UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL BENI ¨JOSE

BALLIVIAN¨
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE MEDICINA

INFORME DE MICROBIOLOGIA
CULTIVO DE MICROORGANISMOS

DOCENTE: DR. MIGUEL ANGEL CASTRO COCA.

ESTUDIANTE: HELMUTH ROMAN VARGAS CUELLAR
MATERIA: MICROBIOLOGIA
AÑO: 2DO. PARALELO ¨A¨
GESTION: 2018
  DEFINICION:
El cultivo es el proceso de proliferación de microorganismos al proporcionarles un entorno
con condiciones apropiadas. Los microorganismos en proliferación producen réplicas de sí
mismos y necesitan los elementos presentes en su composición química. Los nutrientes
deben proporcionar estos elementos en una forma que sea accesible desde el punto de
vista metabólico. Además, los microorganismos requieren energía metabólica para
sintetizar macromoléculas y mantener gradientes químicos esenciales a través de sus
membranas.

 NECESIDADES PARA EL CRECIMIENTO:

La mayor parte del peso seco de los microorganismos es materia orgánica que contiene
elementos como carbono, hidrógeno, nitrógeno, oxígeno, fósforo y azufre.
Se necesitan iones inorgánicos como potasio, sodio, hierro, magnesio, calcio y cloruro
para facilitar los procesos enzimáticos y mantener los gradientes químicos a través de la
membrana celular.
En su mayor parte, la materia orgánica consiste en macromoléculas formadas por enlaces
anhidro entre los bloques de construcción. La síntesis de enlaces anhidro requiere energía
química, que es proporcionada por dos enlaces fosfodiéster contenidos en el trifosfato de
adenosina.
La fuerza motriz protónica es un gradiente electroquímico con dos componentes: una
diferencia en pH (concentración de iones hidrógeno) y diferencia en la carga e iónica.

 FUENTES DE ENERGIA METABOLICA:

Los tres mecanismos principales para la generación de energía metabólica son
fermentación, respiración y fotosíntesis. Para el desarrollo del microorganismo debe
utilizarse al menos uno de estos mecanismos.
FERMENTACION:
La transformación de ATP en la fermentación no se acopla con la transferencia de
electrones. La fermentación se caracteriza por la fosforilación del sustrato, un proceso
enzimático en el cual los enlaces de pirofosfato se donan directamente al trifosfato de
adenosina (ATP) por un intermediario metabólico fosforilado.
La fermentación no se acompaña de cambios en el estado general de oxidación-reducción
del sustrato fermentable y por tanto la composición elemental de los productos de
fermentación debe ser idéntica a la de los sustratos.
RESPIRACION:
La respiración es análoga a los procesos de acoplamiento dependientes de energía para
descargar una batería.El reductor (donador de electrones) puede ser un compuesto
orgánico o inorgánico.
A menudo se utiliza oxígeno gaseoso (O2) como oxidante, pero algunos microorganismos
pueden utilizar oxidantes alternativos como dióxido de carbono (CO2), sulfato (SO4 2−) y
nitrato (NO3−).
FOTOSINTESIS:
La fotosíntesis es similar a la respiración en el sentido de que la reducción de un oxidante
a través de una serie específi ca de transportadores de electrones establece una fuerza
motriz protónica.
La diferencia en los dos procesos consiste en que en la fotosíntesis se crean el reductor y
el oxidante por medios fotoquímicos por medio de energía luminosa absorbida por los
pigmentos en la membrana; así, la fotosíntesis continúa en tanto exista una fuente de
energía luminosa.

