Técnicas Histológicas

→ Sirven para analizar una pieza. Estudiar que → Los haces atraviesan el objeto, ingresan al
pasa en un tejido. objetivo y al ocular.

→ Uso de microscopio: esencial para el estudio de → Se define la apertura numérica y la longitud de

un preparado histológico. Microscopio óptico.
MICROSCOPIA
Visión
└ Uno de los sentido capitales de los seres vivos
└ Permite Adaptaciones al medio
└ Capacidad de interpretación del entorno y
modificaciones de eso.
Ojo
└ Órgano que nos permite vertebral
└ Tiene un límite de resolución.
└ Tiene la capacidad de distinguir dos puntos
separados a una distancia de dos metros, con un
mínimo de 1.000.000 de Angstron (A°)
Medidas mundo visible
1km = 1000m
1m = 1000mm
1mm = 1000 µm (micrómetro)
onda que determina el poder de resolución del
microscopio
Poder de Resolución
└ Representa la capacidad del microscopio para
ver dos distintos puntos próximos entre sí.
→ Apertura numérica: cantidad de rayos luminosos
que ingresan al objetivo. Más haces, mayor
apertura.
→ Longitud de onda: la calidad de los haces
luminosos.
↑Poder de Resolución ↑Apertura Numérica
↑Poder de Resolución ↓Longitud de Onda
PODER DE RESOLUCIÓN =
AP. NUMER. / LONG. DE ONDA

→ Límite de Resolución: “La mínima distancia a la

Medida mundo invisible
que deben encontrarse dos puntos próximos para
1 µm = 1000 nm (nanómetros)
que el microscopio pueda distinguirlos como
1nm = 10 A° (Angstron)
distintos.”– 0,2 µm | 2000 A° |200 nm
1nm = 1000 pm (picómetros)
LIMITE DE RESOLUCIÓN =
LENTES LONG. ONDA / AP. NUMER.
└ Anteojos
└ Lupas → Objetivo: cantidad de veces que se vá aumentar
└ Catalejo lo que se observa ,puede ser de 10x, 40x o 100x.
└ Telescopio
└ Microscopio → Aumento total: se multiplica el objetivo del
microscopio por 10 (aumento del ocular).
MICROSCOPIO ÓPTICO
→ Apertura numérica: la porcentaje de rayos de
└ Fuente de luz luces que pasan por el objetivo.
└ Células vivas y muertas (0,25 = 25% pasa)
└ Con o sin coloración
└ Aumento 2000 veces MICROSCOPIO ELECTRÓNICO

→ Lentes convergentes sobre un eje óptico. └ Haces electrónicos

→ Se pone el objeto sobre la platina y se ilumina
con una fuente de luz directa.
→ En la suplatina (entre luz y la platina) se
encuentra el condensador, que concentra los haces
de luz sobre el objeto.
└ Blanco y negro
└ Aumento 10.000.000 veces
→ Fuente de energía son electrones, pues tienen
menor longitud de onda, pero mayor resolución.
→ Alto vacío en el tubo: para libre desplazamiento
de los electrones.
→ Alto voltaje de trabajo: para el corrimiento
acelerado de electrones.
→ Portaobjeto agujerado: grilla de cobre.
→ Bobina electromagnética en reemplazo de las
lentes de vidrio.
→ Pantalla fluoroscópica receptora (Placa
Fotográfica): porque el ojo humano no es sensible
a los electrones.
Microscopio Electrónico de Transmisión (MET)
└ Revela interiores
└Utiliza células muertas (y algunos, células vivas)
└ imágenes en blanco y negro.
└ Aumento de 10.000.000x
└ Limite de Resolución: 4A°
Microscopio Electrónico De Barrido (MEB)
└ Haz muy fino de electrones que recorre al
objeto.
└ Imágenes Tridimensionales en blanco y negro.
└ Mayor limite de resolución que el MET.
ETAPAS DE UN PREPARADO
HISTOLÓGICO
1) Obtención de la muestra
└ Biopsia: un cuerpo anatómico vivo (Quirúrgica,
Exámenes).
└ Necropsia: un cuerpo anatómico muerto.
→ Se fragmenta el tejido para dejar aptos para la
fijación.
2) Fijación.
└ Conserva la pieza para mantener su función
estructural y química.
└ Se pone la muestra dentro de un Fijador (con el
liquido Formalina / Formaldehído – que mantiene
todas las estructuras “vivas”)
→ Se deshidrata la pieza con sustancias
alcohólicas en una concentración creciente (alcohol
70% → alcohol 100%) para poder haber la
inclusión.
3) Inclusión
└ Sirve para dar firmeza a la pieza para que pueda
pasar por otros procesos futuros.
└ Se añade Parafina o Paraplast para dejar la
muestra más firme.
4) Realización de los cortes
└ En un micrótomo con una cuchilla de acero
└ Se corta la muestra en pequeños cortes con
espesor de 5-10 micrómetros que permite con que
la luz atraviese la estructura
└ Es un corte muy pequeño para que se pueda
mirar el tejido.
→ Se hace una re-hidratación con soluciones
alcohólicas, ahora en concentraciones decrecientes
(alcohol 100% → alcohol 70%) para que el tejido
pueda ser mirado,montado y colorado
5) Montaje
└ Se monta en un portaobjeto de vidrio
└ Se aplica Albúmina para que se fije en en vidrio.
6) Coloración
└ Se usa coloraciones para identificar las partes
celulares en los tejidos.
└ Las sustancias para coloración más comunes son
la hematoxilina y la eosina.
└ Se necesita de eso porque la muestra paso por
muchos procesos químicos y las estructuras ya no
aparecen más mucho.
Hematoxilina
└ Coloración básica
└ Tiene afinidad con medio ácido
└ Color Violeta
└ Apunta donde encontrar el núcleo
Eosina
└ Coloración ácida
└ Tiene afinidad con el medio básico.
└ Color Rosa
└ Apunta el citoplasma
Núcleo Citoplasma