SOMMAIRE

INTRODUCTION ………………………………………………………….2

CHAPITRE I: Présentation de la structure

I- Historique………………………………………………………..3
II- Organigramme du CHU…………………………………………4
III- Présentation du laboratoire………………………………………5

CHAPITRE 2: Déroulement du stage

I- Activités menées………………………………………………...6
II- Présentation du spermogramme…………………………………8

CHAPITRE 3 : Difficultés rencontres et suggestions

I- Difficultés………………………………………………………16
II- Solutions………………………………………………………..16
CONCLUSION……………………………………………………………..17

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 INTRODUCTION

L’immersion professionnelle est une période de formation au cours de la quelle

l’apprenant est appelé à mettre en exergue les connaissances théoriques dans le but de
pratiquer et d’asseoir ses savoirs théoriques apprises à l’école de formation. C’est une période
très privilégiée au cours de la formation en biologie clinique. L’Ecole des Sciences de la
Santé de l’Université Catholique d’Afrique Centrale permet à ses étudiants d’effectuer durant
leur cursus académique un certains nombres de stages afin de pourvoir concilier les
enseignements théoriques et la pratique dans les hôpitaux. C’est ainsi que dans le cadre de
notre premier stage d’immersion professionnelle au niveau trois, nous avons été envoyé au
Centre Hospitalier universitaire dans la ville de Yaoundé en service de anatomo-pathologie
pour une période du 06 au 31 Aout 2018. Nous commencerons par vous présenter la structure
hospitalière qui nous a accueilli, ensuite nous vous présenterons activités menées et observées
durant notre stage, les difficultés et problèmes rencontrés et enfin les acquisitions, critiques et
suggestions.

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CHAPITRE I: Présentation de la structure

I- Historique
La création du Centre Hospitalier et Universitaire (CHUY) vient combler un vide réel
et ouvre une ère nouvelle aux prestations sanitaires du pays, à la formation des étudiants
en médecine du Centre Universitaire des Sciences de la Santé (CUSS) en 1978. Il est situé
dans la région du Centre, Département du Mfoundi, Arrondissement de Yaoundé 3 ème. Il
fait partie des 04 hôpitaux de références de la ville Yaoundé donc les 03 autres sont
l’Hôpital Central de Yaoundé (HCY), l’Hôpital Général de Yaoundé (HGY) et l’Hôpital
Gynécologique Pédiatrique et Obstétrique de Yaoundé (HGOPY). Il a été Crée par décret
N°78/741 du 24 Juin 1978 et par la suite il a été réorganisé deux fois par les décrets
N°91/065 du 23 Janvier 1991 et N°2001/269 du 24 Septembre 2001. Ce dernier a pour
mission l’administration des soins aux personnes nécessiteuses sur le plan psychologique,
physique …

II- Organisation du CHUY

Le CHUY est doté d’un organigramme dont la structure organisationnelle se
compose ;D’un Conseil d’administration présidé par Son Excellence le Professeur
Jacques FAME NDONGO de la Direction générale dirigée par le Professeur Maurice
NKAM, avec une Direction générale adjointe présidée par le Professeur Kathleen NGU
BLACKETT, d’une Direction médicale et technique chargée des services médicaux et
spécialités et des services techniques et autres laboratoires, radiologie, pharmacie, etc.
d’une Division Nursing chargée des services Nursing et Médicaux-Sanitaires, d’une
Division administrative et financière chargée des services administratifs et financiers, et
des services du personnel.

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 Organigramme du CHUY.
President du comité administratif

Directeur générale

Directeur générale adjoint

Commission technique consultatif Cellule informatique

Service d’étude et de relations publiques Secrétariat de la direction générale

Service juridique et contantieux

Bureau du courrier

Service technique de la maintenance

Direction médicale et technique Division de nursing Division administrative et financier

Service de médicine Service de chirugie et Coordinateur

interne et spécialistes Service du Service finance
spécialistes
personnel de comptabilite

Service Major
Service de pédiatrie
d’odontostomatologie
et socialistes Bureau du Service de
Bureau social personnel hôtellerie
Service d’ORL
Service de réa polyvalente
et unité d’hémodialyse Bureau de
Service
la solde Service de la gestion du
d’ophtalmologie
malade, clientelle,
Service de gynéco- marketing et de suivie
obstétrique et spécialiste Laboratoire d’hématologie
et transfusion sanguine