 NUTRICION:
La nutrición en medios de cultivo debe contener todos los elementos necesarios para la
síntesis biológica de un nuevo microorganismo.
FUENTES DE CARBONO:
Estos microorganismos pertenecen al grupo de microorganismos autótrofos, seres vivos
que no necesitan nutrientes orgánicos para su desarrollo. Otros microorganismos
autótrofos son los quimiolitótrofos, que utilizan sustratos inorgánicos como hidrógeno y
tiosulfato como reductor y dióxido de carbono como fuente de carbono.
Los microorganismos heterótrofos, para su desarrollo, requieren carbono orgánico que
debe encontrarse en una forma que puedan asimilar.
El dióxido de carbono es necesario para varias reacciones de fotosíntesis.
FUENTES DE NITROGENO:
El nitrógeno es un constituyente importante de las proteínas, ácidos nucleicos y otros
compuestos, y constituye casi 5% del peso seco de una bacteria típica. El nitrógeno
inorgánico molecular (N2), es muy prevalente pues constituye casi 80% de la atmósfera
terrestre.
El producto terminal de todas las vías para la asimilación de nitrógeno es la forma más
reducida del elemento, el amoniaco (NH3). Cuando se cuenta con NH3, se difunde hacia el
interior de la mayor parte de las bacterias a través de conductos transmembrana como
gas disuelto en lugar de forma de ion amonio (NH4+).
La capacidad de asimilar N2 en forma reducida como NH3, proceso denominado fi jación
de nitrógeno, es una propiedad singular de las células procariotas y muy pocas bacterias
son capaces de desdoblar el triple enlace entre ambos átomos de nitrógeno.
FUENTES DE AZUFRE:
Al igual que el nitrógeno, el azufre es un componente de muchas sustancias orgánicas de
las células. Forma parte de la estructura de varias coenzimas y se encuentra en las
cadenas laterales de cisteinil y metionil de las proteínas. El azufre en su forma elemental
no puede utilizarse por plantas o animales.
La mayor parte de los microorganismos pueden utilizar sulfato como fuente de azufre, al
reducir el sulfato al nivel de ácido sulfhídrico (H2S).
FUENTES DE FOSFORO:
El fosfato (PO43−) es necesario como componente del ATP, ácidos nucleicos y coenzimas
como NAD, NADP y flavinas. Además, muchos metabolitos, lípidos (fosfolípidos, lípido A),
componentes de las paredes celulares (ácido teicoico), algunos polisacáridos capsulares y
algunas proteínas sufren fosforilación. El fosfato siempre se asimila en forma de fosfato
inorgánico libre (Pi).
FUENTES DE MINERALES:
Numerosos minerales son necesarios para la función de las enzimas. El magnesio (Mg2+) y
el ion ferroso (Fe2+) también se encuentran en derivados de porfi rina: el magnesio en las
moléculas de clorofi la, el hierro como parte de las coenzimas de los citocromos y
peroxidasas. Mg2+ y K+ son esenciales para la función e integridad de los ribosomas.
El calcio es necesario como constituyente de las paredes celulares de bacterias
grampositivas, aunque es indispensable para las bacterias gramnegativas.
La captación de hierro, que forma hidróxidos insolubles a pH neutro, es facilitada en
muchas bacterias y hongos por la producción de sideróforos, compuestos que tienen la
capacidad de generar y favorecer su transporte en forma de complejo soluble.
FACTORES DE CRECIMIENTO:
Un factor de crecimiento es un compuesto orgánico que debe contener la célula a fi n de
desarrollarse, pero que es incapaz de sintetizar.Además, los microorganismos de vida libre
deben ser capaces de sintetizar complejos vitamínicos que actúan como precursores de
coenzimas.
Cada uno de estos compuestos esenciales se sintetiza por una secuencia de reacciones
enzimáticas; cada enzima se produce bajo el control de un gen específico.
El microorganismo debe obtener el compuesto de su entorno: el compuesto se
transforma en un factor de crecimiento para el microorganismo.
FACTORES AMBIENTALES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO:
Un medio de cultivo adecuado debe contener todos los nutrientes necesarios para el
microorganismo a cultivar y tales factores incluyen pH, temperatura y aireación que deben
ser controlados con gran cuidado.
Se utiliza un medio de cultivo líquido; al medio de cultivo puede añadirse agar o gel de
sílice para que adquiera consistencia de gel para situaciones especiales.
NUTRIENTES:
En general, debe suministrarse lo siguiente: 1) donadores y aceptores de hidrógeno: casi 2
g/L; 2) fuente de carbono: casi 1 g/L; 3) fuente de nitrógeno: casi 1 g/L; 4) minerales:
azufre, fósforo, casi 50 mg/L de cada uno y oligoelementos, 0.1 a 1 mg/L de cada uno, y 5)
factores de crecimiento: aminoácidos, purinas, pirimidinas, casi 50 mg/L de cada uno y
vitaminas, 0.1 a 1 mg/L de cada uno.
Para estudios del metabolismo microbiano, por lo general es necesario preparar un medio
completamente sintético en el cual se conocen las características y concentración exactas
de cada uno de los ingredientes.
Para muchos microorganismos, un compuesto simple (como un aminoácido) puede actuar
como fuente de energía, de carbono y nitrógeno en tanto que otras requieren
compuestos separados para cada uno de estos elementos.
TEMPERATURA:
Las diferentes especies microbianas varían ampliamente en cuanto a sus intervalos
óptimos de temperatura para su proliferación. Los psicrófilos se desarrollan mejor en
temperaturas bajas (15 a 20°C) los mesófilos a 30 a 37°C y los termófilos a temperaturas
de 50 a 60°C.
Algunos microorganismos son hipertermófilos y pueden desarrollarse a temperatura de
ebullición, la cual existe en sitios con alta presión como en las profundidades del océano.
AIREACION:
Muchos microorganismos son aerobios obligados, es decir, de manera específica
necesitan oxígeno como aceptor de hidrógeno; algunos anaerobios son facultativos, es
decir, tienen la capacidad de vivir de forma aerobia o anaerobia; en tanto que otros son
anaerobios obligados, pues requieren una sustancia diferente al oxígeno como aceptor
hidrógeno y son sensibles a la inhibición con oxígeno.
El peróxido de hidrógeno debe gran parte de su toxicidad al daño que causa al DNA.
El proporcionar aire a los cultivos de bacterias aerobias es un problema técnico mayor. Por
lo común se lleva a cabo un mezclado mecánico para introducir oxígeno al medio de
cultivo o bien se fuerza el paso de aire a través del medio de cultivo por medio de presión.
CONCENTRACION IONICA Y PRESION OSMOTICA:
En menor grado, deben controlarse factores como la presión osmótica y concentración de
sales. Para la mayor parte de los microorganismos, las propiedades de los medios de
cultivo ordinarios son satisfactorias; sin embargo, para formas marinas y microorganismos
adaptados para crecer en soluciones hipertónicas de azúcar, por ejemplo, deben tomarse
en consideración tales factores.
Los microorganismos que requieren concentraciones elevadas de sales se denominan
halófilos, aquellos que requieren presiones osmóticas elevadas se denominan osmófilos.

