UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESPEPECTROSCOPÍA
INFRARROJA

Mg NORMA
ANGÉLICA CARLOS
CASAS
Espectroscopia en el Infrarrojo

Intensidad de la Luz
Rango móvil del Interferometro

T%

Espectro Infrarrojo

4000 400 (cm-1)

Espectroscopia de Absorción en el Infrarrojo
La región del Infrarrojo abarca la región comprendida desde los 0.8 m
hasta los 1000 m. Desde el punto de vista instrumental como en el de
las aplicaciones, es conveniente dividir el espectro infrarrojo en tres
secciones: El Infrarrojo Cercano, El infrarrojo Medio y El Infrarrojo
Lejano.

12,500 cm-1 4,000 cm-1 400 cm-1 10 cm-1

Infrarrojo Cercano Infrarrojo Medio Infrarrojo Lejano

0.8 m 2.5 m 25  m 1 mm
Espectroscopia de Absorción en el Infrarrojo

Regiones del Espectro Infrarrojo

Región Intervalo de longitud Intervalo de número Intervalo de frecuencias

de onda (), m de onda (), cm-1 (), Hz

Cercano 0.78 a 2.50 12,800 a 4,000 3.8 x 1014 a 1.2 x 1014

Medio 2.50 a 50 4,000 a 200 1.2 x 1014 a 6.0 x 1012
Lejano 50 a 1,000 200 a 10 6.0 x 1012 a 3.0 x 1011
Zona Util 2.50 a 50 4,000 a 400 1.2 x 1014 a 2.0 x 1013
Espectroscopia de Absorción en el Infrarrojo
Aplicaciones:
La espectroscopia Infrarroja presenta su principal aplicación en el análisis
cualitativo (y algunas veces cuantitativo) de compuestos orgánicos, los cuales
presentan espectros complejos con numerosos máximos y mínimos que resultan
útiles al efectuar comparaciones.
%T
100

Espectro infrarrojo de la
sustancia de referencia
70 (Caucho Natural)

30 Espectro infrarrojo de la
sustancia desconocida

0.0
4,000 3,000 2,000 1,500 1,000 500 cm-1
El Espectro Infrarrojo

Que es un espectro infrarrojo?

El Espectro Infrarrojo
Es el registro ordenado y lineal de los valores de Transmitancia (como
ordenada), y los números de onda (como abscisa). El registro puede variar de
formato (Transmitancia vs. Longitud de Onda, Absorbancia vs. Número de
onda o Energía vs. número de onda.
%T
100

70

35

0.0
0 3,000 2,000 1,500 1,000 500 cm-1
El Espectro Infrarrojo

Por que el espectro es

tan complejo?
El Espectro Infrarrojo
UV.visible

La Radiación Infrarroja no es lo
suficientemente energética como
para producir transiciones
electrónicas (como las que
ocurren con la radiación UV y
Visible). La absorción se debe en
gran parte a que algunas
especies moleculares presentan
pequeñas diferencias de energía
entre los distintos estados
vibracionales.

IR
El Espectro Infrarrojo

Entonces si no hay Absorción

en los átomos,
Como se obtiene el Espectro?

T%

4000 400 (cm-1)

El Espectro Infrarrojo
• Para absorber radiación infrarroja, la molécula debe
experimentar cambio neto en el momento dipolar, como
consecuencia de su movimiento de rotación o
vibración.
➢ Si la frecuencia de la radiación iguala exactamente a la
frecuencia de vibración natural de la molécula,
ocurrirá una transferencia neta de energía que da
lugar a un cambio en la amplitud de la vibración
molecular, y en consecuencia se absorbe la radiación.
De igual forma, la rotación de moléculas asimétricas
alrededor de sus centros de masas produce una
fluctuación dipolar periódica que puede interaccionar con
la radiación.
 CAMBIO EN EL MOMENTO DIPOLAR

La apariencia y la intensidad de las bandas de absorción

dependen del momento dipolar de las moléculas .

La luz IR se absorbe cuando interactúan el momento dipolar de

la molécula con el vector eléctrico de la luz.

