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C I E N C I A I N M U N O L O G Í A | A RMás
T Í C información
U L O D E disponible en www.DeepL.com/pro.
INVESTIGACIÓN
TUBERCULOSIS Copyright © 2021

The Authors, algunos
La BCG pulmonar induce la activación de los derechos reservados;
licenciatario
macrófagos residentes en el pulmón y confiere exclusivo American

Association for the
protección a largo plazo contra la tuberculosis Advancement of

Science. Sin
reivindicación de
Elena Mata1,2† , Raquel Tarancón1,2‡ , Claudia Guerrero1,2 , Eduardo Moreo1,2 , Flavie Moreau3 , obras originales del
Santiago Uranga1,2 , Ana Belén Gómez1,2 , Dessislava Marinova1,2 , Miriam Doménech2,4 , Gobierno de EE.UU.
Fernando González-Camacho2,4 , Marta Monzón5 , Juan Badiola5 , Jorge Domínguez-Andrés6 ,
José Yuste2,4 , Alberto Anel7 , Antonio Peixoto5 , Carlos Martín1,2,8§ , Nacho Aguilo *1,2§
El bacilo de Calmette-Guerin (BCG) es una vacuna bacteriana atenuada que se utiliza para proteger contra
Mycobacterium tuberculosis (Mtb) en regiones donde las infecciones son muy prevalentes. En la actualidad, la
BCG se administra por vía intradérmica, pero las vías alternativas de administración son de gran interés, incluida
la administración intrapulmonar para imitar más de cerca la infección respiratoria por Mtb. En este estudio, se
2023
Descargado de https://www.science.org el 16 de septiembre de
estudiaron ratones sometidos a la administración pulmonar de cepas de micobacterias virulentas (Mtb) y
atenuadas (BCG) marcadas con proteína verde fluorescente para caracterizar mejor los subconjuntos de células
pulmonares infectadas. Se detectaron profundas diferencias en los patrones de diseminación entre Mtb y BCG,
con una fuerte tendencia de Mtb a diseminarse desde los macrófagos alveolares (MA) a otros subconjuntos
mieloides, principalmente neutrófilos y macrófagos reclutados. El BCG permaneció principalmente en los MA, lo
que promovió su activación. Estos macrófagos preactivados fueron muy eficaces a la hora de contener los
bacilos de Mtb e interrumpir la diseminación bacteriana temprana, lo que sugiere un posible mecanismo de
protección asociado a la vacunación pulmonar con BCG. La BCG respiratoria también protegió a los ratones frente
a una provocación letal con Streptococcus pneumoniae, lo que sugiere que la activación innata inducida por la BCG
podría conferir una protección heteróloga frente a patógenos respiratorios distintos del Mtb. La BCG impulsó la
activación a largo plazo de los AMs, incluso después de la eliminación de la vacuna, y estos AMs reaccionaron
eficientemente ante un desafío posterior. Estos resultados sugieren la generación de una respuesta de tipo
memoria innata entrenada en l o s A M inducida por la vacunación pulmonar con BCG.
Radboud Center for Infectious Diseases (RCI), Radboud University Nijmegen

INTRODUCCIÓN Medical Center, Nijmegen, Países Bajos. 7Grupo Apoptosis, Inmunidad y Cáncer, IIS
La vacuna contra el bacilo de Calmette-Guerin (BCG) se ha utilizado Aragón, Dpto. Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Fac. Ciencias, Universidad
de Zaragoza, Zaragoza, España. 8Servicio de Microbiología, Hospital Universitario
durante casi un siglo, pero la tuberculosis (TB) sigue siendo una de Miguel Servet, I S S Aragón, Paseo, Isabel la Católica 1-3, 50009 Zaragoza, España.
las principales causas de mortalidad causada por un solo patógeno y *Autor corresponsal. Correo electrónico: naguilo@unizar.es
fue responsable de ~ 1,4 millones de muertes en todo el mundo en Dirección actual: Certest Biotec, San Mateo de Gállego, 50840 Zaragoza, España.
Dirección actual: Meakins-Christie Laboratories, Department of Medicine, McGill
2019 (1). Además, la creciente amenaza de cepas multirresistentes University Health Centre, McGill University, Montreal, QC, Canada.
y extremadamente farmacorresistentes convierte a la TB en un §Estos autores comparten la autoría principal de este trabajo.
problema de salud mundial urgente y pone de relieve la necesidad
de un enfoque de vacuna contra la TB más eficaz.
Existe un interés renovado por las estrategias basadas en la
administración de BCG por vías de administración no canónicas, y
recientemente se ha demostrado que la vacunación intravenosa
con BCG induce protección en primates no humanos (PSN). La
vacunación con BCG por vía pulmonar se describió por primera
vez en estudios clínicos realizados hace varias décadas (2, 3), y los
resultados en múltiples modelos preclínicos demostraron
1
Grupo de Genética de Micobacterias, IIS Aragón, Facultad de Medicina, Universidad
de Zaragoza, C/ Domingo Miral s/n, 50009 Zaragoza, España. 2CIBER
Enfermedades Respiratorias, Instituto de Salud Carlos III, Madrid, España. 3Institut
de Pharmacologie et de Biologie Structurale (IPBS), Université de Toulouse, CNRS,
UPS, Toulouse, Francia.
4
Centro Nacional de Microbiología, Instituto de Salud Carlos III, Madrid, España.
5
Re-
Centro de búsqueda de Encefalopatías y Enfermedades Transmisibles Emergentes,
Universidad de Zaragoza, Zaragoza, España. 6Departamento de Medicina Interna y
Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 1 de 13
2021
CIENCIA INMUNOLOGÍA | ARTÍCULO DE
INVESTIGACIÓN
mejoras sustanciales en la protección conferida por la vacunación
pulmonar en relación con la inmunización subcutánea o
intradérmica (4, 5). La mayoría de los estudios que describen las
respuestas inmunitarias de las mucosas provocadas
específicamente por la BCG pulmonar se han centrado en las
respuestas adaptativas. Se ha informado de la inducción de células
T helper 17 e inmunoglobulinas específicas de la TB en la mucosa
tras la inmunización pulmonar con BCG tanto en ratones (6)
como en PSN (7). Sin embargo, se sabe poco sobre la
contribución de la inmunidad innata local a la protección
inducida por la vacuna.
La entrada de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) en las vías
respiratorias provoca interacciones de los bacilos con las células
fagocíticas pulmonares, y estas interacciones determinan los
resultados de la infección, que pueden ir desde la esterilización
hasta la diseminación bacteriana. Las micobacterias son
engullidas por los macrófagos alveolares (MA) situados en las vías
respiratorias durante las fases iniciales de la infección, y las células
infectadas migran rápidamente al intersticio pulmonar, donde los
bacilos pueden diseminarse a otras células fagocíticas,
principalmente macrófagos intersticiales (MI) diferenciados y
neutrófilos.
(8). Estas poblaciones celulares presentan una tolerabilidad
diferencial a la replicación de Mtb. Los MI son altamente
inflamatorios e impiden eficazmente la replicación bacteriana (9,
10), aunque algunos subconjuntos de macrófagos parecen ser más
permisivos a la infección (11). Los neutrófilos son típicamente
más permisivos a la infección y se han asociado con la
diseminación bacteriana durante la TB activa (12-14).
En el presente estudio, hemos caracterizado la activación de
los macrófagos pulmonares inducida por la vacunación pulmonar
con BCG y la contribución de estos macrófagos a la protección
contra la tuberculosis. Nuestros resultados sugieren un papel clave
de la diseminación célula a célula por Mtb durante la infección
temprana y cómo la interrupción de este proceso de diseminación
puede adaptarse a un enfoque de vacunación protectora.

