Prévention des risques professionnels

Risques biologiques
par Isabelle BALTY
Expertise et conseil technique (ECT)
Institut national de recherche et de sécurité (INRS)
Christine DAVID
Expertise et conseil technique (ECT) (INRS)
Philippe DUQUENNE
Métrologie des polluants (MP) (INRS)
et Colette LE BÂCLE
Études et assistance médicales (INRS)

1. Risques biologiques ............................................................................... SE 3 840 – 2

1.1 Risques infectieux ...................................................................................... — 2
1.2 Risques non infectieux ............................................................................... — 2
2. Activités professionnelles concernées par les risques
biologiques ................................................................................................ — 3
3. Évaluation et prévention des risques biologiques ........................ — 3
3.1 Cas d’une exposition potentielle à des agents biologiques .................... — 3
3.2 Cas d’une utilisation délibérée d’agents biologiques .............................. — 5
4. Place de la métrologie aérienne dans l’évaluation des risques
biologiques ................................................................................................ — 5
4.1 Micro-organismes présents dans l’air ....................................................... — 5
4.2 Valeurs limites ............................................................................................. — 5
4.3 Échantillonnage ........................................................................................... — 6
4.4 Identification ................................................................................................ — 6
Références bibliographiques ......................................................................... — 7

Les agents biologiques es micro-organismes (bactéries, virus, champignons…) se trouvent

L naturellement dans l’environnement (l’eau, le sol), où ils sont à la base de
toutes les chaînes alimentaires, et chez les êtres vivants (dans l’intestin, la
peau, le nez…). Leur grande distribution s’explique par la diversité de leurs
métabolismes, le métabolisme étant l’ensemble des réactions chimiques qui se
déroulent dans un organisme vivant.
La plupart des micro-organismes sont inoffensifs pour l’homme mais certains,
les pathogènes, peuvent être à l’origine de maladies. À l’inverse, d’autres pré-
sentent un intérêt pour l’homme et sont utilisés de manière industrielle dans les
biotechnologies [1] [2] [3].
■ Certains micro-organismes sont utilisés depuis des milliers d’années pour la
transformation des produits alimentaires (boissons alcoolisées, pain, fromages).
Plus récemment, des procédés exploitant la capacité de certains micro-
organismes à dégrader de nombreuses molécules organiques ou minérales ont
été développés pour dépolluer les sols, les eaux ou l’air.

Intérêt des micro-organismes ■ Certains micro-organismes produisent des molécules qui peuvent avoir des
et utilisation applications dans le domaine de la santé (antibiotiques, vitamines…) ou de
l’industrie (tensioactifs…).

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■ Les micro-organismes génétiquement modifiés contiennent un ou plusieurs

gènes étrangers apportant un nouveau caractère transmis aux générations sui-
vantes. Ces gènes peuvent commander la synthèse d’une molécule inhabituelle
ou d’une molécule modifiée ou bien encore modifier le niveau de synthèse de la
molécule (il est possible d’obtenir des cultures dont 30 % du poids est constitué
de la molécule désirée). Cette technique permet la production industrielle de
molécules comme l’insuline ou l’hormone de croissance.

■ Certains micro-organismes possèdent des propriétés insecticides.

