(eBook PDF) Textbook of Structural

Biology (Series in Structural Biology 8)

2nd Edition
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structural-biology-8-2nd-edition/
Contents

Preface to the Second Edition

Chapter 1 Introduction
Chapter 2 Basics of Protein Structure
Chapter 3 The Folding, Folds and Functions of Proteins
Chapter 4 Basics of Membrane Proteins
Chapter 5 Basics of Nucleic Acid Structure
Chapter 6 Basics of Lipids and Membrane Structure
Chapter 7 Basics of Carbohydrates
Chapter 8 Enzymes
Chapter 9 Genome Structure, DNA Replication and Recombination
Chapter 10 Transcription
Chapter 11 Protein Synthesis — Translation
Chapter 12 Protein Folding and Degradation
Chapter 13 Transmembrane Transport
Chapter 14 Signal Transduction
Chapter 15 Cell Motility and Transport
Chapter 16 Structural Aspects of Cell-Cell Interactions
Chapter 17 The Immune System
Chapter 18 Virus Structure and Function
Chapter 19 Bioinformatics Tools in Structural Biology
Index

8
Preface to the Second Edition

It is now over seven years ago since we published the first edition of our
Textbook of Structural Biology. Our coauthor of the first edition, Jure
Piskur, died prematurely in 2014 due to cancer. We very much miss his
insights and skills.
The field has made very rapid and extensive progress since the first
edition was released. In particular, it is becoming evident that many
molecular systems are highly integrated with each other and sometimes
very large assemblies are formed. This complexity is gradually emerging
and accessible for structural investigations. The field of membrane
proteins is making remarkable progress and is more extensively covered in
this edition with its own dedicated chapter. Furthermore, we have added a
chapter on carbohydrates, which is an emerging area that is deeply
integrated with protein and cellular structure and function.
Given the impressive number of unique protein structures now
available, it is of course impossible to cover all of these in any single
volume. We have therefore tried to concentrate on the growing body of
lasting knowledge of the structure and the roles of macromolecular
systems.
We have received help from many colleagues who have used the first
edition of the textbook for courses. In addition, we have had expert help in
reviewing certain chapters. We are indebted to Prof Ulf Lindahl for expert
insight into carbohydrates. Furthermore, we wish to express our thanks to
Lars Erik Andreas Ehnbom and Saraboji Kadhirvel for expert skills in
producing parts of the illustrations. Many illustrations are produced using
the program Molscript by Per Kraulis.

9
1
Introduction

1.1 Life

We are surrounded by microbes, plants and animals that we immediately

recognize as living beings (Figure 1.1). However, it is still difficult to
provide a concise definition what life is. Perhaps the most useful definition
for this book is that life is a unit capable of chemical activities, which can
reproduce and evolve.
Chemical activities, which involve conversions of energy and matter,
are called metabolism. These activities capture energy and chemical matter
in different forms. Thousands of chemical activities take place
simultaneously in a living organism and they must be well coordinated or
regulated to maintain the stability of the living unit.
Reproduction of the unit (generating new units) provides both the
continuity and the variation that is also an important characteristic of life.
The combination of reproduction, horizontal transfer of information and
“erroneous” duplicates provides the basis of evolution. In other words, the
composition of the unit should be able to change over time to better adapt
to the changing environmental conditions. Living organisms appear in very
different forms and follow very different life-styles. However, the basic
characteristics of life (including metabolism, reproduction and evolution)
are provided and governed by very similar sub-structures: biological
macromolecules and cells.

1.2 Levels of Organization of Life

The living world has several hierarchical levels, ordered from the smallest
to the largest. At the bottom are molecules, a mix of inorganic and organic

10
compounds and biological macromolecules, followed by sub-cellular
structures, cells, tissues, organs, organisms, populations, communities and
the biosphere, which encompasses all biological communities on the Earth.

Fig. 1.1 ▪ Living organisms are found in numerous different forms. Left: A
microscope picture of baker’s yeast (Saccharomyces cerevisiae) cells (by the
courtesy of Concetta Compagno). Right: Linneas (Linnea borealis) covering vast
areas of Lapland (by the courtesy of Bernarda Rotar) and bottom: moose, the
largest land animals in Scandinavia (by the courtesy of Aca.Pixus.dk). Within these
different macro-forms very similar molecular structures can be found, which
determine the form and lifestyle of the carrier organisms.