Service
d’anesthésiologie Laboratoire de parasitologie

Laboratoire de
bactériologie Exploration fonctionelle et
médecine sportive

Laboratoire de biochimie
Pharmacie

Laboratoire d’anapath

Service d’imagerie
médical et radiologie

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 III- Présentation du laboratoire

Le laboratoire de CHUY est constitué de plusieurs unités parmi lesquelles nous avons
l’hhématologie, parasitologie puis, bactériologie, biochimie et anapath au sous sol. L’unité
d’anatoma-pathologie est divisé en 04 parties qui sonts le bureau du major, le bureau du
mmédecin anatomo-pathologistes, la salle de lecture et la salle de technique. La salle de
technique est une grande salle avec plusieurs postes.
 Le poste 1 est celui de l’enregistrement des échantillons ou on retouve plusieurs
registres et fiches de comptes rendus
 Le poste 2 est celui du stockage des échantillons histologiques en attente de la
macroscopie
 Le poste 3 est la macroscopie histologique
 Le poste 4 est pour la déshydratation, éclairsicement et enrobage. Ici, on retrouve des
bacs d’alccol, bacs de xylène, station d’enrobage et la plaque de refroidissement.
 Le poste 5 est pour la microtomie ou on retrouve le microtome et le bain marie
 Le poste 6 est pour la coloration histologique ou on retrouve des bacs de colorants
pour la coloration hématoxyline éosine
 Le poste 7 est pour la coloration cytologique ou on retrouve des bacs de colorants pour
la coloration de Papanicolaou
 Le poste 8 est pour le stockage des lames en attente d’archivage.
 Le poste 9 est pour l’entretien de la verrerie.
Comme grande materiel on peut également retrouver un microscope, l’étuve et un
réfrigérateur.

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 CHAPITRE 2: Déroulement du stage

I- Activités menées

Tout au long de notre stage au CHUY nous étions appelés a réalisé effectivement tous
les étapes des examens en anatomo-pathologie à partir du prélèvement jusqu’au rendu de
résultats. A cet effet nous avons eu à faire des examens cytologiques et tout le processus de
réalisation d’une lame blanche pour une analyse histologique.
 Réception et enregistrement des échantillons (cytologie et histologie) ;

L’enregistrement des échantillons reçu.

Tout analyse d’échantillon en anapath était tarifier et lorsque le patient arrivé avec son
échantillon on se rassure qu’il a payé, puis, nous l’enregistrons dans des registres ; un registre
de finances, un registre pour les examens histologiques, cytologiques et décharge.
En histologie, On se rassure que l’échantillon reçu a été bien fixé au formol diluer a
10%,le bocal qui contient l’échantillon doit être large et fermable, avoir une base stable et
plane, le volume du fixateur doit être 6 fois le volume de la pièce pour que la pièce soit
complétement submerger dans le formol pour bien fixer le zone antigéniques. Apres avoir
noté ses détails la piece est suivi d’une fiche qui contient le nom du patient, l’heure du
prélèvement, l’heure de réception, le numéro d’enregistrement, le contact du patient, nom du
prescripteur, La nature de la piece reçu (biopsie, piece opératoire, nom de l’organe ou site de
prélèvement), provenance de la piece, tous les critères correspondants à la bonne fixation de
la piece.
En cytologie, on se rassure également que le patient à payer, cela se vérifie avec le
reçu de paiement que le patient nous présente. On remplit les fiches de cytologie pour les
divers échantillons. Les échantillons reçus en cytologie étaient des liquides d’épanchements,
Cyt oponction, les frottis et le sperme.

 Colorations de Papanicolaou, Hématoxyline-Eosine, May Grunwald, Giemsa ;

 Quelques étapes de la technique histologique

Présentation de la technique
Examen histopathologique d’un fragment de trompe.
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La trompe de Fallope utérine ou trompe utérine est un conduit par lequel l’ovocyte
provenant de l’ovaire quitte cette dernière pour se retrouver dans l’utérus.

Intérêt biologique
Il est indiqué lorsqu’on veut établir ou confirmer le diagnostic d’une maladie et la
rapporter à sa cause (lésion bénigne ou maligne), vérifier le stade d’un cancer, d’évaluer
le suivi des traitements et des malades.

