SIMULACION DE LOS PROCESOS INVOLUCRADOS EN LA

PRODUCCION DE BIOETANOL A TRAVES DE SUERO DE

LECHE.
Joshue Chévez Macías 1
jchevez5683@utm.edu.ec 1
Facultad de Matemática, Física y Químicas, Carrera de Ingeniería Química Universidad técnica
de Manabí.

RESUMEN
El rendimiento de bioetanol se respeta una solución energética que aporta a la merma de impactos
ambientales destructivos, originados principalmente por el uso desmedido de combustibles fósiles.
Teniendo en cuenta la evaluación de la producción de bioetanol por parte del suero de leche de bovinos,
optimizando el proceso de hidrolisis de la lactosa y la fermentación del hidrolizado. El suero de leche se
caracterizó tanto física como químicamente usando dos procesos de hidrolizado: química con ácido
clorhídrico al 0.01, 0.1 y 1M (40 y 85 minutos) y enzimática con 0.43, 1, 1.6 μL/L de lactasa (15 a 20
minutos). La eficiencia del proceso de hidrólisis se cuantificó con el contenido de azúcares reductores por
DNS y de glucosa por la técnica GOD-GOP (Trinder) y mediante fermentación de los mejores
tratamientos. Los sueros (ácido y dulce) hidrolizados con la concentración de solución de HCl al 0.1 M,
crudos y suplementados al 6 y 12 % fueron fermentados con una concentración de inoculo de 1x10 6
cel/mL a una temperatura de 30°C bajo condiciones anaerobias, durante 85 horas. En estas condiciones,
se obtuvieron 28.44 g/L en suero dulce suplementado (12% de azúcar total) y 30.02 g/L de bioetanol en
suero ácido suplementado.

Palabras Claves: Bioetanol, residuos agroindustriales, lactosuero, fermentación.

ABSTRACT

The performance of bioethanol is respected, an energy solution that contributes to the reduction of
destructive environmental impacts, mainly caused by the excessive use of fossil fuels. Taking into account
the evaluation of bioethanol production by bovine whey, optimizing the process of hydrolysis of lactose and
the fermentation of the hydrolyzate. The whey was characterized both physically and chemically using two
hydrolyzing processes: chemical with hydrochloric acid at 0.01, 0.1 and 1M (40 and 85 minutes) and
enzymatic with 0.43, 1, 1.6 μL/L of lactase (15 to 20 minutes). ). The efficiency of the hydrolysis process
was quantified with the content of reducing sugars by DNS and glucose by the GOD-GOP technique
(Trinder) and by fermentation of the best treatments. The sera (acid and sweet) hydrolyzed with the
concentration of HCl solution at 0.1 M, raw and supplemented at 6 and 12%, were fermented with an
inoculum concentration of 1x106 cells/mL at a temperature of 30°C under anaerobic conditions. for 85
hours. Under these conditions, 28.44 g/L in supplemented sweet whey (12% total sugar) and 30.02 g/L of
bioethanol in supplemented acid whey were obtained.
Key Words: Bioethanol, agro-industrial waste, whey fermentation.