Macromolecules are central in all living organisms. They are giant

polymers consisting of repeating units. These repeating units may or may

11
not be identical, and are connected with covalent or non-covalent bonds.
Macromolecules perform a multitude of functions, which are the basis of
metabolism, reproduction and evolution, such as energy or information
storage, reaction catalysis, coordination and regulation, communication,
structural support, defense, movement and transport. On the basis of
chemical composition we talk about three different kinds of
macromolecules: (i) peptides and proteins that are polymers of amino acid
residues, (ii) nucleic acids, which are polymers of nucleotides, and (iii)
carbohydrates, which are polymers of sugars (Figure 1.2). Other central
molecules that should be mentioned here are the lipids. Although they are
not macromolecules, they self-assemble into large aggregates of
macromolecular dimensions, including the lipid bilayer (an important
building block of cell membranes), micellar aggregates containing bile
molecules, and the aggregates of lipoproteins that transport cholesterol and
fat in the blood stream. In the following chapters we will try to understand
the structures of bio-macromolecules and link them to their functions and
the higher levels of the living world.

Fig. 1.2 ▪ A simplified picture of two bio-macromolecules, which are the focus of
our further chapters. Left: The structure of a well-known protein, chymotrypsin
(PDB: 4CHA). Right: A nucleic acid molecule, yeast tRNAPhe (PDB: 1EHZ).

The basic unit of life is a cell (Figure 1.3). Cells are surrounded by a
plasma membrane, which separates each cell from the external
environment and creates a segregated compartment with a controlled
internal environment. Cells show two organizational patterns: (i)
prokaryotic, characteristic for Bacteria and Archaea, and (ii) eukaryotic,
characteristic for Eukarya. Prokaryotic cells usually exist as single cells

12
and are smaller than eukaryotic ones, typically on the order of 1 μm in
diameter. The basic structure of a prokaryotic cell is defined by a cellular
membrane, an intracellular nucleoid containing DNA, and the cytosol
holding the rest of the intracellular material, where ribosomes, enzymes
and cytoskeletal elements are found. Eukaryotic cells are usually at least
ten times larger than prokaryotic cells and more complex, with inner
membranes separating compartments and organelles. The organelles
include: (i) the nucleus, storing genetic material and the replication and
gene transcription systems (ii) the cytosol, where protein synthesis and
many essential biochemical reactions take place, (iii) the mitochondrion, a
power plant and energy storage compartment, (iv) the endoplasmatic
reticulum and Golgi apparatus, where proteins are matured and sorted to
further locations, (v) the lysosomes or vacuoles, where polymeric
macromolecules, such as proteins, are recycled into usable metabolites.

Fig. 1.3 ▪ A schematic picture of an animal cell showing sub-cellular structures,

such as nucleus, membrane systems (ER), mitochondrion, etc. (Made by Michael
W. Davidson, Florida State University.)

13
 All organisms on Earth seem to originate from a single unicellular
organism. The main reasons why one can claim that all organisms
originate from the same cell is that not only do all living species use the
same nucleotides and amino acids despite many other possibilities, but the
genetic code (the dictionary for translation from the language of nucleic
acids to the one of proteins) is the same. In addition, central molecular
systems like transcription and translation are strongly related. A smaller
molecule like ATP is the universal currency of energy in all living
organisms, although in principle many other choices would have been
possible.
Today, many millions of different organisms that do not interbreed
with each other are found and we call them species (Figure 1.4). They are
all adapted to their different environments and in a naive sense they may
seem perfect. However, a particular life form may not be fit tomorrow and
thereby become extinct, like so many other species in the past, which have
previously populated Earth. Due to changes of environment, new and
better-fit species constantly evolve over time, and this evolution works by
gradually changing the structures of macromolecules.
The unfolding of events leading to the present diversity is expressed as
an evolutionary tree showing the order in which species split and evolved
into new species. This tree traces the descendants coming from ancestors
that lived at different times in the past.

14
Fig. 1.4 ▪ A simplified tree of life. The common progenitor originated
approximately 4 billion years ago. The position of the first branchings, occurring
between the progenitor of Bacteria, Archaea and Eukarya, are still unclear.

