UNIDAD II

Tema Nº 1

METODOS
ESPECTROSCÓPICOS

Geraldine Rojas Rendón

2020
 INTRODUCCIÓN
• La palabra Espectroscopía se usó originalmente para
describir una rama de la ciencia relacionada con la
Radiación Visible con sus longitudes de onda que la
componen, pero a medida que pasó el tiempo se
expandió a todo el Espectro Electromagnético.

• Los primeros Instrumentos Espectroscópicos fueron

diseñados para la región Visible (VIS) por lo cual se
denominaron instrumentos ópticos, actualmente se ha
extendido a los instrumentos diseñados para trabajar en
las regiones Ultravioleta (UV), Visible (VIS) e Infrarroja (IR)
del espectro aunque esta denominación no es correcta.

• El objetivo es describir la naturaleza, las propiedades y los

componentes de estos instrumentos utilizados en
Espectroscopía óptica.
 ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
UV menor a 400 nm
VIS 400 nm – 800 nm
IR cercano 800 nm – 2.5 m
IR medio 2.5 m – 50 m
IR lejano 50 m – 1500 m

Conversión:

1m = 10 +3 nm
 COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS
DE ESPECTROSCOPÍA ÓPTICA
Los Métodos Espectroscópicos se basan en los fenómenos de
emisión, absorción, fluorescencia o dispersión. Aunque los
instrumentos difieren en los componentes, aquellos básicos son
esencialmente semejantes, pero viendo a que región se va a aplicar
UV,VIS e IR.

Constan de 5 componentes:

• Fuente (proporciona energía radiante)

• Selector de longitud de onda (utilizar una región de longitud
de onda restringida)
• Recipiente para la muestra (cubeta transparente)
• Detector de radiación (convierte la energía radiante en señal
eléctrica)
• Dispositivo de procesamiento de la señal y lectura
Existen 2 tipos de Espectroscopia:

• La Espectroscopía de emisión, no
necesita una fuente externa de
radiación ya que la muestra es la
emisora. En este caso colocamos la
muestra en una arco, chispa o llama,
que además de contenerla le permite
emitir una radiación característica.

• La Espectroscopia de absorción, como

la de fluorescencia y dispersión, requiere
de una fuente externa de energía
radiante. En el primer caso el haz de luz
atraviesa la muestra. En el segundo caso
la fuente produce en la muestra en un
recipiente adecuado radiación
fluorescente o dispersa que medimos
bajo un ángulo.
 1. FUENTE DE RADIACIÓN
Presenta las siguientes características:

- Debe producir un haz de radiación cuya

potencia sea suficiente para facilitar la
medida y detección.

- La señal debe ser estable para lo cual

utilizamos una fuente de poder regulada
y no exista diferencia entre la potencia
de energía radiante y la potencia
eléctrica proporcionada.

Existen 2 tipos de fuentes:

Continuas y Fuentes de líneas.
a. Fuentes contínuas

Son aquellas que proporcionan una radiación cuya potencia no

varía bruscamente entre longitudes de onda adyacentes. Se utilizan
en procedimientos de absorción molecular. Tenemos:

- Lámparas de Hidrógeno o Deuterio, produce un espectro

continuo en la región UV por excitación de H y Deu. Las lámparas
de H existen de alto voltaje (2000 a 6000 V) y de bajo voltaje (40
V), para obtener intensidades constantes se aplica una fuente de
poder. Ambas lámparas producen un espectro continuo entre 160
y 375 nm para lo cual se deben emplear cubetas de cuarzo
porque el vidrio absorbe fuerte en esta región.

- Lámparas de filamento de Tungsteno, fuente más común de

radiación VIS e IR la mayor parte en la región IR, la distribución de
energía depende de la Tº de operación siendo de 2870 ºK, es útil
utilizar esta lámpara entre 320 y 2500 nm de longitud de onda. La
lámpara puede ser operada de una batería de 6 V
manteniendose estable.
- Lámpara de arco de Xenón, produce intensa radiación por
el paso de corriente por una atmósfera de Xenón. El
espectro mantiene continuo entre 250 y 600 nm con una
intensidad máxima de 500 nm.

- Emisor incandescente de Nernst, formado por óxidos de

tierras raras, se utiliza para la Radiación IR un sólido inerte
calentado eléctricamente a Tº de 500 y 2000ºK produciendo
radiación continua.