12
 CONDICIÓN DE RESONANCIA :

• La excitación de una VIBRACIÓN corresponde a la

absorción de un fotón para pasar de un nivel
vibracional basal n0 a un nivel vibracional n1 de
mayor energía.
• La energía del fotón debe ser igual al DE entre n0 a
n1 .
En estas condiciones el fotón será absorbido.
E foton = DE molécula

13
El Espectro Infrarrojo
Transiciones Rotacionales
La energía necesaria para provocar
un cambio a nivel rotacional es muy
pequeña y corresponde a radiaciones
de 100 cm-1 o menores.
Debido a que los niveles rotacionales
están cuantizados, la absorción en los
gases en la región del infrarrojo
cercano se caracteriza por tener líneas
discretas bien definidas. Sin embargo,
para sólidos y líquidos, los choques e
interacciones intramoleculares causan
un ensanchamiento de las líneas,
resultando un espectro continuo.
El Espectro Infrarrojo
Transiciones Vibracionales/Rotacionales

Los niveles de energía vibracional también están cuantizados, y

para la mayoría de las moléculas las diferencias de energía entre
los estados cuánticos corresponden a la región del infrarrojo
medio.
El espectro infrarrojo de un gas consiste por lo general, en una
serie de líneas muy próximas entre sí (debido a que existen
varios estados energéticos rotacionales para cada estado
vibracional). Por otra parte, en los sólidos y líquidos la rotación
esta muy restringida, y las líneas discretas vibracionales
/rotacionales desaparecen, quedando solo los picos vibracionales
algo ensanchados.
El Espectro Infrarrojo
Tipos de Vibraciones Moleculares

Dos tipo de Vibraciones:

De Tensión y Flexión.
El Espectro Infrarrojo
Vibraciones de Tensión

Una vibración de tensión supone un

cambio continuo en la distancia
interatómica a lo largo del eje de
enlace entre dos átomos.
Se presentan dos clases de Vibración de Tensión
vibraciones de tensión: Simétrica

Simétrica y Asimétrica.

Vibración de Tensión
Asimétrica
El Espectro Infrarrojo
Vibraciones de Flexión

Las vibraciones de flexión se

caracterizan por un cambio en el
ángulo entre dos enlaces, y son de
cuatro tipos: Tijereteo en el plano Balanceo en el plano

•De Tijereteo.
•De Balanceo
•De Aleteo.
•De Torsión

Aleteo fuera del plano Torsión fuera del plano

El Espectro Infrarrojo

Por que aparecen algunos picos

y otros no aparecen, si la teoría
dice que....

T%

4000 400 (cm-1)

MODOS NORMALES DE VIBRACION

3N-6 (para moléculas NO lineales)

3N-5 (para moléculas lineales)

3N - 6 3N - 5

21
N es número de átomos
El Espectro Infrarrojo
Modos de Vibración
Normalmente en las moléculas sencillas, diatómicas y triatómicas, es
posible deducir el número y la clase de vibración. Las moléculas
complejas pueden contener distintos tipos de átomos y enlaces, y en
estos casos la gran cantidad de vibraciones posibles hacen que los
espectros infrarrojos resulten muy difíciles (y a veces imposible) de
analizar.
Hay cuatro factores que tienden a producir menos picos que los
previstos a partir del número de modos normales:
(1) Simetría de la molécula (la vibración no produce dipolo)
(2) La energía de vibración de dos o mas vibraciones son casi idénticas.
(3) La intensidad de Absorción es tan baja que no es detectable.
(4) La energía vibracional se encuentra en un rango alto de longitud de
onda, fuera del intervalo de lectura del instrumento.
REGLAS DE SELECCIÓN

23
El Espectro Infrarrojo
Modos de Vibración

Ocasionalmente podemos encontrar mas picos de los esperados por

sobretonos que se encuentran a unas frecuencias dos o tres veces mayores
que la frecuencia del pico fundamental.

En algunas ocasiones se pueden encontrar “Bandas de Combinación”,

que ocurre cuando un fotón excita en forma simultanea dos modos de
vibración. La frecuencia de la banda de combinación es
aproximadamente la suma o la diferencia de las dos frecuencias
fundamentales.
Determinación de Grupos funcionales e Identificación de sustancias

El propósito principal de un FTIR es

la determinación de grupos

funcionales, y por lo tanto, la

identificación de sustancias.

Debido a que cada pico de un

espectro infrarrojo le pertenece a

solo un grupo funcional, la

estructura molecular de la sustancia

bajo análisis puede determinarse.

