble halo de hemólisis, no
motiles, fermentación de carbohidratos, CAMP
reversa, lecitinasa, leche tornasolada,
licuefacción de la gelatina.
Es importante recalcar que el doble halo de
condiciones de anaerobiosis de sistema Gas Pack → 
En los cultivos se pueden observar el doble
halo de hemólisis en la parte externa el halo de
hemólisis alfa, y en el interior el halo de
hemólisis beta, que es característico de C.
perfingrens. 
Dx. Serológico: Para determinar los
serotipos de bacterias 
Dx. Toxicologico: Para determinar tipo
de toxinas; alfa, beta, epsilon.Se realizan
pruebas en ratones, un ratón con
antitoxina, y un ratón sin nad, y a los dos
se les inyecta la toxina, y se observa si
ambos sobreviven o si uno sobrevive,
haciendo una comparación.
Dx. Génico: Para determinar el toxotipo
presente en la muestra.  
Intoxicación alimentaria:
Para el diagnóstico de este tipo de intoxicación
alimentaria se tiene que buscar al
microorganismo en materia fecal y alimento. En
H. Fecales, > a 10(6)  UFC/g  se considera
como positivo. El problema es que puede estar
como FMN (Flora microbiana normal)  de HF
(Hisopado faríngeo).
Por esto es mejor determinar el alimento.
Encontrar C. perfringens mayor a 10(5) UFC/g
del alimento es positivo.
Intoxicación por C. perfringens:
Es uno de los MO más difundidos por la
contenido intestinal y carne cruda de
mamíferos y aves. 
Se debe por menús a base de carne sometidos
a un tratamiento térmico defectuoso. Estos
casos son encontrados comúnmente en
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instituciones, hospitales, cafeterias y
establecimientos de restauración similares.
Contaminación  preferentemente de origen
fecal o en alimentos de origen animal como
carne asada y mantenida a temperatura
ambiente.
TRATAMIENTO
Se debe realizar un desbridamiento quirúrgico,
que significa (amputación de la parte afectada).
Posteriormente se administra antibióticos como
la penicilina, que evita la replicación del bacilo,
y detiene la producción de toxina, se debe
administrar también antitoxina polivalente, esto
para el tratamiento de la gangrena gaseosa.
Y para la intoxicación alimentaria, se debe dar
tratamiento sintomático, se refiere a la salida de
la toxina del organismo.
Intoxicación alimentaria: tenemos que agarrar y
damos un tratamiento sintomático (como la
toxina entra y se sale y bueno ya se acabó el
proceso infeccioso)
Prevención y control: debemos de desinfectar
adecuadamente las heridas es lo mas
importante evitar la infección) y posteriormente
dar tratamiento con antibiótico profiláctico.
Enterotoxinas con calcio dependiente?
La unión a las células es calcio dependiente y
posteriormente se da la producción de la toxina
que es calcio independiente.
La unión a la membrana celular es calcio
dependiente, así genera el cambio en la
permeabilidad de celular dando como resultado
una diarrea
Una mala manipulación de los alimentos, estos
se contaminan con las esporas de este
microrganismo te puede llevar a esto
CLOSTRIDIUM DIFFICILE LA COLITIS
PSEUDOMEMBRANOSA
El Clostridium difficile produce la colitis
pseudomembranosa y este es una enfermedad
que normalmente se da porque las personas
abusan de los antibióticos. Entonces
normalmente tiene un proceso diarreico o
tienen cualquier cosa y empiezan a tomar
antibióticos y estos antibióticos eliminan a la
flora microbiana normal y permiten que
proliferen el Clostridium difficile que es flora
microbiana normal no del colon.
Ósea se mantienen una población pequeña
porque las otras bacterias están impedimento
su proliferación. Así hay produciendo un
proceso de interferencia, las otras bacterias se
consumen los alimentos y no le permiten
crecer, pero si esas bacterias son eliminadas
por un tratamiento de antibiótico previo este
microorganismo empieza a proliferar y así
aumentado en número y como resultado te
produce la Colitis Pseudomembranosa.
Es una alteración severa que se presenta como
una inflamación aguda de la mucosa intestinal
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que está caracterizada por la presencia de

pseudomembranas o placas en el colon.

Afecta a las personas mayores de 65 años, en

especial a los hombres.