1. Risques biologiques
En santé au travail, la notion d’« agents biologiques » est définie
réglementairement au niveau européen [4] comme étant les micro-
organismes (bactéries, virus, champignons, protozoaires et prions),
y compris les micro-organismes génétiquement modifiés, les cultu-
res cellulaires et les endoparasites humains, susceptibles de provo-
quer une infection, une allergie ou une intoxication.
Nota : les cultures cellulaires issues de cellules isolées d’origine humaine ou animale
sont incluses dans la définition des agents biologiques, d’une part parce qu’elles sont sus-
ceptibles d’être contaminées par des agents biologiques pathogènes et d’autre part parce
que des cellules issues de certaines lignées continues pourraient s’implanter accidentelle-
ment chez un travailleur et entraîner le développement de tumeurs.
1.1 Risques infectieux
Les pathologies infectieuses sont les mieux connues. En santé au
travail, des classements des agents biologiques ont été établis, per-
mettant d’évaluer les risques et de définir les mesures de prévention
à mettre en œuvre [5]. Ce classement est basé sur les critères
suivants : gravité de la maladie, risque de contagion ou d’épidémie,
existence d’une prophylaxie et/ou d’un traitement efficace. Une liste
européenne des agents biologiques pathogènes a été établie, qui
est devenue la liste officielle française par arrêté du 18 juillet 1994
modifié [6]. Les agents biologiques sont classés de 1 à 4, par ordre
croissant d’infectiosité (tableau 1).
(0)
Tableau 1 – Résumé du classement des agents biologiques
en fonction des dangers d’infection
Il ne s’agit pas d’un classement strictement scientifique mais d’un
outil au service de la prévention puisque, de ce classement officiel
vont découler des obligations ou des recommandations à mettre en
œuvre pour l’utilisation ou le travail en présence de ces agents
biologiques.
Le groupe 1 comprend les agents biologiques qui ne sont pas
pathogènes pour l’homme, au sens où ils n’entraînent pas de maladie
infectieuse. Ces agents sont innombrables et il n’existe pas de liste
des agents du groupe 1. Un agent biologique qui ne figure pas dans
l’un des groupes 2, 3 ou 4 ne relève pas systématiquement du groupe
1. Seule l’évaluation des risques, faite à travers les connaissances de
l’historique de cet agent ou un dossier d’évaluation des risques, peut
autoriser à dire qu’un agent biologique donné relève d’un classement
dans le groupe 1.
Les risques immuno-allergiques et la production de toxines ne
sont pas pris en compte par ce classement. Néanmoins, pour les
pathogènes classés, certains font l’objet d’un signalement par une
note A (effets allergisants possibles) ou T (toxines possibles) en
marge du classement dans le groupe de risque. Pour le groupe de
risque 3, un astérisque signale les agents classés 3 pour lesquels le
risque d’infection est limité car ils ne sont normalement pas trans-
mis par voie aérienne, ce qui autorise, après évaluation des risques,
une possibilité d’assouplissement des règles de prévention.
La majorité des processus industriels fait appel à des micro-
organismes du groupe 1 ; les micro-organismes pathogènes ne doi-
vent être utilisés de façon « délibérée » que lorsqu’il est impossible
d’utiliser des micro-organismes du groupe 1 (essentiellement pour
la production de vaccins).
Pour les micro-organismes à ADN recombiné, le critère recom-
biné n’est pas en lui-même un critère de pathogénicité ; selon l’éva-
luation des risques, ils peuvent être classés dans un des groupes de
pathogénicité. Des critères de classement des micro-organismes à
ADN recombiné ont été proposés par différentes instances. En
France, la Commission de génie génétique, mise en place en 1990, a
établi des règles de nature impérative permettant de déterminer les
niveaux de risques potentiels des expérimentations de construction
et d’utilisation des organismes génétiquement modifiés en milieu
confiné [7].

Existence
d’une
Danger Propagation 1.2 Risques non infectieux
Pathogénicité prophylaxie
Groupe pour les dans la
chez l’homme et/ou d’un
travailleurs collectivité
traitement
efficace L’exposition à des agents biologiques peut également induire des
pathologies non infectieuses pour lesquelles il persiste beaucoup
1 Non – – – d’incertitudes physio-pathologiques, qui ne sont pas prises en
2 Oui Oui Peu probable Oui compte par ce classement des micro-organismes :
3 Oui Oui Possible Oui — les risques immuno-allergiques : rhinites, asthmes, alvéolites
allergiques extrinsèques (maladie du poumon du fermier, par
4 Oui Oui Risque élevé Non exemple) ;

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— les risques toxiniques : on distingue deux types de toxines :
• les exotoxines sont des molécules protéiques sécrétées par les
micro-organismes (toxines du tétanos, de la diphtérie, mycotoxi-
nes de certaines moisissures…),
• les endotoxines sont des composants de la paroi, libérées lors
de la destruction ou de la multiplication des bactéries Gram-
négatif (bactéries dont la paroi contient des lipopolysaccharides).
Les endotoxines sont à l’origine de pathologies, le plus souvent
de type pseudogrippal, telles que la byssinose (industrie du
coton) ou le syndrome des égoutiers ;
— les risques cancérogènes : des maladies comme l’infection
chronique par le virus de l’hépatite B, l’infection chronique par le
virus de l’hépatite C ; des mycotoxines ; des virus (certains papillo-
mavirus…) sont classés cancérogènes pour l’homme [groupe 1 du
Centre international de recherche contre le cancer (CIRC)] mais ce
classement ne fait pas particulièrement référence aux expositions
professionnelles. Les papillomavirus humains type 31 et 33 sont
dans le groupe 2A (l’agent est probablement cancérogène). Les afla-
toxines M1 sont dans le groupe 2B (l’agent pourrait être
cancérogène).
ques de l’activité : chaleur, humidité et présence de nutriments favo-
risant l’installation et le développement d’agents biologiques
(papeteries, industrie du coton…).
3.1.1 Identification et description du danger
L’identification du danger lié à l’activité relève :
— de la conscience collective du risque (travail en équarrissage,
dans les égouts…) ;
— du repérage des activités désignées dans les tableaux de mala-
dies professionnelles liées à des agents biologiques ;
— des données de la littérature rapportant les agents biologiques
les plus probables ou les maladies les plus fréquemment rencontrées
dans un type d’activité donné. Ce repérage des dangers peut être
affiné par des connaissances ayant trait à des données épidémiolo-
giques spécifiques, des particularités régionales…
3.1.2 Description des risques