Determinación de Grupos funcionales e Identificación de sustancias

Debido a que cada sustancia

presenta un espectro infrarrojo
único y característico (como una
huella digital humana), este
espectro puede identificar una
sustancia de muchos de sus
isómeros estructurales.
Determinación de Grupos funcionales e Identificación de sustancias
En el mercado existen Software que permite la comparación directa de los
espectros infrarrojos. Sin embargo,la decisión final sobre la presencia o
ausencia de grupos funcionales en la muestra debe de tomarla el analista..

%T
100

75

- CH2 -

50
- CH2 -
- CH3 - CH3
Acetato de Etilo
25 O C-O-C
CH3 - C
O
CH3 - CH2 >C=O - CH3
0
4000 3000 2000 1500 1000 500
cm-1
Determinación de Grupos funcionales e Identificación de sustancias
El sistema de identificación se agiliza utilizando “Librerías Comerciales de
Espectros Infrarrojos”. Algunas de las librerías comerciales más conocidas
son Aldrich Database y Sadtler Libraries.

%T
100

Espectro infrarrojo de la sustancia

de referencia (Caucho Natural)

70

35
Espectro infrarrojo de la
sustancia desconocida

0.0
0 3,000 2,000 1,500 1,000 500 cm-1
Principio y Estructura de un IR
Construcción de un Espectrómetro Infrarrojo.-
Un espectrómetro Infrarrojo puede dividirse en dos tipos:
* Espectrómetro Infrarrojo de Dispersión.
* Espectrómetro Infrarrojo con Transformada de Fourier.

Fuente de Luz Fuente de Luz

Compartimento de Infrarrojo
Muestras Interferómetro
Dispersivo
Infrarrojo con
Monocromador Transformada Compartimento de
de Fourier Muestras

Detector Detector
Principio y Estructura de un IR
El Espectrómetro Infrarrojo de Dispersión:
La luz que emerge del monocromador llega al detector (una Termocupla) para convertirse en una señal eléctrica. La cual es
amplificada por un pre-amplificador, para luego ser medidas como dos señales separadas.

Compartimento Cámara de la fuente de

de muestra Luz
Chopper
SLIT (ON/OFF)
(Rendija)
Filtro

Rejilla de Dispersión

Condensador y
Termocupla
Principio y Estructura de un IR

El Espectrómetro Infrarrojo de Dispersión:

Estas señales son separadas en un filtro de bandas y

rectificadas en forma sincrónica. Luego, estas señales
son convertidas e interpretadas por la Unidad
Controladora de Procesos (CPU). El CPU cruzara
información entre el haz de referencia y el haz de la
muestra para calcular la Transmitancia o Absorbancia de
la muestra.
Principio y Estructura de un FTIR
El Espectrómetro Infrarrojo con Transformada de Fourier:
El espectrómetro Infrarrojo con
Transformada de Fourier no Interferómetro
utiliza un elemento dispersante. Espejo Fijo

En su lugar se utiliza un Espejo Móvil

“Interferómetro” para generar Detector

una luz de interferencia a la cual

la muestra es expuesta. Divisor de Haz

En un FTIR, la señal espectral no

Compartimento
se obtiene directamente del de Muestra
detector, ya que lo que se obtiene
es una forma de onda interferente Fuente de Luz
llamada “Interferograma”. Esta
onda se obtiene debido al
movimiento reciprocante
(Atrás/Adelante), del espejo móvil
del Interferómetro.
Principio y Estructura de un FTIR
El Espectrómetro Infrarrojo con Transformada de Fourier:
Para obtener el espectro infrarrojo a partir de un Interferograma, se aplica la
Transformada de Fourier. La Transformada de Fourier es un Calculo Matemático
que permite la conversión rápida del Interferograma.

%T
Intensidad de Luz

Computador
a
Transformada
de Fourier
4000 400
(cm-1)

Rango móvil del Espectro

Interferómetro Infrarrojo
Ventajas de un FTIR
“La precisión en el número de onda de un FTIR esta determinada por la luz
del Haz Láser (Láser Helio - Neón). En consecuencia, los espectros que
se obtienen son de alta precisión”.