LA HISTORIA
Normalmente la historia es que los pacientes
consumieron principalmente clindamicina, otros
dicen que hasta la ampicilina y otros incluso
dicen que las quinolonas que la actualidad
están produciendo.

Ahora que es lo que pasa hay personas que

tienen diarrea toman ciprox, no les pasa nada
con las ciprox y se van por ejemplo a un
antibiótico mas fuerte amoxiclaburanico para
que este para que si limpia todo y permite que Estas normalmente son 2 toxinas la A
este microorganismo empiece a proliferar y (enterotóxica) y B (citotóxica)
produzca la enfermedad de la colitis.
Citototóxica en cultivos tisulares +/- ++++
Entero-inflamatoria ++++ +/-
Secresion intestinal ++++ +/-

La imagen por colonoscopia las

pseudomembranas, que son característicos de
esta enfermedad. Entonces es un doble efecto digamos de las 2,
se observa el daño a la mucosa como resultado
Dr. F. Tedesco en 1960 gastroenterólogo en el las células mueren y al morir las células,
Hospital de Barnes en St. Louis, Observo normalmente salen el líquido del edema de los
diarrea asociada al uso de clindamicina. vasos capilares, el líquido del edema cubre
Inestigacion: 200 pacientes uso de esto (sector 3) y forma las pseudomembranas
clindamicina, para tapar esas ulceras que se han generado y
40 pacientes con diarrea. posteriormente estos produce una inflamación
20 pacientes con colitis pseudomembranosa del colon, por el daña al tejido que se está
haciendo por las 2 toxina y como resultado se
da una colitis pseudomembranosa.
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Las pseudomembransa uno es normal y el otro
esta lleno de estas, y la 3ra ni que decir.
DIAGNOSTICO
Un método muy fiable para el diagnóstico
justamente es la colonoscopia, el diagnóstico
clínico tiene una sensibilidad 98% y
especificidad del 91% es bien difícil identificara
los microorganismos por bacteriología, se tiene
que tener un medio especifico.
Ya no se hace el método clínico, pero muchos
médicos aquí en la paz hacen la prueba de la
colonoscopia, y para esta se hace que eliminen
todo el contenido del intestino, posteriormente
te meten el colonoscopio por el ano, la
endoscopia es por la boca porque quieren ver
el estómago.
Ver por el ano y que tiene que observar la
presencia de estas pseudomembranas.
El cultivo mire tiene una sensibilidad del 97%,
el Elisa es inmediato, pero es muy caro y el
PCR normalmente tiene muchos limitantes por
las contaminaciones.
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
Ensayos citotoxicidad: en diversas líneas
celularesa partir de sepas aisladas en medios
selectivos o directamente en heces (mejora la
sensibilidad y la especificidad); muy sensible
pero lento y no disponible en la mayoría de los
laboratorios diagnóstico.
Tecnicas de EIA e Inmunocromomatografia:
para la detección de las toxinas A y B; es una
técnica rápida y fácil ejecución, buena
especificidad, pero sensibilidad entre el 66 y
96%
En cuanto al diagnóstico microbiológico, se
tiene que ver, los ensayos de citotoxicidad: que
tenemos que buscar principalmente a las dos
toxinas A y B que actúan en forma conjunta,
pueden hacer inmunofluorescencia,
inmunocromatográfia, también se puede hacer
PCR-TR pero para esto tenemos que agarrar y
aislar el microorganismo y posterior buscar los
genes.
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No se realizan las pruebas en heces porque
puedes encontrar a los microorganismos que
están presentes normalmente en heces no
tiene ninguna relación con este problema por
eso no se hace muy de rutina.
Lo que si se puede hacer es un cultivo,
posteriormente observar la producción de
toxinas por parte del microorganismo y tenerlo
normalmente en el cultivo; pero que es lo mejor
es realizar una colonoscopia.
Ahora si te piden cultivo, se utiliza un medio
que se llama “CCFA” es un medio que se llama
agar yema de huevo adicionado con
cicloserina, cefoxitina y fructosa.
1ro). a la muestra se le aplica un shock térmico
(es que la muestra antes de sembrarla, la
llevas por unos 10 minutos a la temperatura de
80 grados centígrados a esa temperatura
mueren la mayoría de las bacterias que no son
termo resistentes que no producen
normalmente esporas ej.: enterobacterias,
Estafilococos, estreptococos estos mueren no
resisten esa temperatura) terminado es shock
térmico posteriormente recién se siembra la
muestra.
Y para confirmar se debe saber que este
sacarolitico y proteolítico, además se le puede
identificar por aglutinación
TRATAMIENTO
Y este es el tratamiento: metronidazol
vancomicina. Los datos en una enfermedad
graves los leucocitos son mayor a 5000/Ul,
albumina menor a 3g/100 Ml, aumento de la
creatinina sérica mayor a 1.5 veces al valor
inicial.
De esta manera se diagnostica esta
enfermedad, pero hay un gastroenterólogo
especializado que hace la colonoscopia es lo
mejor.
Y esta colitis pseudomembranosa,
normalmente se caracteriza por una diarrea
que las personas hacen su tratamiento y todo
para una diarrea, pero esta sigue y no cede y
por cualquier cosa de coman siempre se hace
una diarrea , constipación de órganos y siente
que esta completamente inflamado , van al
médico, ojala piense que es una colitis
pseudomembranosa, de acuerdo a la historia
clínica del paciente a la anamnesis del paciente
y posteriosmente el método que más se está
empleando en la actualidad es el de la
colonoscopia.
Ahora uno piensa que esta enfermedad no es
muy común, pero si es muy común; por eso no
se debe utilizar los antibióticos así de forma
indiscriminada, mucho cuidado. Porque hay
personas de tomas y toman ampicilina,
amoxicilina, y de repente ya están con un
proceso de colitis pseudomembranosa y es
muy grave. No es una enfermedad para
tomarla a la ligera.
¿Medio de cultivo el agar yema de huevo?
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Se realiza un shock térmico, y posteriormente como sea, y después se le puede presentar

