Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

TMASALAH-SKHUSUSSTEMCELL

Analisis Komparatif Sel Punca Mesenkimal dari Sumsum

Tulang, Darah Tali Pusat, atau Jaringan Adiposa

SUSANNEKERN,AHERMANeICHLER,AJOHANNESSTOEVE,BHARALDKLÜTER,AKARENBIEBACKA

AInstitute of Transfusion Medicine and Immunology, Layanan Darah Palang Merah Jerman di Baden-Württemberg–
Hessen, Mannheim, Jerman;BDepartemen Bedah Ortopedi Rumah Sakit Universitas Mannheim, Universitas Heidelberg,
Fakultas Kedokteran Klinis, Mannheim, Jerman

Kata Kunci.Sel punca mesenkimal • Sumsum tulang • Darah tali pusat • Jaringan adiposa • Analisis komparatif
Diferensiasi multi-garis keturunan

ABSTRAK
Sel induk mesenchymal (MSCs) merupakan alat yang menjanjikan
untuk konsep klinis baru dalam mendukung terapi seluler. Sumsum
tulang (BM) adalah sumber pertama yang dilaporkan mengandung
MSC. Namun, untuk penggunaan klinis, BM dapat merugikan karena
prosedur donasi yang sangat invasif dan penurunan jumlah MSC serta
potensi diferensiasi seiring bertambahnya usia. Baru-baru ini, darah
tali pusat (UCB), dapat diperoleh dengan metode yang kurang invasif,
diperkenalkan sebagai sumber alternatif untuk MSC. Sumber lain yang
menjanjikan adalah jaringan adiposa (AT). Kami membandingkan MSC
yang berasal dari sumber-sumber ini mengenai morfologi, tingkat
keberhasilan isolasi MSC, frekuensi koloni, potensi ekspansi, kapasitas
diferensiasi ganda, dan fenotip imun. Tidak ada perbedaan yang
signifikan mengenai morfologi dan fenomen imun
jenis MSC yang berasal dari sumber-sumber ini sudah jelas.
Perbedaan dapat diamati mengenai tingkat keberhasilan
isolasi MSC, yaitu 100% untuk BM dan AT, tetapi hanya 63%
untuk UCB. Frekuensi koloni terendah di UCB, sedangkan
tertinggi di AT. Namun, UCB-MSC dapat dikultur paling lama
dan menunjukkan kapasitas proliferasi tertinggi, sedangkan
BM-MSC memiliki periode kultur terpendek dan kapasitas
proliferasi terendah. Yang paling mencolok, UCB-MSC tidak
menunjukkan kapasitas diferensiasi adipogenik, berbeda
dengan BM- dan AT-MSC. Baik UCB dan AT adalah alternatif
yang menarik untuk BM dalam mengisolasi MSC: AT karena
mengandung MSC pada frekuensi tertinggi dan UCB karena
tampaknya dapat diperluas ke angka yang lebih tinggi.STEMC
ELL2006;24: 1294 –1301

SAYAPENDAHULUAN
Sel punca mesenchymal (MSC) yang ditemukan di banyak jaringan dewasa
merupakan sumber sel punca yang menarik untuk regenerasi jaringan yang
rusak dalam aplikasi klinis karena dicirikan sebagai sel yang tidak
berdiferensiasi, mampu memperbaharui diri dengan kapasitas proliferasi
tinggi, dan memiliki diferensiasi mesodermal. potensial [1].
Meskipun sumsum tulang (BM) telah menjadi sumber utama
untuk isolasi MSC multipoten, pemanenan BM adalah prosedur
yang sangat invasif dan jumlah, potensi diferensiasi, dan masa
hidup maksimal MSC dari BM menurun dengan bertambahnya
usia [2-4 ]. Oleh karena itu, sumber alternatif untuk mengisolasi
MSC harus diselidiki secara intensif.
Salah satu sumber alternatif adalah darah tali pusat (UCB), yang dapat
diperoleh dengan metode yang kurang invasif, tanpa membahayakan ibu
atau bayi [5]. Namun, masih ada kontroversi apakah UCB jangka penuh
dapat berfungsi sebagai sumber untuk mengisolasi MSC multipoten:
meskipun beberapa kelompok tidak berhasil
mengisolasi MSC [6, 7], kami dan kelompok lain berhasil
mengisolasi MSC dari UCB jangka penuh [8-12].
Jaringan adiposa (AT) adalah sumber alternatif lain yang dapat
diperoleh dengan metode yang kurang invasif dan dalam jumlah yang
lebih banyak daripada BM. Telah dibuktikan bahwa AT mengandung
sel punca yang mirip dengan BM-MSCs, yang disebut sel lipoaspirat
(PLA) yang diproses [13]. Sel-sel ini dapat diisolasi dari sedot lemak
kosmetik dalam jumlah besar dan tumbuh dengan mudah di bawah
kondisi kultur jaringan standar [13]. Kapasitas diferensiasi
multilineage sel PLA telah dikonfirmasi [13].
Karena BM-MSC paling baik dicirikan, kami bertanya apakah MSC
yang berasal dari sumber lain memiliki karakteristik yang sama
dengan BM-MSC. Tujuan dari penelitian kami adalah untuk
membandingkan MSC yang diisolasi dari tiga sumber dalam kondisi in
vitro yang identik sehubungan dengan morfologi, frekuensi koloni,
karakteristik ekspansi, kapasitas diferensiasi multilineage,
imunofenotipe, dan tingkat keberhasilan isolasi sel.

Korespondensi: Karen Bieback, Ph.D., Institut Kedokteran Transfusi dan Imunologi, Palang Merah Jerman Layanan Darah Baden-
Württemberg – Hessen, Universitas Heidelberg, Fakultas Kedokteran Klinis Mannheim, Friedrich-Ebert-Stra-e 107, D-68167 Mannheim,
Jerman. Telepon: -49-621-3706-8216; Faks: -49-621-3706-851; e-mail: k.bieback@itima.blutspende.de Diterima 28 Juli 2005; diterima
untuk publikasi 21 Desember 2005; pertama kali diterbitkan diSTEMCELLeXPRESS12 Januari 2006. ©AlphaMed Press
1066-5099/2006/$20.00/0 doi: 10.1634/stemcells.2005-0342

STEMCELL2006;24:1294 –1301 www.StemCells.com

Kern, Eichler, Stoeve dkk.
MATERIAL DANMETOS
Koleksi BM
Aspirasi BM dari 18 pasien dengan rentang usia 68 – 84
tahun diperoleh dari poros femoralis yang menjalani
penggantian pinggul total di departemen ortopedi Rumah
Sakit Universitas Mannheim. Aspirasi BM tambahan
diperoleh dari tiga pasien dengan rentang usia 44-71
tahun dengan menusuk krista iliaka. Aspirasi BM diterima
sesuai dengan standar etika komite etik lokal.
Isolasi dan Kultur Sel Mononuklear dari
BM
Aspirat diencerkan 1:5 dengan 2 mM ethylenediaminetetraacetic
acid (EDTA)-phosphate-buffered saline (PBS) (Merck & Co.,
Whitehouse Station, NY, http://www.merck.com; Nexell, Baxter,
Unterschleissheim, Jerman, http://www.baxter.de). Fraksi MNC
diisolasi dengan sentrifugasi gradien densitas pada suhu 435G
selama 30 menit pada suhu kamar menggunakan larutan Ficoll-
Hypaque-Plus (GE Healthcare BioSciences Corp., Piscataway, NJ,
http://www.gehealthcare.com) dan diunggulkan dengan
kepadatan 1 - 106sel per cm2ke dalam labu kultur sel T75 atau
T175 (Nunc, Rochester, NY, http://www.nuncbrand.com; Greiner
Bio-One, Frickenhausen, Jerman, http://www.gbo.com).
