Professional Documents
Culture Documents
Genetyka ĆW
Genetyka ĆW
igolago.DKA .
inhibitoro w enzyme w
innychzanieczyszczerisjgoottapogyskiivouni.ae
' '
i
,
hueasoivnmikleinouryck.m.bahtevie.am
kombrkiroslin.m-komorhizwierzqt.me
"
"
komorhi cztowieka
'
threw
"
cebvlki wtosow
a.
komorkiptynuowodniowegomm.plamy kvwi nasienia ,
a.
fibroblastow
hodowle a.
szpikkostny
a.
komoivkiepitelialne
egastosouearnieuoyigoloueomeego DNA
mm.tranfekcjakomorek.me
reakcjapcr
a.
analizavestrykcyjna.m.sekwencjonowanie.me
klonowanie a.•
"
"
kvyminalistyha
"
a.
transformacjabaktevii.m.diagnostykachorobmedycy.ua
nnretodyigolagi DNA
izolacja DNA zastosowaniemfenolu i chloroform
celuodbiatceeniapreparatow.ir#'izolacja
a.
z u w
lizatowleomorek.m.io/acjaDNAprzezzwiqzanie przebiegajqcaprzezwysoleniebiate.kz
DNA
vwolnienie DNA
odmycie hi em ,
' '
nos hi i
a
eanieczyszczen
etoysyigolagii DNA
•
Wstgpneprzygotowanie material biologicznego do izolacji DNA
homogenicacja
zawieszeniewodpowiednimbuforze.m-wzaleinos.ci
Oczyszczenie ,
i material ,
w ne moi e obejmowac
oczyszczenia z ro't ne
'
-
go rodzajvzanieczyseczenzewneetrzny.ch poiywki ,
i poeostatos.ci innych komarek przemywanie buforami stab ilizvjqcymi ,
Dez integra cja i Liza Komarek ovaz uwolnienia DNA do voztworv, wktovym jest on rozpuszczalny i zabezpieczohy
priced degradacjq
Rozbicie
btonykomorkowej.m.poprzezhomogenizac.gg
sci i
any
miqkhie than ki zwievzece
a.⑨
ifihacjq zawiesiny komarek
'
son
.ir#'rozcieraniekomo'rhiros'linne,bahtevyjne
lice detergent
amikomorkizhodowlikomorkowej.li
a.⑤
zq enzymatycznq komo
ki battery
jne droidi
'
r owe
,
wewnqtrzkomovkowychdoroztworv.am#'destrukcja
Uwolnienie DNA i innychkomponento '
'
W roztvvorze NaCl
hamujqdziataniedeoksyrybonvkle.az
"
Mg metal i Cd "
, ,
Mn "
hto've pozwiqzaniv a DNA wymagajq do
,
ahtywnosci Mg "
"
tub Mn
lnahtywacjaenzymownukleolityczny.ch
a.
DNA jest narai one na
dziataniedegradujqcychnukle.az
a.⑤
inaktywacjasilnymienzymamiproteolitycznymi proteinazak
.
Oddzieleniekwasu nukleinowegoodpozostatychkomponentdwkomorkowy.ch
Dysocjacjakompleksow DNA
biatho.ae#zniesienieoddziaTywan'jonowych
-
detergent :
y,
sole
owycharakter
czynnikdenaturvjqcydeoksyrybonukleazy
sodowasiarczanudodecylu
a.
so 't SDS] :
wigie sig z bi atkami silnie anion ,
i inne bi at ha
a.⑤
sole w wysokich stgieniach cathowitadysocjacjakompleksow DNA
: -
biatko , usuwajqzwiqzane Kat ion owe poliaminy
ddzielenie DNA od innychrozpuszczalnychkomponentowkomorkowy.ch
znymimieszaninafenolv.ch/oroformv,alkoholuizoamylow
a. cathowiteodbiatczenieroztworu ekstra kcjarozpuszczalnikami organic :
ego , odwirowanie
interfazazdenaturowanebiatha , dolna for a organic na RNA , lipid
tray warstwy gornafazawodna
'
a. : DNA , y
a.