las simbras en el medio “CCFA” que contiene esta enfermedad.
agar, yema de huevo, adicionado con La colitis pseudomembranosa no se da como
cicloserina, cefoxitina y fructosa. Se le incuba una enfermedad infecciosa, el microorganismo
en anaerobiosis por el sistema GASPAK, y vive en tu colon pero no te produce
posteriormente se observa que tiene actividad enfermedad, te produce la enfermedad cuando
sacarolitica y proteolítica y se lo puede la flora microbiana acompañante de este
identificar y confirmar por aglutinación. microorganismo es eliminada y este comienza
Su aislamiento a nivel en medio de cultivo es a proliferarse y aumentar en número, y eso
bien difícil, porque hay mucho microorganismo hace que empiece a producir tus toxinas y
en el colon, pero si ya está con la colitis produzca daño a nivel del colon.
pseudomembranosa creo que si se puede Esta enfermedad no te contagias.
lograr algo. El problema es que tienes que ¿Estos microorganismos pueden adquirir
utilizar medios selectivos. resistencia?
Por tener a la cicloserina y cefoxitina son los Si, pero normalmente la vancomicina o el
antibióticos inhibidores sería un medio de metronidazol no son muy utilizados, es poco
cultivo de tipo selectivo. probables que la bacteria sea resistente a estos
antibióticos.
Un método exitosos para el tratamiento de
la colitis pseudomembranosa , si es
recurrente bo resistente era el trasplante
fecal por colonoscopia y ¿este tratamiento
se lleva acabo en nuestro medio?
Bueno tendríamos que preguntar a los
gastroenterólogos, que son los que
normalmente trata este tipo de enfermedad,
ahora el trasplante fecal por colonoscopia
(significa que tomas una muestra de heces y la
instaures directamente en el colon a través del
colonoscopio, para que se recupere la flora
microbiana normal) pero si ya se han formado
las pseudomembranas (el microorganismo
prolifera y empieza a producir las 2 toxinas A y
B, y como resultado se produce
necrosis/muerte del epitelio) ala morir el epitelio
empiezan a salir los leucocitos
polimorfonucleares, liquido del edema, empieza
a salir fibrina, y se empieza a formar
pseudomembranas de fibrina para cubrir las
lesiones.
Al dar las heces fecales podrías frenar el
proceso y ayudar a que se empiece a curar
mas rápido, pero necesariamente tienes que
dar tratamiento con antibiótico es largo.

Esta enfermedad se presenta con frecuencia, la

gente exagera con los antibióticos y lo toman