- Fuente globar, formado por carburo de silicio

- Fuente de filamento incandescente, fuente de intensidad

menor pero de vida más prolongada consiste en un
alambre de nicromo y también de rodio.
b. Fuentes de líneas

Emiten radiación en forma de pocas líneas de longitud de

onda definida. Se utilizan en la Espectroscopía de absorción
atómica, Ramán, de fluorescencia, refractometría y
polarometría.

- Lámparas de vapor metálico, las más comunes las de vapor

de mercurio y de sodio. La lámpara de vapor consiste en una
envoltura transparente que contiene un elemento gaseoso a
baja presión. La lámpara de mercurio produce varias líneas
cuya longitud varía entre los 254 – 734 nm . En la lámpara de
vapor de Sodio el par de líneas va de 589.0 – 589.6 nm.

- Lámparas de cátodo hueco, producen un espectro de líneas

para un gran número de elementos. Su uso está dado en
espectroscopía de absorción atómica y de fluorescencia
atómica.
 2. RECIPIENTE PARA LA MUESTRA

 Denominada también cubeta o celda, son

los recipientes que se utilizan para contener
las soluciones que se someten al análisis
fotométrico.

 Deben presentar las mismas características,

pudiendo utilizarse cubetas con caras
ópticamente planas y también cubetas con
caras cilíndricas pero la desventaja es que
pueden perder radiación por reflexión de la
luz en las superficies curveadas.

 En cuanto al diámetro de las cubetas existen

desde los 0.1 cm hasta los 10 cm pero la
medida más usada es la de 1 cm.
• Los recipientes deben estar construidos de un material que
permita el pasaje de la radiación de la región espectral:
cuarzo o sílice fundido para el trabajo en la región UV los
vidrios silicatos pueden emplearse en la región VIS y una
parte de la región de IR cercano; los recipientes de plástico
también han llegado a ser útiles en la región VIS. La sustancia
que se utiliza para la fabricación en la región IR es el cloruro
de sodio cristalino.

• En algunos casos por razones de economía se utilizan celdas

cilíndricas en las regiones UV y VIS en estos casos hay que
cuidar la posición de las cubetas con respecto al haz de
radiación.

• La calidad de los datos variará en cuanto a la forma de

cómo se usan y se mantienen las celdas (huellas dactilares,
grasa y suciedad sobre las paredes internas), es muy
importante la limpieza antes y después de usarlas. En cuanto
al secado de las celdas este se debe realizar a Tº ambiente
 3. SELECTOR DE LONGITUD DE ONDA
• Los métodos analíticos necesitan dispersar la radiación
policromática en bandas que abarquen un intervalo de
longitudes de onda.

• Denominamos banda a un grupo limitado de longitudes de onda

por ej: 500 – 550 nm el color que presenta es violeta por lo tanto
es monocromática (mono=1 ; cromo=color).

• Estas bandas se pueden producir por 2 tipos de dispositivos

denominados: filtros y monocromadores.
FILTROS.- Utilizamos 2 tipos de filtros de absorción y de
interferencia para seleccionar una longitud de onda. Los primeros
solo sirven para la región VIS y los de interferencia para las
regiones IR, VIS y UV.

• Filtros de Absorción, más económicos que los de interferencia y

de mayor utilidad en la región VIS. Limitan la absorción a ciertas
porciones del espectro. El más común consiste en un vidrio
coloreado o un colorante suspendido en gelatina y colocado
entre 2 placas de vidrio. Poseen anchos de banda que varían
entre 30 – 250 nm.
• Filtros de Interferencia, producen bandas relativamente
estrechas de radiación. Es un dieléctrico transparente de
fluoruro de Ca o fluoruro de Mg encontrándose entre dos
películas metálicas semitransparentes que revisten las superficies
interiores de dos placas de vidrio. Cuando un haz incide sobre
este dispositivo una fracción atraviesa la primera capa metálica
y el resto se refleja, la porción que pasa experimenta lo mismo
una parte atraviesa y el resto se refleja. Existen filtros de
MONOCROMADORES.- Los métodos analíticos en la mayoría de los
casos requieren dispersar la radiación policromática en bandas que
abarquen un intervalo de valores restringido de longitud de onda.
La forma más común es por medio de un dispositivo denominado
monocromador.