In other words, the evolutionary tree shows the evolutionary relationship

among modern and ancient species. It is important to understand the
evolutionary relationship between organisms when one compares the
structure of macromolecules from these organisms, being involved in
similar processes. Some of the earlier branching is difficult to reconstruct
because there are no available fossils. However, based on molecular
evidence in modern organisms, we can separate all living organisms into
three domains, which have been evolving separately for more than 1
billion years: (i) Archaea, (ii) Bacteria, and (iii) Eukarya. Even if they
superficially look similar, Archaea and Bacteria separated into distinct
lineages very early during evolutionary history.
Archaea are often inhabitants of extreme environments, such as hot
and acidic springs, sea depths and salt brines, but can also be found in
more “normal” environments. Their replication, transcription and
translation machinery resembles the eukaryotic machinery, while their
metabolism and energy conversion resemble the bacterial ones.
Bacteria consist of more than a dozen sub-groups, also called clades,
but the most important are: Protobacteria, Cyanobacteria, Spirochetes,
Chlamydias and Firmicutes. The Protobacteria are the largest and a very
diverse group, including one of the beststudied organisms, Escherichia
coli. Sometimes bacteria are divided, on the basis of their cell wall
composition, into gram-positive, including Bacillus subtilis, and gram-
negative, including E. coli. Bacteria exhibit the greatest biochemical
diversity.
Eukarya can be divided into four groups: Protista, Plantae, Fungi and
Animalia. The Protista contain mostly single celled organisms and have a
polyphyletic origin, meaning that some represent very primitive
eukaryotes, such as Giardia, while some are closely related to animals,
such as Dictyostelium, or plants, such as red algae. Phagotrophy, a feeding
mode to form a pocket in the plasma membrane and enclose the “food”, is
a hallmark of Eukarya.

1.3 Short History of Life on Earth

The theory of chemical evolution holds that conditions on the primitive

15
Earth, around 4 billion years ago, led to the emergence of the first
biological molecules. Oparin and Haldane independently suggested in the
1920s that if Earth’s first atmosphere was reducing, and if there was a
supply of external energy then a range of organic compounds might be
synthesized. In the 1950s, Stanley Miller and Harold Urey mimicked these
conditions in the lab. Water vapor, hydrogen gas, ammonia and methane
gas were exposed to sparks, and after a few days the system contained
several complex molecules, such as amino acids and nucleic acid bases,
the building blocks of today’s life. When the monomeric units were
present, it was not so difficult to achieve polymerization even under
abiotic conditions. However, how could the first peptides and nucleic acids
become “alive”? In other words, how could they start reproducing and
evolving?
The term replicator means a structure that can arise only if there is a
preexisting structure of the same kind in the vicinity. For example, a
supersaturated solution crystallizes if a small seeding crystal is added.
However, this represents a simple replicator relying on a single structure.
More sophisticated replicators could exist in several forms and thereby
could have contributed to heredity. For sustained evolution, an indefinite
number of forms and indefinite variation in heredity is necessary. The first
artificial replicator, a simple hexadeoxynucleotide not needing enzymes
for its replication (polymerization from the present mono-units) was
synthesized by von Kiedrowski in 1986. The first short RNA molecules
may have had the ability to catalyze the polymerization of offspring
molecules. The first replicating RNA molecules competed successfully
with their own erroneous copies and with other less-efficient systems for
the monomers needed for their replication. Even if self-replicating RNA
molecules fulfill the above criteria for life, the path to the first cells was
still more sophisticated. One of the main following steps was to include
peptides and proteins to establish the RNA — protein world, followed by
the introduction of membrane systems, thereby segregating the primitive
cell from its environment.
The origin of the first cell, the common progenitor of all living
organisms, could be approximately 3.5 billion years ago, and at that time
simple replication and translation machineries already existed. One
hypothesis suggests that, during the following 2 billion years, the
unicellular system evolved to represent a fine net of metabolic reactions
connected to increasingly sophisticated machineries for nucleic acid
replication and RNA to protein translation, also keeping plasticity,
enabling the cell to respond to the demands of the ever-changing

16
environment. During this period, the first living cells were still dependent
on organic compounds, which were the primary source of energy, and had
abiotic origin. Later, approximately 2.5 billion years ago, one of the major
steps was the evolution of the ability to use the energy of sunlight to power
metabolism. Photosynthesis provided energetic independence and soon
resulted in vast quantities of organic materials and oxygen. The evolution
of aerobic metabolism significantly changed cellular biochemistry. Many
enzymatic reactions became dependent, directly or indirectly, on the
presence of oxygen. Aerobic metabolism allowed cells to grow larger.
Some of the further major transitions include the origin of sex, the origin
of multicellular organisms and the origin of social groups. Behind all these
events stood proteins, nucleic acids, carbohydrates and lipids, with their
evolving structures and functions.