Perubahan media pertama dilakukan dalam waktu 3 hari setelah
isolasi. Sel-sel pelekat fibroblastoid yang dihasilkan disebut sel-sel
pelekat fibroblastoid yang diturunkan dari BM (BM-FACs) dan
dibudidayakan pada suhu 37 ° C pada atmosfer yang
dilembabkan yang mengandung 5% CO2. Media ekspansi terdiri
dari media pertumbuhan sel punca mesenkimal Bullet-Kit
(MSCGM;Cambrex,Walkersville,MD,http://www.cambrex.com)
atau Dulbecco's modified Eagle's medium-low glucose (DMEM-lg)
yang mengandung 10% mesenchymal suplemen pertumbuhan
sel punca (MSCGS) (Cambrex). FAC dipertahankan dalam MSCGM
atau DMEM-lg - 10% MSCGS hingga mencapai pertemuan 70%
hingga 90%. Sel dipanen pada subconfluence menggunakan
Trypsin (PromoCell, Heidelberg, Jerman, //www.PromoCell.com).
Sel-sel pada bagian kedua dan selanjutnya diganti dengan
kerapatan rata-rata 1,3 - 0,7 - 103/cm2.
Generasi koloni fibroblastoid terpisah tunggal yang
disebut unit pembentuk koloni fibroblastoid (CFU-F) dicapai
dengan awalnya menyemai MNC pada kepadatan rendah (1 -
103ke 1 - 104sel per cm2). CFU-F dipilih dan diisolasi baik
menggunakan Trypsin (PromoCell) atau dengan mengikisnya
dari permukaan pelat kultur dengan ujung pipet. Subkultivasi
dilakukan seperti yang dijelaskan untuk BM-FACs.
Koleksi UCB
Satuan UCB (N 59) dikumpulkan dari plasenta yang belum lahir dari
pengiriman jangka penuh dalam sistem kantong ganda yang
mengandung 17 ml buffer sitrat fosfat dekstrosa (Sistem
Pengumpulan Darah Tali Pusat; Eltest, Bonn, Jerman) [14, 15] dan
diproses dalam 24 jam setelah pengumpulan. Pengumpulan
dilakukan sesuai dengan standar etika komite etika lokal.
Isolasi dan Budaya MNC dari UCB
Isolasi MSC dilakukan seperti yang dijelaskan untuk BM dengan
beberapa pengecualian. Sebelum isolasi MNC, darah tali pusat
antikoagulan diencerkan 1:1 dengan 2 mM EDTA-PBS. Fraksi MNC
awalnya diunggulkan dengan kepadatan 1 - 106
www.StemCells.com
1295
MNC/cm2ke dalam pelat kultur yang dilapisi serum janin (FCS) (FCS
batch S0113/1038E dan S0113/892E; Biochrom, Berlin, Jerman, http://
www.biochrom.de) (Falcon, Becton, Dickinson and Company, Franklin
Lakes, NJ, http://www.bd.com) [8]. Sel-sel yang tidak melekat
dihilangkan 12-18 jam setelah pelapisan awal. Kondisi kultur dan
media yang sama diterapkan seperti yang dijelaskan untuk BM-FAC.
Sel fibroblastoid yang melekat hanya muncul sebagai CFU-F dan
dipanen pada subconfluence menggunakan Trypsin (PromoCell). Sel-
sel pada bagian kedua dan selanjutnya diganti dengan kerapatan rata-
rata 3,5 - 4,8 - 103/cm2.
Koleksi AT
AT diperoleh dari 18 pendonor dengan rentang usia 26-57
tahun yang menjalani prosedur sedot lemak. Lipoaspirat
diperoleh sesuai dengan standar etika komite etik lokal.
Isolasi dan Kultur sel PLA dari AT
Lipoaspirat mentah (50 –100 ml) diproses seperti yang dijelaskan
sebelumnya [13]. Untuk mengisolasi fraksi vaskular stroma (SVF),
lipoaspirat dicuci secara intensif dengan PBS. Setelah itu lipoaspirat
dicerna dengan volume yang sama dari 0,075% kolagenase tipe I
(Sigma-Aldrich, St. Louis, http://www.sigmaaldrich.com) selama 30 – 60
menit pada suhu 37°C dengan agitasi lembut. Aktivitas kolagenase
dinetralkan dengan DMEM-lg yang mengandung 10% FCS. Untuk
mendapatkan pelet SVF densitas tinggi, lipoaspirat yang dicerna
disentrifugasi pada 1.200G selama 10 menit. Pelet disuspensikan
kembali dalam MSCGM atau DMEM-lg yang mengandung 10% MSCGS
dan disaring melalui 100
- m saringan sel nilon (Falcon). Sel-sel yang disaring disentrifugasi
pada 1.200Gselama 10 menit. Sel-sel SVF yang disuspensi ulang
disepuh dengan kepadatan 1 - 106/cm2ke dalam labu kultur T75
atau T175. Sel-sel yang tidak melekat dihilangkan 12-18 jam
setelah pelapisan awal dengan mencuci pelat secara intensif. Sel-
sel pelekat fibroblastoid yang dihasilkan disebut sel-sel pelekat
fibroblastoid turunan-AT (AT-FACs). AT-FAC ditanam dalam kondisi
yang sama seperti yang dijelaskan untuk BM-FAC. AT-FAC dipanen
di subconfluence menggunakan Trypsin (PromoCell). Sel-sel pada
bagian kedua dan selanjutnya diganti dengan kerapatan rata-rata
1,8 - 3,1 - 103/cm2.
Generasi CFU-F terpisah tunggal dicapai dengan awalnya
menyemai sel SVF pada kepadatan rendah (1 - 102ke 1 - 103sel
per cm2). CFU-F dipilih dan diisolasi seperti yang dijelaskan
untuk BM-CFU-F. Subkultivasi sel dilakukan seperti yang
dijelaskan untuk AT-FAC.
Fibroblast Dermal Primer sebagai Kontrol
Fibroblast dermal normal primer (PromoCell) berfungsi sebagai
kontrol negatif dalam studi diferensiasi. Sel-sel dikultur dalam 10%
media pertumbuhan fibroblast yang ditambahkan (PromoCell).
Karakteristik Ekspansi
Sel fibroblastoid dari BM, UCB, dan AT dipanen pada
subconfluence seperti yang dijelaskan pada paragraf
sebelumnya. Kultur ditinggalkan segera setelah mereka
menunjukkan fenotip tua yang ditentukan oleh dua kriteria: 1)
ketika setidaknya 90% sel mengadopsi morfologi yang berubah
menyerupai sel tua dalam 3–4 minggu setelah subkultivasi (Gbr.