1. INTRODUCCIÓN
1
La producción de etanol genera emisiones de en países en vías de desarrollo en lugar de
carbono negativas, lo que exacerba los gases de direccionarlo para diferentes usos como:
efecto invernadero y el calentamiento global. alimentación animal o como sustrato microbiano.
Además, el etanol es responsable de la Por otro lado, el suero de leche contiene
destrucción de millones de hectáreas de habitad cantidades significativas de proteína, grasa,
natural a nivel mundial. azúcar (lactosa), vitaminas y algunas trazas de
Actualmente los altos índices de contaminación otros elementos.
han llevado a los gobiernos de todo el mundo a La obtención de etanol a partir de lactosuero es
exigir a las industrias una producción limpia, lo considerada un recurso energético sostenible,
cual hace que las empresas planteen soluciones con alta viabilidad técnica, que brinda ventajas
para disminuir sus cargas contaminantes medioambientales y económicas a largo plazo,
(Panesar et al., 2007), mediante la mejora de sus obtenido de la fermentación realizada por los
procesos o a través del aprovechamiento de los microorganismos los cuales metabolizan los
subproductos. azúcares provenientes de subproductos de
La industria láctea alrededor del mundo es una grandes procesos industriales (Jácquez et al.,
de las principales de la industria alimenticia de 2015). Es de suma importancia recalcar el valor
origen animal. Genera grandes recursos, y su que tiene el lactosuero, ya que como sustrato
forma de producción depende de las tecnologías fermentable generaría una oportunidad de
utilizadas, produciendo leche y derivados. En el desarrollo para nuevas formas de producción y
marco ecuatoriano, la leche es producida cuidado con el medio ambiente.
principalmente por pequeños ganaderos, quienes Los sueros se caracterizan por medio de la física
venden su producción láctea a las marcas de y química con métodos de hidrólisis ácida y
expendio y procesamiento de lácteos. enzimática. La hidrólisis fue eficiente y se
El principal residuo que genera la industria láctea cuantificó mediante el contenido de azúcares
es el suero de leche, la producción mundial de reductores y glucosa.
este residuo por año es de 160 millones de ton, 2. MATERIALES Y MÉTODOS
con un crecimiento de 1-2 % anual (Dragone et
Obtención del suero de queso
al., 2011; Guimarães et al., 2010; Das et al.,
Se colecto el suero de dos distintas queserías en
2015).
el sector de Montañita, Junín. En el caso del
Lo mencionado con anterioridad causa un gran
suero dulce fue conseguido por coagulación de la
daño al ambiente por la alta concentración de
caseína por vía enzimática (renina) y el suero
sustancias orgánicas disueltas (Mukhopadhyay
ácido por la mezcla de renina y cultivos lácticos.
et al., 2003), mismas que provocan una alta
Material biológico y medio de cultivo
demanda bioquímica de oxígeno (DBO) de 35-
Se utilizó una cepa etanolgénica de
45 mg/L, así como una alta demanda química de
Saccharomyces cerevisiae (levadura de cerveza)
oxígeno (DQO) 80,000mg/L (Dragone et al.,
ITPE01, muestra señera de caña de azúcar la
2011), las variaciones en la demanda están
misma que fue conservada por medio del cultivo
determinadas directamente por el tipo de leche y
usando el agar papa-dextrosa a 4 °C.
del contenido de lactosa.
Composición química
El lactosuero es un subproducto de la
El suero contiene, por lo tanto, lactosa (63-70%),
elaboración del queso, el cual se caracteriza por
proteínas solubles (10-12%, albúminas y
el color amarillo-verdoso, la forma opalescente, y
globulinas) y cenizas (8-12%).
el alto valor nutritivo debido a la presencia de
El suero ácido y dulce está compuesto
proteínas de alto valor biológico (Kamei et al.,
químicamente bajo ciertos criterios como:
1975). En la actualidad se sigue desperdiciando
materia seca que se evaluó por secado en una

2
estufa RIOSSA H-33 a 65°C, las cenizas se Análisis estadístico
incineraron en la mufla a 540°C por 5 horas; la El efecto que puede tener los diferentes
proteína se cuantifico por medio de parámetros de hidrolisis química utilizados se
espectrofotometría; la grasa butírica se desarrolló evaluaron una factorial de dos y tres niveles (23)
por el método de Gerber (NMX-F-317-S-1978), el así se llevó a cabo un análisis de varianza
pH se utilizó un potenciómetro Hanna modelo HI- usando la ANOVA y comparativo de medias
98130; para medir el DQO se usó un kit HACH® (LSD). La hidrolisis enzimática se evaluó por
que se basa en el método 800 para agua y aguas medio del método del diseño optimizado de Box-
residuales, por último se determinó la lactosa Benkhen, todos los análisis se realizaron por
usando el equipo Lastocan. Todas las duplicado; (Cuadro 1). El análisis estadístico se
determinaciones se realizaron por triplicado. realizó a través del software statgraphic.
Pretratamiento del suero de queso