Quelle que soit l’activité professionnelle concernée, la démarche

d’évaluation des risques est facilitée par l’utilisation du concept de
2. Activités professionnelles « chaîne épidémiologique » ou chaîne de transmission.
Une chaîne de transmission est constituée de cinq maillons : le
concernées par les risques réservoir d’agents biologiques, les portes de sortie, la transmission,
biologiques les portes d’entrée dans l’organisme et l’hôte potentiel :

Les risques d’exposition à des agents biologiques intéressent de Réservoir

nombreux secteurs professionnels : métiers de la santé, métiers au
contact d’animaux vivants ou morts, traitement de l’eau ou des
déchets, industries des biotechnologies, laboratoires de recherche… Portes de sortie
En pratique, on distingue deux grands types de situation
d’exposition : « l’utilisation délibérée » et « l’exposition potentielle ».
• Dans les activités où les micro-organismes sont utilisés de façon Transmission
délibérée (comme dans les biotechnologies et les laboratoires de
recherche), on connaît l’identité précise des agents biologiques mis
en œuvre, les quantités utilisées et les endroits où ils sont présents. Portes d´entrée
• Dans les situations d’exposition potentielle (travail dans le sec-
teur de la santé, travail au contact des animaux, agriculture et indus-
tries agroalimentaires, traitement des eaux usées, élimination des Hôtes potentiel
déchets, etc.), on ne peut que faire le repérage des agents biologi-
ques les plus probables compte tenu de l’activité.
(0)

Une enquête [8] réalisée en 1994 par des médecins du travail fai-
sait apparaître qu’1,2 million de salariés se déclaraient exposés dans Tableau 2 – Activités exposant potentiellement des salariés
leur travail à des agents biologiques. Une minorité d’entre eux à des agents biologiques (1)
(55 000 personnes) se trouvait exposée à l’occasion d’une utilisation
délibérée dans les activités des biotechnologies ou de la recherche. Secteur Nombre de salariés
Les expositions aux agents biologiques étaient essentiellement
« potentielles » (tableau 2). Secteur de la santé
dont 55 000 en laboratoires d’analyses 560 000
médicales
Services funéraires 22 000
3. Évaluation et prévention Travaux en contact avec des animaux
des risques biologiques vivants (animaux d’élevage, domestiques,
sauvages)
236 000

Industrie agroalimentaire
dont 24 000 en laboratoire 161 000

3.1 Cas d’une exposition potentielle Élimination des déchets 97 000

à des agents biologiques Travail dans les égouts 24 000
Abattage, équarrissage 27 000
Dans une situation d’exposition potentielle, les agents biologi- Activités de nettoyage en secteur exposé
ques ne font pas partie du procédé industriel, mais ils l’accom- Travaux de maintenance dans un secteur non chiffré
à risques...
pagnent soit du fait de l’activité elle-même (métiers de la santé, du
traitement de l’eau ou des déchets…), soit du fait des caractéristi- (1) Données enquête SUMER 94

