ww suuu oon! DEIKAId Tlemcen Institut des Sciences et Techniques Appliquées - ISTA. Spécialité : Technologie des Industries Laitidres et Fromagéres -TILF 1™* Année LMD Module : « Outils anatytiques de Chimie, Biochimie et Sécurité » Spectuphors:: 1. Prineipe La spectrophotomeétrie est une méthode analytique quantitative qui consiste a mesurer "absorbance ou la densité optique d'une substance chimique donnée, généralement en solution, “us |'échantillon est concentré,phusil absorbe la lumigxe dans les limites de proportionnalité énoneées par la loi de Beer-Lambert. La densité optique des échantillons vst déierminge pur un spectrophotométre préalablement étalonné sur la longueur d'onde c'absorption de la substance & étudier. Lorsqu’une lumigre d'intensité T, passe & travers une solution, une partie de celle-ci est absorbée par le(s) soluté(s). L"intensité I de la lumidre transmise est done inférieure 4 Z,. On définit Vabsorbance de la solution comme A = log (Io/T) ‘On parle aussi de transmittance définie par la relation : T=I/ I, ancentnation | Lrabsorbance est une valeur positive. sans unité. Elle est d’autant plus grande que l’intensité transmise est faible. La relation de Beer-Lambert décrit que, 4 une longueur d'onde 2. donnée, |'absorbance d’une solution est proportionnelle a sa concentration, et a la longueur du trajet optique (distance sur laquelle la lumiére travérse la solution), Alors, pour une solution limpide contenant une seule substance absorbante A=e. |. ‘A: est l’absorbance ou la densité optique (sans unité) de la solution pour une longueur d'onde + C (en mol.m™) est la concentration de la substance absorbante | * L(encm) est la Jongueur du trajet optique © €(enm’.mol”!.cm') est le coefficient d’extinction molaire de la substance- 1 Un soluté coloré ou chromophore absortv: la humiere visible (longueurs d'onde comprises entre 400 et 800 nm). On parle de spectrophotocolorimétrie ou plus simplement de colorimetric. Certaines solutions absorbent dans I'ultraviolet (Jongueurs ide inférieures & 380 nm). on parle alors de spectrophotométrie UV Le spectrophotométre UV-visible (UV ; ultraviolet) comprend une source ou des sources de lumitre : lumiére blanche pour la mesure dans le spectre visible (lumiére polychromatique) et/ou humiére UV. La lampe UV est généralement de iype deutérium (clomaine «le 195 & 380 nm, durée de vie de la Lampe de 1 000 h, par exemple). La lampe visible est généralement de type halogene (ilomaine de 320 4 1 000 nm, durée de vie de 500 h, par exemple). Diaphragme __ Cellule photeslectrique —_Afficheur | Source polychromatique +} 8,024 al ~ simplicité des mesures «permet de déterminer Ja concentration de molécules