 Hidrolisis enzimática de suero de leche

En el proceso se usó la enzima en estado líquido
(β-galactosidasa) Medibac Lab. bajo el nombre
comercial Lactoset, el producto fue almacenado
en frio a 4°C hasta que se utilice. La enzima tiene
una actividad de 10,000 u/g de enzima (1mol de
o-nitrofenol/min, en condiciones óptimas). La
lactosa por medio del método de hidrolisis se
optimizó bajo los siguientes parámetros: Corrida Tiempo Enzima Temperatura
1 15 0.43 36
temperatura (35-40°C), pH (6.5-7.5), tiempo (15-
2 18 0.43 40
20 min) y concentración de enzima (0.43, 1, 1.6 3 20 0.43 40
4 15 1.2 36
μL/L).
5 15 1.5 36
6 15 1 36
 Hidrolisis química de suero de leche 7 20 1 40
8 20 0.45 40
Se llevó a cabo bajo ciertas condiciones:
9 18 0.45 40
autoclave a 123°C/16 psi y 100°C/1 atm, por un 10 20 0.43 40
tiempo de 40 y 85 minutos y una concentración 11 18 1 36
12 18 1.35 40
de ácido 0.01, 0.1 y 1 M cada uno. 13 15 1.40 36
Producción de alcohol 14 20 0.45 36
15 20 1.25 36
Las muestras hidrolizadas fueron centrifugadas a
10000 rpm de 8 a 10 minutos a una temperatura Tabla 1 Diseño de Box-Benkhen
de 4°C, las impurezas fueron filtradas en el papel
3. RESULTADOS Y DISCUSION
filtro No 1, el pH a 4.6 y los azucares reductores
se cuantificaron en el hidrolizado se realizó Composición química

mediante el método de DNS Se inocularon Los resultados finales para la composición

matraces de 1000 ml con un volumen de trabajo química fueron los del Cuadro 2. Lo que es

de 500 ml de suero hidrolizado, con una materia seca y el pH del suero son similares a lo

concentración de inoculo de 1x106 cel/ml, dicho por Boudjema et al. (2015), se encontro

temperatura y tiempo de fermentado fue de 30°C ceniza presente en ambos sueros y se mostro

y 85 horas, por ultimo las muestras se destilaron que la cantidad es menor respecto a lo

y el etanol porcentual se estimó por la ecuación conseguido por Yadav et al. (2015), la cantidad

Gay Lussac. de proteína es menor, y la cantidad de ácido

láctico es mayor a lo reportado por Anand et al.

3
(2013), la cantidad de lactosa fue mayor a lo 0.502) señala que no existe diferencia
expuesto por Panesar et al. (2007), la cantidad significativa entre dichos factores (Gráfico 1), por
de grasa es menor a lo dicho por Yadav et al. lo que se procedió a utilizar, la concentración
(2015), esto tiene relación a las rasgos físicos y más baja de la solución de HCl para efectuar la
químicos de la leche, la especie bovina usada, el hidrólisis.
tiempo en el que se obtubo la leche, tipo de
alimentación de animal bovino y el método de
coagulación usado para separar la caseína Park
et al. (2007), el DQO es similar a lo expuesto por
Boudjema et al. (2015), esto se refleja de tal
manera por la composición física y química de la
leche
(Navas, 2015).

Parámetro Ácido
Materia seca 6.75 ± 0.20
Cenizas 0.85 ± 0.03 Gráfico 1 Gráfico de efectos principales, tipo de
Proteinas 0.15 ± 0.60 suero y concentración de ácido.
Ácido láctico 5.00 ± 1.20
Fermentación de los hidrolizados del suero
Lactosa 3.496 ± 0.132
pH 4.40 ± 0.15 Durante el proceso los azucares reductores
DQO 74.52 ± 0.02 presentes en la fermentación del suero
suplementado con melaza gráfico 2, mostro un
Tabla 2 Composición química (%) de suero de consumo acelerado de azucares en el transcurso
leche bovino de las primeras 18 horas, luego se logra
Hidrolisis enzimática estabilizar medianamente.

La solución de la efectividad de la hidrolisis Se observó que, a pesar de haber mantenido la

enzimática por Box-Benhken no mostro datos
que reflejen alguna diferencia relevante (P=0.308
y 0.809 respectivamente). Inmediatamente en el
tratamiento de hidrolisis en el suero los análisis
mostraron que no hubo una
significativa respecto al contenido de azucares
reductores, lo cual se debe principalmente a la
inhibición competitiva que ejercen los productos
de reacción, glucosa y galactosa, ya que van en
incremento y la galactosa ocupa el sitio activo de
la enzima evitando que la lactosa se una al
mismo (Beltran y Acosta, 2003).
fermentación hasta 92 horas, a partir de las 40
horas el consumo es prácticamente nulo, lo que
indica la posibilidad de que se esté agotando otro
nutriente que actúa como sustrato limitante.
diferencia (Carvalho et al. (2013) encontraron que la
concentración y tipo de la fuente de nitrógeno
afecta el consumo de galactosa cuando se usan
cepas de panificación y cerveceras.

