Berikut adalah langkah-langkah untuk membuat reagen kolesterol untuk pengujian yang

menggunakan deteksi cahaya:

Bahan-bahan yang dibutuhkan:

Kolesterol

Asam klorida pekat : https://www.tokopedia.com/kimiaidjgc/hcl-55-1-liter-pembersih-kerak-semen-

keramik-kotoran-lantai?extParam=ivf%3Dfalse&src=topads

Asam sulfat pekat : https://www.tokopedia.com/cepykimia/asam-sulfate-98-percen-ready-

stok?extParam=ivf%3Dfalse&src=topads

Asam asetat : https://www.tokopedia.com/glattchemical/cuka-dapur-1000-gram-murni-

berkualitas?extParam=ivf%3Dfalse&src=topads

Aseton : https://www.tokopedia.com/kimiaidjgc/aseton-acetone-1-liter-penghilang-cat-kuku-
asetone-aceton-kuku-cat

Etanol: https://www.tokopedia.com/layanaolinstore/alkohol-teknis-96-ethanol-kemasan-20-liter

Air suling : https://www.tokopedia.com/fukuchanbabyshop/aquadest-aquades-distilled-water-air-

suling-5-liter?extParam=ivf%3Dfalse&src=topads

Kloroform : https://www.tokopedia.com/rorostorees/promo-kloroform-teknis-
murah?extParam=ivf%3Dfalse%26src%3Dsearch

Reagen Liebermann-Burchard: campuran asam asetat dan asam sulfat pekat

Alat-alat yang dibutuhkan:

Gelas ukur

Erlenmeyer

Pipet

Pengaduk magnetik

Kolom kromatografi

Spektrofotometer UV-Vis

Langkah-langkah:

Persiapkan larutan kolesterol dengan melarutkan 20 mg kolesterol dalam 5 mL kloroform dalam

Erlenmeyer. Kolesterol akan terlarut dengan mudah dalam kloroform.
Gunakan pipet untuk mengambil 1 mL larutan kolesterol dan tempatkan dalam gelas ukur.
Tambahkan 3 mL asam sulfat pekat dan 0,5 mL asam asetat. Aduk campuran secara perlahan
menggunakan pengaduk magnetik selama beberapa menit. Pastikan bahwa semua bahan tercampur
dengan baik.

Tambahkan 10 mL etanol ke dalam campuran dan aduk lagi menggunakan pengaduk magnetik
selama beberapa menit.

Kemudian tambahkan 1 mL aseton dan aduk kembali selama beberapa menit.

Diamkan campuran selama beberapa menit, kemudian gunakan pipet untuk memindahkan lapisan
atas (yang mengandung kolesterol) ke dalam tabung reaksi.

Gunakan kolom kromatografi untuk memisahkan kolesterol dari campuran lainnya. Gunakan
campuran asam asetat dan asam sulfat pekat sebagai fase gerak. Elusi kolesterol dari kolom
menggunakan campuran asam asetat dan asam sulfat pekat.

Gunakan spektrofotometer UV-Vis untuk mengukur absorbansi kolesterol pada panjang gelombang
tertentu. Reagen Liebermann-Burchard dapat digunakan untuk memperkuat sinyal spektrofotometri
kolesterol.

Dengan mengikuti langkah-langkah di atas, reagen kolesterol untuk pengujian yang menggunakan
deteksi cahaya dapat dibuat di laboratorium. Namun, sebaiknya dilakukan oleh tenaga ahli yang
berpengalaman dan memperhatikan keselamatan dalam penggunaan bahan kimia.

Regenerate response

ChatGPT Feb 13 Version. Free Research Preview. Our goal is to make AI systems more natural and
safe to interact with. Your feedback will help us improve.

New chat
Berikut adalah cara pembuatan reagen kolesterol dengan menggunakan tiga enzim, yaitu cholesterol
esterase (CE), cholesterol oxidase (CO), dan peroxidase (POD):

Bahan-bahan yang dibutuhkan:

Cholesterol esterase

Cholesterol oxidase

Peroxidase

Fosfat buffer 0.1 M pH 7

4-aminoantipyrine (4-AAP)

Phenol

Natrium lauril sulfat (SDS)

Asam asetat glasial

Air suling

Gula pasir

Alat-alat yang dibutuhkan:

Gelas ukur

Erlenmeyer

Pipet

Pengaduk magnetik

Spektrofotometer UV-Vis

Langkah-langkah:

Persiapkan larutan CE, CO, dan POD dengan melarutkan 100 mg masing-masing enzim dalam 5 mL
fosfat buffer 0.1 M pH 7 dalam Erlenmeyer. Aduk campuran dengan pengaduk magnetik selama
beberapa menit sampai tercampur dengan baik.

Campurkan 2 mL larutan CE, 2 mL larutan CO, dan 2 mL larutan POD dalam gelas ukur. Aduk
campuran dengan pengaduk magnetik selama beberapa menit.
Tambahkan 20 mg 4-aminoantipyrine (4-AAP) dan 50 mg phenol ke dalam campuran, kemudian
aduk campuran dengan pengaduk magnetik selama beberapa menit sampai tercampur rata.

Tambahkan 50 mg natrium lauril sulfat (SDS) dan 0,5 mL asam asetat glasial ke dalam campuran,
kemudian aduk campuran dengan pengaduk magnetik selama beberapa menit sampai tercampur
rata.

Tambahkan air suling hingga volume mencapai 100 mL, kemudian aduk campuran dengan pengaduk
magnetik selama beberapa menit sampai tercampur rata.

Tambahkan 5 g gula pasir ke dalam campuran, kemudian aduk lagi dengan pengaduk magnetik
selama beberapa menit.

Saring campuran menggunakan kertas saring untuk menghilangkan endapan dan partikel kasar.

Simpan reagen kolesterol dalam botol yang bersih dan kedap udara.

Dengan mengikuti langkah-langkah di atas, reagen kolesterol dengan tiga enzim CE, CO, dan POD
dapat dibuat di laboratorium. Namun, sebaiknya dilakukan oleh tenaga ahli yang berpengalaman
dan memperhatikan keselamatan dalam penggunaan bahan kimia.