Los monocromadores para la región UV, VIS e IR son todos

semejantes entre si en cuanto a su construcción mecánica ellos
emplean : ranuras, lentes, espejos, ventanas y prismas. Los materiales
para construirlos son escogidos de acuerdo a la longitud de onda.
Dentro de los componentes tenemos:

• Ranura de entrada
• Lente o espejo colimador (produce haz de radiación paralela)
• Prisma o red de difracción (elemento dispersor)
• Elemento de enfoque (proyecta imágenes rectangulares de
la ranura de entrada sobre una superficie plana plano focal)
• Ventanas de entrada y de salida (protección del polvo y vapores
del laboratorio).
• Dentro de los instrumentos en los cuales se van a detectar la
radiación dispersada por un monocromador tenemos :
Espectroscopio, Espectrógrafo, Espectrofotómetro el cual
contiene un dispositivo fotoeléctrico para cuantificar la
potencia de radiación que sale de la ranura. Tenemos 2 tipos:
los de prisma y los de rejilla.
• Monocromadores de prisma.- Los prismas pueden utilizarse
para la dispersión de radiación UV, VIS e IR y se construyen
de acuerdo a la longitud de onda en la que serán utilizados.
Tenemos prismas de cuarzo hasta los 3000 nm, de vidrio
hasta los 2000 nm con una mejor resolución.
• Monocromadores de rejilla.- La radiación UV, VIS, e IR
puede dispersarse haciendo pasar un haz por una rejilla de
transmisión o reflejándolo en una rejilla de reflexión, Como
característica es de que las líneas estén igual espaciadas en
toda la longitud de la rejilla .
• Monocromadores dobles.- Monocromadores modernos
contienen dos elementos dispersantes, es decir dos prismas
o dos rejillas incluso puede ser combinado un prisma y una
rejilla.
 4. DETECTOR DE RADIACIÓN
• Los primeros instrumentos utilizaban métodos de
detección visual o fotográficos, actualmente estos
se los ha reemplazado por transductores que
convierten la energía radiante en señal eléctrica.
Entre las características de un detector tenemos:
-Responder a la energía radiante de un
amplio intervalo de longitudes de onda
- Ser sensible a bajos niveles de potencia
radiante
- Responder rápidamente a la radiación
- Producir una señal eléctrica amplificable
- Tener un ruido relativamente bajo para
mantener la estabilidad
- La señal producida sea directamente
proporcional a la potencia del haz
• Entre las clases de detectores tenemos : uno que
responde a los fotones y otro al calor.
Detectores de fotones.- Se basan en la interacción de la
radiación con una superficie reactiva que produce electrones
(fotoemisión) o llevan a estos electrones a estados energéticos en
los que puedan conducir la electricidad (fotoconducción)
llegando a dar esta energía suficiente la radiación UV, VIS e IR.
Entre las clases de detectores de fotones tenemos: Células
fotovoltaicas, Fototubos de vacío, Tubos fotomultiplicadores,
Detectores semiconductores y Detectores de diodo de silicio.

Detectores térmicos o de calor.- La medición de radiación en la

región IR es muy difícil por la baja intensidad de fuentes
disponibles y la poco energía del fotón IR, la señal eléctrica de un
detector IR es pequeña y la medición requiere grandes factores
de amplificación.
Los detectores térmicos se basan en el calentamiento de la
radiación para la detección de las longitudes de onda,
excepto para las más cortas. Dentro de estos detectores tenemos :
Termocuplas, Bolómetros, Detectores piroeléctricos y detector de
Golay.
5. PROCESADOR DE SEÑAL Y DISPOSITIVO DE
LECTURA
El procesador de señal es por lo general un dispositivo electrónico
que amplifica la señal eléctrica generada por un detector,
además de modificarla puede transformarla de contínua en
alterna o viceversa, cambiar su fase o filtrarla para quitar
componentes indeseables. Además puede realizar operaciones
matemáticas como ser diferenciación, integración y conversión
logarítimica.

Los dispositivos de lectura como ya indicamos nos muestra un

resultado visible para el ojo humano normalmente se encuentran
en los equipos modernos. Entre estos tenemos: Medidores de
d’Arsonval, los medidores digitales, las escalas de potenciómetros,
los registradores y los tubos de rayos catódicos.
 LEY DE LAMBERT - BEER
• Es el resultado de la combinación de las leyes de Lambert y de
Beer, leyes de Absorción. Indica “relación directamente
proporcional que existe entre la absorbancia de una muestra y su
concentración”

Io = Intensidad inicial o de la radiación incidente

Ia = Intensidad de absorción Io = Ia + Id + Ia
Id = Intensidad de dispersión
It = Intensidad de transmisión
 ABSORBANCIA, TRANSMITANCIA Y
ABSORTIVIDAD
- ABSORBANCIA = Cantidad de radiación absorbida.
(Densidad Óptica, Extinción).