Hidrolisis química

En el ANOVA, los factores evaluados,

concentración de la solución de HCl y el
contenido de azúcares reductores (P-Value:

4
 La evaluación de la producción de bioetanol en
suero ácido y dulce suplementado con melaza al
6 y 12% muestra un rendimiento del 50% con
respecto al rendimiento teórico, en el que 1 mol
de glucosa produce 2 mol de etanol, 2 moles
CO2 y energía (Sánchez, 2005)

Los resultados obtenidos coinciden con lo

esperado, ya que se detectó que la levadura solo
consume una parte del sustrato principal (fuente
de carbono y energía azúcares), lo que indica la
Gráfico 2 Cinética de consumo de azúcares
posibilidad de que se esté agotando otro
reductores en suero ácido de bovino.
nutriente y que actúe como sustrato limitante. Sin
Producción de alcohol embargo, en este trabajo no se evaluó la
evolución de otros nutrientes.
El rendimiento de alcohol obtenido de la
fermentación procesada (suero en crudo y con la Trigueros et al. (2016), encontraron que S.
melaza 6 y 12%) se muestran en la tabla 3. cerevisiae consume rápido la glucosa y
metaboliza con mayor lentitud la galactosa,
Suero dulce Suero ácido
debido a que célula está lista para metabolizar
Tipo Etan Rendimie Etan Rendimie
glucosa. Ocasionado que su sistema de síntesis
ol nto teórico ol nto teórico
enzimática, necesario para asimilar la segunda
(g/l) (g/l)
fuente de carbono dependa de su estado de
Suero 0.316 18.35 0.632 17.45 energía asociado con la concentración de
hidrolizad ± ± ± ± glucosa en el medio. Regulando el sistema en
o 0.00 0.00 0.00 0.00 diferentes mecanismos tales como la represión
de catabolitos y la inactivación catabólica, lo que
Suero 15.8 30.66 15.8 30.66 resulta, en fermentaciones prolongadas. No
Supleme ± ± ± ± obstante S. cerevisiae posee una buena
nto 0.00 0.00 0.00 0.00 capacidad fermentativa y tolerancia al etanol, lo
(6%) que permite producir hasta 20% (v / v)
Suero 28.44 61.33 30.02 61.33 (Boudjema et al. 2015; Guimarães et al., 2010),
Supleme ± ± ± ± convirtiéndola en la levadura más usada para la
nto 0.129 0.00 0.129 0.00 generación de este producto.
(12%)
4. CONCLUSIONES
Se puede concluir que los parámetros físicos y
Tabla 3 Rendimiento de alcohol obtenido a partir
químicos del suero de leche proveniente de la
de suero.
región de Montañita, Junin se encuentran dentro

La producción de bioetanol en suero ácido y de los intervalos aceptables.

dulce hidrolizado sin suplementar es acorde a lo

La optimización de la hidrolisis enzimática por
esperado considerando que el contenido de
razón del diseño de Box-Benhken no aconsejó
azúcar (lactosa) es cercano al 40%, y coincide
residuo típica reducido de sustancias mientras
con estudios previos donde se utilizó suero solo
que el interés de acceso termo-ácidos (hidrólisis
para la producción de etanol, en los que se
química) incremento el agotamiento de almíbares
encontraron bajos rendimientos. (Miller, 2003)
sumas mediante soluciones de HCl a bajas

5
coagulaciones permitiendo llevar a cabo métodos
de desarrollo fermentativos.

La concentración de azúcares totales en suero

de leche hidrolizado ejerció gran influencia en la
producción de etanol por Saccharomyces
cerevisiae ITPE01 siendo la formación de
producto máxima de 28.44 y 30.02 para suero
dulce y ácido respectivamente, cuando se utiliza
una concentración de suplemento (melaza) al 12
%. Por último, el uso de suero de leche como
sustratos representa una oportunidad importante
que puede permitirnos mejorar el valor añadido
de los procesos agroindustriales, reduciendo
temporalmente los costos de eliminación
ayudando a mitigar la contaminación, de cuerpos
de agua y suelos.