Technique de prélèvement

 Contenant : le diamètre du contenant ainsi que son ouverture doivent être supérieur
au diamètre de la pièce, le volume du contenant doit être supérieur au volume de la
pièce, le contenant doit être résistant au formol.
 Délai de transmission : les pièces doivent déposées au laboratoire d’ana pathologie
le plus tôt possible.

 Acheminement : les pièces doivent être acheminées et déposées par le personnel du

bloc opératoire contre décharge effectuée par le personnel du laboratoire
 Le fixateur : le formol doit être dilué à 10%, le volume du formol doit être 6 fois plus
grand que celui de la pièce opératoire recouvrir complétement la pièce, le délai
minimum de fixation est de 6h, le formol doit être introduit dans le contenant avant
la pièce

Principe
Il est basé sur la recherche d’éventuelles lésions qui peuvent se
manifester par des signes physiologiques ou des symptômes
fonctionnels. Il Consistera donc en utilisant les matériaux et outils
de préparer les lames colorées c’est-à-dire toutes les étapes de la
technique histologique (de la transmission au montage des lames
colorées) afin que le médecin anatomopathologiste après
observation et préparation au microscope puisse établir un
diagnostic et éditer un compte rendu. Les principes de chaque étape
technique seront énoncés plus bas.

Procédure
Les étapes de la technique d’histopathologie sont en fait le circuit que doit emprunter
un examen d’histopathologie :
Notons que le prélèvement ne relève pas de la fonction du technicien. Mais il peut se
faire sur un cadavre rapidement après le décès, sur des pièces opératoires etc. et avec des
instruments tranchants afin de ne pas écraser les tissus et éviter la formation d’artefacts
(scalpel).

La transmission

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 Les procédures doivent être élaborées et validées en concertation avec les services
cliniques ou les correspondants et le médecin d’anatcytopathologie ;
 La feuille de demande d’examen : il doit impérativement y figurer l’identité
complète du patient, le tampon de service d’origine, le nom du prescripteur, la date
et l’heure du prélèvement, nature et le siège du prélèvement, les renseignements
cliniques ;
 Les modalités de transport : le contenant qui doit impérativement être adapté à la
taille de prélèvement, contenir une quantité suffisante de fixateur, l’identifier nom,
prénom et date de naissance du patient ;
 Le délai de transmission : le prélèvement doit être transmis le plus rapidement
possible au laboratoire accompagné de la demande d’examen dument signé et
remplie par le prescripteur (homme, femme, diabète, séropositif…)

Réception et enregistrement
 Contrôler la conformité du prélèvement dès son arrivée au laboratoire c’est-à-dire
l’identification du flacon, la demande d’examen qui doivent être identique ; sur la
feuille de demande vérifier nature et siège du prélèvement, vérifier si présence de
fixateur
 Attribution d’un numéro interne au laboratoire sue le flacon et la feuille de
demande après enregistrement sur registre de décharge, de finances, et en fonction
du prélèvement le registre d’histopathologie
 Remplissage de la feuille de travail

Analyse cytologiques
Nous avons manipulé des liquides d’ascites C’est-à-dire effectué la macroscopie,
confectionné un frottis, effectuer la numération avec la cellule de mallassez, coloration au
MGG.
Nous avons aussi fait la coloration de Papanicolaou des lames de frottis cervico vaginal,
réalisation des spermogrammes et observation des cytoponction mammaire.

II- Présentation du spermogramme

But.

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Le spermogramme est une analyse détaillée du sperme qu’on fait pour le diagnostic de
l’infertilité, de la prostatite et d’autres maladies du système génito-urinaire des hommes. Il
évalue la qualité et quantité des spermatozoïdes et des éléments constituants du sperme.

Technique de prélèvement.

Conditions :

 Délai d’abstinence sexuelle entre 2 et 5jours.

 Bonne hydration la veille (1,5L d’eau dans la journée)
 Le prélèvement proprement dit a lieu par masturbation
 Ne pas prendre de substance toxique ; médicaments, alcool, drogue au moins trois
jours avant le prélèvement
 Uriner avant le prélèvement
 En cas de forte fièvre, stress et problème médico-chirurgical, décaler le prélèvement

Conditionnement :

L’échantillon est recueilli dans pot stérile qui se ferme hermétiquement. Il est placé à l’abri
des rayons lumineux dans l’étuve à 37°C pendant 72heures.