fend rookie la
: DNA od ante
growanych z nim bialek odbiatcza
chloroform
powierzchniowadenaturacjabiatek.me
a.⑤ :
:
, ,
matoczqsteczkowych.am#'poekstrakcjiewykle
i
'
. us unique zanieczyseczen
zanieczyszceonematoczqstecekowymizwiqekami.am DNA
jest w
dviym roxie n' czenivw facie wodnej ,
yo
: -
w etanolv RNA
drobneeanieczysxeeniemiestrqcasigjahDNA.am#
:
"
ieopropanalv RNA
pozostajewroztworze.me
:
'
sig e
,
zaniesza w
krew lizowana
a.⑤
b force lie ujqcym zawierajqcym sole Chaotropowe i detergenty niejonowe bufor LT dodatko
w u
,
-
Wo
uczestniczy protean protein k] a za
mini kolvmnqzeztoiemkrzemionhowym
DNA
oczyszczone DNA wy my wane nishojonowymi buforami tub wodg
a.⑨
'
nose one na na
,
brah
precypitacji
Footstoneoury speoggtlaboratoryjny
pigsty out not
on
yogare
uriioudri
wortdas
y
plastihi laboratorypre
.
avi genial
'
igolocga RNA
RNA kavas
euylsoruikkinoery.me
-
dnoniciowypolimershtadajqcysigznvkleotydow.me
je
"
, , , ,
i
cytoplazma mybosomy
air
powstanie RNA → transkrypcja
gtowna rola → real izacji informacjigenetycznej
a.
DNA vs RNA
vtoiona
budowanukleotydu '
deoksyryboea Vyboza
' '
, , , , , ,
tymina ur
acyl
funk cja noshik inform
acjigenetyce-umoiliwiarealizag.ee infor -
macji genetycrnej
'
ng
Rodzaje RNA
.am#matrycowymRNA:posiadainformacje okdejnosciaminokwasowwbiatkach.matry.ca synteey bialek ,
41 RNA
.
a.
rybosomowy rRNA zbiathamibudujery bosomy miejscesyntezy bialek
:
aminokwasownamiejscesyntezybiaiek.am
transportujqcy tRNA transport
a. :
interfere
regulacjaekspresjigenowkodujqcychbiatka.me
siRNA , miRNA
"
ncyjne
:
a.
mate jqderkowe snoRNA :
gasaolypraeypeogyvyolo-ueaniutRHA.m.US
uniqciezasocjowanych rRNA bialek
a.
rybonvkleazy leandro silnezwiqzkidenaturvjqcebiatkachlorowodorekguanidy.my
izotiocjaniangvanidyny.am
:
,
na a ,
a.
sterylizacjaprobowekikoncowek do pi pet auto Haw >
sole
dnaotropoue .ch/orowodoreklubizotiocyjanian gvanidynywwysokich steel .
W -
:
znakowanie.restrykcjaogo-lolgjOLR.UA
oozysure RNA DNA poreahcjachenzymatyczny.ch
PCR
"
nie
, ,
gwjqciomTRIZOL-u.ir#'lizawTRkolvlizakomo'rek
ahtywacjaendogenny.ch RNaz ,
in
a.⑤
chloroform ekstrakcjazanieczyszczenbiathowy.ch rozdziat RNAi DNA
:
,
chloroform
stwy.am#'izopropanol:wytrqcenieikoncentracja fancy
a.⑨
wi rowan ie obecnoshi '
:3 war
'
w u
wodnej.ir#'osvszenieirozpuszczeniewwodzieosadv
RNA a
RNA
a.
bi atha i DNA moil iwe do Odayshania-
a
fancy organiczhej
itgolaejol
R.ua?netoolqkolurnienkoieeqPotrzebneodceynnihi
bufor
:
lizvjqcy
•
bufovy ptuczqce
•
'
2 mevkaptoetanol
-
96 1001 etand
"
-
.
kolumienhihomogenizacyjne
"
mini
kolumienhiwiqiqceigo-lovjaR.UA/DNAuroysooviuo
•
mini
builtin magnet
yogne.ir#'pohomogenizacji lizieiDNAiRNA
powierzchnikuleh.me
rat
wig zane na
kulki od at lie
magnetyczny
"
→
Sepe u
air
"
"
kompletowaniebibliotekcDNA.m.de/-ekcjawiruso'
a.
w RNA
air
.
.AM#'pomiarabsorpcj
Ivoryi5witrynna
atTaUV..metodaf-
me
pointat adssogscjisiviattaurgakresieuv
pochtanianie energi i fali elektro magnetycznej substance skutekprzejs.ci a stain podstawowego
-
a.
preez na e ze do
wzbvdzonego.am
spektrofotometr.me
"
prawo amber
"
ta Beer -
a
A- hot -
-
fncyjnych.me
tuouyn etryogn.am#'zastosowaniewzbudzanych
nmetoola
UV bavwnikow fluoresce
pvzez
"
badawceej a
pro'6q kontrolnq
Qubit 4 Fluorometer
Barwnihi
a.⑤
Hoechst
aim
Bvomeketydyny
"
air
Pico Green
"
.am#'absorbancjaX=260nmro'wnal!dladwunici
Owego DNA ostqz 50M£
.