1.4 What is Structural Biology and When Did It Start?

The field of structural biology focuses on a classical insight: in order to

understand, we need to see. “Seeing is believing”, or “a picture says more
than a thousand words” are well-known phrases. This is true whether we
deal with large objects, as in astronomy and astrophysics, medium-sized
objects such as birds or fishes, or with very small objects like biochemical
systems or particle physics. Structural biology is the science that tries to
make the sub-cellular and molecular objects of biology visible and
understandable.
It is difficult to identify the very beginning of structural biology. One
important step is the purification of the fundamental components. Friedrich
Miescher discovered and isolated DNA in 1869. The understanding of the
biological role of DNA did not start until 1944 when Avery, MacLeod and
McCarty showed that DNA is the genetic material. Elucidation of the
structure of DNA in 1953 was a major milestone in structural biology.
Francis Crick and James Watson, using diffraction data obtained by
Rosalind Franklin and Maurice Wilkins, deduced a model for DNA. This
model led to a detailed insight of the replication of DNA, the transcription
of DNA to RNA and also the key steps of translation, central activities in
molecular biology.
In a review from 1964, James Watson expressed: “Unfortunately, we
cannot accurately describe at the chemical level how a molecule functions
unless we know first its structure.” This describes the situation in a
nutshell and it is exemplified in one field of biology after the other.

17
 Proteins have long been known, but the molecular nature of them was
poorly understood. Jöns Jacob Berzelius (1779–1848), the well-known
Swedish chemist, introduced the term protein. Proteins were classified as
colloids without defined structures and shapes. The first crystallization of
proteins may have been of hemoglobin, in 1840 by Hünefeld. At this time,
the crystals were called “blood crystals” and it was not realized that the red
crystals were built of a protein. Several other proteins were also
crystallized early on. The nature of proteins became better understood
when Theodor (The) Svedberg could show with his ultracentrifuge that
proteins have unique molecular weights.
During the 19th century the action of gastric juice on the degradation
of solid proteins was thoroughly studied. One active ingredient was called
pepsin but its nature was entirely unclear. Gradually, the catalytic
substance was given names as “ferment” or “enzyme”. Enzymes were
believed by (among others) the Nobel laureate Willstätter to be of a
different nature than lipids, carbohydrates or proteins and present in only
very low concentrations in plants or animals. J.B. Sumner and
subsequently J.H. Northrop showed that enzymes are proteins with unique
structures, since urease and pepsin could be purified and crystallized. John
D. Bernal and Dorothy Crowfoot (later Hodgkin) could show that pepsin
crystals diffracted X-rays when kept in a moist environment, thus
demonstrating that proteins would have a specific structure, which was lost
if dried out. In the same period, F.C. Bawden, N.W. Pirie and W.M.
Stanley crystallized a number of viruses. The perfection of crystallization
and the crystallographic analysis of protein and enzyme crystals took
several decades until it matured in the well resolved crystallographic
structures of myoglobin and hemoglobin, in 1959 and 1968, respectively.
Structural biology includes a number of methods in addition to
diffraction and scattering methods. In an early phase, electron microscopy
was already an important technique to obtain an insight into the
organization of biological systems and macromolecules. One major
advance was the analysis of virus particles by Caspar and Klug in the end
of the 1950s and beginning of the 1960s. The symmetry principles could
be deduced, and for the larger viruses different functional components
were identified. Another development in the field of electron microscopy
was the studies of 2D crystals of bacteriorhodopsin studied by R.
Henderson and N. Unwin using electron diffraction. This opened new
possibilities, but only a limited range of objects yielded material good
enough for structural studies. Subsequent to these developments, the single
particle reconstruction studies of large molecular complexes at cryo-

