PRÁCTICA No.

1 MICROSCOPIO

1. Defina lo que es poder de resolución y discuta los factores que lo condicionan.

El poder de resolución es la capacidad para diferenciar entre dos puntos o líneas muy
próximos entre si. Esta determinado por la longitud de onda de la radiación empleada
para iluminar, a menor longitud de onda mayor poder de resolución.

2. ¿Qué es el índice de refracción?

Define la rapidez con la que un haz de luz viaja a través de un medio en particular en
relación con la velocidad a la que pasa atraves de un segundo medio.

3. ¿Qué es el índice de difracción?

Resultado de la superposición de muchas ondas con diferentes fases, que se
producen cuando un rayo laser ilumina una superficie rugosa. Se suman para dar una
onda resultante cuya amplitud, y por lo tanto la intensidad, varia al azar.

4. Defina el término apertura numérica.

Es la capacidad para recoger luz y formar una imagen clara y nítida.

5. ¿Por qué los objetivos están ubicados en un revolver?

Permite girar y poder realizar el cambio de los objetivos con facilidad.

6. Complete el siguiente cuadro.

Objetivo 10X 40X 100X

Otro nombre que Seco de pocos Seco de muchos De inmersion

recibe aumentos aumentos

Código de Amarillo Azul Blanco

colores

Apertura 0.25 0.85 1.25

numérica

Distancia frontal 4-8mm 0.2-0.6mm 0.11-0.16mm

o de trabajo
 Distancia de
enfoque

Área de enfoque
o de trabajo

7. Indique el índice de refracción del aire, vidrio, agua y aceite de inmersión.

-Aire: 1,0002926
-Agua: 1,3330
-Vidrio: 1,52
-Aceite de inmersión: 1,516
8. ¿Por qué es necesario el uso de aceite de inmersión cuando se realizan enfoques
con el lente objetivo de alto poder?
El aceite de inmersión tiene un alto índice refractivo, por lo que mejora la resolución
y la nitidez de la imagen.

9. Describa paso a paso la técnica correcta para enfocar un frotis bacteriano.

1) Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un
portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad
de agua, por lo que se puede usar asa de siembra.
2) Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones
asépticas, una pequeña cantidad de cultivo
bacteriano en medio solido o transferirlo a la gota de
agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta
formar una suspensión homogénea que quede
bastante extendida para facilitar su secado. Si la
muestra se toma de un medio de cultivo liquido, no es
necesario realizar esos pasos, basta con colocar y
extender una gota de suspensión bacteriana, que se
toma con el asa de siembra y se coloca directamente
sobre el portaobjetos.
3) Esperar hasta que el liquido se evapore o acelerar su
evaporación acercando el porta a la llama del
mechero (teniendo precaución de no calentar
demasiado pues las células pueden deformarse o
romperse).
10. ¿Qué cuidados se deben tener en el uso y manejo del microscopio?
• Para transportar el microscopio deben utilizarse siempre las dos manos,
sujetándolo por el brazo con una mano y por el pie con la palma de la otra.
• Una vez colocado el microscopio en su sitio, no debe moverse hasta que
finalice la práctica. Cuando se vaya a cambiar de observador se debe mover
el y no el microscopio.
• Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio.
• Nunca poner los dedos en las lentes del ocular ni el objetivo. Si se ensucian
dichas lentes se limpiarán con un paño suave de algodón, sin utilizar ningún
disolvente.
• No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos, a no ser que vayan a ser
sustituidos, en cuyo caso la operación debe realizarse lo más rápidamente
posible, para evitar la entrada de polvo.
• Asegurarse que el portaobjetos esta bien seco cuando va a ser colocado sobre
la platina.
• Al enfocar, sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que evitar que
el extremo del objetivo choque con la preparación. Para ello acercaremos el
objetivo a la preparación mirando lateralmente y luego, mirando ya a través del
ocular, enfocamos alejando el objetivo.