1E–1G); dan 2) ketika mereka menghentikan proliferasi. Rasio
penuaan ditentukan hingga bagian 2 menghitung rasio sampel
1296
Gambar 1. Morfologi sel yang melekat setelah pelapisan awal dan pada
fase tua.(A–C):Sel-sel yang melekat fibroblastoid setelah pelapisan awal
berasal dari monolayer sel fibroblastoid yang melekat (FAC) dari BM pada
hari ke-14(A), dari unit pembentuk koloni UCB-fibroblastoid (CFU-F) pada
hari ke 16(B), dan dari FAC monolayer AT pada hari ke 8(C).(MISALNYA):
Sel-sel tua dari FAC monolayer BM pada bagian 2(E), dari UCB-CFU-F pada
bagian 4(F), dan dari FAC monolayer AT pada bagian 6(G)diidentifikasi
dengan morfologi yang berubah. Semua contoh representatif ditampilkan
pada perbesaran -100.(D):Nilai rata-rata dari penggandaan populasi
kumulatif. Penggandaan populasi ditentukan pada setiap subkultur; nilai
rata-rata BM-mesenchymal stem cell (MSCs) ditampilkan dalam warna
hitam; nilai rata-rata UCB-MSC ditampilkan dalam warna abu-abu; nilai rata-
rata AT-MSC ditunjukkan oleh bilah terbuka. Nomor sampel awal pada
bagian 2 diberikan dalam diagram. Saat sampel mengalami penuaan,
jumlah sampel turun pada bagian yang melanjutkan; jumlah sampel pada
bagian yang berbeda memunculkan nilai rata-rata berikut. BM: p3,nn
9; p4 dan p5,N 7; p6,
1. UCB: p4,N 9; p5,N 7; p6 – 8,N 4; p9,N 1. DI: p3,
N 6; p4,N5; p5 dan p6,N 2; p7,N1.-,P . 05. Singkatan:
AT, jaringan adiposa; BM, sumsum tulang; P, bagian; UCB, darah tali
pusat.
mengadopsi fenotipe tua ke jumlah total sampel yang
dikultur. Penggandaan populasi kumulatif dihitung dengan
menggunakan rumusX[catatan10(NH) catatan10(N1)]/catatan10(2) [16],
Di manaN1adalah nomor sel inokulum danNHjumlah panen sel. Untuk
menghasilkan tingkat penggandaan terakumulasi, penggandaan
populasi untuk setiap bagian dihitung dan kemudian ditambahkan ke
tingkat penggandaan populasi dari bagian sebelumnya. Karena
jumlah sel fibroblastoid dari ketiga jaringan dapat ditentukan untuk
pertama kalinya pada bagian 1, jumlah penggandaan kumulatif
pertama kali dihitung untuk bagian 2.
Diferensiasi In Vitro
Fibroblast dermal manusia normal primer (PromoCell) berfungsi
sebagai kontrol negatif dalam ketiga studi diferensiasi.
Diferensiasi Osteogenik
Diferensiasi masing-masing sampel dilakukan pada bagian yang
ditentukan sebagai berikut: BM-FACs, bagian 0 –5 (N7); BM-CFU-F,
Membandingkan MSC dari Jaringan Berbeda
bagian 2–6 (N AT-FAC,
14); UCB-CFU-F, bagian 1–7 (N 8);
jalur 0 –5 (N (N 14); AT-CFU-F, bagian 2–6
28). Untuk mempromosikan diferensiasi osteogenik, sel-sel itu
diunggulkan dengan kepadatan 3,1 - 103sel per cm2menjadi delapan
ruang-slide (Nunc) dan dibiakkan dalam MSCGM atau DMEM-lg
- 10% MSCGS hingga mencapai pertemuan 70%–80%. Segera
setelah subconfluence tercapai, diferensiasi osteogenik sel
diinduksi dengan memberi mereka makan selama 2,5 minggu,
dua kali seminggu, dengan media induksi osteogenik yang terdiri
dari 100 nM dexamethasone, 10 mM--gliserofosfat, askorbat 0,2
mM, dan 10% FCS dalam media basal osteogenik (Cambrex).
Untuk kontrol negatif, sel disimpan dalam MSCGM atau DMEM-lg
- 10% MSCG. Diferensiasi osteogenik dikonfirmasi oleh
peningkatan ekspresi alkaline phosphatase (AP) dengan
pewarnaan histokimia mengikuti instruksi pabrik (leukocyte
alkaline phosphatase kit 85L-3R; Sigma-Aldrich). Tahap
diferensiasi selanjutnya terdeteksi oleh pewarnaan von Kossa,
menunjukkan pengendapan matriks hidroksiapatit. Pewarnaan
von Kossa dilakukan sesuai dengan protokol yang dijelaskan
sebelumnya [17] dengan beberapa modifikasi. Sel-sel difiksasi
dengan formalin 10% (Sigma-Aldrich) selama 15 menit pada suhu
kamar dan diwarnai selama 10-15 menit dengan perak nitrat 5%
(Sigma-Aldrich). Noda dikembangkan menginkubasi sel dalam 1%
pirogalol (Merck) dan kemudian difiksasi dengan 5% natrium
tiosulfat (Sigma-Aldrich) selama 5 menit.
Diferensiasi Adipogenik
Diferensiasi masing-masing sampel dilakukan pada bagian yang
ditentukan sebagai berikut: BM-FACs, bagian 0 –5 (N9); BM-CFU-F,
bagian 2–6 (N 14); UCB-CFU-F, bagian 1–7 (N 11);
AT-FAC, jalur 0 –5 (N 16); AT-CFU-F, bagian 2–6
(N 28). Untuk menginduksi diferensiasi adipogenik, sel-sel tersebut
diunggulkan dengan kepadatan 2,1 - 104sel per cm2ke slide
delapan ruang (Nunc) dan dibiakkan dalam MSCGM atau DMEM-
lg - 10 MSCGS hingga mencapai pertemuan 100% atau pasca
pertemuan. Kemudian, sel diinduksi dengan tiga siklus induksi/
pemeliharaan [1] menggunakan media induksi adipogenik yang
terdiri dari 1 mM deksametason, 0,5 mM 3-isobutil-1-metil-xantin,
10-g/ml insulin manusia rekombinan, 100 mM indometasin, dan
10% FCS (Cambrex) dan menggunakan media pemeliharaan
adipogenik yang hanya terdiri dari 10-g/ml insulin manusia
rekombinan dan 10% FCS (Cambrex). Setelah menyelesaikan tiga
siklus induksi dan pemeliharaan, sel yang diinduksi diinkubasi
selama 7 hari lagi dalam media pemeliharaan adipogenik. Sel
kontrol yang tidak diinduksi diberi makan hanya dengan media
pemeliharaan adipogenik. Diferensiasi adipogenik dikonfirmasi
oleh pembentukan vakuola lipid netral yang dapat diwarnai
dengan Minyak Merah O (Sigma-Aldrich). Untuk pewarnaan
Minyak Merah O, sel difiksasi dengan formalin 10% (Sigma-
Aldrich), dicuci, dan diwarnai dengan larutan kerja Minyak Merah
O 0,18% selama 5 menit. Inti diimbangi dengan larutan
hematoxylin Mayer (Sigma-Aldrich).
Diferensiasi Kondrogenik
Diferensiasi masing-masing sampel dan CFU-F dilakukan pada bagian
yang ditentukan sebagai berikut: BM-FACs, bagian 0 –5 (N 8);
BM-CFU-F, bagian 2–6 (N14); UCB-CFU-F, bagian 1–7 (N
15); AT-FAC, jalur 0 –5 (N 18); AT-CFU-F,
bagian 2–6 (N 28). Untuk diferensiasi kondrogenik, sel
dikulturkan dalam kultur mikromassa. Oleh karena itu 2,5 - 105sel
Kern, Eichler, Stoeve dkk.
disentrifugasi dalam tabung polipropilen 15 ml (Greiner) pada
150Guntuk membentuk pelet. Tanpa mengganggu pelet, sel
dikultur selama 4 minggu dalam 0,5 ml medium diferensiasi
kondrogenik lengkap (Cambrex) termasuk 10 ng/ml TGF---3
(Strathmann Biotec AG, Hamburg, Jerman, http://
www.strathman-biotec-ag.de). Sel diberi makan dua kali
seminggu. Setelah periode kultur, cryosection dianalisis
dengan pewarnaan Safranin O. Untuk pewarnaan, bagian
difiksasi dengan aseton dingin (Sigma-Aldrich) dan diwarnai
dengan Safranin O berair 0,1% selama 5 menit dan nukleus
diimbangi dengan hematoksilin besi Weigert (Sigma-Aldrich).