2021
INVESTIGACIÓN
patrón de diseminación bacteriana no se observó con BCG, que se
RESULTADOS restringió principalmente a los AM y se extendió de forma limitada
Patrón diferencial de diseminación celular temprana entre a los IM en el día 24 (Fig. 1H y fig. S2A).
Mtb y BCG
Para confirmar la propagación de Mtb in situ, utilizamos
Primero caracterizamos las poblaciones de células pulmonares
microscopía confocal para visualizar la adquisición de Mtb y BCG
infectadas en diferentes momentos de la infección pulmonar
por las células pulmonares en los días 1 y 13 tras la infección.
tras una provocación intranasal con la cepa virulenta de Mtb
Infectamos una línea de ratones transgénicos obtenida del cruce de
H37Rv que expresa la proteína verde fluorescente (GFP) (fig. S1).
ratones Csf1r-eCFP (proteína fluorescente cian mejorada)
La provocación intranasal con dosis bajas de Mtb representa uno
(MacBlue) (18) y LysM-GFP (19) con H37RV-RFP (proteína
de los modelos fisiológicos más relevantes de infección tuberculosa
fluorescente roja) o BCG-RFP. En esta línea de ratones, los monocitos
en ratones, pero una carga bacteriana baja dificulta la
diferenciación entre las células infectadas y la fluorescencia de
referencia de las células no infectadas (15). Por esta razón,
realizamos experimentos de desafío con una dosis alta de 106
unidades formadoras de colonias (UFC) H37Rv para evaluar las
poblaciones infectadas en los días 1 y 7 después de la infección.
En los días 13 y 24, utilizamos 105 y 104 CFU, respectivamente,
para limitar los síntomas asociados a la enfermedad y la
mortalidad prematura en estos puntos temporales posteriores (Fig.
1A). Como era de esperar, los AM (CD11chigh CD64+ SiglecF+ )
fueron el principal subconjunto infectado en los primeros
2023
momentos tras la provocación intranasal. Sin embargo, en puntos
temporales posteriores, una fracción mayor de células infectadas
tenía un fenotipo consistente con neutrófilos (CD11c− CD64−
SiglecF− CD11b+ Ly6G+ ) (Fig. 1, B y C, y fig. S2A), y este
resultado se correlacionó con un aumento de la neutrofilia en
los pulmones a lo largo del curso de la infección (fig. S2B).
Otros análisis indicaron que los MI (CD11cdim CD64+ SiglecF− )
fueron reclutados en el pulmón a partir del día 13 tras la
infección (fig. S2B) y que Mtb se propaga de los MA a los MI
durante el curso de la infección (fig. 1, B y D, y fig. S2A), lo que
confirma observaciones publicadas anteriormente (8).
A continuación examinamos si la diseminación temprana de
Mtb estaba asociada con la virulencia o servía como estrategia para
combatir la infección. Evaluamos los patrones de diseminación
bacteriana de una vacuna BCG con expresión de GFP, ya que se
trata de una cepa atenuada que puede ser controlada por el sistema
inmunitario del huésped tras la infección respiratoria (16).
Analizamos las poblaciones de células infectadas tras la
administración intranasal de BCG, en los mismos puntos
temporales estudiados para H37Rv (Fig. 1E). La deficiencia de RD1
(región de diferencia 1) en BCG representa la principal causa de
atenuación y deterioro de la capacidad infectiva (17), por lo que
incluimos una cepa de BCG complementada con RD1
(BCG::RD1), de la que se ha informado previamente que restaura la
virulencia (16). Se utilizó la misma dosis de 106 UFC tanto para
BCG como para BCG::RD1 (Fig. 1E), ya que no se detectó
toxicidad adicional con BCG::RD1 en puntos temporales
posteriores. Aunque se observó un aumento de neutrófilos no
infectados en el día 24 en los pulmones de los ratones infectados
con BCG (fig. S2B), la cepa vacunal apenas se diseminó en los
neutrófilos y permaneció asociada a macrófagos en todos los puntos
temporales medidos (fig. 1F y fig. S2A), a diferencia de la
diseminación observada de H37Rv. Se detectó un subconjunto de
neutrófilos infectados con BCG::RD1 en el día 13 después de la
infección (Fig. 1G), y esto se correlacionó con el fenotipo virulento
restaurado de la cepa BCG completada definido por una mayor
proporción de células infectadas con BCG::RD1- y una mayor carga
bacteriana en los pulmones de los ratones infectados en relación
con el grupo BCG (fig. S3). En los días 13 y 24, BCG::RD1 pasó a IMs
(Fig. 1I), de forma similar a lo observado con Mtb (Fig. 1D). Este
2021
INVESTIGACIÓN virulencia bacteriana.
y macrófagos son CFP positivos, mientras que los neutrófilos Evaluamos la activación de macrófagos inducida por la
maduros son GFP positivos pero CFP negativos, y esto permite la vacunación intranasal o subcutánea inmunizando ratones con 106
visualización de las bacterias por los neutrófilos en los pulmones UFC de BCG y analizando la activación de macrófagos a las cuatro
infectados. Nuestros resultados mostraron que un mayor número u ocho semanas después de la vacunación (Fig. 2C). Se detectaron
de neutrófilos (GFP+ CFP− ) fueron reclutados en el pulmón bacterias BCG en los pulmones en ambos momentos tras la
infectado después de la infección H37Rv en comparación con inmunización intranasal, pero no se encontraron colonias BCG
BCG (Fig. 1J). En línea con nuestros datos de citometría de flujo, detectables en los ratones que recibieron BCG subcutánea (Fig.
los neutrófilos (GFP+ CFP− ) adquirieron H37Rv tan pronto como 2D). El BCG intranasal, pero no el subcutáneo, indujo la activación
24 horas (3%) después de la infección, con un porcentaje mayor de macrófagos a las 4 y 8 semanas después de la vacunación (Fig.
(20%) observado en el día 13 después de la infección (Fig. 1K). 2E),
Por el contrario, BCG se detectó raramente, si es que se detectó,
en neutrófilos (GFP+ CFP− ).
Realizamos un experimento de desafío con H37Rv tras la
depleción de neutrófilos para definir mejor el papel de los
neutrófilos durante la infección temprana. La depleción de
neutrófilos se llevó a cabo utilizando una combinación del
anticuerpo monoclonal anti-Ly6G (clon 1A8) con un anticuerpo
secundario de ratón anti-rat-IgG� (fig. S4A) (20). Para evaluar el
agotamiento celular, los neutrófilos se detectaron como células
CD11c− CD11b+ Ly6cdim (fig. S4B), ya que el anticuerpo
neutralizante utilizado en este protocolo enmascara la unión del
anticuerpo anti-Ly6G utilizado para la detección por citometría
de flujo (20). Obtuvimos una reducción media de
aproximadamente el 65% de los neutrófilos en los pulmones
medidos el día 19 después de la infección (fig. S4B), y observamos
una fuerte disminución de los neutrófilos infectados por Mtb en
relación con los ratones no empobrecidos (una reducción del 60
al 20% de las células infectadas) en este punto temporal. En estas
condiciones de neutrofilia reducida, observamos que las bacterias no
quedaban retenidas dentro de los AM, independientemente de la
eliminación de neutrófilos, y que migraban principalmente a los
IM (fig. S4C). Inesperadamente, los menores niveles de infección
por neutrófilos no se correlacionaron con diferencias en la carga
bacteriana o la proporción de células infectadas, que no difirieron
notablemente entre los grupos empobrecidos y no empobrecidos
(fig. S4, D y E). Esta observación sugiere que la colonización de
neutrófilos podría no ser un determinante crucial para la
replicación de Mtb in vivo, y que la infección bacteriana podría
progresar con éxito en otros compartimentos celulares como los
MI. Encontramos que tanto los MI infectados como los totales
mostraban una menor expresión del marcador de activación del
complejo mayor de histocompatibilidad II (MHCII) en el grupo
empobrecido (fig. S4F). Esta observación sugiere que los
neutrófilos pueden contribuir a la activación óptima de los MI
transeúntes, lo que podría explicar la permisividad de estas células
para permitir la replicación de Mtb en estas condiciones.
La vacunación pulmonar con BCG, pero no la subcutánea,

induce la activación de los macrófagos pulmonares
A continuación estudiamos la expresión de marcadores de
activación bien conocidos en macrófagos infectados con BCG.
Observamos un aumento dependiente del tiempo de MHCII,
CD86 y óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) en las células que
contenían BCG (GFP+ ) (Fig. 2A). El BCG pulmonar también
desencadenó la activación de macrófagos transeúntes no infectados
(GFP− ) (Fig. 2B), lo que concuerda con estudios previos (21). Se
observó una tendencia similar cuando los macrófagos se
infectaron con H37Rv que expresaba GFP (fig. S5), aunque con una
cinética más rápida, lo que sugiere que la activación de los
macrófagos se produce independientemente de los niveles de
2021
INVESTIGACIÓN
Fig. 1. Patrones diferenciales de
diseminación célula a célula entre cepas
virulentas y atenuadas. (A) Esquema de la
infección respiratoria por Mtb. Se infectaron
ratones C57BL/6 adultos por vía intranasal
c o n Mtb marcado con GFP (H37Rv::gfp). (B)
Diagramas de puntos r e p r e s e n t a t i v o s
que muestran las células infectadas con Mtb en
los días 1, 7, 13 y 24 después de la infección, y
las p r o p o r c i o n e s de poblaciones
marcadas con GFP+ determinadas por análisis
de marcadores CD64 y SiglecF. Los recuadros
corresponden a AM (azul), IM (naranja) y neutrófilos
(rosa). SSC, luz lateral dispersa. (C) Frecuencias
de macrófagos y neutrófilos infectados por Mtb.
(D) Frecuencias de AMs e IMs infectados por Mtb.
(E) Esquema de la administración intranasal (i.n.) de
BCG marcado con GFP y BCG::RD1 en ratones.
(F) F r e c u e n c i a de macrófagos infectados
con BCG y BCG::RD1.
(G) Frecuencias de neutrófilos infectados con
BCG y BCG::RD1. (H) Frecuencias de AMs e IMs
2023
infectados con BCG. (I) Frecuencias de AMs e IMs
infectados con BCG::RD1. (J) Proyección de
máxima intensidad de apilamientos de
microscopía focal de secciones de tejido
pulmonar de ratones infectados con Csf1r-eCFP
× LysM-GFP en los días 1 y 13 tras la infección.
Los neutrófilos son GFP+ y CFP− , mientras que
los macrófagos y monocitos son CFP+ . Las
flechas rojas resaltan l o s ejemplos de células
infectadas. (K) Cuantificación de neutrófilos
totales (arriba) e infectados (abajo) a partir de
imágenes de microscopía confocal. (C a H)
Datos agrupados de dos experimentos
independientes (n = 6 ratones por grupo). Los
gráficos se presentan como medias±SD.
**P<0,01, ***P<0,001 y ****P<0,0001 mediante la
prueba t de Student no apareada múltiple (C, D
y F a H) y ANOVA unidireccional con postprueba
de Bonferroni (K).
sugiriendo que la presencia física de a largo plazo (22). Observamos que la

BCG puede ser necesaria para La regulación al alza de varios genes asociados a un perfil
desencadenar la activación de los inflamatorio de los macrófagos, como Nos2, Ifng, Irf8 o Ccl2 (Fig.
macrófagos, pero esta comparación no 2F). Varios de los genes más regulados al alza están relacionados
pudo realizarse aquí ya que la BCG con una mayor función metabólica en estas células, como Hk2, Ldlr,
subcutánea no produjo colonización G6pdx o Ldha. La regulación al alza de estas vías se ha descrito
pulmonar. Analizamos las diferencias como una marca distintiva de la inducción de la inmunidad
en los perfiles de expresión génica de los entrenada tanto a nivel central como en los AM (23, 24).
AM a las 8 semanas después de la
vacunación intranasal con BCG. Se
siguieron genes diana seleccionados en
función de su papel en la inflamación y
el metabolismo, incluida la glucólisis,
porque la expresión de estos genes se ha
asociado con la activación celular innata
2021
INVESTIGACIÓN
Los macrófagos activados por BCG contienen la

infección temprana y previenen la propagación de
Mtb desde los AMs
Estas observaciones nos llevaron a plantear la hipótesis de que los
AM preactivados con BCG intranasal podrían representar una
barrera de contención primaria contra una infección posterior por
Mtb. Para probar esta hipótesis, im- munizamos ratones con un
BCG no fluorescente (106 UFC) por vía intranasal o subcutánea
y desafiamos a los ratones 8 semanas más tarde por vía
subcutánea.