BIBLIOGRAFÍA
Anand, S., Som Nath, K., & Chenchaiah, M. (2013). Whey and whey products. Milk and Dairy Products in
Human Nutrition: Production, Composition and Health. 477-497.

Beltran y Acosta. (2003). Effect of sugar catabolite repression in correlation with the structural complexity
of the nitrogen source on yeast growth and fermentation. Journal of the Institute of Brewing.
4(109), 349-355.

Boudjema, K., Fazouane-Naimi, F., & Hellal, A. M. I. N. A. (2015). Optimization of the Bioethanol
Production on Sweet Cheese Whey by Saccharomyces cerevisiae DIV13-Z087C0VS using
Response Surface Methodology (RSM).Romanian. Biotechnological Letters, 5(20), 10814-10825.

Carvalho, F., Prazeres, A. R., & Rivas, J. (2013). Cheese whey wastewater: characterization and
treatment. Science of the total Environment(445), 385-396.

Das, B., Roy, A. P., Bhattacharjee, S., Chakraborty, S., & Bhattacharjee, C. (19 de Febrero de 2015).
Lactose hydrolysis by β-galactosidase enzyme: optimization using response surface
methodology. Ecotoxicology and environmental safety. (121), 244-252.

Dragone, G., Mussatto, S. I., e Silva, J. B. A., & Teixeira, J. A. (2011). Optimal fermentation conditions for
maximizing the bioethanol production by Kluyveromyces fragilis from cheese whey powder.
Biomass and bioenergy. Redalyc, 5(35), 1977-1982.

Guimarães, P. M., Teixeira, J. A., & Domingues, L. (2010). Fermentation of lactose to bio-ethanol by
yeasts as part of integrated solutions for the valorisation of cheese whey. Biotechnology
Advances (Vol. 28(3)).

Jácquez-Velázquez, L., Soto-Cruz, N. O., Rutiaga-Quiñones, O. M., & Páez-Lerma, J. B. (2015).

Evaluación de las variables de fermentación para la producción de etanol a partir de lactosuero.
XVI Congreso Nacional de Biotecnología y Bioingeniería. IntechOpen.

6
Kamei, C., Masuda, Y., Oka, M., Shimizu, M. (1975). Effects of antidepressant drugs on amygdaloid after
discharge in rats. Jpn J Pharmacol, 4(25), 359–365. doi:eng. doi:10.1254/jjp.25.359

Miller, G. (2003). Determination of reducing sugar by DNS method. Analytical Chemistry(31), 426-428.

Mukhopadhyay, R., Talukdar, D., Chatterjee, B. P., & Guha, A. K. (2003). Whey processing with chitosan
and isolation of lactose. Process Biochemistry, 3(39), 381-385.

Navas, J. (2015). Aprovechamiento Industrial de Lactosuero Mediante Procesos Fermentativos.

Publicaciones e Investigación. 6, 69-83.

Panesar, P. S., Kennedy, J. F., Gandhi, D. N., & Bunko, K. (2007). Bioutilisation of whey for lactic acid
production. Food Chemistry. Dialnet, 1(105), 1 - 14.

Park, Y. W., Juárez, M., Ramos, M., & Haenlein, G. F. W. (2007). Physico-chemical characteristics of goat
and sheep milk. Small ruminant research, 1(68), 88-113.

Sánchez, Ó. J. (2005). Producción biotecnológica de alcohol carburante I: obtención a partir de diferentes

materias primas. Interciencia, 11(30), 671-678.

Trigueros, D. E. G., Fiorese, M. L., Kroumov, A. D., Hinterholz, C. L., Nadai, B. L., & Assunção, G. M.
(2016). Medium optimization and kinetics modeling for the fermentation of hydrolyzed cheese
whey permeate as a substrate for Saccharomyces cerevisiae var boulardii. Biochemical
Engineering Journal(110), 71-83.

Yadav, J. S. S., Yan, S., Pilli, S., Kumar, L., Tyagi, R. D., & Surampalli, R. Y. (2015). Cheese whey: A
potential resource to transform into bioprotein, functional/nutritional proteins and bioactive
peptides. Biotechnology advances, 6(33), 756-774.

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