Judul Biochemically Tracked Variability of Blood Plasma Thawed-State Exposure

Times in a Multisite Collection Study (Variabilitas Waktu Paparan Keadaan

Pencairan Plasma Darah yang Dilacak Secara Biokimia dalam Studi
Pengumpulan Multisitus)
Nama Jurnal Jurnal Riset Kesehatan Institute Arizona State University

Download https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32608993/

Volume dan Volume 18, Number 5

Halaman
Tahun 2020

Penulis Yueming Hu, Claire Mulot, Camille Bourreau, Diane Martin, Pierre Laurent-
Puig, Loredana Radoı, Pascal Gue´ nel, and Chad R. Borges
Reviewer Hanifa Agusti

Tanggal 19-10-2023

LatarBelakang Numerous studies have revealed that the preanalytical variables (PAVs) may
Penelitian potentially generate samples with unknown or unrecognized integrity issues. TO
address the issue of biospecimen integrity, a call was made in 2012 in numerous
clinical chemistry research journals to require a full description of specimen
handling before sending out articles for review. In addition, efforts have been
made toward the development of standard operating procedures (SOPs) for
samples collection, processing, and storage. However, the universal adsoption
of a single rigorous SOP, while in principle appealing as a solution to the
development of potential biospecimen integrity problems, can, in practice,
become impractical or impossible for laboratory personnel to implement on a
rigorous basis for every single sample or in situations where infrastructure
issues arises. These potential problems are amplified in studies with multiple
collection sites involved-each of which must contend with different personnel,
unique infrastructure, constraints, and shipment routes. Therefore, the “ΔS-Cys-
Albumin” as a QC/QA marker for P/S integrity was developed.
Sejumlah penelitian telah mengungkapkan bahwa variabel praanalitik (PAV)
berpotensi menghasilkan sampel dengan masalah integritas yang tidak diketahui
atau tidak diketahui. Untuk mengatasi masalah integritas biospesimen, seruan
dibuat pada tahun 2012 di berbagai jurnal penelitian kimia klinis yang
mewajibkan penjelasan lengkap tentang penanganan spesimen sebelum
mengirimkan artikel untuk ditinjau. Selain itu, upaya telah dilakukan terhadap
pengembangan prosedur operasional standar (SOP) untuk pengumpulan,
pemrosesan, dan penyimpanan sampel. Namun, penerapan SOP tunggal yang
ketat secara universal, meskipun pada prinsipnya merupakan solusi terhadap
potensi masalah integritas biospesimen, namun dalam praktiknya, dapat menjadi
tidak praktis atau tidak mungkin dilakukan oleh personel laboratorium secara
ketat untuk setiap sampel atau dalam situasi di mana masalah infrastruktur
muncul. Potensi masalah ini semakin besar dalam studi yang melibatkan
beberapa lokasi pengumpulan – masing-masing lokasi harus menghadapi
personel yang berbeda, infrastruktur yang unik, kendala, dan rute pengiriman.
Oleh karena itu, “ΔS-Cys-Albumin” sebagai penanda QC/QA untuk integritas
P/S dikembangkan.
Tujuan Penelitian To evaluate the potential utility of the “ΔS-Cys-Albumin” to reveal variations in
biospecimen handling and storage conditions.
Untuk mengevaluasi potensi kegunaan “ΔS-Cys-Albumin” untuk mengungkap
variasi dalam kondisi penanganan dan penyimpanan biospesimen
Subjek Penelitian 413 clinical plasma samples from the Women Epidemology Lung Cancer
(WELCA) collected under a single SOP using 12 different collections sites and
then stored at -800C for long-term conditions
413 sampel plasma klinis dari Women Epidemology Lung Cancer (WELCA)
dikumpulkan berdasarkan SOP tunggal menggunakan 12 tempat pengumpulan
berbeda dan kemudian disimpan pada suhu -800C untuk kondisi jangka panjang
Metode penelitian Jenis penelitian adalah uji kromatografi cair atau spektrometri massa (LC/MS)
protein utuh encer dan tembak sederhana yang disebut DS-Cys Albumin yang
mengukur paparan kumulatif Plasma terhadap kondisi pencairan berdasarkan
perubahan kelimpahan relatif Plasma
Definisi Variabel Dependent dalam penelitian ini adalah sampel plasma EDTA
Operasional
Variabel
Dependent
Cara & Alat Ukur uji DS-Cys-Albumin pada serangkaian sampel plasma 413 yang dikumpulkan
Variable Dependent dalam satu studi klinis tetapi dari 12 lokasi pengumpulan berbeda. Diamati
antara kelompok sampel yang berbeda dengan kondisi penanganan awal yang
agak tidak konsisten (yaitu, pemrosesan awal darah utuh menjadi plasma dan
penempatan pada suhu -80C yang diselesaikan dalam waktu kurang dari 3 jam,
3–13 jam, dan lebih dari 17 jam
Definisi Variabel Independent dalam penelitian ini adalah Waktu penyimpanan
Operasional
Independent
Langkah Penelitian 1) Preparasi sampel
10 µL sampel plasma dicairkan pada suhu kamar. Sebanyaka 0.5 µL dari
sampel plasma ditambahkan ke 500 µL TFA 0.1% (v/v) dan dicampurkan
dengan vortex selama 20 detik. 10 µL larutan plasma yang telah diencerkan di
injeksi ke LC-MS.

Untuk mengatur derajat albumin S-Cycsteinylation ke nilai maksimum,

sebanyak 9.5 µL residu sampel plasma di inkubasi di dalam dry-oven pada suhu
370C selama 18 jam dalam tabung reaksi tertutup Eppendorf ukuran 600 µL.
Setelah itu, 0.5 µL sampel diencerkan 1000x dalam 0.1% TFA (v/v) lalu di
injeksi ke LC-MS. Untuk aliquot yang diinkubasi, setiap batch sampel yang
diencerkan dimasukkan kedalam autosampler pada suhu 40C dan diinjeksi
semalam.