2021
INVESTIGACIÓN
Fig. 2. La presencia de BCG en el pulmón
desencadena la activación de los macrófagos
pulmonares. (A) Histogramas representativos e
intensidad de fluorescencia de la expresión de
MHCII, CD86 e iNOS en macrófagos infectados
con BCG (GFP+ ) en los días 1 (gris), 13 (azul) y 20
(rosa) tras la inoculación de ratones C57BL/6
adultos con BCG marcado con GFP. PE,
ficoeritrina.
(B) Expresión de MHCII, CD86 e iNOS por
macrófagos no infectados (GFP− ). (C) Esquema
de la vacunación con BCG marcado con GFP de
ratones por vía intranasal y subcutánea (s.c.). (D)
UFC de BCG en pulmones a las 4 y 8 semanas
tras la a d m i n i s t r a c i ó n d e la vacuna.
(E) Expresión de MHCII, CD86 e iNOS por
macrófagos pulmonares totales de los grupos
BCG subcutáneo (púrpura) e intranasal (azul) o
ratones no vacunados (gris). (F) Expresión génica
relativa de macrófagos pulmonares
seleccionados de r a t o n e s vacunados con
BCG intranasal 8 semanas después de la
2023
vacunación. Los datos son representativos de
dos experimentos independientes (n = 6
ratones por grupo). Los gráficos se presentan
como media ± DE. **P < 0,01, ***P < 0,001, y ****P <
0,0001 por ANOVA unidireccional con postest de
Bonferroni (A, B, D, E, F).
3B). Por el contrario, el estado de activación de las MA infectadas

por Mtb de ratones inmunizados con BCG subcutáneo fue menor y
similar al de los controles no vacunados.
El análisis de las células infectadas (GFP+ ) reveló una
diseminación restringida (baja) de Mtb en los neutrófilos de los
pulmones de los pacientes infectados por vía intranasal.
administración intranasal de una cepa H37Rv con expresión de

GFP (Fig. 3A). Comparamos los marcadores de activación de las
células infectadas por Mtb en ratones naïve frente a los vacunados.
Nuestros datos revelaron que los AMs infectados con Mtb (GFP+ )
en el día 1 después del desafío ya están presentes en un estado
activado en el grupo BCG intranasal y son positivos para los tres
marcadores inflamatorios analizados (MHCII, CD86, y iNOS) (Fig.
2021
I N V E S T I G A C I Ó N ratones vacunados (fig. 3C y fig. S6A),
y las micobacterias virulentas se
localizaron normalmente en el
compartimento de los macrófagos en
ambos momentos (fig. 3D). La BCG
intranasal se asoció con un menor
número de neutrófilos no infectados
en los pulmones en comparación con
los controles no vacunados (fig. S6B).
Estas observaciones se
correlacionaron con un fuerte efecto
protector inducido por la vacuna,
demostrado por una carga bacteriana
reducida en los pulmones (Fig. 3E) en
el grupo de BCG intranasal en
comparación con los controles no
vacunados. La vacunación BCG
subcutánea dio lugar a un perfil de
diseminación similar al de los
controles no vacunados, con una
mayor proporción de neutrófilos
infectados en comparación con el
grupo BCG intranasal. Hubo una
disminución sustancial de neutrófilos
infectados.
en el día 24 (Fig. 3C y fig. S6A), lo que se correlacionó con el
control de la infección (Fig. 3E).
El análisis de los subconjuntos de macrófagos indicó que el
Mtb estaba restringido principalmente a los AM en los ratones
vacunados con BCG intranasal, lo que sugiere que los AM
previamente activados limitaron notablemente la capacidad del
Mtb para propagarse a otros compartimentos celulares (Fig. 3F y
fig. S6A). Tanto los ratones no vacunados como los vacunados
subcutáneamente mostraron una diseminación bacteriana
progresiva de los MA a los MI a lo largo de la infec- ción. Se
detectó una mayor proporción de MI infectados en el día 7
después de la provocación en el grupo vacunado
subcutáneamente en comparación con los ratones no vacunados
(Fig. 3F), lo que concuerda con anteriores estudios sobre la
propagación de la bacteria a los MI (Fig. 3F).

2021
INVESTIGACIÓN
Fig. 3. Los macrófagos pulmonares de
ratones vacunados con BCG pulmonar, pero
no subcutánea, son protectores frente a Mtb.
(A) Esquema de la vacunación intranasal y
subcutánea de ratones con BCG no fluorescente
y posterior desafío intranasal con H37Rv que
expresa GFP medido en días postinfección (p.i.).
(B) Histogramas representativos e intensidad de
fluorescencia de la expresión de MHCII, CD86 e
iNOS en macrófagos infectados con H37Rv en el
día 1 tras la provocación, en ratones no vacunados
(gris), vacunados con BCG subcutánea (púrpura) y
vacunados con BCG intranasal (azul). (C)
Frecuencias de neutrófilos infectados con Mtb
e n ratones no vacunados (gris), vacunados con
BCG subcutánea (púrpura) y vacunados con BCG
intranasal (azul). (D) Frecuencias de macrófagos
infectados por Mtb en ratones no vacunados
(gris), vacunados con BCG s u b c u t á n e a
(púrpura)yvacunados con BCG
i n t r a n a s a l (azul). (E) Cargas bacterianas
de Mtb en los pulmones de ratones no
2023
vacunados, vacunados con BCG subcutánea y
vacunados con BCG intranasal. (F) Frecuencias
de AMs e IMs infectados con Mtb en ratones no
vacunados, vacunados con BCG subcutánea y
vacunados con BCG intranasal. (G) Esquema de la
vacunación intranasal y subcutánea de
r a t o n e s con BCG y posterior challenge
intranasal con S. pneumoniae. (H) Curva de
supervivencia de ratones no vacunados,
vacunados con BCG subcutánea y vacunados con
BCG intranasal tras la exposición a S. pneumoniae.
(I) Cargas bacterianas de S. pneumoniae en
sangre en ratones no vacunados, vacunados
con BCG subcutánea y vacunados con BCG
intranasal a las 24, 48 y 72 horas después de la
infección. (B) Los datos son representativos de
dos e x p e r i m e n t o s independientes (n = 3
ratones por grupo). (C a F) D a t o s
a g r u p a d o s d e d o s experimentos
independientes (n = 6 r a t o n e s p o r
g r u p o ). (I) Datos agrupados de dos
experimentos independientes (n = 4 a 5 ratones
por grupo). Los gráficos se presentan como
medias ± DE. *P < 0.05,
**P < 0,01, ***P < 0,001 y ****P < 0,0001
mediante ANOVA unidireccional con
postprueba de Bonferroni (B) y ANOVA
bidireccional con postprueba de Bonferroni (C a
I). La supervivencia se analizó mediante la
prueba de log-rank (Mantel-Cox).
y puede ser un mecanismo potencial de protección inducido por el CD45 por vía intravenosa antes de la eutanasia para discernir las
BCG subcutáneo (25). células inmunitarias re- cribadas de la circulación frente a las células
Evaluamos la compartimentación de las células mieloides residentes en el tejido pulmonar (fig. S7A). Como era de esperar, no
pulmonares infectadas in vivo. Se administró anticuerpo anti- se encontraron AM CD45+ en los pulmones de los ratones
vacunados o no vacunados, lo que indica que esta población celular
2021
I N residente
es V E S T I Gen
A CelI Ó N pulmonar (fig. S7B). Por el contrario,
tejido afluencia de neutrófilos de la circulación a los pulmones. Del
encontramos una gran proporción de neutrófilos CD45+ mismo modo, la presencia de MI CD45+ reflejaba el reclutamiento
(alrededor del 50%), sin que se observaran diferencias entre los de estas células desde la sangre al parénquima pulmonar, aunque
distintos grupos, lo que indicaba una presencia constante en el se observó que la proporción de células circulantes era mayor al
tejido pulmonar. principio de la provocación y disminuía progresivamente a lo largo
de la infección (fig. S7B). No se encontraron células GFP+ en las
células CD45+ -circulantes, lo que indica que la infección se
produce una vez que las células extravasan de la circulación a los
tejidos pulmonares (fig. S7, C y D).
Analizamos el marcador de proliferación Ki67 en macrófagos
pulmonares infectados y no infectados tras la infección. Se observó
una pro- porción notablemente mayor de MA infectados que
expresaban Ki67 (GFP+ ) en los macrófagos pulmonares
infectados.