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■ Le réservoir
C’est la source de l’infection, le lieu dans lequel s’accumulent et
prolifèrent les agents biologiques. Le réservoir peut être vivant ou
inanimé. Vivant, ce peut être tout ou partie d’un être humain (rhino-
pharynx, peau, appareil respiratoire, sang...) ou d’un animal (cuir,
salive, urines, cervelle…). Inanimé, ce peut être le sol (agent du téta-
nos…), l’eau (virus de l’hépatite A, amibes, agent du choléra…) ou
un objet contaminé (seringue abandonnée…).
■ Les possibilités de sortie du réservoir ou d’accès du travailleur à
ce réservoir
Pour qu’il y ait risque d’infection, il faut que les agents biologi-
ques puissent sortir du réservoir ou que le travailleur puisse avoir
accès à ce réservoir.
Exemples :
— un patient atteint d’une tuberculose pulmonaire, qui tousse et cra-
che, constitue un risque de contamination pour tout son entourage, les
autres malades et les soignants qu’il côtoie. Mais s’il s’agit d’une tuber-
culose osseuse, seuls les soignants qui vont aller au-devant du foyer
infectieux vont être exposés à un risque de contamination ;
— de même, le risque de transmission de l’agent de l’encéphalopa-
thie spongiforme bovine à l’abattoir ne concerne que les postes de tra-
vail où les travailleurs peuvent être en contact avec le tissu nerveux
(cervelle et moelle épinière) ou les autres matériels à risques spécifiés.
Les travailleurs des ateliers de découpe ne sont pas concernés par ce
risque puisque, à ce stade du travail en abattoir, le réservoir a disparu.
■ La transmission
En milieu professionnel, elle peut se faire essentiellement :
— par voie aérienne, par exemple :
• gouttelettes émises lors de la toux par une personne atteinte
de grippe ou de tuberculose,
• poussières contaminées par des déjections,
• aérosols contaminés produits par l’utilisation de jets d’eau à
haute pression ;
— par contact avec la peau ou les muqueuses, par exemple :
• animal atteint de rage,
• personne atteinte d’une mycose cutanée,
• manipulation d’objets contaminés,
• en portant les mains contaminées : au visage, en se frottant les
yeux, aux muqueuses urogénitales, en allant aux toilettes ;
— par inoculation accidentelle, par exemple :
• piqûre avec une seringue abandonnée,
• piqûre d’un « vecteur » vivant (moustique dans le cas du palu-
disme, tique pour la maladie de Lyme…) ;
— par voie digestive, par exemple :
• en portant les mains ou des objets contaminés à la bouche,
• en mangeant ou en fumant dans des lieux contaminés.
■ Les portes d’entrée
Elles sont liées aux différents modes de transmission :
— voies respiratoires et transmission aérienne ;
— muqueuses ou peau intacte ou lésée et contact ;
— voie sanguine et plaie, piqûre ou blessure ;
— voie digestive en portant les mains à la bouche.
■ L’hôte potentiel
Dans le cas des risques biologiques en milieu professionnel, il
s’agit du travailleur qui se trouve en bout de chaîne de transmission.
Il va être contaminé et pourra développer la maladie si l’exposition
est suffisamment importante et s’il n’est pas protégé par une immu-
nisation antérieure. Cette immunisation a pu être acquise au contact
de l’agent pathogène lorsque celui-ci est immunisant (par exemple,
le virus de l’hépatite A), ou en étant vacciné avec succès contre cet
agent pathogène.
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3.1.3 Prévention des risques
La prévention des risques consiste à supprimer un maillon ou à
placer des barrières venant interrompre la chaîne. Il n’est pas possi-
ble d’envisager ici tous les cas de figure possibles. Seules quelques
pistes de réflexion peuvent être rapidement envisagées.
■ Les mesures de protection doivent, avant tout, porter sur l’origine
des risques donc sur le réservoir. Ces mesures sont à envisager
selon les situations professionnelles :
— pour les professions du secteur social ou des métiers de la santé,
il s’agit de dépister et de traiter au plus tôt les individus-réservoirs ;
— pour les métiers en contact avec des animaux, les mesures
sont parfois plus radicales (euthanasie d’un chien atteint de tubercu-
lose, abattage d’un troupeau en cas de brucellose…) ;
— nettoyage, désinfection et/ou stérilisation ;
— pour d’autres situations professionnelles, des mesures telles
que désinsectisation, dératisation peuvent être mises en œuvre.
■ Les actions de prévention peuvent également porter sur les pos-
sibilités de transmission entre le réservoir et l’hôte potentiel :
— mesures d’isolement des patients ou des animaux malades ;
— confinement des procédés ;
— séparation des zones « propres » et des zones « sales » ;
— application du principe de la marche en avant (du sale vers le
propre, sans possibilité de retour en arrière) ;
— utilisation de conteneurs pour les déchets contaminés [9] ;
— amélioration de la ventilation ;
— limitation des projections…
Quand les mesures de protection collective ne suffisent pas ou ne
peuvent pas être mises en place rapidement (remise en cause de
l’organisation du travail, nouvelle conception des locaux et/ou des
matériels…), il est possible d’avoir recours à des équipements de
protection individuelle adaptés au contexte professionnel tels que
gants [10], vêtements de protection, lunettes, appareils de protec-
tion respiratoire [11].
L’information et la formation des personnels doivent permettre
d’obtenir leur adhésion à de nouvelles pratiques parfois contrai-
gnantes, ainsi que le respect des mesures individuelles d’hygiène
pour autant qu’auront été mises en place toutes les facilités d’accès
aux installations sanitaires correspondantes, y compris sur les chan-
tiers mobiles et dans les véhicules.
Exemple : ce concept de la chaîne de transmission (cf. schéma ci-
dessous) permet d’évaluer, par exemple, les risques de transmission
de la bactérie Chlamydophila psittaci présente dans les fientes
d’oiseaux salissant aussi bien l’intérieur d’un clocher que la charpente
de bâtiments ouverts ou des cages à oiseaux. En effet, des oiseaux
infectés excrètent de nombreux germes dans leurs déjections. Les
déjections desséchées forment des poussières qui peuvent contami-
ner l’homme par inhalation. Les mesures de prévention seront adap-
tées à l’activité concernée : installateur d’antennes relais de téléphonie
mobile, couvreurs amenés à reprendre une toiture ancienne ou
employés d’un magasin d’oiseaux de compagnie.
Réservoir : oiseaux
Porte de sortie : fientes
Transmission : par l´air (poussières contaminées par des fientes)
Porte d´entrée : voies respiratoires
Hôte : travailleur (couvreur, employé d´abattoir, d´animalerie…)
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Cette démarche peut être appliquée à toutes sortes d’activités
mais également dans les laboratoires d’analyses médicales [12] ou
pour les installations à risque de légionelles [13].
3.2 Cas d’une utilisation délibérée
d’agents biologiques
dans le milieu de travail puis sa transmission aux travailleurs et,
enfin, d’en limiter la propagation accidentelle dans l’environnement
[14] [15].
Il existe un pictogramme (sur fond jaune) de signalisation des ris-
ques liés à la présence d’agents biologiques de niveau 2 et plus, à
apposer à l’entrée des locaux et sur les postes de travail concernés.