Analisis Immunophenotypic
Untuk karakterisasi lebih lanjut, fenotipe antigen
permukaan sel dilakukan pada BM-MSCs pada pasase 0-7,
UCB-MSCs pada pasase 3-7, dan AT-MSCs pada pasase
1-5. Epitop permukaan sel berikut ditandai dengan
antibodi anti-manusia: CD14-fluorescein isothiocyanate
(FITC), CD34-phycoerythrin (PE), CD73-PE, CD90-Cy5
(Becton Dickinson), CD29-PE, CD44-FITC, CD45 -Kompleks
protein peridium-klorofil (PerCP), HLA-kelas I-FITC, HLA-
kelas II-FITC (Beckman Coulter, Fullerton, CA, http://
www.beckmancoulter.com), CD133-PE (Miltenyi Biotec,
Bergisch Gladbach, Jerman, http://
www.miltenyibiotec.com), CD105-FITC, dan CD106-PE
(Immunokontakt; AMS Biotechnology, Wiesbaden,
Jerman, http://www.immunok.com). Antibodi isotipe tikus
berfungsi sebagai kontrol (Becton Dickinson; Beckman
Coulter). 10,
Analisis statistik
Data disajikan sebagai rata-rata - standar deviasi. Dua sisi, tidak
berpasanganTtes digunakan untuk menganalisis flow cytometry
dan data penggandaan kumulatif. Mann-WhitneyAStes digunakan
untuk membandingkan kemanjuran isolasi CFU-F yang berasal
dari UCB, BM, dan AT. A-2tes diterapkan untuk membandingkan
kapasitas diferensiasi sel yang diisolasi dari jaringan yang
berbeda dan rasio sampel dengan fenotipe tua. Perbedaan
dianggap signifikan padaP . 05. Paket perangkat lunak SPSS
(versi 12.0; SPSS Inc., Chicago, http://www.spss.com)
digunakan untuk uji statistik.
RHASIL
Isolasi Sel Adheren Morfologi
Fibroblastoid dari BM, UCB, dan AT
Pada kerapatan pelapisan awal 1 - 106sel per cm2, baik sel
fibroblastoid yang diturunkan dari BM dan AT membentuk lapisan
tunggal 4-5 hari setelah pelapisan awal dan disebut FAC. Berbeda
dengan BM atau AT, sel fibroblastoid yang diturunkan dari UCB
membentuk CFU-F dan dapat dideteksi pertama kali 2–4 minggu
setelah pelapisan ketika menerapkan kepadatan pelapisan awal yang
sama. Berbeda dengan UCB, untuk pembuatan CFU-F dari BM dan AT
diperlukan kepadatan pelapisan awal yang lebih rendah. Jumlah CFU-F
dihitung berdasarkan 1 - 106awalnya sel berlapis tertinggi untuk AT
(557 - 673), diikuti oleh BM (83 - 61); itu terendah untuk UCB (0,002 -
0,004) (P . 001).
Tingkat keberhasilan mengisolasi FAC dan CFU-F dari kedua
BM (N 21) dan DI (N 18) adalah 100%. Sebaliknya,
tingkat keberhasilan di UCB (N 59) hanya 29% dari semua unit
www.StemCells.com
1297
Tabel 1.Rasio penuaan dan potensi ekspansi maksimal sel
punca mesenchymal (MSC) yang berasal dari BM, UCB, dan AT
Rasio penuaan hingga
bagian 2 Lintasan maksimal
BM (N 21) 23,6% P 7 (9,5%)
UCB (N 26) 34,6% P 10A(3,9%)
PADA (N 18) 5,6% P 8 (5,6%)
P . 02B
Data mewakili rasio sampel yang mengalami penuaan awal hingga
bagian kedua dan sampel yang dapat dikultur hingga bagian
maksimal yang ditunjukkan hingga mengalami penuaan. Rasio
penuaan ditentukan dengan menghitung jumlah sampel yang
mengadopsi morfologi yang diubah (Gbr. 1E–1G) dan menghentikan
proliferasi ke jumlah total sampel yang dikultur.
AKulturdapat dibudidayakan minimal hingga bagian yang
ditunjukkan, karena harus dibuang karena kontaminasi.
BPerbedaan yang signifikan dari rasio penuaan diamati
antara AT dan UCB.
Singkatan: AT, jaringan adiposa; BM, sumsum tulang; UCB,
darah tali pusat.
diproses. Tingkat dapat ditingkatkan menjadi 63% dengan
precoating FCS dan dengan mempertimbangkan hanya unit
kualitas optimal [8]. Namun, tidak ada perbedaan yang jelas
mengenai morfologi sel yang melekat yang berasal dari ketiga
jaringan (Gbr. 1A–1C).
Karakteristik Ekspansi
Analisis kapasitas proliferasi MSC yang berasal dari tiga
sumber menunjukkan bahwa BM-MSC memiliki jumlah
penggandaan populasi terendah melalui jalur 4 – 6, diikuti
oleh AT-MSC setelah jalur 3 (Gbr. 1D). Namun, UCB-MSC
menampilkan angka penggandaan tertinggi di semua bagian
yang dianalisis.
Selama kultur in vitro, MSC memiliki masa hidup yang terbatas
dan akhirnya mengalami penuaan replikasi yang ditandai dengan
hilangnya proliferasi dan perubahan morfologi. Analisis rasio penuaan
dan potensi ekspansi maksimal BM-MSC (N 21 lakukan-
nors), dari UCB-MSCs (N 26 CFU-F, 16 unit UCB), dan dari
AT-MSC (N 18 donor) menunjukkan bahwa UCB terkandung
rasio tertinggi MSC yang mengalami penuaan dalam bagian
awal, diikuti oleh BM-MSC (Gbr. 1E–1G; Tabel 1). Rasio
penuaan terendah dalam bagian awal ditampilkan AT-MSC.
Meskipun banyak koloni mencapai penuaan pada tahap awal,
UCB-MSC lainnya dapat dikultur paling lama, diikuti oleh AT-
MSC, sedangkan BM-MSC menunjukkan periode kultur
terpendek (Tabel 1).
Potensi Diferensiasi Multilineage
Untuk mendemonstrasikan isolasi MSC dan untuk menyelidiki
potensi diferensiasinya, sel-sel fibroblastoid yang berasal dari tiga
sumber diarahkan ke garis keturunan osteogenik, adipogenik,
dan khondrogenik pada masing-masing bagian. Fibroblas
berfungsi sebagai kontrol negatif.
Kapasitas Diferensiasi Osteogenik
Diferensiasi osteogenik dikonfirmasi dengan deteksi fenotipe
osteogenik yang terdiri dari peningkatan ekspresi AP dan
dengan pengendapan matriks mineralisasi bernoda perak.