2021
INVESTIGACIÓN
en el grupo BCG intranasal en comparación con el grupo BCG vacunados con BCG intranasal, y las células T CD4+ fueron
subcutáneo y los controles no vacunados en el día 1 tras la deplecionadas en el momento de la infección por Mtb. La depleción
provocación. Esta mayor expresión de Ki67 se mantuvo en todos de células T CD4+ mediada por anticuerpos se inició 1 semana antes
los puntos temporales analizados y se restringió a las células del desafío (Fig. 4A), lo que permitió que estas células estuvieran
infectadas. Este resultado sugiere que las AM cebadas con BCG presentes durante la fase de vacunación. Nuestros resultados
intranasal proliferan tras la infección por Mtb, lo que podría revelaron que los AM infectados por Mtb (células GFP+ ) analizados 1
representar un mecanismo que contribuya a la protección día después de la provocación intranasal permanecían activados en
temprana asociada a la vacunación con BCG intranasal (fig. S8). ausencia de células T CD4+ , confirmado por la expresión de
Los macrófagos pueden reconocer una amplia gama de MHCII y CD86 (Fig. 4B). Se observó una menor expresión de iNOS
patógenos. Por lo tanto, nuestra hipótesis es que los macrófagos en el grupo sin células T CD4 + , lo que sugiere que las
pulmonares activados por BCG pueden proteger frente a una células T CD4 se activaron de forma específica en el grupo sin
infección bacteriana respiratoria distinta de la tuberculosis. Ocho células T CD4 .
semanas después de la vacunación BCG intranasal o subcutánea,
los ratones fueron desafiados intranasalmente con una dosis letal
de Streptococcus pneumoniae y se evaluó la supervivencia de los
animales (Fig. 3H). Cinco de los 10 ratones del grupo vacunado
intranasalmente no mostraron ningún síntoma asociado a la
enfermedad al final del experimento (7 días después de la
provocación), mientras que todos los animales del grupo no
vacunado alcanzaron el criterio de valoración final y fueron
2023
eutanasiados (Fig. 3H). Se encontró una protección leve pero no
significativa en el grupo vacunado por vía subcutánea, con 2 de 10
supervivientes al final del estudio. Los ratones vacunados por vía
intranasal también mostraron un menor grado de bacterias
diseminadas en sangre a las 24, 48 y 72 horas después del desafío
en comparación con los controles no vacunados y con el grupo
vacunado por vía subcutánea (Fig. 3I).
Las células T CD4+ contribuyen a la activación de

macrófagos inducida por vacunas
La producción de interferón-y (IFN-y) por las células T CD8+ se ha
descrito como una citocina clave para el cebado y la activación de
los AM en respuesta a la infección viral respiratoria (24).
Anteriormente habíamos descrito que la BCG intranasal induce
una fuerte respuesta local de células T específicas de antígeno (4, 6).
En el presente trabajo, nos propusimos evaluar la importancia de las
células T en la activación de macrófagos inducida por BCG y la
protección temprana frente a Mtb.
Se evaluaron las respuestas de células T específicas de antígeno
inducidas por la vacuna en diferentes momentos antes y después
de la provocación mediante el análisis de células pulmonares CD4+
y CD8+ productoras de IFN-y en ratones vacunados y no
vacunados. La inducción de IFN-y específica de las células T CD4+
fue sustancialmente superior a la de las células T CD8+ , lo que
confirma que las micobacterias desencadenan preferentemente
respuestas dependientes de las células T CD4+ . Nuestros datos
revelaron que el BCG intranasal inducía células CD4+ productoras
de IFN-y en todos los momentos analizados, incluido el día 1 antes de
la provocación (fig. S9, A a C). Por el contrario, las respuestas
pulmonares inducidas por BCG subcutáneo se retrasaron hasta el día
7 después del desafío. Además, medimos la concentración de
proteína IFN-y en suspensiones pulmonares de ratones vacunados
con BCG intranasal tras la depleción de células T CD4+ o CD8+ ,
que fue altamente eficaz para ambas poblaciones (>95%) (fig. S10).
Los niveles de IFN-y se redujeron profundamente en ausencia de
células CD4+ y no de CD8+ , lo que sugería que los linfocitos T
CD4+ eran los principales productores de esta citocina tras la
vacunación pulmonar con BCG (fig. S9, D y E). Basándonos en
estos resultados, evaluamos el papel de los linfocitos T CD4+ en la
activación de los macrófagos pulmonares. Los ratones fueron
2021
I N V E S T I GdeAactivación
marcadores C I Ó N en los AM podrían ser desencadenados vacunación (Fig. 5D). La infiltración de MI y neutrófilos
por interacciones con células T CD4 . La diseminación
+ desapareció a los 7 meses (punto final fijo del experimento), lo que
bacteriana en los neutrófilos en el día 13 (Fig. 4C) y la carga sugiere que el estado inflamatorio inducido por la vacuna se
bacilar de Mtb pulmonar fueron menores en el grupo vacunado resolvió tras la eliminación de la bacteria, y el entorno
con BCG intranasal y sin células T CD4+ (Fig. 4E) en inmunológico pulmonar volvió a la homeostasis.
comparación con los controles no vacunados, lo que sugiere que Las AM detectadas a los 7 meses de la vacunación mostraron
los macrófagos activados por BCG indujeron protección incluso una alta expresión de MHCII y CD86, lo que indica que estas
en ausencia de células T CD4+ . Llevamos a cabo un experimento células mantuvieron cierto grado de activación tras la eliminación
de supervivencia utilizando una dosis baja intranasal de Mtb y de la vacuna en comparación con los controles no vacunados de la
tratamos a los ratones con anticuerpos anti-CD4 semanalmente misma edad (Fig. 5E). La expresión de iNOS no fue
durante la duración de la fase de desafío, comenzando la significativamente diferente entre los grupos vacunados y naïve, lo
depleción antes de la inoculación de Mtb. Se observó una que difirió de las observaciones en los experimentos de vacunación
reducción de la supervivencia en los ratones no vacunados con a corto plazo. Se evaluó la expresión de los genes estudiados en los
depleción de células T CD4+ , mientras que la supervivencia no se grupos de 2 meses de edad.
vio afectada en los animales inmunizados con BCG,
independientemente de la presencia de células T CD4+ (Fig. 4F).
Estos resultados sugieren que la protección temprana conferida por las
células innatas activadas por BCG puede ser efectiva durante
periodos de tiempo más largos.
Evaluamos el efecto de la depleción de células T CD4+ durante
las fases de vacunación y desafío (Fig. 4G). La ausencia de células
T CD4+ durante la vacunación condujo a una activación
deficiente de los AMs, que inter- nalizaron Mtb tras la
provocación y presentaron una menor expresión de los
marcadores MHCII, CD86 e iNOS (Fig. 4H). El análisis de las
poblaciones de células infectadas en el día 13 después de la
provocación indicó una menor retención de Mtb en los
macrófagos del grupo sin células T CD4+ en comparación con los
ratones control vacunados (Fig. 4I) y una mayor diseminación en
los neutrófilos (Fig. 4J) a niveles similares a los controles no
vacunados. Además, la carga de Mtb en el día 13 fue comparable
en el grupo sin células T CD4+ y en los ratones no vacunados (Fig.
4K), lo que sugiere la necesidad de una activación de los
macrófagos mediada por células T CD4+ para la protección
inducida por la vacuna.
Evaluamos la contribución de las células T CD8+ a la activación
de macrófagos inducida por BCG (fig. S11). La ausencia de células
T CD8+ durante las fases de vacunación y/o desafío no tuvo un
efecto significativo sobre la activación de los MA y la carga
bacteriana en los pulmones.
El BCG pulmonar induce la activación a largo plazo de las

AMs
Examinamos los efectos de la activación a largo plazo de los
macrófagos tras la eliminación de la vacuna BCG, ya que es
fundamental para identificar la adquisición de un fenotipo similar
a la memoria por parte de las poblaciones de células innatas (26).
Nuestra hipótesis era que el aumento de las respuestas tras una
exposición secundaria a Mtb podría deberse a la adquisición de
memoria y no a la presencia de los estímulos primarios.
Vacunamos ratones con BCG intranasal y evaluamos el
aclaramiento bacteriano en diferentes momentos tras la
inmunización (Fig. 5A). Se encontraron algunas bacterias BCG en
los pulmones a los 5 meses pero no a los 7 meses (Fig. 5B).
También caracterizamos diferentes poblaciones mieloides con el
objetivo de evaluar los eventos de infiltración celular que
acompañan al aclaramiento bacteriano (Fig. 5C). Nuestros datos
revelaron una fuerte correlación entre la cantidad de BCG
pulmonar y el nivel de MI infiltrados (Fig. 5, C y D). El número de
neutrófilos era elevado en el grupo vacunado 1 mes después de la