- TRANSMITANCIA = Relación entre la radiación incidente

y la radiación transmitida.

- ABSORTIVIDAD = Medida de la cantidad de luz

absorbida por una disolución, definida como la unidad
de absorbancia por unidad de concentración por
unidad de longitud de la trayectoria de luz. La
absortividad es proporcional a la concentración del
soluto absorbente.
 A = C .e. L

donde:
A = Absorbancia de la muestra
C = Concentración del analito
L = Longitud del paso óptico que contiene la muestra (cubeta)
e = Absortividad molar. Depende del cromóforo en si mismo, de la
longitud de onda y de las condiciones de medida (pH, T...).

Ejemplo:
1) Una disolución 100 µM de un determinado analito tuvo una
transmitancia a 525 nm de 0.5 cuando se midió en una celda 1.5 cm
de longitud. Calcular: a) la absorbancia de la disolución; b) la
absorptividad molar del cromóforo
a) A = -log T = - log 0.5 = 0.301
b) A = C .e. L Reordenando la ecuación obtendremos:
e = A/(C x L) = 0.301 /(10-4 M x 1.5 cm) = 2 x 103 M-1 cm-1
Mediciones de Transmitancia y Absorbancia

Las mediciones de absorbancia o transmitancia se

hacen por comparación entre la muestra problema y un
estándar arbitrario o referencia.

Como la referencia debe poseer un porcentaje de

transmitancia de 100%, esta es llamada referencia de
100%, o una absorbancia de 0.
 ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE Y
• La absorción molecular de radiación UV y VIS por una
ULTRAVIOLETA
especia atómica o molecular, se considera un proceso que
se realiza en 2 etapas: excitación y relajación.

• Excitación: Tiempo de vida es de 10-8 o 10-9 seg.

Concentración, es despreciable por la corta
vida.
• Relajación: Exotérmica, genera calor indetectable
Fotoquímica, diferentes especies químicas
Fluorescencia,
Fosforescencia,

• En cada molécula o compuesto existen electrones que se

colocan al centro de los orbitales atómicos, estos orbitales
pueden ser de 2 tipos: enlazantes (de baja energía y
mayor estabilidad) y antienlazantes (de alta energía e
inestables). Los electrones que absorben radiación UV-VIS
en una molécula orgánica son los electrones enlazantes,
asociados a más de un átomo y los electrones no
enlazantes se encuentran alrededor de átomos como el
O2, N2, S y X.
Ejemplos de absorción de grupos funcionales:
- H2O 167 nm
- Halógeno 258 nm
- Alcano derivado de O 184 nm
- Alqueno 177 nm
- Alquino 177, 196, 225 nm
- Nitro 280 nm
- Cetona 282 nm
- Benceno 204 – 256
- Fenol 211 - 270
- Anilina 230 - 280
Esto da lugar a la posibilidad de identificación de:

• Identificación de grupos funcionales en las moléculas.

• Cuantificación de compuestos que poseen grupos
funcionales absorbentes, técnicas aplicables a
especies orgánicas e inorgánicas con características
de buenas sensibilidades, selectividades aceptables,
buena precisión, fácil preparación de muestras y
obtención de resultados.
• Aproximadamente el 95% de las determinaciones
analíticas clínicas de rutina se realizan por este método.
 - CURVA DE CALIBRACIÓN
Uno de los métodos más utilizados para
determinar la concentración de una
muestra problema, es el método de la
curva de calibración.

Esta curva de calibración es una gráfica

que relaciona la concentración de al
menos cinco soluciones de estándar de
concentraciones conocidas, con la
absorbancia de cada uno de ellos a la
longitud de onda máxima.

Una vez obtenida la gráfica se determina

la función matemática que presenta
dicha recta a través del tratamiento
estadístico de regresión de los mínimos
cuadrados, la cual relaciona la
 A=mc+n

A : Absorbancia n : Intercepto de la recta

m: Pendiente de la recta y corresponde al producto entre
absortividad a de la muestra y el espesor b de la cubeta.