Conservation :

Au-delà de 72heures il est conservé au réfrigérateur entre 2 - 8°C.

Transport :

L’échantillon étant recueilli dans un pot stérile fermer hermétiquement, est transporté dans un
plateau. Pour une longue distance, on dépose dans un sac à l’abri de la lumière. On peut
également tenir le pot en position verticale sous les vêtements pour le maintenir à la chaleur
corporelle.

Délai de transport : 30mins.

Délai d’exécution : 1heure

Critères d’éligibilité de l’échantillon :

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  Le conteneur de l’échantillon doit être approprie
 Il doit être bien étiqueter c’est-à-dire il doit contenir l’identité du patient, la nature,
date et heure du prélèvement.

Principe.
Le principe repose sur le recueil d’éjaculat par masturbation dans le pot stérile pour évaluer la
qualité et quantité du sperme. Il comporte deux étapes principales : la macroscopie et la
microscopie.

La macroscopie permet d’apprécier la couleur, le volume, pH (le pH permet de vérifier le bon

équilibre entre la sécrétion prostatique acide et la secrétions alcaline des vésicules séminales)
et la viscosité du sperme à l’ œil nu.

La microscopie est subdivise en l’état frais et l’état colore. L’état frais entre lame et lamelle
permet d’apprécier la mobilité des spermatozoïdes, estimer le nombre de spermatozoïdes,
observe des agglutinats, des agrégats et des érythrocytes dans le sperme. L’état frais permet
également la numération des spermatozoïdes et leucocytes avec la cellule de Malassez après
une dilution du sperme. L’état colore permet l’appréciation de la vitalité du sperme en
déposant une goute du sperme colore a l’éosine nigrosine et lu entre lames et lamelles. La
morphologie des spermatozoïdes à l’aide de la coloration de Papanicolaou, Hématoxyline-
Eosine sur un frottis du sperme.

Procédure.

Matériel :

 Pot stérile pour recueillir le sperme

 Pipette pasteur pour prélever des petites quantités du sperme
 Lame pour étaler le sperme
 Lamelle pour recouvrir l’échantillon
 Microscope optique pour la lecture microscopique
 Tube à hémolyse
 Cellule de malassez pour le comptage des cellules

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Réactif :

 Formol 10%
 Eosine 1% en eau physiologique

C’est un colorant polychrome. Il colore les spermatozoïdes mort en rose. Le principe repose
sur la perméabilité de leur membrane.

 Nigrosine 10% en eau physiologique

C’est un colorant composé de plusieurs molécules phénique. Il colore le fond du champ en

bleu pour permettre une bonne visualisation des spermatozoïdes surtout les incolores.

 Hématoxyline

Composition : Hématoxyline ( C11H6O6), éthanol, Alum de potassium, oxyde rouge de

mercure et acide acétique.

Assure la coloration nucléaire.

 Orange G 6

Composition : Orange G, acide phosphotungstique et alcool éthylique

 Eosine-Azur 50

La coloration cytoplasmique est basée sur l’affinité tinctoriale des cellules faites en deux
temps en utilisant des colorants alcooliques polychromes (EA50 et OG6).

 Lithium de carbonate (LiCO3)

 Acide chlorhydrique (HCl)
 Alcool 95°

Etape technique :

Prélèvement.

 On accueille le patient puis on s’assure qu’il respecte les conditions du prélèvement

 On installe le patient dans la salle de recueille et on l’explique comment il doit faire le
prélèvement
 Le patient se lave les mains à l’aide d’un savon doux, les rince avec de l’eau et les
sèche
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  Il réalise avec une lingette une toilette intime en décalottant le prépuce
 Il effectue ensuite la masturbation avec la vaseline
 Enfin, il recueille l’éjaculat dans un pot stérile, la ferme et l’achemine au laboratoire.

Macroscopie.