2) LC-ESI-MS analysis
Instrument yang digunakan yaitu Agilent 1260 Infinity II UHPLC yang
terhubung dengan Agilent 6530 Electrospray Ionization Quadrupole (LC-ESI-
MS). 10 µL sampel dimasukkan pada 200 µL/min dalam 80% air yang
mengandung 0.1% asam format (SolventA) dan 20% acetonitrile yang
mengandung 0.1% asam format (Solvent B). Komposisi pelarut yang sama
ditahan selama 3 menit pada 200 µL/min untuk membilas captrap protein.
Mengikuti peningkatan bertahap dari komposisi aliran untuk melarutkan
trapped albumin pada 200 µL/min: 3.0-3.1 menit, ditingkatkan ke 65/35 A/B
dan ditahan selama 4.5 menit; 4.5 – 4.6 menit, ditingkatkan ke 55/45 A/B dan
ditahan selama 7.5 menit. 7.5-7.5 menit, ditingkatkan ke 20/80 A/B dan ditahan
selama 8.7 menit; terakhir, ditingkatkna kembali ke 80/20 A/B selama 8.7 menit.
Hasil dari peningkatan bertahap ini yaitu pemisahan kromatografik yang
mendekati selesai dari apolipoprotein A-I. Pada 4 menit post-run
diimplementasi pada 200 µL/min dari 80/20 A/B untuk meng-equilibrasi
kembali system dengan komposisi solvent pertama kali. Spektrofotometer massa
diatur untuk menjalankan ion positif dan untuk mengumpulan spektra dalam
 m/z 100 hingga 3200. Pengaturan ESI untuk Dual AJS ESI adalah sebagai
berikut: VCap 5700V, Nozzle Voltage (Expt) 2000 V, Gas nitrogen pengering
7L/min pada 3250C, nebulizer nitrogen 45 psig, gas sheath 11L/min pada 250
0
C. Data were acquired in profile mode at a rate of one spectra per second.

3) Processing Data
0.3 menit dari spectrum yang terekam dirata-ratakan. INI DITULIS SEMUA
SAMPE KELAR, GAUSAH SEMUA SIH TAPI KEK YANG AKU BUAT
DIATAS
Sampel plasma diencerkan 1000 kali sebelum disuntikkan ke dalam
LC-MS. Kemudian 10 mL plasma dicairkan
pada suhu kamar. Setelah benar-benar dicairkan, 0,5 mL
plasma ditambahkan ke 500 mL TFA 0,1% dan dicampur
secara menyeluruh dengan cara divorteks selama 20 detik. Kemudian 10 mL
larutan plasma yang baru diencerkan segera disuntikkan ke instrumen LC MS.
Untuk secara sengaja mendorong tingkat sisteinylasi S albumin ke nilai
maksimumnya, the
sisa sampel plasma 9,5 mL diinkubasi dalam oven
pada suhu 37 C selama 18 jam dalam uji snap-cap Eppendorf 600 mL
tabung. Setelah itu, 0,5 mL sampel (dalam keadaan teroksidasi sempurna
negara bagian) diencerkan 1000 kali lipat dalam 0,1% (v/v) TFA dan kemudian
disuntikkan ke LC-MS, mengikuti langkah yang sama seperti dijelaskan di atas.
Namun, untuk alikuot yang diinkubasi, sejumlah
sampel yang diencerkan dimasukkan ke dalam autosampler yang disimpan
4 C dan disuntikkan semalaman.

Hasil Penelitian Untuk semua 413 sampel plasma darah yang diperoleh dari studi WELCA, DS-
Cys-Albumin diukur dalam 33 batch. Sampel dianalisis secara acak. Sampel
plasma QC EDTA dikeluarkan dan diukur dalam setiap batch dan menunjukkan
presisi interassay total yang masuk akal (%CV = 12,4%; pada nilai S-Cys-
Albumin 20%, ini sesuai dengan variabilitas DS-Cys-Albumin absolut 2,5%.
Sampel dari dua lokasi pengumpulan memiliki nilai DS-Cys-Albumin yang jauh
lebih rendah dibandingkan sampel dari lokasi lain, sesuai dengan fakta bahwa
sampel tersebut disimpan pada suhu -20C selama rata-rata 7,6 bulan sebelum
dikirim ke gudang pusat untuk penyimpanan akhir pada - 80C
Kekuatan Menggunakan metode uji yang sederhana tetapi akurat
Penelitian
Kelemahan Jenis sampel terbatas karena menggunakan satu jenis sampel yaitu plasma
Penelitian EDTA
Kesimpulan Sampel dari dua lokasi pengumpulan memiliki nilai DS-Cys-Albumin yang jauh
lebih rendah dibandingkan sampel dari lokasi lain, sesuai dengan fakta bahwa
sampel tersebut disimpan pada suhu -20C selama rata-rata 7,6 bulan sebelum
dikirim ke gudang pusat untuk penyimpanan akhir pada - 80C. Berdasarkan
hukum laju pembentukan S-Cys-Albumin dalam plasma ex vivo, waktu rata-rata
setiap spesimen plasma terpapar pada suhu ruangan yang setara (23C) dihitung
kembali dari nilai DS-Cys-Albumin yang diukur. Sebuah survei analit klinis
plasma yang konsentrasi yang diukur peka terhadap kondisi
penanganan/penyimpanan awal yang didokumentasikan dalam penelitian ini
disediakan dan konsekuensi dari temuan integritas plasma dari studi klinis
multisite ini