Dans le cas d’une utilisation délibérée, l’agent biologique fait par-

tie du procédé industriel. Il est à la base de la réalisation finale. Il y a
seulement quelques années, l’utilisation délibérée concernait essen-
tiellement la recherche et les biotechnologies dans le secteur de la
santé (fabrication d’insuline, de protéines…). Depuis quelques
temps, l’utilisation délibérée d’agents biologiques se pratique pour
la dépollution (marée noire, par exemple) ou le dégraissage indus-
triel. Récemment, des fontaines de dégraissage utilisant des agents
biologiques ont fait leur apparition. Présentées comme une alterna-
tive aux fontaines à solvants, elles pourraient demain être diffusées
dans tous les milieux industriels concernés par le dégraissage.
En utilisation délibérée, et particulièrement quand il s’agit de
recherche ou de biotechnologie, l’identité des agents biologiques
est connue, ainsi que leur localisation et leur quantité. Il en va de la
qualité de la recherche ou du produit fini. La démarche d’évaluation
des risques s’apparente donc à la démarche d’évaluation des ris-
ques chimiques [14].
3.2.1 Identification et description des dangers
L’employeur doit établir un dossier d’évaluation des dangers de
l’agent biologique utilisé. Cependant, pour les agents biologiques, il
n’existe pas d’équivalent de la « fiche de données de sécurité »
concernant les produits chimiques.
L’identification et la description des dangers sont néanmoins
réalisables :
— soit à partir du classement officiel des agents biologiques
pathogènes ;
— soit à partir de connaissances générales, parce qu’il s’agit d’un
agent biologique couramment utilisé depuis des années.
4. Place de la métrologie
aérienne dans l’évaluation
des risques biologiques
4.1 Micro-organismes présents
dans l’air
L’air ambiant comprend les micro-organismes d’origine environ-
nementale (sol, eau, plantes…) et les micro-organismes émis par les
hommes ou les animaux. À l’extérieur, selon les conditions d’envi-
ronnement, on dénombre quelques micro-organismes à quelques
centaines de micro-organismes par mètre cube. Dans un local nor-
malement ventilé, on retrouve les germes de l’atmosphère exté-
rieure accompagnés de germes provenant de sources d’émissions
(individus, procédés…) situées dans le local considéré. L’air confiné
présente un degré de contamination d’autant plus important que les
individus émetteurs de micro-organismes sont nombreux. En rap-
port avec divers facteurs (activité professionnelle, taux de ventila-
tion, température, etc.), le nombre de germes peut varier de
quelques milliers à quelques dizaines de millions par mètre cube.
De nombreuses maladies infectieuses peuvent être contractées
par voie respiratoire (coqueluche, légionellose, tuberculose,
grippe…). À côté des pathologies infectieuses, des pathologies
immuno-allergiques ou toxiniques moins bien connues sont
décrites, pour lesquelles il est difficile de faire la part de ce qui
revient aux micro-organismes eux-mêmes, aux toxines qu’ils libè-
rent et aux poussières organiques auxquelles ils sont associés.

