Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Bioquímica General
PRÁCTICA.
“SEPARACIÓN DE FOSFOLIPIDOS POR CROMATOGRAFÍA
EN CAPA FINA”
Integrantes: Macias Rivera Guadalupe Lizbeth y Mendoza Vilchis Miguel Ángel
3FM4

INTRODUCCIÓN.
Los lípidos se definen como pequeñas moléculas
hidrófobas (molécula o parte de una molécula que
es soluble en agua) o anfipáticas (moléculas que
contienen grupos o dominios polares y apolares)
que se originan completamente o en parte por la
condensación de tioéstres, basada en
carbaniones (intermedios de reacción con una
carga negativa localizada sobre un átomo de
carbono) o por la condensación de unidades de Imagen 3. CTL con Ninhidrina
isopreno, basada en carbocationes (intermediados
Tabla 3. Ninhidrina
orgánicos en los que el carbono está cargado (Distancia solvente 6.2 cm)
positivamente). Los lípidos contienen carbono,
Analito
Imagen Distancia
4. CTL con Yodo Rf
hidrógeno, algo de oxígeno y alguno nitrógeno y
fósforo. 1 0.3 cm 0.048
2 2 cm 0.32
La cromatografía en capa fina es una técnica 3 3.6 cm 0.58
cromatográfica que utiliza una placa inmersa Tabla 5. Referencia de Rf
verticalmente en una fase móvil. Esta placa
Fosfolípido Rf
cromatográfica consiste en una fase estacionaria
LISOFOSFATIDIL 0.17
polar adherida a una superficie sólida.
COLINA
OBJETIVOS. ESFINGOMIELINA 0.26
FOSFATIDIL Yodo
COLINA
Tabla 4. 0.33
 Identificar la clasificación de los lípidos (Distancia solvente 6 cm)
FOSFATIDIL SERINA 0.33
de acuerdo a su estructura y función. Analito Distancia Rf
 Determinar los diferentes tipos de lípidos FOSFATIDIL 0.71
que existen en la yema de huevo. ETANOLAMINA
1 4.3 cm 0.71
 Separar por cromatografía en capa fina LÍPIDOS NEUTROS 1.0
los fosfolípidos de la yema de huevo.
DISCUSIÓN
RESULTADOS
Molibdato: La reacción se basa en que el fosfato
CÁLCULO DE Rf inorgánico, en medio ácido, con el molibdato da
fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido
Distancia recorrida por el analito luego por el ácido ascórbico a azul de molibdeno,
Rf =
Distancia recorrida por el solvente color azul verdoso. Comparando nuestros
resultados con nuestra tabla de referencia
Tabla 1. Molibdato
(Distancia solvente 6.3 cm) encontramos la presencia de lisofosfatidil colina.
Analito Distancia Rf Bismuto: Con esta prueba se pueden identificar
1 1 cm 0.15 fosfolípidos que contengan colina, esto nos dará
2 1.6 cm 0.25 una coloración amarilla-naranja, por lo que
encontraremos Fosfatidilcolina y Esfingomielina.
3 2.5 cm 0.40
4 4 cm 0.63 Ninhidrina:
Tabla 2. Bismuto
(Distancia solvente 6.2 cm) La
Imagen 1. CTL con Molibdato ninhidrina
Analito Distancia Rf
1 3.5 cm 0.32
(hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con
aminoácidos que tengan el grupo amino libre,
dando lugar a la formación de amoniaco y
anhídrido carbónico, con reducción del reactivo
(ninhidrina) a hidrindantina .La hidrindantina
reacciona a su vez con el amoniaco y otra
molécula de ninhidrina para dar un compuesto de
adición doble que presenta una coloración azul-
púrpura, en este caso encontramos fosfatidil
serina y fosfatidiletanolamina.
Yodo: Los cristales de yodo revelan lípidos que
tengan dobles enlaces en su molécula. Estos se
verán de color amarillo, Conforme a la tabla de
referencia y nuestros resultados obtenidos
podemos observar que tenemos valores cercanos
a lípidos neutros.
CONCLUSIÓN
 Con base en los resultados podemos
decir que el TLC es una buena técnica
para conocer la composición de alguna
muestra, en este caso los fosfolípidos
que componían dicha muestra (yema de
huevo) pero esta técnica además de
presentar ventajas como ser rápida,
barata y que no ocupa muchos
materiales es bien sabido que no es la
mejor cromatografía ya que la
temperatura y la humedad son factores
que puede perjudicar el resultado final
además de que la placas son demasiado
cortas para la fase estacionaria.
 Lehninger. Principios de Bioquímica. 4ª
ed.Nelson D. y Cox, M. Editorial Omega
(2005) 1 vol.
 Bioquímica. 3ª ed. Mathews, van Holde y
Ahrem. Pearson Education (2002) 1 vol.
 Química Biológica I TP 3 LÍPIDOS.
(2010).fcn.unp.edu.ar/.
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/
quimicabiologica1/wpcontent/
uploads/2010/08/TPLIPIDOpdf
 Rodriguez, J. V. (2008). Análisis de
Lípidos de Biomembranas.
researchgate.net.
https://www.researchgate.net/publi
cation/274192733_Analisis_de_Lipid
os_de_Biomembranas_Curso_Practic
o_Joaquin_V_Rodriguez_Editor_Cien
tifico_2008_UNR_Editora_Rosario_A
rgentina_150_pag_ISBN_978-950
673- 663-7

 Con la cromatografía en capa fina

pudimos observar como los fosfolípidos
llegan a presentar, dobles enlaces,
aminos terminales libres, grupos fosfatos
y colina. Y a su vez poder saber que
cada uno de ellos tiene una función
diferente.

 Observamos que la yema de huevo es

rica en colesterol y a demás contiene
diversos tipos de lípidos.

BIBLIOGRAFIAS