 METODOS DE CULTIVO
Deben considerarse dos problemas: elección del medio de cultivo apropiado y aislamiento
de un microorganismo bacteriano.
MEDIOS DE CULTIVO:
La técnica y medio de cultivo utilizados dependen de la naturaleza de la investigación. En
términos generales, pueden encontrarse tres situaciones:
1) Tal vez sea necesario cultivar un grupo de células de una especie en particular que se
encuentran a la mano.
2) Puede ser necesario establecer el número y tipo de microorganismos presentes en un
material dado.
3) Podría desearse el aislamiento de un tipo particular de microorganismo a partir de una
fuente natural.
DESARROLLO CELULAR DE UNA ESPECIE DADA:
Los microorganismos observados en el microscopio pueden proliferar en su ambiente
natural y pueden ser extremadamente difíciles de hacer crecer en un medio de cultivo
artificial puro. En términos generales puede diseñarse un medio de cultivo apropiado para
reproducir cuidadosamente las condiciones encontradas en el entorno natural del
microorganismo.
El pH, temperatura y aireación son fáciles de duplicar; los nutrientes presentes
constituyen el mayor problema.
ESTUDIO MICROBIOLOGICO DE MATERIALES NATURALES:
Un material dado puede contener muchos microambientes diferentes y cada uno
proporciona un nicho para diferentes especies. El cultivo de una muestra de material bajo
cierto grupo de condiciones permitirá que un grupo selecto de formas produzca colonias,
pero podría ocasionar que se pasen por alto muchos otros tipos.
No es irracional utilizar seis u ocho medios de cultivo y condiciones de cultivo diferentes si
se van a identificar la mayor parte de las formas presentes.
Cada tipo de microorganismo debe tener la posibilidad de proliferar, por lo que se utilizan
medios sólidos para evitar el aglomeramiento de colonias.
AISLAMIENTO DE UN MICROORGANISMO EN PARTICULAR:
Una pequeña muestra de tierra, si se manipula de manera apropiada, permite el cultivo de
diferentes tipos de microorganismos en cada microentorno presente.
La transferencia de una muestra de este cultivo a un medio fresco dará origen a un
enriquecimiento adicional de las azobacterias; después de varias transferencias seriadas el
cultivo puede colocarse en un medio de cultivo sólido enriquecido, lo que permite el
aislamiento de colonias de azobacterias.
El enriquecimiento de cultivos es un procedimiento por medio del cual se prepara el
medio de cultivo para duplicar el ambiente natural (“nicho”) del microorganismo deseado,
por lo que se permite su selección.
Cuando se busca un tipo particular de microorganismo en material natural es ventajoso
cultivar los microorganismos obtenidos en un medio de cultivo diferencial, si éste se
encuentra disponible.

 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN CULTIVOS PUROS

A fi n de estudiar las propiedades de un microorganismo dado, es necesario manipularlo
en cultivos puros sin otros tipos de microorganismos. Para llevar a cabo esto, debe aislarse
una sola célula de todas las demás y cultivarse de forma tal que su progenie permanezca
aislada. Se dispone de varios métodos.
A. CULTIVO EN PLACA:
A diferencia de las células en medio líquido, las células en un medio de gel se encuentran
en moles. Por tanto, si se colocan pocas células en un medio de gel, cada célula prolifera
en una colonia aislada.
El agente ideal para la formación de gel para la mayor parte de los medios de cultivo
microbiológico es el agar, un polisacárido ácido extraído de ciertas algas rojas.
En la técnica de extensión en placa, un pequeño volumen de suspensión microbiana
diluida que contiene 30 a 300 células se transfiere hacia el centro de la placa de agar y se
extiende en forma uniforme sobre la superficie con una varilla de cristal estéril, doblada.
Las células dispersadas dan origen a colonias.
B. DELUCION:
Un método mucho menos fiable es el de la dilución hasta la extinción. Se realizan
diluciones seriadas de la suspensión y las muestras de cada dilución se cultivan en placa.
Este método no se utiliza a menos que sea imposible el cultivo en placa por alguna razón.
Una característica indeseable de este método es que sólo puede utilizarse para aislar el
tipo predominante de microorganismo en una población mixta.