1298
Setelah 2,5 minggu induksi, tidak ada perbedaan signifikan dalam
kapasitas diferensiasi osteogenik yang terdeteksi (P . 4), sejak
100% (delapan dari delapan) sampel UCB, 71,4% (lima dari tujuh)
sampel BM, dan 78,8% (11 dari 14) sampel AT menunjukkan
fenotipe osteogenik (Gbr. 2B, 2D, 2I, 2K , 2P, 2R). Tidak ada
fenotipe osteogenik berbeda yang terlihat pada 28,6% (dua dari
tujuh) sampel BM atau untuk 21,4% (3 dari 14)
Membandingkan MSC dari Jaringan Berbeda
Gambar 2.Kapasitas diferensiasi multilineage
dari sel punca mesenchymal. Sel-sel pada
bagian 1–4 berasal dari monolayer sel
fibroblastoid yang melekat pada BM(A–G) atau
di(O–U)dan dari unit pembentuk koloni UCB-
fibroblastoid(H–N)diselidiki untuk kapasitas
diferensiasi multilineage in vitro mereka.
Osteogenesis ditunjukkan oleh peningkatan
aktivitas alkaline phosphatase, ditunjukkan
pada(B),(SAYA), Dan
(P)(A,H,HAI, kontrol tanpa induksi), dan dengan
pengendapan matriks termineralisasi yang ditunjukkan
dengan pewarnaan von Kossa, ditunjukkan pada(D),(K),
Dan(R)(C,J,Q, kontrol yang tidak diinduksi).
Adipogenesis terdeteksi oleh pembentukan vakuola
lipid netral yang dapat diwarnai dengan Minyak Merah
O, seperti yang ditunjukkan untuk sel yang berasal dari
BM- dan AT, ditunjukkan pada(F)Dan(T)(e,S, kontrol
yang tidak diinduksi), sedangkan sel yang diturunkan
dari UCB tidak dapat dibedakan ke arah garis keturunan
ini, ditunjukkan pada(M)(L, kontrol yang tidak
diinduksi). Chondrogenesis ditunjukkan dengan
pewarnaan Safranin O di cryosections dari ketiga
sumber(G,N,U). Semua contoh representatif
ditampilkan pada perbesaran -100. Singkatan: AT,
jaringan adiposa; BM, sumsum tulang; UCB, darah tali
pusat.
dari sampel AT, karena hanya peningkatan ekspresi AP dan tidak ada
pengendapan matriks yang diamati. Tidak ada fenotipe osteogenik
yang diinduksi dalam fibroblas (tidak diperlihatkan).
Kapasitas Diferensiasi Adipogenik
Diferensiasi adipogenik ditunjukkan oleh akumulasi vakuola
lipid netral yang ditunjukkan oleh noda Minyak Merah O.
Kern, Eichler, Stoeve dkk. 1299

Setelah induksi adipogenik, 100% (sembilan dari sembilan) sampel BM Meja 2.Perbandingan ekspresi protein permukaan sel punca
dan 94% (15 dari 16) sampel AT memiliki sel dengan fenotip mesenkim yang berasal dari BM, UCB, dan AT yang dianalisis
adipogenik (Gbr. 2F, 2T). Namun, tidak satu pun CFU-F yang dengan flow cytometry
diturunkan dari UCB menampilkan fenotip adipogenik dalam kondisi BM (%) UCB (%) PADA (%)
diferensiasi standar. Bahkan setelah menerapkan protokol diferensiasi Antibodi (N-9) (N-10) (N-9)
yang diperkaya di mana sel diinduksi selama 5 minggu hanya dalam
CD44 97,5 - 5,1 99,7 - 0,5 99,8 - 0,2
media induksi adipogenik, tidak ada adiposit yang terdeteksi (Gbr. CD73 90,0 - 20,0 99,3 - 1,3 99,6 - 0,5
2M). Dengan demikian, jumlah sampel BM dan AT yang jauh lebih CD90 99,1 - 2,5 97.8 - 7.1 99,9 - 0,2
tinggi daripada UCB menampilkan kapasitas diferensiasi adipogenik (P CD14 1.2 - 1.1 0,8 - 0,9 2.4 - 5.0
.01). Tidak ada fenotip adipogenik yang diinduksi pada fibroblas (tidak CD34 1.6 - 1.4 1.2 - 1.5 5.0 - 5.1
diperlihatkan). CD45 5.2 - 3.7 3.8 - 3.6 3.8 - 5.1
CD105A 88.1 - 7.4 72,4 - 20,0 90,4 - 5,9
Kapasitas Diferensiasi Chondrogenic CD133 1.3 - 1.1 2.9 - 5.5 2.9 - 3.5
Diferensiasi khondrogenik dikonfirmasi oleh pembentukan bola
CD29 99,0 - 1,5 99,8 - 0,4 99,5 - 1,3
HLA I 95,2 - 6,0 94,3 - 6,8 98,8 - 2,8
dalam kultur mikromassa dan sekresi proteoglikan spesifik
CD106B 66,3 - 22,7 70,0 - 23,6 30.3-18.6
kartilago yang dapat diwarnai dengan Safranin O. Semua sampel
HLA II 4.2 - 6.1 0,8 - 1,2 4.4 - 6.2
yang diuji, terlepas dari asalnya, serta fibroblas, menunjukkan CD144 4.5 - 9.3 2.4 - 4.0 2.4 - 2.5
fenotip mirip tulang rawan dengan mirip kondrosit. kekosongan
Tabel menunjukkan nilai rata-rata persentase sel positif -
(Gbr. 2G, 2N, 2U; fibroblas tidak ditampilkan).
standar deviasi terhadap jumlah total sel yang dianalisis.
APerbedaan signifikan diamati antara UCB dibandingkan
Perbandingan Kapasitas Diferensiasi Multilineage dengan BM dan AT (P . 05).
Membandingkan kapasitas diferensiasi multilineage, kami BPerbedaan signifikan diamati antara AT dibandingkan
menganalisis hanya sampel-sampel yang hasil dari tiga kapasitas dengan BM dan UCB (P . 05).
diferensiasi diperoleh. Kapasitas diferensiasi ke dalam ketiga Singkatan: AT, jaringan adiposa; BM, sumsum tulang; UCB,
garis keturunan ditunjukkan untuk 71,4% sampel BM dan AT (lima darah tali pusat.
dari tujuh; 10 dari 14). Semua (enam dari enam) UCB-CFU-F yang
dianalisis hanya dapat diarahkan ke dua garis keturunan, karena donor pada bagian 2-5 diperiksa dengan flow cytometry. Setiap
kapasitas diferensiasi adipogenik yang tidak terdeteksi. Kapasitas sampel dianalisis pada satu bagian yang berbeda (Tabel 2).
diferensiasi dua garis keturunan hanya diamati untuk sampel BM MSC yang berasal dari ketiga sumber tidak menunjukkan
dan AT yang secara signifikan lebih sedikit daripada sampel UCB ekspresi penanda hematopoietik (CD14, CD34, CD45),
(BM, 28,6% [dua dari tujuh]; AT, 28,6 [4 dari 14];P . 008); semua penanda sel punca CD133, atau penanda sel endotel CD144.