2021
INVESTIGACIÓN
Fig. 4. Las células T CD4+ contribuyen a la
activación de macrófagos inducida por la
vacuna. (A) Esquema de la vacunación intranasal
con BCG no fluorescente en ratones y posterior
desafío intranasal con H37Rv que expresa GFP,
con tratamiento de depleción de células T CD4+
mediante la administración intraperitoneal de
anticuerpos neutralizantes anti-CD4,
comenzando 7 días antes del desafío intranasal
con H37Rv. (B) Histogramas representativos e
intensidad de fluorescencia d e l a expresión
de MHCII, CD86 e iNOS en macrófagos
infectados con H37Rv en el día 1 tras la
p r o v o c a c i ó n , en grupos no vacunados
(gris), vacunados con BCG intranasal (azul) y
vacunados con BCG intranasal con depleción de
células T CD4+ (rojo). (C) Frecuencias de
neutrófilos infectados por Mtb en ratones no
vacunados (gris), vacunados con BCG intranasal
(azul) y vacunados con BCG intranasal y sin
células T CD4+ (rojo). (D) Frecuencias de
macrófagos infectados con Mtb en ratones no
vacunados (gris), vacunados con BCG i.n. (azul) y
vacunados con BCG intranasal con células T CD4+
a g o t a d a s (rojo). (E) Cargas bacterianas de
Mtb en los pulmones de ratones no vacunados,
vacunados con BCG intranasal y vacunados con
BCG intranasal/pobreza d e células T CD4+ . (F)
Curva de supervivencia utilizando una dosis
baja de desafío de Mtb de 500 UFC, y
d e p l e c i ó n d e células T CD4+ a partir del
desafío. (G) Esquema de la vacunación
intranasal de ratones con BCG no fluorescente, y
posterior desafío intranasal con H37Rv que
expresa GFP, con tratamiento de depleción
intraperitoneal de células T CD4+ , comenzando
7 días antes de la vacunación intranasal con BCG.
(H) Histogramas representat i v o s e
intensidad de fluorescencia de la expresión de
MHCII, CD86 e iNOS en macrófagos infectados
con H37Rv en el día 1 tras l a provocación, en
grupos de ratones no vacunados (gris),
vacunados con BCG intranasal (azul) y vacunados
con BCG intranasal con depleción de células T
CD4+ (rojo). (I) F r e c u e n c i a s de
macrófagos infectados por Mtb en ratones no
(azul) y vacunados con BCG intranasal, s i n
células T CD4+ (rojo). (J) Frecuencias de
neutrófilos infectados por Mtb en ratones no
(azul) y vacunados con BCG intranasal, sin
células T CD4+ (rojo). (K) Cargas bacterianas de
Mtb en los pulmones de los grupos no
vacunados, vacunados con BCG intranasal y
vacunados con BCG intranasal, sin células T
CD4+ . Los datos son representativos de dos
experimentos independientes. Los datos son
representativos de dos experimentos
independientes (n = 6 ratones por grupo). Los
gráficos se presentan como medias ± DE. ns, no
significativo.
*P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 y ****P < 0,0001
mediante ANOVA unidireccional con
postprueba de Bonferroni (B y H), y ANOVA
bidireccional con postprueba de Bonferroni (C a
2021
INVESTIGACIÓN F e I a K). La supervivencia se analizó mediante
la prueba de log-rank (Mantel-Cox).
(Fig. 2F) en las MA seleccionadas del séptimo mes. En este caso, mayor capacidad de respuesta a la estimulación secundaria (24, 27,
sólo los niveles de expresión de Ldlr, Irf8 e Il1b aumentaron 28). Se desafió a los ratones con H37Rv que expresaba GFP como
notablemente en las AM seleccionadas, de modo que la expresión estímulo secundario 7 meses después de la vacunación intranasal
basal de los marcadores inflamatorios detectada 2 meses después con BCG (Fig. 5F), y se midió el nivel de expresión de los
de la vacunación casi había desaparecido en el séptimo mes (fig. marcadores de activación en las MA infectadas (GFP+ ) y no
S12). infectadas (GFP− ) el día 1 después del desafío. Supusimos que no
Se ha demostrado que ciertos subconjuntos de células innatas era probable que las células GFP− de los grupos vacunados y no
experimentan un cambio hacia un fenotipo similar a la memoria, vacunados desencadenaran una respuesta secundaria, ya que no
que se caracteriza por habían interactuado.
2023

2021
INVESTIGACIÓN
****P < 0,0001 mediante ANOVA unidireccional
con postprueba de Bonferroni (B y D), prueba t de
Student múltiple no apareada (E y G) y ANOVA
bidireccional con postprueba de Bonferroni (H a
J).
2023
Fig. 5. Los macrófagos activados por BCG conservan la capacidad protectora tras la eliminación de la vacuna. (A)
Esquema de la vacunación con B C G marcado con GFP por vía intranasal. (B) UFC de BCG en pulmones. (C) Gráficos
de puntos representativos que analizan las poblaciones pulmonares según la expresión de los marcadores CD11c,
CD64 y SiglecF. (D) Número total de AM, IM y neutrófilos pulmonares. Los controles corresponden a ratones no
vacunados. (E) Histogramas representativos e intensidad de fluorescencia de la expresión de MHCII, CD86 e iNOS en
macrófagos totales en el mes 7 tras la vacunación, en grupos de ratones no vacunados (gris) y vacunados con BCG
intranasal (púrpura). (F) Esquema de la vacunación intranasal con BCG no fluorescente en ratones y posterior desafío
intranasal con H37Rv que expresa GFP (H37Rv::gfp). (G) Histogramas representativos de la expresión de MHCII, CD86
e iNOS en macrófagos pulmonares no infectados (gris) e infectados por Mtb (GFP+ , verde) de ratones no vacunados y
vacunados con BCG intranasal medidos 1 día después de la infección con H37Rv marcado con GFP. El gráfico muestra
las relaciones de intensidades de fluorescencia entre las células GFP+ y GFP− para cada marcador y estado de
vacunación. (H) Frecuencias de neutrófilos infectados por Mtb en grupos de ratones no vacunados y vacunados con
BCG. (I) Frecuencias de macrófagos infectados por Mtb en g r u p o s no vacunados y vacunados con BCG. (J) Cargas
bacterianas de Mtb en pulmones de ratones no vacunados y vacunados con BCG. Los datos son representativos de
dos experimentos (n = 2 a 6 ratones por grupo). Los gráficos se presentan como medias ± DE. *P < 0,05, **P < 0,01,
***P < 0,001, y
2021
I N V E S T I Gcon
directamente A Clas
I Óbacterias
N de desafío. Nuestros datos demostraron que los AMs del grupo de
BCG intranasal se comportaron como se predijo para una respuesta similar a la memoria, con
un aumento sub-estancial en la expresión del marcador de activación en las células infectadas
en relación con las células no infectadas (Fig. 5G). Esto fue particularmente notable para
iNOS, porque las AMs activadas a largo plazo tenían una expresión reducida de este
marcador (Fig. 5E) que aumentó rápidamente tras la estimulación secundaria.
Como habíamos demostrado en los experimentos de vacunación a corto plazo, la
diseminación bacteriana de los neutrófilos en el día 13 después del desafío se redujo
notablemente en estas condiciones (Fig. 5H), con micobacterias contenidas principalmente
dentro de los macrófagos (Fig. 5I). Las cargas bacilares (UFC) en los pulmones de los ratones
vacunados también fueron menores en comparación con los controles no vacunados (Fig. 5J),
lo que sugiere que los macrófagos cebados con BCG mantuvieron su capacidad para
restringir la replicación de Mtb a largo plazo después de la vacunación.
DEBATE
La administración pulmonar de BCG es un tema de interés renovado en términos de su
viabilidad para el uso en la clínica y su capacidad potencial para conferir una protección local
más específica y duradera en los pulmones contra la tuberculosis pulmonar. Un estudio
clínico reciente de vacunación pulmonar con BCG en voluntarios adultos sanos no informó de
problemas de seguridad importantes tras la administración de la vacuna con un broncoscopio
(29). Además, recientemente han finalizado dos ensayos clínicos realizados por la Universidad
de Oxford para evaluar la seguridad y la inmunogenicidad de la BCG en aerosol en adultos
del Reino Unido (NCT02709278 y NCT03912207),
sin que hasta la fecha se hayan notificado problemas de seguridad importantes. Desde el
punto de vista de la eficacia protectora, existen datos sólidos tanto en ratones como en
cobayas que indican una mejor protección conferida por la BCG intranasal en comparación con
la BCG subcutánea (5, 6). Más recientemente, se demostró que el BCG pulmonar podía
prevenir no sólo la enfermedad de la tuberculosis, sino también la infección por tuberculosis en
los PSN.
(7). Sin embargo, los mecanismos inmunológicos que subyacen a este efecto protector no se
entienden completamente, y los estudios disponibles se centraron en las respuestas
adaptativas de la mucosa con pocos datos sobre la interacción y modulación de las
poblaciones mieloides pulmonares por BCG.