 Une fois l’échantillon arrive au laboratoire on vérifie l’éligibilité de l’échantillon puis

on l’enregistre.
 Ensuite, on met l’échantillon à l’étuve à 37° pendant 30mins pour la liquéfaction.
 Apres liquéfaction, on observe la couleur du sperme et on mesure le volume de
l’éjaculat avec une pipette pasteur.
 Pour la viscosité, on pipette une quantité du sperme et on observe sa manière
d’émission verticalement dans le pot.
 Nous mesurons le pH en déposant une goutte du sperme sur le papier pH, puis, on
observe un changement de couleur. On compare la couleur obtenu avec les différentes
couleurs sur le pH mètre.

Microscopie.
L’état frais
 Tout d’abord, on étiquette une lame, puis on homogénéise bien le sperme.
 On dépose une goutte du sperme sur la lame à l’aide d’une pipette.
 Ensuite, on recouvre la goutte avec une lamelle en évitant les bulles d’air.
 Enfin, on apprécie la mobilité et le nombre des spermatozoïdes à l’aide du microscope
à l’objectif x 40.
 Nous pourrons aussi observer les Trichomonas, érythrocytes, agglutinats (amas de
spermatozoïdes lies les uns aux autres par la tête, le cou et/ou le flagelle) et agrégats
(amas de spermatozoïdes immobiles ou mobiles a des filets de mucus, des débris ou
d’autres type de cellules) des spermatozoïdes.

L’état frais entre lame et lamelle a pour avantage de ne pas déformé le mouvement des
flagelles et donc apprécier correctement la mobilité.

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  Pour la numération, on fait une dilution au 1/20 du sperme avec le formol. On
introduit 10µl du sperme dans un tube à hémolyse puis on ajoute 190µl de formol et
on homogénéise.
 On dépose une petite quantité entre la lamelle et la cellule, et on laisse pendant 10 à
20mins pour que les spermatozoïdes sédiment et pour que le formol agit en leur
immobilisant.
 Ensuite, on fait la numération des spermatozoïdes et leucocytes à l’objectif x 40 au
microscope.

Pour la numération, on considère l’estimation faites entre lame et lamelle ;

 Pour une faible concentration prévisible, on compte toute la chambre. La

concentration est calculée comme suite :

C = X x 20 x 1000 = X x 20 000/ml

Avec X = nombre de spermatozoïdes comptes

20 = facteur de dilution
1000cm3(ml) = 1mm3 = volume

 Pour une concentration intermédiaire prévisible, on compte deux bandes non

consécutives.

C = X x 20 x 5000 = X x 105/ml

Avec V = 1/5mm3 = 5000cm3

 Pour une forte concentration prévisible, on compte 02 carreaux non consécutifs.

C = X x 20 x 50000 = X x 106/ml

Avec V = 1/50mm3 = 50000cm3

L’état colore (la nécrospermie)

Il permet d’évalué la vitalité qui correspond au pourcentage de spermatozoïde vivants et

morts, de savoir si les spermatozoïdes immobiles sont vivant et aussi d’observer la
morphologie des spermatozoïdes.

 Premièrement, on homogénéise bien le sperme, puis, on pipette 50ul du sperme qu’on

dépose dans un tube à hémolyse.

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  On ajoute 100ul d’éosine et on mélange
 On ajoute 150ul de nigrosine et on mélange
 Puis on met une goute du mélange entre lame et lamelle.
 On observe au microscope à l’objectif x100 avec l’huile à immersion. On évalue 100
spermatozoïdes.
 On observe les spermatozoïdes coloré en rose qui on laisser passer l’éosine et qui ont
une perméabilité membranaire modifier, il s’agit des spermatozoïdes morts. Les
spermatozoïdes vivants ont une tête incolore.

En ce qui concerne la morphologie :

 Tout d’abord on pipette 10microlitre de sperme qu’on dépose sur la lame et on

confectionne un frottis.
 On fixe au cytospray ou on laisse sécher à l’air libre.
 On effectue la coloration selon Papanicolaou ou coloration a l’hématoxyline éosine
ou alors la coloration de Diff quick.
 Apres colorations les lames de frottis sont monté avec du xylène et la résine.
 L’observation se fait à l’objectif x40 ou à l’objectif x 100 si le frottis n’est pas monter
au xylène et à la résine.

Lecture des résultats.

Macroscopie

On observe des spermes laiteux, gris, blanchâtres, jaunâtres, hématiques ou opalescents.

Sperme de pH et volume varié.