BM dan hampir semua sampel AT menunjukkan kapasitas diferensiasi Lebih dari 90% MSC yang berasal dari ketiga sumber tersebut
adipo-chondrogenic. Hanya satu sampel AT yang menunjukkan menyatakan protein penanda MSC khas CD44, CD73, CD29,
kapasitas diferensiasi osteo-kondrogenik. dan CD90. Namun, intensitas ekspresi CD90 dari MSC yang
diturunkan dari UCB secara signifikan di bawah jaringan lain
Kapasitas Diferensiasi Multilineage BM- dan (intensitas fluoresensi rata-rata: UCB, 738 - 715,9; BM, 1.512,1
AT-CFU-F - 754,9; AT, 2.200,6 - 896,9; UCB dibandingkan dengan BM,P
Karena UCB-MSC tidak menunjukkan kapasitas diferensiasi . 02; UCB dibandingkan dengan AT,P . 001) (Gbr. 3). Lagi
adipogenik, berbeda dengan AT- dan BM-MSC, kami berhipotesis dari 90% MSC yang berasal dari ketiga sumber tersebut menyatakan
bahwa ini mungkin terkait dengan asal UCB-MSC yang diturunkan HLA I; namun, tidak ada MSC yang menyatakan HLA II. CD105
dari CFU-F. BM- dan AT-FAC berasal dari lapisan tunggal, yang diekspresikan oleh persentase UCB-MSC yang jauh lebih rendah
mungkin mengandung campuran sel prekursor yang lebih dibandingkan dengan BM- atau AT-MSC (UCB dibandingkan dengan
heterogen berbeda dengan CFU-F. Oleh karena itu, CFU-F juga BM,P . 02; UCB dibandingkan dengan AT,P . 008) (Gbr. 3).
dihasilkan dari BM dan AT dan dianalisis untuk kapasitas Secara signifikan lebih banyak UCB- dan BM-MSC yang mengekspresikan CD106
diferensiasinya. Kapasitas diferensiasi CFU-F dari kedua jaringan daripada AT-MSC (UCB dibandingkan dengan AT,P . 008; BM dibandingkan
tidak dibatasi: kapasitas diferensiasi terhadap ketiga garis dengan AT,P . 002) (Gbr. 3). Hal yang sama diamati untuk
keturunan dapat diamati untuk 28,6% (4 dari 14) BM-CFU-F dan intensitas ekspresi molekul ini; itu secara signifikan lebih
untuk 89,3% (25 dari 28) AT -CFU-F (P . 001). Sebuah diferensiasi tinggi untuk UCB- dan BM-MSC dibandingkan dengan AT-MSC
kapasitas terhadap dua garis keturunan hanya diperhatikan untuk (BM, 28.37 - 21.18; UCB, 41.90 - 31.81; AT, 8.26 - 4.77; AT
64,2% (9 dari 14) BM-CFU-F dan untuk 7,1% (2 dari 28) AT-CFU-F (P dibandingkan dengan BM,P . 02; AT dibandingkan dengan UCB,
. 001): semua AT-CFU-F dan hampir semua BM-CFU-F P . 001) (Gbr. 3).
menunjukkan kapasitas diferensiasi adipo-kondrogenik, karena
satu BM-CFU-F memiliki kapasitas diferensiasi osteo-kondrogenik.
Satu CFU-F yang diturunkan dari BM dan AT dapat dibedakan DPERMASALAHAN
hanya menjadi satu, garis keturunan kondrogenik. Kami membandingkan MSC dari BM dan dua sumber alternatif,
yaitu UCB dan AT, mengenai karakteristik dasar MSC. Semua sel
Karakterisasi Immunophenotypic yang diisolasi dari ketiga sumber ini menunjukkan karakteristik
Untuk karakterisasi MSC lebih lanjut, ekspresi protein permukaan MSC yang khas: morfologi fibroblastoid, pembentukan CFU-F,
MSC dari sembilan donor BM pada jalur 0 –7, dari 13 UCB-CFU-F (8 kemampuan diferensiasi multipotensial, dan ekspresi kumpulan
unit UCB) pada jalur 3–5, dan dari sembilan AT protein permukaan yang khas. Sedangkan

www.StemCells.com
1300
Gambar 3. Analisis imunofenotipe sel punca mesenkimal
(MSC) dari BM (garis putus-putus), UCB (garis berat), dan AT (garis ringan).
MSC dari sembilan donor BM pada bagian 0 –7, 13 unit pembentuk koloni
UCB-fibroblastoid pada bagian 3–5, dan sembilan donor AT pada bagian 2–5
dicobakan, diberi label dengan antibodi terhadap antigen yang ditunjukkan,
dan dianalisis dengan flow cytometry . Hanya contoh representatif yang
menampilkan profil ekspresi antigen berbeda yang signifikan yang
ditampilkan. Singkatan: AT, jaringan adiposa; BM, sumsum tulang; FITC,
fluorescein isothiocyanate; PE, fikoeritrin; PerCP, kompleks protein
Peridium-klorofil; UCB, darah tali pusat.
MSC yang berasal dari tiga sumber mengekspresikan protein
penanda MSC klasik, tetapi kekurangan penanda hematopoietik
dan endotel, kami mengamati perbedaan yang signifikan
mengenai ekspresi CD90, CD105, dan CD106. Molekul-molekul ini
dijelaskan terkait dengan hematopoiesis dan migrasi sel [18-20].
Perlu diselidiki lebih lanjut apakah molekul-molekul ini secara
fungsional penting untuk stroma dan kapasitas homing. Dalam
pendekatan pertama, kami membuat profil ekspresi protein
komprehensif dari UCB-MSC yang tidak berdiferensiasi, yang
akan diperluas ke BM- dan AT-MSC dan kemudian dikorelasikan
dengan sifat fungsional [21].
Karena relevansi perbedaan yang diamati dari ekspresi
penanda belum diselidiki dengan baik, perbedaan mengenai
kapasitas diferensiasi tampaknya lebih relevan untuk kualitas
MSC saat ini. Kami mendemonstrasikan kapasitas diferensiasi
multilineage untuk BM- dan AT-MSC. Menariknya, UCB-MSC
tidak dapat dibedakan ke arah garis keturunan adipogenik,
yang tidak terkait dengan asal CFU-F. Sebenarnya, ada data
yang bertentangan mengenai kapasitas diferensiasi
adipogenik UCB-MSCs [9-12, 22, 23]. Namun demikian, kami
berasumsi bahwa UCB-MSC kurang sensitif terhadap
diferensiasi adipogenik (didukung oleh hasil Chang et al. [22])
yang mungkin terkait dengan usia ontogenetik sel-sel ini. Hal
ini selanjutnya didukung oleh fakta bahwa adiposit berada
pada BM dan AT manusia dewasa tetapi tidak ada pada BM
janin dan dengan pengamatan peningkatan adipogenesis
berkorelasi dengan usia [24]. Pendekatan genomik atau
proteomik komparatif lebih lanjut diperlukan untuk menilai
kerentanan terhadap adipogenesis MSC.
Tak satu pun dari UCB-MSC kami yang menunjukkan kapasitas
diferensiasi adipogenik, tetapi semuanya berdiferensiasi menjadi garis
keturunan chondro- dan osteogenik. Sebaliknya, kapasitas diferensiasi tri-
potensial diamati untuk sebagian besar sampel AT tetapi hanya untuk
beberapa sampel BM. Satu sampel masing-masing BM dan AT diamati
Membandingkan MSC dari Jaringan Berbeda
hanya menjalani jalur kondrogenik. Sesuai dengan ini,
potensi diferensiasi hierarkis atau bahkan terbatas dari
MSC telah dilaporkan [1, 13, 25].
Dalam penelitian kami, investigasi terbatas pada kapasitas
diferensiasi mesodermal. Namun, berdasarkan laporan terbaru,
spektrum diferensiasi MSC tampaknya tidak terbatas pada garis
keturunan ini. MSC yang berasal dari ketiga jaringan telah
terbukti berdiferensiasi menjadi garis keturunan mesodermal
lebih lanjut dan menjadi garis keturunan endo dan ektodermal
juga [10-13, 26-33]. Eksperimen komparatif perlu dilakukan untuk
menilai respons terhadap diferensiasi kardiomiogenik, endotel,
hati, saraf, dan pankreas.