CET) Hoo-
CHIT) Hao
-
×
.
•
d la DNA o stqz 40M£ CET) Hoo Ano ) box vozcieniczenie but CET) Az, ox 40
xvozcieniczenieognaogerrieogystos.ci
-
-
x -
.
preparator Dharana
a.⑨
zanieczyszczenie DNA tRNA bi atkami Stosunk u A260 do A280
'
.am#'Aa7s:miqdzyh8-2-7Wystarczajqcooczyszceone
Aa::: 1,5 -7501 bi at ka
pre paracie DNA tRNA
-
arm
.
.
w
a.③
'
Max .
absorban oji 2x wiqksze nii absorbancjatta
a.
krytycznedlareahcjienzymatycznychf.is: i II:< 1,4
et 6yd problem
:
naw RT-PCR moi e em
erodgajegarnieogysggein
Fend
a.B
"
je sie do zastosowan
enzymatyczny.ch/zotiocyjanian/chlovekguanidyny
a.
nie nada '
nada do zastosowan
nie
'
enzymatycenych
"
je sie
BiaTha
air#
'
. nie
Etanol l ko propanol
brah zhaczqcychzmian absorban cji
air
"
zbliionapochtanialnosdiemisjaswiatta.B.tv
barde
"
elektro
forego
a.⇐
zjawisko elektro kinetyczne ktorym pod wptywem przetoionego pola elektrycznego preemieszczajq sing makroczqsteczkiobdarzo
"
,
w -
hiezvownowaionymtadunkiemelektvycznym.am
prqdkos
"
he
lez y 'd za
'
od :
z him
Elektroforeza DNA i RNA
posiadajqniezrowhowazonytadunekelektryczny
vjemny-grupyfosfovanowe.am
air
"
elektrycznym
migvvjqwkierunkueleletvodytanody.m.g.to
polo pH lekhozasadowe
"
idehtyfikacji
'
w na me analityczne
toda ,
rozdzielania i oczyszczania DNA tRNA Ce le i pveparatywne
Elektrofore za
analityczna.ae#'vstaleniewielkos'cifragmentu
czqsteczkowych.m.us/-alenieilos'cipreparatu tempo migvacjibadanychprqikow DNA tRNA do weorca mas
identyfihacjadegradacjipreparatusmugawielu.me
a.
identyfikacjazanieczyszczen
"
plebs
'
bi atha -
hour DNA 16
iatkozalegajqcywstvdzienkach; RNA -
smuga
Elektroforeza
paratywna-elucjawielusjekek brofoetyogne.me
pre
z ele
poliakvylamidowe
"
⑨
rozdziat DNAIRNA 5 2000
-
pz
zdohtadnosciq do
jednegonuhleotydu.m.ie/eagarozowe.vozdziaT
•
DNA tRNA 50 -
30000 pz
brah
przygotowy
substancjisiecivjqcych.me watery roztworu monomer o' Lami du
"
sq wane z i
monomerami
-
a
,
katalizatorreakcji polimeryeacji
MED -
sjeleagaro-gouee.am
"
agarOga
"
buf-oryekkteoforetygne.m.tvis -
octan -
EDTA TAE
.am#'tris-fosforanTPE.m-
this borah EDTA - -
TB E
a.
'
alkali any
ow DNA tRNA
a.
fragment y DNA hydroliey DNA faga Lambda tub planmidowenzymami vestryhcyjnymi EcoRl i Hind 111
'
ow
lsufogolseiaigajauoy
lepszaobserwacja buf obciqiajqcy barwhile letdry pozWala ledzenie migracji fragment DNA
podczaselektrofovezy.am
'
a.⑨ '
'
→ or na s ow
,
"
niebieshi :
xylene cyanol cyjanol kryten
-
f-ioletowy :
bromophenol blue -
Bar wienie ie ti -
melody wizvalizacji :
bro meh
edyny.am#isrebvo.m. STBR
a.
Green
air
.
two vwidoczniony w UV
a.
stqieniebromkuetydyny 0,5 Mme
jocko
'scioueol Oceana
0,8 -
tt .
.AM#'Wielko5dponad5Okpz,6ezsmvg-wysokoczqsteczkowe
Rozdziatelektrofovetyczny RNA Eelv
agavozowym.at#'zelagavowy
w
1/1,51
warunhidenatuvujqce.am
.
.am#'frahcja28S2xintensywniejszaniil8S brah
degradacji.AM#'mogqbyiwidoczne:mRNA-smvga
pierwszafrahcja tRNA ,
orare high oczqsteczkowe RNA
a.⑤
niepowinien wystqpowaiprqiek DNA