3.2.2 Description des risques

C’est l’étude des possibilités d’exposition aux dangers identifiés.

Elle conduit à préciser notamment :
— la fréquence de l’exposition ;
— les facteurs favorisants l’exposition (aménagement du poste,
procédures de travail) ;
— la perception du risque chez les travailleurs (formation initiale,
formation en milieu de travail), qui va conditionner le respect des Figure 1 – Pictogramme risques biologiques
mesures préventives.

3.2.3 Prévention des risques 4.2 Valeurs limites

Dans un contexte d’utilisation délibérée, s’il s’avère que les
Il n’existe pas de valeur limite concernant la quantité de micro-
agents biologiques utilisés sont pathogènes, les dispositifs de pré-
organismes dans l’air. Mais il est tout à fait possible de faire des
vention doivent au moins répondre aux prescriptions de la régle-
mesures comparatives, par exemple air intérieur/air extérieur ou
mentation qui fixe les mesures techniques de prévention, notamment
local à problème/local sans problème, le même jour, dans des condi-
de confinement, à mettre en œuvre dans les industries et les labora-
tions similaires et avec le même type d’appareils.
toires où les travailleurs sont susceptibles d’être exposés à des
agents biologiques pathogènes. Avant de faire des prélèvements d’air, il est nécessaire de préciser
les points suivants :
Cette réglementation définit des niveaux de confinement mini-
mum à mettre en œuvre en fonction du groupe de danger auquel — formuler l’objectif de l’intervention :
appartient l’agent biologique utilisé. Le confinement a pour objectif • contrôle de la ventilation,
d’empêcher tout d’abord la dissémination de l’agent biologique • enquête après plaintes de travailleurs,