Dampak tinggi pada eksploitasi klinis mungkin terkait dengan kelimpahan dan kapasitas ekspansi MSC. Berdasarkan hasil kami, baik
BM dan AT adalah sumber yang dapat diandalkan untuk mengisolasi dan memperluas MSC dalam pengaturan autologus karena semua
preparat memunculkan MSC. UCB, sebaliknya, memiliki kemanjuran isolasi maksimal 63% [8]. Kami mengaitkan perbedaan ini dengan fakta
bahwa MSC bersirkulasi dalam organisme prenatal dan berada di jaringan orang dewasa [9]. Meskipun frekuensi UCB-MSCs rendah, potensi
ekspansi tertinggi dibandingkan dengan sumber sel lainnya. Mempertimbangkan aplikasi klinis, jumlah sel yang dihasilkan mungkin serupa
dengan BM dan AT, yang dapat diperoleh pada frekuensi yang lebih tinggi. Satu argumen yang menentang AT mungkin ketersediaan
terbatas pada beberapa pasien. Namun, kami percaya bahwa karena tingginya frekuensi AT-MSC, juga reservoir lemak kecil mungkin cukup
untuk isolasi MSC. BM telah menjadi sumber utama untuk aplikasi klinis MSC, seperti pengobatan osteogenesis imperfekta, penyakit graft
versus host, dan infark miokard akut [34-36]. Karena jumlah, frekuensi, dan kapasitas diferensiasi BM-MSCs berkorelasi negatif dengan usia,
mereka bisa menjadi tidak efisien secara klinis ketika berasal dari pasien usia lanjut. Dalam hal ini, pendekatan alogenik akan diperlukan. Jika
diperlukan donor yang cocok, BM atau AT dari saudara kandung yang identik dengan HLA, kerabat identik haplo, atau donor yang disaring
HLA mungkin merupakan pilihan terbaik. Berspekulasi pada produk “off-the-shelf” yang membutuhkan produksi massal, AT mungkin
merupakan basis awal yang solid karena kelimpahannya, panen yang relatif mudah, dan frekuensi MSC yang tinggi. BM telah menjadi
sumber utama untuk aplikasi klinis MSC, seperti pengobatan osteogenesis imperfekta, penyakit graft versus host, dan infark miokard akut
[34-36]. Karena jumlah, frekuensi, dan kapasitas diferensiasi BM-MSCs berkorelasi negatif dengan usia, mereka bisa menjadi tidak efisien
secara klinis ketika berasal dari pasien usia lanjut. Dalam hal ini, pendekatan alogenik akan diperlukan. Jika diperlukan donor yang cocok, BM
atau AT dari saudara kandung yang identik dengan HLA, kerabat identik haplo, atau donor yang disaring HLA mungkin merupakan pilihan
terbaik. Berspekulasi pada produk “off-the-shelf” yang membutuhkan produksi massal, AT mungkin merupakan basis awal yang solid karena
kelimpahannya, panen yang relatif mudah, dan frekuensi MSC yang tinggi. BM telah menjadi sumber utama untuk aplikasi klinis MSC,
seperti pengobatan osteogenesis imperfekta, penyakit graft versus host, dan infark miokard akut [34-36]. Karena jumlah, frekuensi, dan
kapasitas diferensiasi BM-MSCs berkorelasi negatif dengan usia, mereka bisa menjadi tidak efisien secara klinis ketika berasal dari pasien
usia lanjut. Dalam hal ini, pendekatan alogenik akan diperlukan. Jika diperlukan donor yang cocok, BM atau AT dari saudara kandung yang
identik dengan HLA, kerabat identik haplo, atau donor yang disaring HLA mungkin merupakan pilihan terbaik. Berspekulasi pada produk
“off-the-shelf” yang membutuhkan produksi massal, AT mungkin merupakan basis awal yang solid karena kelimpahannya, panen yang relatif
mudah, dan frekuensi MSC yang tinggi. penyakit graft versus host, dan infark miokard akut [34-36]. Karena jumlah, frekuensi, dan kapasitas
diferensiasi BM-MSCs berkorelasi negatif dengan usia, mereka bisa menjadi tidak efisien secara klinis ketika berasal dari pasien usia lanjut.
Dalam hal ini, pendekatan alogenik akan diperlukan. Jika diperlukan donor yang cocok, BM atau AT dari saudara kandung yang identik dengan HLA, kerabat identik haplo, at
Transplantasi MSC saat ini merupakan prosedur yang
sangat eksperimental, menyerupai awal awal transplantasi
sel punca hematopoietik. Yang terakhir, BM telah digantikan
secara bertahap oleh sel progenitor darah perifer dan darah
tali pusat. Juga, di bidang MSC, sumber alternatif diselidiki
secara intensif, dan suatu hari sumber baru ini dapat
menggantikan BM. Mempertimbangkan semua keuntungan
dan kerugian dari ketiga sumber yang dibahas di atas,
tergantung pada indikasi terapeutik, aplikasi klinis mungkin
didasarkan pada kapasitas diferensiasi, tetapi lebih mungkin
pada kelimpahan, frekuensi, dan potensi ekspansi sel.
AUCAPAN TERIMA KASIH
Kami berterima kasih kepada kolaborator di departemen
kebidanan dari St. Hedwigsklinik di Mannheim, Jerman, Rumah
Sakit St. Rochus di Dieburg, Jerman, dan khususnya Dudi Vutay
(Departemen Obstetri dan Ginekologi, Rumah Sakit Universitas
Mannheim), dan dari Klinik am Lui-senpark untuk memasok
bahan sedot lemak. Kami berterima kasih kepada Daniela
Griffiths untuk mengedit naskah. Pekerjaan ini dulu
Kern, Eichler, Stoeve dkk.
didukung oleh Forschungsfonds der Fakultät für Klinische
Medizin Mannheim dan oleh Deutsche José Carreras
Leukämie-Stiftung eingetragener Verein.
RREFERENSI
1 Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC dkk. Potensi multilineage dari sel
punca mesenkimal manusia dewasa. Sains 1999;284:143–147.
2 Nishida S, Endo N, Yamagiwa H dkk. Jumlah sel osteoprogenitor dalam
sumsum tulang manusia secara nyata menurun setelah pematangan
kerangka. J Bone Miner Metab 1999;17:171–177.
3 Mueller SM, Glowacki J. Penurunan terkait usia dalam potensi
osteogenik sel sumsum tulang manusia yang dikultur dalam spons
kolagen tiga dimensi. J Cell Biochem 2001;82:583–590.
4 Stenderup K, Justuesen J, Clausen C dkk. Penuaan dikaitkan dengan
penurunan masa hidup maksimal dan percepatan penuaan sel stroma
sumsum tulang. Tulang 2003;33:919 –926.
5 Rubinstein P, Rosenfeld RE, Adamson JW dkk. Menyimpan darah plasenta untuk
pemulihan sumsum tulang yang tidak terkait. Darah 1993;81:1679 –1690.
6 Mareschi K, Biastin L, Piacibello W et al. Isolasi sel punca
mesenkimal manusia: Sumsum tulang versus darah tali pusat.
Hematologica 2001;86:1099 –1100.