Luego se mide la absorbancia de la solución N° Matraz Vol.

problema y se interpola su valor en la gráfica o Reactivo 5
se reemplaza en la ecuación, para obtener el (ml)
valor de concentración del analito. 1 0
2 0.1
3 0.2
La concentración de la sol. problema debe 4 0.3
estar comprendida en el rango de 5 0.4
concentración que comprende la curva de
calibración. Si la concentración de la sol.
problema es menor que la concentración del
St más diluido, debe adicionarse un vol.
determinado de un St. conc. a la sol
problema. Si la concentración del analito es
mayor que la concentración del St. más
concentrado la sol. problema deberá ser
 - DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE UN
ANALITO
La espectrofotometría de absorción molecular se puede
aplicar tanto al análisis cualitativo como cuantitativo.
• Análisis cualitativo: los espectros de la muestra se comparan
con los de los correspondientes estándares. Este tipo de
análisis es más frecuente en UV e IR para identificar
compuestos orgánicos y más rara vez se utiliza en Vis.

• Análisis cuantitativo: está basado en la ley de Lambert-Beer

en el intervalo de concentraciones de cumplimiento de la
ley. Se establece la curva de calibrado usando estándares y
la absorbancia de la muestra de concentración
desconocida se remite a la curva (a veces basta con un
solo estándar). En espectrofotometría Vis, el analito se suele
incorporar a una especie compleja que presente bandas de
absorción intensas. Siempre que sea posible se debe medir
la absorbancia a la longitud de onda.
 Método de Punto final
En este método se incuba la muestra y el reactivo
durante un tiempo determinado a una Tº determinada.
Por tanto se mide al final de un tiempo fijo de
incubación. En un punto de un determinado tiempo se
lee.
Sirve para aquellas pruebas donde el analito reacciona
con un sustrato o reactivo y se lee después de que ha
pasado un determinado periodo. Son procedimientos
estandarizados.
 Pruebas cinéticas o enzimáticas

Pueden ser de 2 tipos: - por Estándar

- por Factor
ESPECTROSCOPIA INFRA ROJA (IR)
QUE ES LA LUZ INFRARROJA
FUNDAMENTO
COMPONENTES
APLICACIONES
ACIDO ACETIL
SALICILICO
FOTOMETRÍA
TIPOS DE FOTOMETRÍA
FOTOMETRO DE LLAMA
PRINCIPIO DEL FOTOMETRO DE LLAMA
CLASIFICACIÓN
FOTOMETRÍA DE LLAMA DE EMISIÓN
FOTOMETRÍA DE LLAMA DE ABSORCIÓN ATÓMICA
CARACTERÍSTICAS
ALGUNOS EQUIPOS QUE FUNCIONAN MEDIANTE

TÉCNICAS DE ESPECTROFOTOMETRÍA
 ANALIZADOR DE ELISA
El analizador de ELISA es un espectrofotómetro especializado. Está
diseñado para efectuar la lectura de los resultados de una técnica
que se utiliza para determinar la presencia de anticuerpos o
antígenos específicos presentes en una muestra.
Se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase
sólida, mediante anticuerpos que, directa o indirectamente,
producen una reacción cuyo producto puede ser leído por el
espectrofotómetro. Se le conoce también con el nombre de Lector
de ELISA.
 PRINCIPIO DE OPERACIÓN

• El analizador de ELISA es un espectrofotómetro especializado.