11. Menciona el fundamento (mecanismo de función) cada uno de los siguientes tipos de
microscopio: ya Y cuál es la principal utilidad de cada uno de los microscopios antes
mencionados.
 MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO: Funciona emitiendo un haz de luz con una
longitud de onda suficiente para ser percibida por el humano. La luz reflejada
sobre una porción de tejido crea un campo claro y es esta luz visible la que
permite resaltar las estructuras coloreadas previamente. óptico de campo claro
es la observación de tejidos muertos previamente cortados y teñidos. El manejo de
éste microscopio ha sido de gran provecho en el diagnóstico de enfermedades y
conocimiento de las estructuras que conforman los organismos vivos.
 MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO: El efecto producido por la técnica del campo
oscuro consiste en un fondo negro sobre el cual se ven los objetos intensamente
iluminados. La microscopía de campo oscuro es de un valor especial en el examen de
microorganismos sin teñir que exhiban algún aspecto morfológico en vivo y en
suspensión (preparaciones húmedas y en gota pendiente). Es muy útil para observar
materiales en suspensión, permitiendo detectar con gran facilidad partículas sólidas con
índices de refracción muy cercanos al del medio en que se encuentran, por esta razón, es
un sistema de gran utilidad para realizar conteos de número de partículas en una muestra
 MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES: Mejora las diferencias de contraste
entre las células y el medio circundante, lo que permite observar células vivas sin tinción.
El microscopio de contraste de fases permite que la luz pase a través de objetos
transparentes, como las células y se fusiona en diferentes fases dependiendo de las
propiedades de los materiales de a través de los cuales pasa. Este efecto se amplifica en la
lente objetivo, lo que da origen a la formación de una imagen oscura en un entorno
 luminoso. Permite el examen de estructuras celulares en células vivas de organismos más
grandes: levaduras, algas, protozoarios y algunas bacterias.
 MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA: El microscopio de luz ultravioleta
permite un mayor poder de resolución con útiles y mayores ampliaciones que las
obtenidas con el microscopio de luz ordinario, ya que la luz ultravioleta tiene una
longitud de onda más corta (180-400 nm frente a 400-700 nm) que la luz visible, su
aplicación principal es la diferenciación de componentes celulares sobre la base de una
mayor o menor facultad de absorber la luz ultravioleta. Puede utilizarse para la toma de
microfotografías usando una película sensible a esta radiación, o imágenes captadas por
una cámara de televisión sensible a la luz ultravioleta. Sirve para detectar y cuantificar
ácidos nucleícos y proteínas con determinados amino ácidos.
 MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA: Algunas sustancias químicas absorben la
energía de las ondas ultravioletas y la emiten como ondas visibles de mayor longitud.
Así, un material aparece con un color a la luz ordinaria y con otro del todo distinto con
luz ultravioleta, a estos materiales se les llama fluorescentes y al fenómeno fluorescencia.
Los microorganismos que se tiñen con un colorante fluorescente aparecen como objetos
luminosos cuando se observan al microscopio con luz ultravioleta. Los colorantes
fluorescentes tienen varias aplicaciones en microbiología, entre ellas, una de las más
notables ha sido detectar las reacciones inmunológicas, es decir, reacciones de
anticuerpos con antígenos.
 MICROSCOPIO ELECTRONICO: El microscopio electrónico utiliza ondas de
electrones y campos magnéticos para producir la imagen, se utiliza principalmente para el
examen de virus y de la ultraestructura de las células microbianas. La resolución superior
de la microscopia electrónica se debe al hecho de que los electrones tienen una longitud
de onda mucho más corta que los fotones de la luz blanca. Hay dos tipos de microscopio
electrónico el microscopio electrónico de trasmisión, que tiene muchas características en
común con el microscopio de luz y el microscopio electrónico de barrido. Permite
obtener imágenes de gran resolución en materiales pétreos, metálicos y orgánicos. La luz
se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se
hacen conductoras metalizando la superficie.

13. Indica el poder de resolución de cada uno de los microscopios antes mencionados.
 Microscopio de campo claro: Aproximadamente 0.2 micrometros (200
nanómetros) en las mejores condiciones.
 Microscopio de campo oscuro: Similar al de campo claro, alrededor de 0.2
micrómetros.
 Microscopio de luz ultravioleta: Depende de la longitud de onda de la luz
utilizada, en general es similar a los de luz visible, alrededor de 0.2
micrómetros.
 Microscopio de fluorescencia: Pueden alcanzar un poder de resolución
ligeramente mejor que los de campo claro, en el rango de 0.1 a 0.2
micrómetros, dependiendo de las condiciones y las técnicas de mejora de la
resolución utilizadas.
  Microscopio electrónico: Utilizan haces de electrones en lugar de luz visible, lo
que les permite lograr un poder de resolución mayor. Aproximadamente 0.1 a
0.5 nanometros en el de transmisión. Mientras que con el de barrido pueden
lograr resoluciones en el rango de varios nanómetros.
14. Indica cuando menos tres diferencias entre los microscopios electrónicos de barrido
y de transmisión.
Los microscopios electrónicos de barrido visualizan resolución de 1-10nm. Mientras que
los de transmisión muestran estructuras internas en 2D con resolución subnanometrica.
Los de barrido son para muestras solidas y superficies, a veces recubiertas de metal.
Los de transición son para muestras delgadas, como células y nanomateriales, requiere
preparación mas compleja.
Los de barrido muestran imágenes tridimensionales de topografía superficial. Los de
transmisión muestran imágenes bidimensionales de detalles atómicos o moleculares
internos.
15. Indica por qué nunca se puede llevar a inmersión una preparación en fresco.
Las preparaciones en fresco se utilizan oara observar microorganismos vivos. Pero
este no permite aumentar el contraste de la preparación. Oír lo tanto, en un
microscopio óptico de campo claro, es bastante limitado.
 PRÁCTICA No. 2 CLASIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS

1. Clasificación de los seres vivos según Chatton.

Divide a los seres vivos en función del tipo de célula básica
-Eucariotas (Núcleo verdadero)
-Procariotas (Pre-Núcleo)

2. Completa el siguiente cuadro:

PROPIEDAD PROCARIOTAS EUCARIOTAS

Composición de la pared Quimicamente compleja con Quimicamente mas sencilla y

celular peptidoglucano carece de peptidoglucano

Núcleo verdadero rodeado de Ausente Presente

membrana
No. de cromosomas Un cromosoma Más de uno (23 pares)

Mitocondrias Ausentes Presentes

Lisosomas Ausentes Presentes

Cloroplastos Ausentes Presentes

Tamaño del Ribosomas 70s 80s

3. Clasificación de los seres vivos según Whittaker y las características de cada reino.
Su sistema tenia como base la organización celar, la alimentación y la ecología.
-Animalia: Eucariotas, sin pared celular, pluricelulares, heterocigotos. (vertebrados o
invertebrados).
-Plantae: Plantas, seres eucariotas, con pared celular, pluricelulares, autotróficos.
(helechos, coníferas y angioespermas)
-Fungi: Eucariotas con pared celular que pueda contener quitina, pluricelulares,
heterotróficos. (Hongos: levaduras y mohos).
-Protista: Organismos Eucariotas, unicelulares o pluricelulares, con pared celular o
no, autotróficos o heterotróficos. (algas y ptrotozoos)
-Monera: Organismos procariotas, con pared celular, unicelulares, autotróficos o
heterotroficos. (bacterias)
4. Clasificación de los seres vivos según Woese y las características de cada dominio.
- Bacteria: Reproducción asexual, pared celular con peptidoglicanos, sin envoltura
nuclear, ADN circular y único, células procariotas, se pueden cultivar fuera de su
habitad.
- Archaea: Unicelulares, reproducción asexual, pared celular solo con
polisacáridos o proteínas, sin envoltura nuclear, ADN circular y único, no se
pueden cultivar fuera de su habitad natural, células procariotas.
- Eukarya: Unicelulares y pluricelulares, reproducción sexual y asexual, pared
celular de plantas de celulosa, de hongos quitina y animales sin pared celular,
con envoltura nuclear, se pueden cultivar fuera de su habitad natural, células
eucariotas.
-
5. De un ejemplo de microorganismos intermedios entre:
a) virus y bacterias: Rickettsias (causantes de enfermedades infecciosas
transmitidas por aerosoles, mordeduras, picadura, rasguños, aguas y alimentos
contaminados).
b) Bacterias y hongos: Actinomicetos (Son bacterias, producen esporas).
6. De las características generales de los virus por las cuales no son incluidos en
ningún reino.
 Los virus son estructuras mas simples a comparación con las células de los
seres vivos. No tienen estructuras celulares complejas.
 Carecen de sistemas metabólicos propios,como respiración, producción de
energía, síntesis de proteínas, etc.
 No crecen a través de división celular. Se replican dentro de las células del
huésped.
 No responden a estímulos del entorno ni muestran comportamientos
complejos como adaptación.

7. ¿Qué es un prión?
Los priones son agentes infecciosos cuya forma extracelular consiste totalmente de
proteína. No tienen ni DNA ni RNA. Son agentes causantes de patologías
neurodegenerativas (encefalopatías espongiformes transmisibles).
8. Mencione las diferencias entre algas unicelulares y protozoarios.
Protozoos: Unicelulares, eucariotas, heterótrofos y especies patogenas.
Algas: Autotrofas, membrana plasmática rígida.

9. Explique el término taxonomía y los diferentes niveles taxonómicos que existen.

Taxonomia es un sistema jerarquico para agrupar y ordenar a los microorganismos,
para facilitar su clasificación.
 Son siete niveles taxonómicos: Reino, Filo, Clase, Orden, Familia, Genero y
Especie.
10. ¿Qué es la taxonomía binomial?
Organiza a los organismos en una jerarquía que va desde el nivel mas amplio, el
reino, hasta el nivel mas especifico, la especie. Se basa en similitudes y diferencias
morfológicas, genéticas y evolutivas enrtre los organismos.

11. Explique qué es la taxonomía numérica.

-Esta se encarga de clasificar los seres vivos en función de sus características
numéricas, como el número de cromosomas o el número de células que poseen

12. Indique los criterios generales que se utilizan para clasificar a los virus.
Los virus pueden ser clasificados según la forma de la cápside, presencia o
ausencia de una envoltura y tipo de ácido nucleico.

13. Clasifique el reino al que pertenecen los siguientes microorganismos:

a) Tripanosoma cruzy. : PROTISTA -PROTOZOA
b) Candida albicans. : FUNGI
c) Paramecium sp. PROTISTA
d) Aspergillus niger.: FUNGI
e) Rotavirus. : : ORTHORNAVIRAE
f) Euglena sp.: PROTISTA