7 Wexler SA, Donaldson C, Denning-Kendall P dkk. Sumsum tulang orang dewasa
merupakan sumber yang kaya akan sel punca mesenkimal manusia, tetapi darah tali
pusat dan darah orang dewasa yang dimobilisasi tidak. Br J Haematol 2003;121:368 –
374.
8 Bieback K, Kern S, Klüter H et al. Parameter kritis untuk isolasi sel
punca mesenkimal dari darah tali pusat.SEL STEM
2004;22:625– 634.
9 Erices A, Conget P, Minguell JJ. Sel progenitor mesenchymal dalam
darah tali pusat manusia. Br J Hematol 2000;109:235–242.
10 Goodwin HS, Bicknese AR, Chien SN dkk. Diferensiasi multi-garis keturunan
aktivitas oleh sel yang diisolasi dari darah tali pusat: ekspresi penanda tulang,
lemak, dan saraf. Transplantasi Sumsum Darah Biol 2001;7:581–588.
11 Lee OK, Kuo TK, Chen WM dkk. Isolasi mesenkim multipoten
sel induk mal dari darah tali pusat. Darah 2004;103:1669 –1675.
12 Kögler G, Sensken S, Airey JA et al. Sel punca somatik manusia baru
dari darah tali pusat dengan potensi diferensiasi pluripoten
intrinsik. J Exp Med 2004;200:123–135.
13 Zuk PA, Zuh M, Ashjian P dkk. Jaringan adiposa manusia merupakan sumber dari
sel punca multipoten. Mol Biol Sel 2002;13:4279 – 4295.
14 Eichler H, Meckies J, Schmut N dkk. Aspek donasi dan proses-
transplantasi sel punca dari darah tali pusat. Z Geburtshilfe
Neonatol 2001;205:218 –223.
15 Eichler H, Kern S, Beck C. Kapasitas pengikatan darah tali pusat
sel yang diproses dengan preparat darah utuh atau filtrasi.SEL
STEM2003;21:208 –216.
16 Cristofalo VJ, Allen RG, Pignolo RJ dkk. Hubungan antara donor
usia dan umur replikasi sel manusia dalam budaya: Sebuah evaluasi ulang.
Proc Natl Acad Sci USA 1998;95:10614 –10619.
17 Cheng SL, Yang JW, Rifas L dkk. Diferensiasi tulang manusia
sel stroma osteogenik sumsum in vitro: Induksi fenotip osteoblas
oleh deksametason. Endokrinologi 1994;134:277–286.
18 Barda-Saad M, Rozenszajn LA, Ashush H dkk. Molekul adhesi
terlibat dalam interaksi antara sel T awal dan sel stroma sumsum tulang
mesenkimal. Exp Hematol 1999;27:834 – 844.
19 Levesque JP, Takamatsu Y, Nilsson SK dkk. Adhesi sel pembuluh darah
molekul-1 (CD106) dibelah oleh protease neutrofil di sumsum
tulang setelah mobilisasi sel progenitor hematopoietik oleh faktor
perangsang koloni granulosit. Darah 2001;98:1289 –1297.
www.StemCells.com
1301
DPENUTUPAN
Para penulis menunjukkan tidak ada potensi konflik kepentingan.
20 Conley BA, Koleva R, Smith JD dkk. Endoglin mengontrol migrasi sel
dan komposisi adhesi fokal. J Biol Biochem 2004;279:27440 –
27449.
21 Feldmann RE Jr., Bieback K, Maurer MH dkk. Proteom sel punca: A
profil sel punca mesenkimal manusia yang berasal dari darah tali pusat.
Elektroforesis 2005;26:2749 –2758.
22 Chang YJ, Shih DT, Tseng CP dkk. Garis keturunan mesenkim yang berbeda
kecenderungan dalam sel induk mesenchymal dari sumsum tulang
manusia dan darah tali pusat.SEL STEM2005 [Epub sebelum cetak].
23 Wagner W, Wein F, Seckinger A dkk. Karakteristik komparatif dari
sel induk mesenchymal dari sumsum tulang manusia, jaringan adiposa,
dan darah tali pusat. Exp Hematol 2005;33:1402–1416.
24 Moerman EJ, Teng K, Lipschitz DA dkk. Penuaan mengaktifkan adipogenik
dan menekan program osteogenik dalam stroma sumsum
mesenchymal / sel induk: Peran faktor transkripsi PPAR-gamma2 dan
jalur pensinyalan TGFbeta / BMP. Sel Penuaan 2004;3:379 –389.
25 Muraglia A, Cancedda R, Quarto R. Progenitor mesenkim klonal
dari sumsum tulang manusia berdiferensiasi in vitro menurut model
hirarkis. J Cell Sci 2000;113:1161–1166.
26 Kocok JG, Gruber PJ, Baumgartner WA et al. Sel punca mesenkimal
implantasi dalam model infark miokard babi: Engraftment dan
efek fungsional. Ann Thorac Surg 2002;73:1919 –1926.
27 Strem BM, Zhu M, Alfonso Z et al. Ekspresi kardiomiositik
penanda pada sel yang berasal dari jaringan adiposa dalam model murine
dari cedera miokard akut. Sitoterapi 2005;7:282–291.
28 Silva GV, Litovsky S, Assad JA dkk. Sel punca mesenkimal berbeda
menjadi fenotipe endotel, meningkatkan kepadatan pembuluh darah, dan
meningkatkan fungsi jantung dalam model iskemia kronis anjing. Sirkulasi
2005;18:150 –156.
29 Cao Y, Sun Z, Liao L dkk. Sel induk yang berasal dari adiposa berbeda
menginisiasi ke dalam sel endotel secara in vitro dan meningkatkan neovaskularisasi
pascakelahiran secara in vivo. Biochem Biophys Res Commun 2005;332:370 –379.
30 Lee KD, Kuo TK, Whang-Peng J dkk. Diferensiasi hati in vitro dari
sel punca mesenkimal manusia. Hepatologi 2004;40:1275–1284.
31 Seo MJ, Suh SY, Bae YC dkk. Diferensiasi stroma adiposa manusia
sel ke dalam garis keturunan hati in vitro dan in vivo. Biochem Biophys Res
Commun 2005;328:258 –264.
32 Moriscot C, de Fraipont F, Richard MJ dkk. Mesen sumsum tulang manusia
sel induk chymal dapat mengekspresikan insulin dan faktor transkripsi kunci
dari jalur perkembangan pankreas endokrin pada manipulasi genetik dan /
atau lingkungan mikro secara in vitro.SEL STEM2005;23:594–603.
33 Hou LL, Zheng M, Wang DM dkk. Migrasi dan diferensiasi dari
sel induk mesenchymal sumsum tulang manusia di otak tikus. Sheng Li
Xue Bao 2003;25:153–159.
34 Horwitz EM, Gordon PL, Koo WKK dkk. Tulang alogenik terisolasi
sel mesenchymal yang berasal dari sumsum mengukir dan merangsang
pertumbuhan pada anak-anak dengan osteogenesis imperfekta: Implikasi untuk
terapi sel tulang. Proc Natl Acad Sci USA 2002;99:8932– 8937.
35 Le Blanc K, Rasmusson I, Sundberg B dkk. Pengobatan akut yang parah
penyakit graft-versus-host dengan sel punca mesenkimal haploidentik pihak
ketiga. Lancet 2004;363:1439 –1441.
36 Chen SL, Fang WW, Qian J dkk. Perbaikan fungsi jantung setelah
transplantasi sel induk mesenchymal sumsum tulang autologus pada
pasien dengan infark miokard akut. Chin Med 2004;117:1443–1448.