2021
INVESTIGACIÓN
Se ha descrito que los AM representan una población permisiva macrófagos. Un estudio previo describió que los MI reclutados
para la replicación de Mtb, como se ha observado en las primeras infraactivados pueden representar un nicho permisivo para la
fases de la infección. replicación de Mtb
(8). Según nuestros datos, una pregunta relevante debería ser ¿por (11). Esto podría explicar la falta de reducción de UFC observada en
qué habrían evolucionado las micobacterias virulentas para adquirir nuestros experimentos. Nuestros datos también demostraron que,
la capacidad de escapar de este nicho celular y propagarse a otros en ausencia de neutrófilos, Mtb colonizaba preferentemente los IM,
subconjuntos celulares? Una explicación plausible podría ser que lo que indica que las micobacterias virulentas pueden escapar de los
los AM ingenuos, pero no los AM activados, representan un AM independientemente de la ausencia de neutrófilos. Esta situación
reservorio permisivo de Mtb. Un estudio previo demostró que la es diferente a la que observamos en ratones vacunados con BCG
infección micobacteriana in vivo inducía la reprogramación pulmonar, en los que Mtb estaba restringido principalmente a los
transcriptómica en los AM poco después de la infección, que era AM. Este resultado apoya nuestra hipótesis de que los AM activados
desencadenada por el factor nuclear eritroide 2-relacionado con el son un
factor 2 (NRF2) y conducía a la adquisición de un fenotipo
proinflamatorio (21). Además, una publicación reciente que
describe las poblaciones celulares pulmonares asociadas con la TB
activa o latente en NHPs mostró una fuerte correlación entre los
altos niveles de AMs y el control de la infección, mientras que las
AMs están casi ausentes en individuos con TB activa (30). De
acuerdo con estos estudios, observamos una regulación al alza de los
marcadores de activación en las AM de ratones infectados por Mtb en
2023
comparación con los controles no infectados, y las AM expresaron
moléculas con funciones bactericidas, incluida la iNOS. En el
momento en que detectamos AMs activadas, sólo una pequeña
fracción de bacilos de Mtb estaba contenida dentro de estas células.
Estos hallazgos sugieren que los bacilos de Mtb están bajo presión
para escapar de los AMs ingenuos antes de que este subconjunto
celular adquiera atributos restrictivos de la TB. En el caso del BCG
atenuado, estos bacilos parecen haber perdido la capacidad de
escapar de los AM tras la infección y probablemente estarían
contenidos dentro de estas células durante la activación celular, lo
que podría contribuir a la eliminación progresiva del BCG.
Nuestros datos indican que la BCG pulmonar induce la
activación global de macrófagos infectados y no infectados. Como
resultado, los MA de ratones inmunizados con BCG intranasal que
se encuentran con Mtb tras la infección pulmonar ya están
activados, lo que parece tener consecuencias cruciales para el
posterior proceso de infección. Uno de los efectos más notables es
la interrupción de la dinámica de diseminación bacteriana en las
poblaciones transeúntes, incluidos los neutrófilos y los MI
reclutados, que se correlaciona con una reducción sustancial de la
carga bacteriana. Esta observación, junto con la menor eficacia de
la BCG atenuada para abandonar los AM y colonizar otros
subconjuntos celulares, sugiere la importancia de la dinámica de
diseminación bacteriana para la progresión de la infección
tuberculosa. Otros estudios han demostrado la asociación de
neutrófilos con la TB no contenida en modelos animales (13, 14) y
con la TB activa en humanos (12). Por el contrario, nuestro estudio
mostró que la depleción de neutrófilos tras la provocación con Mtb
no condujo a una reducción de la infección por TB, al menos en
términos de UFC pulmonares, lo que puede deberse a una
depleción incompleta de neutrófilos. Esta causa es poco probable,
ya que nuestros resultados mostraron una reducción sustancial de
los neutrófilos que contenían Mtb, y deberíamos haber detectado
una reducción mensurable de las UFC pulmonares mediadas por
neutrófilos si éstos sirvieran de reservorio celular para la
replicación bacteriana. Es más probable que los neutrófilos
contribuyan a la progresión de la TB de una forma diferente (31,
32). A este respecto, detectamos una disminución de la expresión
de MHCII en los MI de ratones sin neutrófilos, lo que sugiere un
posible papel de los neutrófilos en la activación óptima de los
2021
Ipoblación
N V E S T I restrictiva
G A C I Ó Nde TB, con una gran capacidad para ha identificado como un potente inductor de la inmunidad
contener la infección, y el escape de Mtb de los AM podría entrenada en monocitos periféricos (28), así como en precursores
representar un paso clave de virulencia. mieloides de la médula ósea tras su administración intravenosa.
Se ha especulado que el éxito de Mtb en colonizar los (27). Sin embargo, como se revisa en una publicación reciente (26),
pulmones se debe al retraso en el desarrollo de una respuesta el comportamiento de las células inmunitarias innatas tras recibir
celular eficaz antes de la entrada del patógeno en las vías un estímulo primario puede dar lugar a diferentes fenotipos
respiratorias (33). Durante este tiempo, los AM no activados que causados por la diferenciación, la tolerancia y el cebado, además de
contienen bacilos de Mtb migran al parénquima pulmonar y las respuestas asociadas a la inmunidad entrenada. El fenotipo
permiten la replicación y diseminación bacterianas, lo que es entrenado se caracteriza por el retorno de la activación
crítico para el establecimiento de la infección (8). El control de la inmunológica celular a un nivel basal tras la eliminación del
replicación por parte del huésped se correlaciona con la estímulo primario, y permanecen las modificaciones epigenéticas
migración a los pulmones de células T CD4+ específicas de que hacen que las células respondan de forma más eficiente para
antígeno que habían sido activadas en los ganglios linfáticos de responder a estímulos secundarios. En
drenaje (34). En el caso de la inmunización BCG subcutánea, el
tiempo entre el encuentro bacteriano y la generación de la
respuesta celular se reduce con la vacunación, pero existe una
ventana en la que las bacterias pueden replicarse y establecer la
infección en ausencia de respuestas inmunitarias mediadas por
células (33). Se ha demostrado que la reducción de esta ventana es
una estrategia prometedora para aumentar la eficacia protectora
de la vacuna (35). Nuestros datos con la vacunación BCG
intranasal indican que las micobacterias virulentas son
internalizadas por un subconjunto celular restrictivo de TB en los
primeros momentos de la infección, y la ventana de oportunidad
para que Mtb se replique adecuadamente y alcance una carga
bacteriana crítica o se disemine hacia subconjuntos celulares
permisivos se reduce notablemente. Esto podría explicar una
observación en NHP en la que la BCG pulmonar previno la
infección por TB en un modelo de desafío repetitivo con dosis
ultrabajas, lo que sugiere la inducción de inmunidad esterilizante
(7).
Nuestros resultados indican que los AM activados por BCG
pueden contener la infección tuberculosa en ausencia de células T
CD4+ cuando estas células se desactivan durante la fase de desafío.
Sin embargo, las células T CD4+ son necesarias durante la fase de
vacunación para desencadenar la activación de macrófagos
protectores. Estos resultados indican que la inmunidad adaptativa
desencadenada por la vacuna es crucial para la activación de los
macrófagos. Sin embargo, una vez activados, los macrófagos
pueden contener la infección e incluso prevenir la mortalidad de
los ratones inducida por la tuberculosis, independientemente de la
presencia o ausencia de células T. Es muy probable que la
contribución de las células T a la activación de los AM se base en
el suministro de IFN-y (24). En el caso de la BCG, las células T
CD4+ son las principales contribuyentes de IFN-y, con una
contribución aparentemente dis- pensable de las células T CD8+ .
Por el contrario, un estudio previo que utilizó la administración
de adenovirus respiratorios describió la necesidad de células T
CD8+ como productoras de IFN-y e inductoras de la activación de
AMs (24). La divergencia entre los estudios podría explicarse por
la hipótesis de que la producción local de IFN-y por linfocitos
adaptativos es necesaria para inducir la activación de macrófagos,
pero la fuente de IFN depende del estímulo primario. Los virus
tienden a inducir la activación de las células T CD8+ , pero las
células T CD4+ suelen ser la fuente de IFN-y tras la exposición a
micobacterias intracelulares como la BCG, lo que confirmamos
en nuestro estudio.
La inmunidad entrenada se ha descrito como la capacidad de
las células inmunitarias innatas para mostrar una respuesta
similar a la memoria de los linfocitos adaptativos (36). El BCG se

2021
INVESTIGACIÓN
leyendas de las figuras. Los resultados no se cegaron para el análisis.
En el caso del proceso de cebado, el estímulo primario cambia el
estado funcional de estas células, y su estado inmunológico no Declaración ética
vuelve a los niveles basales anteriores al estímulo secundario o a la El trabajo experimental se llevó a cabo de acuerdo con las directivas
infección. En nuestros experimentos a largo plazo, el estado europeas y nacionales para la protección de los animales de
inmunológico de las AM tras la eliminación de la BCG no volvió a experimentación, y los procedimientos experimentales fueron
los niveles basales, ya que la expresión de MHCII y CD86 seguía aprobados por el Comité de Ética para la Experimentación Animal
siendo elevada. Los genes inflamatorios, incluido el Irf8, también se de la Universidad de Zaragoza (PI46/18, PI33/15 y PI50/14). Para
regularon al alza en los AM activados por BCG intranasal tras la todos los experimentos se utilizaron ratones machos y hembras de
eliminación de la vacuna. Teniendo en cuenta nuestra entre 8 y 10 semanas de edad.
comprensión actual de la im- munidad entrenada (26), no está
claro si la BCG induce entrenamiento o cebado en las AM tras la
vacunación local. Sin embargo, e independientemente de esta
clasificación, nuestros resultados demuestran que las AM activadas
por BCG tienen la capacidad de desencadenar una respuesta
mejorada frente a un desafío posterior. Este estudio informa de la
capacidad de la BCG para inducir una respuesta similar a la
memoria en los AMs y la capacidad de los AMs activados con BCG
a largo plazo para responder eficientemente a un desafío con Mtb.
La presencia de MI infiltrados y de neutrofilia desapareció cuando
se volvió a aplicar la BCG. Desde el punto de vista de la seguridad,
2023
esto indicaría que la vacunación pulmonar con BCG no induce
una inflamación crónica que podría tener consecuencias
colaterales perjudiciales.
Una limitación de nuestros resultados para ser traducidos a un
escenario más relevante podría descansar en la vía de vacunación
elegida para administrar BCG en los pulmones. Es poco probable
que la vía intranasal se autorice para la administración de vacunas
vivas en la clínica debido a problemas de seguridad. Por el
contrario, la administración en aerosol podría ser más probable, y
el BCG en aerosol con nebulizadores clínicos ya está siendo
evaluado clínicamente. Dado que no es factible probar este tipo de
servicios en el modelo de ratón, sería importante caracterizar las
poblaciones mieloides en estudios en humanos (o NHP) para
confirmar el papel de los AM en la protección tras la
administración de BCG en aerosol.
Los investigadores que trabajan en vacunas contra la TB han
estado tratando de identificar los parámetros inmunológicos
basados en las respuestas celulares adaptativas que se correlacionan
con la protección inducida por la vacuna, pero hay un creciente
interés en el papel de las respuestas no canónicas para la
protección contra la TB. Se ha demostrado que los anticuerpos, las
células asesinas naturales o las células T IFN-y negativas son
importantes para la protección natural contra la TB (37-39), y las
defensas innatas se han asociado con la eliminación temprana de la
infección por TB (40). Aquí, hemos demostrado que es posible
modular la activación de los macrófagos pulmonares a través de la
vacunación local con BCG, demostrando así que la inducción de la
inmunidad a largo plazo en los macrófagos residentes en los tejidos
podría representar un enfoque viable para las vacunas
experimentales.
MATERIALES Y MÉTODOS
Diseño del estudio
El objetivo de este estudio era analizar la contribución de los AM a
la protección contra la tuberculosis inducida por la vacuna BCG
administrada por vía pulmonar. Los grupos de ratones se
distribuyeron aleatoriamente en grupos de tres a seis animales por
jaula en cada experimento. El número de representantes biológicos
y el número de repeticiones de cada experimento se indican en las
2021
INVESTIGACIÓN mM MgCl2 , y
Ratones 1,8 mM CaCl2 (pH 7,4)] con desoxirribonucleasa I (40 UI/ml;
Los ratones C57BL/6JR se adquirieron en Janvier Biolabs. Los AppliChem) y colagenasa D (2 mg/ml; Roche) utilizando un
ratones Csf1r-eCFP × LysM-GFP se obtuvieron en las disociador GentleMacs (Miltenyi Biotec) según las instrucciones del
instalaciones para animales del Institut de Pharmacologie et de fabricante. Los pulmones se incubaron a 37 °C durante 30 minutos
Biologie Structurale (IPBS; Toulouse, Francia) cruzando las cepas y se homogeneizaron con el disociador GentleMacs. Los
Csf1r-eCFP (18) y LysM-GFP (19). Todos los ratones se alojaron y homogeneizados se filtraron a través de un colador celular de 70 µm
mantuvieron en condiciones específicas libres de patógenos y se (MACS SmartStainers, Miltenyi Biotec).
observaron para detectar cualquier signo de enfermedad en las
instalaciones del Centro de Investigación de Encefalopatías y
Enfermedades Trans- misibles Emergentes (Zaragoza, España;
referencia ES 50 297 0012 009) y del Centro de Investigaciones
Biomédicas de Aragón (Zaragoza, España; referencia ES 50 297
0012 011).
Cepas bacterianas
Las cepas micobacterianas utilizadas en este estudio se cultivaron
a 37°C en caldo Middlebrook 7H9 (BD Difco) suplementado con
0,05% de Tween 80 (Sigma-Aldrich) y enriquecimiento con 10% de
catalasa de albúmina dextrosa (ADC) Middlebrook (BD
Biosciences) o en agar sólido Middlebrook 7H10 (BD Difco)
suplementado con 10% de ADC (BD Difco). Cuando fue necesario,
el medio se complementó con kanamicina (20 µg/ml). Las cepas que
expresan GFP de H37Rv, BCG Pasteur y BCG::RD1 (regalo de R.
Brosch, Instituto Pasteur de París, Francia) se generaron por
transformación con el plásmido replicativo pJKD6 (regalo de L.
Leite, Instituto Butantan, Brasil). Este plásmido porta el gen gfp
bajo el control de un promotor fuerte generado mediante
reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con error del
promotor PL5 del micobacteriófago L5 (41). Las suspensiones
bacterianas para las vacunaciones intranasales o subcutáneas o las
infecciones intranasales se prepararon en solución salina
tamponada con fosfato (PBS) a partir de soluciones madre de
glicerol cuantificadas.
Infección intranasal y administración de vacunas