%T
100

75

- CH2 -

50
- CH2 -
- CH3 - CH3
Acetato de Etilo
25 O C-O-C
CH3 - C
O
CH3 - CH2 >C=O - CH3
0
4000 3000 2000 1500 1000 500 (cm-1)
Ventajas de un FTIR
Ventajas de aplicación:
(1) Mediciones de alta sensibilidad:
* Fácil medición de muestras de baja Transmitancia.
* Es posible la medición de áreas muy pequeñas.
* Medición de películas de capa delgada sobre superficies es
posible.
(2) Mediciones de Alta Velocidad:
* Análisis On-Line de los componentes respectivos de elución
cuando se combinan con GC o un LC.
(3) Alta precisión en la obtención de espectros:
* Alta precisión en sustracción de espectros es posible.
Medición de Muestras
Técnicas de Trabajo
Espectroscopia de Transmisión.-
El método de la Pastilla de Bromuro de Potasio (1/3)
Es el método mas popular para
la medición de espectros de
muestras en polvo.
Para preparar una tableta,
agregue una cantidad de 0.1 a
1.0 % de la muestra a 200 mg
de KBr sobre un mortero de
Agata y mezcle la muestra en
forma uniforme.
Presione la mezcla con una
presión de cerca de 8 toneladas
y al vacío, para formar una
tableta transparente.
Medición de Muestras
Técnicas de Trabajo
Espectroscopia de Transmisión.-
El método de la Pastilla de Bromuro de Potasio - Accesorio formador de
pastilla (2/3)
Medición de Muestras
Técnicas de Trabajo
Espectroscopia de Transmisión.-
El método de la Pastilla de Bromuro de Potasio - Precauciones:
Puede utilizarse Yoduro de Cesio.
El Bromuro de Potasio debe presionarse por lo menos 5 minutos.
Debe evacuarse el aire antes de presionar y formar la pastilla, por que el
aire atrapado puede romper la tableta o dispersar la luz.
El Polvo de Bromuro de Potasio debe de tener un tamaño de partícula de
200 (tamiz de 200).
El Bromuro de Potasio debe de secarse por lo menos 2 horas a 110 °C.
El Bromuro de Potasio debe de calentarse cuidadosamente sin exceder la
temperatura, ya que el Bromuro de Potasio puede oxidarse a Bromato de
Potasio.
Medición de Muestras
Técnicas de Trabajo
Espectroscopia de Reflexión.-

Espectroscopia por Reflexión Total atenuada (ATR) :

La técnica de espectroscopia ATR se utiliza para obtener un espectro infrarrojo de

muestras que se encuentran en contacto con un medio ópticamente más denso y
transparente a la radiación infrarroja. En la siguiente figura, se muestra como el haz de
radiación infrarroja pasa a través de un cristal (prisma) ópticamente denso, hecho de KRS-
5, ZnSe o Ge. El haz de radiación infrarroja se refleja en la Interfase de la muestra y el
prisma. Si la muestra absorbe radiación infrarroja, la propagación del haz será atenuada,
dando lugar a la Reflexión Total Atenuada (Attenuated Total Reflection).

Haz de Radiación n1
Infrarroja
do
Muestra n2
Prisma
Medición de Muestras
Técnicas de Trabajo

Espectroscopia de Reflexión.-
Espectroscopia por Reflexión Total atenuada (ATR) :
Optica simplificada de un accesorio ATR Horizontal

Prisma
ATR

Al Detector Fuente de
Radiación
Medición de Muestras
Técnicas de Trabajo
Espectroscopia de Reflexión.-
Espectroscopia por Reflectancia Difusa
Los rayos infrarrojos irradiados a una muestra en polvo pueden ser especularmente
reflejada de su superficie por el camino "S" o absorbidos y reflejados difusamente a
partir del volumen por el camino "D", como se muestra en la siguiente figura. Estos
rayos difusamente reflejados crean el espectro infrarrojo de la muestra en polvo.

S = Reflexión Especular
D = Reflexión Difusa
Medición de Muestras
Manejo de Muestras

Muestras en Polvo.-

El Método de la pastilla de KBr es la técnica ampliamente

usada para obtener los espectros infrarrojos de muestras en
polvo. Otros métodos alternativos: El método de Nujol y La
Espectroscopia por Reflectancia Difusa. La Espectroscopia por
Reflectancia Difusa ha crecido en popularidad entre los
usuarios, debido a que la técnica requiere menos pre-
tratamiento de la muestra que el método de la pastilla de KBr.
Medición de Muestras
Manejo de Muestras

Líquidos Orgánicos
El análisis cualitativo de líquidos orgánicos puede

hacerse utilizando una celda desmontable para líquidos. Por

otro lado, a menudo se utiliza una celda para líquidos gruesa

fija y una celda para líquidos sellada, para los análisis

cuantitativo y el análisis de líquidos orgánicos volátiles. Una

ventana de KBr es la más común.