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• bilan initial permettant d’évaluer les résultats de futurs travaux,
• enquête sur les relations possibles entre une maladie et l’expo-
sition professionnelle… ;
— de documenter les trois éléments qui interagissent :
• les sources de prolifération ou d’émission de micro-organismes,
• les mécanismes de dispersion,
• les personnes exposées.
Les éléments qui serviront à interpréter les résultats doivent être
donnés au préalable, afin de ne pas être suspecté de partialité dans
l’interprétation des résultats obtenus. On peut s’appuyer sur les
valeurs-guides [17] publiées par l’IRSST (Institut de recherche en
santé et sécurité du travail) au Québec. Elles correspondent à des
concentrations et des observations qui justifient d’explorer davan-
tage la situation et de prendre les actions requises.
4.3 Échantillonnage
Plusieurs normes existent pour le mesurage des micro-
organismes dans l’atmosphère des lieux de travail. Parmi celles-ci,
on peut citer la norme NF EN 13098 qui donne les recommandations
pour le mesurage des micro-organismes dans l’air [18] et la norme
EN 14031 sur le mesurage des endotoxines [19].
En pratique, une multitude de méthodes et d’appareils sont utili-
sables pour l’étude des bioaérosols mais la majorité d’entre eux
n’est pas standardisée et leur caractérisation est souvent incomplète
[20].
4.3.1 Méthodes physiques
Ces méthodes consistent à dénombrer toutes les particules por-
teuses ou non de micro-organismes en suspension dans l’air. En uti-
lisant les propriétés de diffusion de la lumière par les aérosols, on
peut mesurer directement la quantité de microconstituants atmos-
phériques, au moyen de photomètres ou de spectrophotomètres
par exemple. Cette méthode quantitative est intéressante dans la
mesure où elle permet d’intervenir rapidement, en cas de contami-
nation importante ; elle n’est en aucun cas qualitative.
(0)
Tableau 3 – Critères d’action proposés par l’IRSST
Bactéries totales (1)
Milieu agricole ou industriel 10 000 UFC/m3 sur 8 heures
Milieu non industriel ventilé
1 000 UFC/m3 sur 8 heures
mécaniquement
Bactéries Gram-négatif
Milieu industriel ou agricole 1 000 UFC/m3 sur 8 heures
Milieu non industriel présence
Endotoxines
En l’absence de plaintes, concentration > 30 fois la concentration
de base dans l’air du site de référence
En cas de symptômes respiratoires, concentration > 10 fois
la concentration de base dans l’air du site de référence
Moisissures
Croissance visible sur une surface
Détection d’une odeur caractéristique
Concentration > concentration de base dans l’air du site
de référence
Espèces différentes du site de référence
(1) UFC (unité formant colonie)
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4.3.2 Méthodes biologiques
Ces méthodes de prélèvement permettent le dénombrement des
microorganismes et le dosage de leurs constituants :
— sédimentation : les particules en suspension dans l’air sont
recueillies sur des milieux nutritifs solides ; cette méthode n’est pas
quantitative ;
— centrifugation : variante du procédé précédent, consistant à
accélérer la sédimentation par l’action d’une force centrifuge ;
— filtration : un certain volume d’air est filtré à travers un support
poreux (laine de verre, gélatine, membrane de cellulose, d’alginate
de sodium) qui retient les micro-organismes ; le filtre peut subir une
étape d’extraction des particules dans un liquide stérile ou être
placé sur un milieu nutritif ;
— barbotage : un volume connu d’air est recueilli dans un flacon
contenant un milieu liquide stérile, nutritif ou non ; des billes de
verre et un tube d’aspiration percé de trous favorisent la dissocia-
tion des particules ;
— prélèvement par inertie : l’air contenant des particules est pro-
jeté à grande vitesse sur un obstacle solide ou liquide.
4.3.3 Critères de choix du système de mesure
La difficulté des méthodes de prélèvement aérobiologique est
clairement mise en évidence par l’importance du nombre d’appa-
reils proposés.
Le choix d’un système de prélèvement prend en compte certaines
estimations préalables : doit-on mesurer la concentration totale des
organismes présents dans l’atmosphère ou recherche-t-on un
micro-organisme particulier ? Les concentrations seront-elles éle-
vées ou faibles ?
Signalons également que les germes récupérés doivent présenter
la même viabilité que celle qu’ils possédaient dans l’atmosphère.
Les récupérations de germes sur milieu liquide ou surface humide
permettent l’obtention d’un plus grand nombre de bactéries viables.
Les modes de prélèvement susceptibles de provoquer des trauma-
tismes au niveau des cellules bactériennes peuvent augmenter leur
sensibilité à certains composants des milieux de culture. Aussi est-il
préférable d’éviter l’utilisation de colorants ou d’antibiotiques dans
les milieux de culture sélectifs.
Les études d’aérobiocontamination doivent être réalisées périodi-
quement avec un appareil capable de donner des résultats repro-
ductibles.
4.4 Identification
L’analyse des échantillons est effectuée par le biais des méthodes
utilisées classiquement en microbiologie. La culture sur milieu
gélosé permet l’identification des micro-organismes par l’étude des
caractères macroscopiques, microscopiques et de l’activité biochi-
mique des colonies en culture.
Des techniques de PCR (Polymerase Chain Reaction) basées sur la
reconnaissance de séquences génomiques permettent également
d’identifier certains micro-organismes.
Dossier délivré pour
DOCUMENTATION
28/09/2008
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modifications successives portant adapta-
tion au progrès technique.
[5] Décret no 94-352 du 4 mai 1994 relatif à la
protection des travailleurs contre les ris-
ques résultant de leur exposition à des
agents biologiques et modifiant le code du
travail (deuxième partie : décrets en
Conseil d’État). Journal officiel, p. 6620-
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[6] Arrêté du 18 juillet 1994 fixant la liste des
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Toute reproduction sans autorisation du Centre français d’exploitation du droit de copie
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28/09/2008
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