Nuestra experiencia en el estudio de la administración intranasal
de cepas virulentas y atenuadas como vía de administración
pulmonar indica que esta vía es comparable a la administración
intratraqueal, y seleccionamos la administración intranasal para la
infección con H37Rv::gfp. Los animales fueron anestesiados, y la
administración intranasal se realizó con dos instilaciones de 20 µl
(una por fosa nasal) de la suspensión bacteriana preparada en
PBS. Las dosis de infección se optimizaron en función del número
de células infectadas necesarias para el posterior análisis de las
poblaciones infectadas pulmonares mediante citometría de flujo
en cada punto temporal. Las dosis de infección con H37Rv::gfp se
definieron como 106 UFC para los días 1 y 7, 105 UFC para el día
13 y 104 UFC para el día 24.
La vacunación se realizó con 106 UFC de BCG Pasteur o BCG
Pasteur::gfp por vía intranasal o subcutánea. Para la vacunación
subcutánea, los ratones fueron inyectados subcutáneamente con
100 µl de suspensión bacteriana preparada en PBS. Para los
experimentos de protección, los ratones inmunizados con 106 UFC
de BCG Pasteur por vía intranasal o subcutánea y desafiados
intranasal con H37Rv::gfp en los puntos de tiempo indicados
después de la vacunación.
Preparación de suspensiones unicelulares de pulmón

Los pulmones se extrajeron asépticamente y se homogeneizaron
en tampón Hepes [10 mM Hepes, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1
2021
INVESTIGACIÓN
y se centrifugaron a 1500 rpm durante 5 min. Los hematíes se Biotec), y se determinaron las UFC chapoteando diluciones seriadas
lisaron con tampón de lisado de hematíes (Sigma-Aldrich), y las en medio sólido Middlebrook 7H10 (BD Difco) suplementado con
células se precipitaron y resuspendieron en medio de cultivo RPMI un 10% de enriquecimiento Middlebrook ADC (BD Difco).
(Gibco) para la tinción de anticuerpos.
Desafío letal con S. pneumoniae
Tinción de anticuerpos y citometría de flujo Se inocularon ratones por vía intranasal con 50 µl que contenían 1
La lista de anticuerpos utilizados para la caracterización celular se × 104 UFC por ratón de la cepa 957/13 del serotipo 3. Se trata de una
describe en la tabla S1. Las suspensiones unicelulares pulmonares Aislado clínico de S. pneumoniae de un paciente de 57 años que
se colocaron en placas de 96 pocillos con fondo en U y se padeció neumonía bacteriana adquirida en la comunidad. Niveles
incubaron durante 15 min a 4°C con reactivo de bloqueo FcR bacterianos en
(Miltenyi Biotec). La tinción de la superficie se realizó durante 20
min a 4°C utilizando diferentes combinaciones de anticuerpos para
definir las poblaciones de células pulmonares mieloides y el estado
de activación de los macrófagos. A continuación, se lavaron las
células y se fijaron con paraformaldehído al 4% durante 30 min.
Para la tinción intracelular de iNOS e IFN-y, las células se
fijaron y permeabilizaron tras la tinción de superficie con un set de
tinción FoxP3 (Miltenyi Biotec) durante 30 min a 4°C, se lavaron y
se incubaron con aloficocianina (APC) anti iNOS de ratón
(Miltenyi Biotec) o anti IFN-y-APC de ratón (Miltenyi Biotec)
2023
durante 1 hora a temperatura ambiente. Para la tinción intracelular
de Ki67, las células se fijaron y permeabilizaron después de la
tinción de superficie con FoxP3/transcription factor staining buffer
set (eBiosciences) durante 30 min a 4°C, se lavaron y se incubaron
con anti-mouse Ki67-PerCP-Vio 700 (Miltenyi Biotec) durante 1
hora a t e m p e r a t u r a ambiente. Las células se adquirieron
utilizando un citómetro de flujo Gallios (Beckman Coulter), y los
resultados se analizaron utilizando
Software Weasel.
Los AM pulmonares se definieron como CD45+ CD64+ CD11chigh
SiglecF+ , los MI como CD45+ CD64+ CD11cdim SiglecF− , y los
neutrófilos como CD45+ Ly6G+ CD11c− CD11b+ SiglecF− . El
estado de activación de los macrófagos se evaluó utilizando anti-
MHCII de ratón, CD86 e iNOS.
Etiquetado CD45
Para el marcaje CD45 intravenoso, se inyectó a los ratones por vía
intravenosa 2 µg de CD45-PerCP-Vio 700 (Miltenyi) 10 min antes
de la eutanasia.
Determinación de IFN-y
Para la tinción intracelular de las células T productoras de IFN-y, las
suspensiones unicelulares de pulmón se incubaron durante la noche
en placas de 96 pocillos con fondo en U con derivado proteico
purificado (PPD) (10 µg/ml) a 37°C y 5% de CO2 . Se añadió
brefeldina A (Invitrogen) y las células se incubaron durante 4
horas a 37°C y 5% de CO antes de la tinción intracelular. Se añadió
brefeldina A (Invitrogen) y las células se incubaron durante 4
horas a 37°C y 5% de CO2 antes de la tinción intracelular.
Para la determinación del IFN-y total en los pulmones ex vivo,
se homogeneizaron los pulmones en 1 ml de H2 O utilizando un
disociador GentleMacs (Miltenyi Biotec) y se incubaron durante la
noche en placas de 24 pocillos a 37 °C y 5% de CO2 . Se recuperaron
los sobrenadantes y se cuantificó el IFN-y mediante un ensayo
inmunoenzimático utilizando un kit de detección de IFN-y
(Mabtech Biotech) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Determinación de la carga bacteriana