Medición de Muestras
Manejo de Muestras

Soluciones acuosas
Soluciones ácuosas altamente concentradas (más de 20
~ 30%), pueden ser medidas utilizando la celda desmontable
KRS-5, en el modo de transmisión horizontal. La
Espectroscopia por ATR horizontal es la más conveniente
para las soluciones ácuosas. Con respecto al manejo y el
límite de detección. Soluciones Acuosas al 0.1%, pueden ser
medidas por espectroscopia ATR horizontal.
Medición de Muestras
Manejo de Muestras

Análisis de aceites

El aceite en agua puede extraerse con Tetracloruro de

Carbono ó con 1,1,2 – tricloro - 1,2,2 – trifluoroetano. El
extracto puede ser medido utilizando una celda de paso
óptico de 10 a 100 mm. Una ventana de cuarzo está
disponible sólo para Aceite Mineral y la Celda con ventana de
CaF2 se utiliza para la determinación de la concentración de
aceite mineral, aceite vegetal y aceite animal. El límite de
detección de una celda de 10 mm , para aceite mineral es de
aproximadamente 1 ppm.
Medición de Muestras
Manejo de Muestras

Muestras Gaseosas
Hay varios tipos de celdas para gases en el mercado.
El límite de detección para una celda de gas de 10 cm y
una de 10 m es de 10 ppm a 100 ppm (en el primer caso),
y de 0.1 ppm a 1 ppm (en el segundo caso).
Una ventana de KBr es la más comúnmente utilizada. Una
ventana KRS-5, se utiliza para medir una muestra de gas
que contenga vapor de agua.
IR CERCANO
NIR
780 nm a 2 500 nm
Las radiaciones infrarrojas abarcan:
• Infrarrojo cercano : 780nm -2500 nm. NIR
• Infrarrojo medio: 2 500nm - 40 000nm. MIR
▪ Infrarrojo lejano: 40 000nm – 106nm FIR

IR Lejano: Rotaciones moleculares

IR Medio: Vibraciones moleculares
fundamentales.
IR Cercano: La absorbancia se debe a los
armónicos y bandas de combinación de las
vibraciones fundamentales de las moléculas.
 El origen de las bandas en el NIR es el mismo que
para el IR medio.

Una molécula absorberá radiación NIR si la

radiación corresponde a la diferencia energética
entre dos niveles vibracionales y además se produce
un cambio en el momento dipolar de la molécula.

A diferencia del IR medio en la zona NIR no

aparecen las bandas fundamentales sino que
aparecen las absorciones debidas a los sobretonos (
primer sobretono) y bandas de combinación. Son
bandas anchas , menos intensas.
Espectros NIR
Las características espectrales de las bandas de
absorción de las materias orgánicas son
resultado de las uniones con C, H, N y O.
Estas características se superponen y no son
resultado de un solo componente sino de las
propiedades físicas y químicas del material.
 Instrumentación:

Las partes del instrumento NIR es el mismo

que en IR medio.
Fuente de radiación: Lámparas halogenadas
de tungsteno, Lámparas LED , irradian desde
300 a 1600 nm
Monocromador: Dispersivo y Transformada
de Fourier.
Detector: Arreglo de diodos.
Aplicaciones Analíticas
La Espectroscopía NIR es utilizada para aplicaciones
cuantitativas, haciendo uso de medidas, bien sea de
transmisión o bien de Reflectancia Difusa, las cuales pueden
ser tomadas directamente de los alimentos sólidos. Mediante
el uso de métodos estadísticos de tipo multivariable, los
instrumentos NIR pueden ser calibrados para medir diversos
componentes de una muestra alimentaria , basándose en la
cantidad de IR absorbida a longitudes de ondas específicas.
Muy aplicado para determinar contenido de proteínas,
huemdades y aceites de cereales y semillas.
Aplicado para análisis de productos cárnicos y leche y
derivados.
inprotected.com