• A diferencia de los convencionales que efectuan lecturas en un rango amplio de longitudes de onda,
este dispone de filtros o rejillas de difracción que limitan el rango de longitudes de onda a aquellas que
se utilizan en la técnica de ELISA comprendidas entre los 400 y los 750 nm.
• Algunos analizadores operan en el rango UV y pueden efectuar análisis entre los 340 y los 700 nm.
Utiliza la fibra óptica para llevar la luz hasta los pozos de la placa, donde se encuentra la muestra.
• La luz que atraviesa la muestra tiene un diámetro entre 1 y 3 mm. Un sistema de detección recibe la
energía lumínica, proveniente de la muestra, la amplifica, determina la absorbancia Y a través de un
sistema de lectura, la convierte en datos que permiten interpretar el resultado de la prueba.
• Las muestras del ensayo de ELISA se colocan en placas de diseño especial, las cuales disponen de un
número definido de pozos o vasos, en los cuales se lleva a cabo el procedimiento o ensayo.
• Son comunes las placas de 8 columnas por 12 filas, con un total de 96 pozos. También existen placas
con un mayor número de pozos. Las hay de 384 pozos y la tendencia actual busca aumentar el número
de pozos, y reducir la cantidad de reactivos y el volumen de las muestras requeridas.
• La ubicación de los sensores ópticos en el analizador de ELISA varían. Algunos los colocan sobre la
placa portamuestras, mientras que otros los ponen directamente bajo los pozos de la placa.
• En la actualidad, los analizadores de ELISA disponen de controles regulados por microprocesadores,
conexión a sistemas de información, programas de control de procesos, control de calidad que, a
través del computador, permiten la automatización completa de los ensayos requeridos.
FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA
ELISA es el acrónimo de las palabras en lengua inglesa Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay.

La técnica de ELISA, la cual tiene aplicación directa en inmunología y en

serología; permite confirmar la presencia en el organismo de anticuerpos
o antígenos de un agente infeccioso, vacunas o autoanticuerpos –artritis
reumatoide, por ejemplo–, entre otras aplicaciones.

Para desarrollar la técnica de ELISA se requiere disponer al menos de los

siguientes equipos:
• Un analizador de ELISA.
• Un lavador de ELISA (capítulo 2).
• Un sistema dispensador de líquidos. (Puede usarse pipetas multicanal).
• Una incubadora especializada para las placas.
 NEFELOMETRÍA Y TURBIDIMETRÍA

 Son dos técnicas relacionadas con la Espectroscopía de Absorción

molecular en la zona VIS.
 Se basan en el comportamiento de la materia la incidir sobre ella
una radiación electromagnética, ocurriendo los fenómenos de
reflexión, dispersión, bloqueo y transmisión del resto de la
radiación hasta alcanzar el detector.
 La muestra presenta unas determinadas características, son
partículas no transparentes en el seno de un líquido: precipitados,
suspensiones coloidales, etc.
 La Nefelometría estudia la radiación dispersada por la muestra en
ángulos diferentes al de la incidencia y la Turbidimetría la radiación
no dispersada.
 Se emplean con fines analíticos cualitativos y cuantitativos, para el
segundo caso se aplican calibradores o patrones preparados en las
mismas condiciones que la muestra.
NEFELOMETRÍA
La dispersión de la radiación es un fenómenos físico resultante de la
interacción entre ésta y las partículas en suspensión en un medio
adecuado. Los ángulos de medida de la radiación dispersada oscilan entre
15 y 90. Esta dispersión está influida por: Concentración del analito,
Volumen, tamaño, peso y Nº de partículas, longitud de onda de la
radiación, distancia del detector a la cubeta.
Se basa en la Teoría de Rayleigh que dice que la intensidad de la luz
dispersada es:
- Directamente proporcional a la concentración, peso molecular de las
partículas .
- Relación directa con la distancia entre el detector y la cubeta y la
sensibilidad.
- El modelo de dispersión depende de la relación entre el tamaño de la
partícula la longitud de onda
En un principio la muestra es transparente, al añadir el reactivo aparecen
partículas en suspensión, se utiliza un blanco de muestra.
TURBIDIMETRÍA

 Mide la radiación bloqueada por parte de la muestra, relacionando

la intensidad del haz incidente y del resultante de atravesar la
cubeta. La detección de la radiación transmitida se realiza en la
misma dirección que el haz incidente y la señal puede expresase
como Absorbancia o Transmitancia.
 Se rige por la ley de Lambert-Beer, donde la intensidad de
radiación bloqueada por la muestra será directamente
proporcional a la concentración del analito.
 De igual forma es un espectrofotómetro de absorción molecular
en la radiación VIS.
 QUIMIOLUMINISCENCIA
 La técnica de quimioluminiscencia se aplicaba más en análisis
medioambientales (contaminantes atomosféricos), se denominaba
este fenómeno como bioluminiscencia.
 El equipo es más sencillo, ya que no es necesario emplear el
selector de longitud de onda, la única radiación producida es la
que procede de la reacción química entre el reactivo y el analito.
 Para calcular la concentración del analito se compara la
luminiscencia producida por éste con la de un estándar de
concentración conocida.
 Es un método de elevada sensibilidad.