Para analizar la carga bacteriana, se homogeneizaron los pulmones
en 1 ml de ddH2 O utilizando un disociador GentleMacs (Miltenyi
2021
INV
en E S T Ide
sangre GA CIÓ
cada N infectado a las 24, 48 y 72 horas de la
ratón Cuantificación y análisis estadístico
infección a partir de una muestra de 6 µl de sangre extraída de la Los datos de citometría de flujo se analizaron con el programa
vena de la cola. Los ratones fueron monitorizados durante un periodo Weasel (versión 3.0.2) y se presentaron como medias ± DE. Para la
de 7 días. Los experimentos se repitieron dos veces utilizando cinco representación gráfica y el análisis estadístico se utilizó el
ratones en cada grupo, y los resultados se expresaron como log10 programa GraphPad Prism (versión 6). Todas las pruebas aplicadas
UFC/ml de bacterias recuperadas de la sangre. fueron de dos caras. Para las comparaciones entre dos grupos, el
análisis se realizó mediante la prueba t de Student no apareada.
Agotamiento in vivo Para más de dos
Para agotar las células T CD4+ y CD8+ , se inyectaron ratones por
vía intraperitoneal 1 semana antes de la provocación con
H37Rv::gfp o la vacunación BCG Pasteur con 300 µg de anti-CD4
de ratón (clon GK1.5, BioXCell) o anti-CD8a de ratón (clon 2.43,
BioXCell). Se administraron dosis repetidas de 100 µg de anti-
CD4 o 150 µg de anti-CD8a por vía intraperitoneal dos veces por
semana para lograr una depleción continua.
Para la depleción de neutrófilos, se inyectaron ratones por vía
intraperitoneal con 100 µg de anti-Ly6G (clon 1A8, BioXCell),
alternando con 100 µg de anti-rat-IgGK (clon MAR 18.5, BioXCell)
(20). El tratamiento se inició antes de la provocación con
H37Rv::gfp y se mantuvo durante el transcurso del experimento.
Microscopía
Se recogieron los pulmones de ratones infectados con Csf1r-eCFP
× LysM-GFP y se fijaron en paraformaldehído al 4% en PBS
durante 48 horas. Tras la fijación, los pulmones se sometieron a
un gradiente de sacarosa (10, 20 y 30% en PBS) seguido de la
incrustación en compuesto de temperatura óptima de corte
(OCT) (Tissue-Tek) y la congelación en un baño frío (-20°C). Las
muestras se conservaron a -80 °C hasta su utilización. La
criosección se realizó en un criostato Leica y se hicieron varias
secciones (30 µm) de cada pulmón. Las secciones de pulmón se
lavaron tres veces en tampón de tinción celular (BD Biosciences)
y se montaron en ProLong Glass Antifade (Thermo Fisher
Scientific) con un cubreobjetos. Se adquirieron pilas de imágenes
tridimensionales en un microscopio confocal Zeiss LSM710 NLO
utilizando un objetivo Zeiss 20× de apertura numérica = 0,8 en
modo de adquisición secuencial para minimizar la interferencia
entre proteínas fluorescentes, en particular CFP y GFP. El análisis
de imágenes se realizó en Imaris (Bitplane) para la creación de
imágenes representativas e ImageJ (National Institutes of Health,
EE.UU.) plugin Cell Counter para cuantificar manualmente el
porcentaje de neutrófilos infectados por imagen.
Análisis de la expresión génica

Las suspensiones unicelulares de pulmón se obtuvieron de ratones
vacunados de 2 o 7 meses, y los AM se purificaron como células
CD45+ CD64+ CD11c+ SiglecF+ utilizando un clasificador celular
Sony SH-800S Cell Sorter. Se obtuvo ARN de las AM
seleccionadas utilizando un micro kit RNeasy (QIAGEN). Las
células seleccionadas se recogieron directamente en tampón de
lisis RLT plus (suministrado por el micro kit RNeasy) y el ARN se
purificó siguiendo las instrucciones del fabricante. Las bibliotecas
de ADN complementario se estructuraron con Prime Script RT
Master Mix (Takara) siguiendo las instrucciones del fabricante.
Para la reacción de PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) se
utilizó TB Green Premix ExTaqTM (Tli RNase H Plus) (Takara).
Cada reacción se realizó por triplicado y la qRT-PCR se llevó a
cabo en el sistema de PCR en tiempo real StepOne Plus (Applied
Biosystems). Las secuencias de los cebadores se detallan en la
tabla S2.

2021
INVESTIGACIÓN
Se utilizó un análisis de varianza (ANOVA) unidireccional o un
ANOVA bidireccional para el análisis de una o dos variables,
respectivamente. La supervivencia se analizó mediante la prueba
de log-rank (Mantel-Cox). Un valor P < 0,05 se consideró
significativo (ns, no significativo; *P < 0,05, **P < 0,01.),
***P < 0,001, y ****P < 0,0001).
MATERIALES COMPLEMENTARIOS
www.science.org/doi/10.1126/sciimmunol.eabc2934
Figs. S1 a 12
Tablas S1 y S2
Archivo de datos S1
Ver/solicitar un protocolo para este artículo de Bio-protocolo.
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W. H. Boom, C. M. Stein, S. M. Fortune, C. Seshadri, G. Alter, IFN-y-independent immune D.M., C.M., y N.A. son coinventores de la patente titulada "Eficacia terapéutica mediante
markers of Mycobacterium tuberculosis exposure. Nat. Med. 25, 977-987 (2019). administración pulmonar de micobacterias vivas atenuadas", propiedad de la Universidad de
39. R. R. Chowdhury, F. Vallania, Q. Yang, C. J. L. Angel, F. Darboe, A. Penn-Nicholson, Zaragoza. Disponibilidad de datos y materiales: Todos los datos necesarios para evaluar las
V. Rozot, E. Nemes, S. T. Malherbe, K. Ronacher, G. Walzl, W. Hanekom, M. M. Davis, conclusiones del artículo están presentes en el mismo o en los Materiales Suplementarios. Los
J. Winter, X. Chen, T. J. Scriba, P. Khatri, Y.-h. Chien, Un estudio de cohortes múltiples de datos y materiales están disponibles previa solicitud a los autores.
los factores inmunes asociados con los resultados de la infección por M. tuberculosis.
Nature 560, 644-648 (2018). Presentado el 16 de abril de 2020
40. S. A. Khader, M. Divangahi, W. Hanekom, P.C. Hill, M. Maeurer, K.W. Makar, K.D. Mayer-Barber, Reenviado el 2 de mayo de 2021
M.M. Mhlanga, E. Nemes, L.S. Schlesinger, R. van Crevel, R. Vankayalapati, R. J. Xavier, Aceptado el 24 de agosto de 2021
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Innate Immunity Working Group18, Targeting innate immunity for tuberculosis 10.1126/sciimmunol.abc2934
2023
vaccination. J. Clin. Invest. 129, 3482-3491 (2019).
41. A. I. Kanno, C. Goulart, H. K. Rofatto, S. C. Oliveira, L. C. C. Leite, J. McFadden, New Citación: E. Mata, R. Tarancón, C. Guerrero, E. Moreo, F. Moreau, S. Uranga, A. B. Gómez, D. Marinova,
recombinant mycobacterium bovis BCG expression vectors: Improving genetic control M. Domenech, F. González-Camacho, M. Monzon, J. Badiola, J. Dominguez-Andrés, J. Yuste, A. Anel,
over mycobacterial promoters. Appl. Environ. Microbiol. 82, 2240-2246 (2016). A. Peixoto, C. Martin, N. Aguilo, Pulmonary BCG induces lung-resident macrophage activation
and confers long-term protection against tuberculosis. Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021).

2021
La BCG pulmonar induce la activación de los macrófagos residentes en el pulmón y
confiere protección a largo plazo contra la tuberculosis
Elena Mata, Raquel Tarancón, Claudia Guerrero, Eduardo Moreo, Flavie Moreau, Santiago Uranga, Ana Belén Gómez,
Dessislava Marinova, Miriam Doménech, Fernando González-Camacho, Marta Monzón, Juan Badiola, Jorge Domínguez-
Andrés, José Yuste, Alberto Anel, Antonio Peixoto, Carlos Martín y Nacho Aguiló.
Sci. Immunol., 6 (63), eabc2934.

DOI: 10.1126/sciimmunol.abc2934
BCG entrena a los macrófagos pulmonares

El bacilo de Calmette-Guerin (BCG) es una vacuna micobacteriana atenuada utilizada históricamente para proteger
2023
frente a Mycobacterium tuberculosis (Mtb), y la vacunación intradérmica con BCG tiene una eficacia modesta. Mata et
al. definen ahora los mecanismos inmunitarios asociados a la protección inducida por la administración pulmonar de
BCG. Observaron que los ratones vacunados con BCG por vía pulmonar eran capaces de limitar la diseminación
temprana de Mtb tras el desafío. También se observó una protección a largo plazo vinculada a la activación de los
macrófagos alveolares (MA) mediada por BCG, que se reactivaron rápidamente tras la exposición, lo que sugiere un
papel de la inmunidad entrenada. Estos resultados ponen de relieve el potencial de la provocación intrapulmonar con
BCG y el papel de los MA en la protección frente a Mtb.
Ver el artículo en línea

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Science Immunology (ISSN ) es una publicación de la American Association for the Advancement of Science. 1200 New York Avenue NW,
Washington, DC 20005. El título Science Immunology es una marca registrada de la AAAS.
Copyright © 2021 The Authors, algunos derechos reservados; licenciatario exclusivo American Association for the Advancement of
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TUBERCULOSIS Copyright © 2021

macrófagos residentes en el pulmón y confiere exclusivo American

protección a largo plazo contra la tuberculosis Advancement of

Radboud Center for Infectious Diseases (RCI), Radboud University Nijmegen

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 2 de 13

La vacunación pulmonar con BCG, pero no la subcutánea,

sugiriendo que la presencia física de a largo plazo (22). Observamos que la

Los macrófagos activados por BCG contienen la

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 6 de 13

3B). Por el contrario, el estado de activación de las MA infectadas

administración intranasal de una cepa H37Rv con expresión de

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 8 de 13

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 10 de 13

Las células T CD4+ contribuyen a la activación de

El BCG pulmonar induce la activación a largo plazo de las

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 12 de 13

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 14 de 13

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 16 de 13

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 18 de 13

Infección intranasal y administración de vacunas

Preparación de suspensiones unicelulares de pulmón

Determinación de la carga bacteriana

Análisis de la expresión génica

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 22 de 13

Mata et al., Sci. Immunol. 6, eabc2934 (2021) 24 de septiembre de 25 de 13

Sci. Immunol., 6 (63), eabc2934.

BCG entrena a los macrófagos pulmonares

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