Viscosité normale : si le sperme se sépare bien goutte à goutte

Viscosité 1 : si le sperme forme un filet liquide entre chaque goutte

Viscosité 2 : si le sperme est suffisamment visqueux pour que le filet soit continu

Viscosité 3 : si l’échantillon est tellement visqueux qu’il ne peut s’écouler par la pipette

Microscopie

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Pour la mobilité, on peut observer les spermes de différents grade ;

Grade A : Progression rapide lorsque les spermatozoïdes bougent bien en ligne droit à travers
le champ du microscope.

Grade B : Progression lente lorsque les spermatozoïdes bougent lentement en zigzag.

Grade C : Agitation sans progression. Les spermatozoïdes bougent mais n’avance pas seul les
flagelles bougent.

Grade D : Les spermatozoïdes sont complètement immobiles.

Pour la vitalité, on observe le spermatozoïde mort avec une tête rose ou rouge et les
spermatozoïdes vivant avec une tête incolore.

Pour la morphologie on observe les anomalies de la tête ; Acrosome anormal, absent ou

vacuolé, tête allongé, aminci, microcéphale, macrocéphale multiple.

Les Anomalies des pièces intermédiaires : reste cytoplasmique (extrusion), grêle et angulée, le
cou plié, épais ou mince.

Anomalie du flagelle : Absent, écarté, de calibre irrégulier, enroulé ou multiple.

Valeurs de références.
Liquéfaction ≤ 30mins

Couleur : opalescente ou gris-blanc

Volume : 2- 6ml

PH : 7,2 – 8,0

Viscosité : le sperme se sépare bien goutte à goutte

Concentration des spermatozoïdes : 15 – 20 millions/ml

Leucocytes < 1million/ml

Mobilité ≥ 32% de spermatozoïdes mobiles progressives avec ≥ 25% de spermatozoïdes

mobiles progressives rapide

Morphologie ≥ 15% de spermatozoïdes normale

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Vitalité ≥ 50% de spermatozoïdes vivants

Selon l’OMS 2010.

Interprétation des résultats.

La présence du sang dans le sperme est une hémospermie.

La présence du pus dans le sperme est une pyospermie.

L’absence d’éjaculat est une Aspermie.

Anomalie du nombre de spermatozoïdes :

Polyzoospermie >250millions

Oligozoospermie : 1 – 19 millions

Azoospermie : 0

Anomalie de la mobilité des spermatozoïdes :

<50% on parle d’asthénozoospermie

Anomalie de la morphologie :

Spermatozoïdes normal < 15%, il s’agit d’une tératozoospermie.

L’ensemble d’anomalie du nombre, mobilité et morphologie est une Oligo-asthéno-térato-

spermie(OATS).

Anomalie du volume :

< 1,5 ml, il s’agit d’une hypospermie.

>6,0ml hyperspermie

La Nécrozoospermie est l’absence complète des spermatozoïdes vivants

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 CHAPITRE 3 : Difficultés rencontres et suggestions

I- Difficultés
 Il était difficile pour nous d’effectué deux colorations différentes a même
temps parce qu’il avait juste une minuterie.
 Il y’avait manque d’échantillon donc pas de travail c’était ennuyeux et le
personnel était méprisant.

II- Suggestions
 Le laboratoire doit s’approvisionné d’autres minuteries.
 Le laboratoire doit s’assurer qu’il doit toujours avoir quelque chose à faire
pour les stagiaires.

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 CONCLUSION
Au terme de notre stage de 04 semaines au Centre Hospitalier Universitaire où nous avions
pour objectif général la maitrise le déroulement de tous les examens en anatomo-pathologie ;
nous pouvons dire que grâce aux soutiens permanant de nos encadreurs nous avons pu
atteindre à notre niveau un certain nombre d’objectifs que nous nous sommes fixés au départ.
Nous avons compris que le stage n’est pas seulement un devoir académique mais le lieu où
nous pouvons intégrer nos enseignements théoriques reçu à l’école dans la pratique sur le
terrain. Ce stage nous a permis de nous familiariser au matériel et équipement du laboratoire
d’anapath. Nous pouvons donc dire en définitive que ce stage nous a apporté un plus dans la
suite de notre cursus académique malgré les quelques difficultés que nous avons traversés.

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