18
temperatures (cryo-EM) and tomography have very significantly extended
the capabilities of electron microscopy to contribute entirely new insights
of structural biology at a range of resolutions. The single particle
reconstruction has become a new revolution in the field, with a capacity to
analyze complexes that were poorly or not at all available before at high
resolution. In addition, cryo-EM has the capacity to identify several
different conformations in a single sample, adding insights into the
dynamics of functional molecules.
Structural biology has moved numerous systems from an
understanding where the molecules are represented by blobs to where the
atomic coordinates are available, as well as details of molecular
interactions.
A limitation of crystallography is that it gives still pictures of the
molecular systems studied, with only limited insight into dynamics. In
fortunate cases, a number of states can be crystallized and characterized at
atomic resolution. However, in many cases one would need insights into
states that are not accessible to crystallization, maybe because they are too
short-lived, to understand the dynamics of the system. Here, NMR-studies
can sometimes give the information that is missing.
Generally, NMR spectroscopy can provide structures, which are
particularly valuable when crystals cannot be obtained. When both NMR
and crystallographic structures are available, the quality of the
crystallographic information is normally better. However, the unique
contributions of NMR spectroscopy come from dynamic studies of
systems where the structures are already known. Here, the mobility and
details of transient interactions can be characterized.
To obtain optimal information several methods should be employed.
Wrong or partial information can be corrected or extended. In the best-
understood systems, physical and theoretical chemists have contributed
their experimental or computational methods to get additional angles on
the understanding of the system.

1.5 A Short Summary of the Book

This book is a textbook of structural biology for undergraduate and

graduate students. The focus is to cover the central and most interesting
aspects of structure, combined with a focus on interesting biology. The
book makes no attempt to cover the entire fields of biology or molecular
biology. One selection principle is a focus on systems where we know the

19
structures reasonably well.
We try to provide a comprehensive coverage of the structural and
functional understanding of proteins, nucleic acids, lipids and membranes
as well as carbohydrates. The book makes no attempt at describing the
methods used to obtain the results. This would require a separate volume.
In addition to the basic structural knowledge of protein, nucleic acid, lipids
and carbohydrates there is a significant coverage of the steps involved in
the expression of the genetic information in DNA into proteins. Likewise,
the breakdown of macromolecules is covered. Much of biology is related
to membranes. They enclose cells or cellular compartments. The passage
of material and information across membranes is crucial for all cellular
biology and structural insights are rapidly increasing. In multicellular
organisms, cell-cell contacts and interactions are essential for coordinated
activities. In relation to this, the insights into how cells and organisms
move is increasingly better understood. These fields are described in the
text.
Insights into the evolution of biological systems and functional
genomics also benefit from structural studies. The rate by which the DNA
sequences of complete genomes are produced has generated an enormous
database that is rapidly growing. DNA or protein sequences can
confidently be identified as long as the sequence identity is reasonably
good. In many cases, the sequences themselves are insufficient. However,
the structural relationship can both suggest the evolutionary relationship of
a protein as well as its function. The final chapter gives some approaches
to use various predictive methods to access structural insights from
sequence data alone.

Further Reading

Avery GT, Macleod CM, McCarty M. (1944) Studies on the chemical

nature of the substance inducing transformation of pneumococcal
types. Induction of transformation by a desoxyribonuleic acid fraction
isolated from pneumococcus type iii. J Exp Med 79: 137–158.
Bernal JD, Crowffot DC. (1934) X-ray photographs of crystalline pepsin.
Nature 133: 794–795.
Franklin RE, Gosling RG. (1953) Molecular configuration in sodium
thymonucleate. Nature 171: 740–741.
Fruton JS. (2002) A history of pepsin and related enzymes. Quart Rev Biol

20
 77: 127–147.
Kendrew JC, Dickerson RE, Strandberg BE, et al. (1960) Structure of
myoglobin: a thre-dimensional Fourier synthesis at 2 A resolution.
Nature 185: 442–427.
McPherson A. (1991) A brief story of crystal growth. J Cryst Growth 110:
1–10.
Miescher F. (1871) Über die chemische Zusammensetzung der Eiterzellen.
Hoppe-Seyler’s medicinisch-chemische Untersuchungen 4: 441–460.
Northrop JH. (1929) Crystalline pepsin, Science 69: 580.
Olofsson I, Liljas A, Lidin S. (2014) From a grain of salt to the ribosome.
The history of crystallography as seen through the lens of the Nobel
Prize. World Scientific, Singapore.
Sumner JB. (1926) The isolation and crystallization of the enzyme urease:
preliminary paper. J Biol Chem 69: 435–441.
Watson JD, Crick FH. (1953) Molecular structure of nucleic acids: a
structure for deoxyribose nucleic acid. Nature 171: 737–738.

21
2
Basics of Protein Structure

2.1 Bonds and Interactions

In most biological processes on the molecular, cellular or organism level,

proteins are the main actors, and it is therefore important to understand
their function. The function of a protein is determined by its structure.
Most proteins are designed to bind other proteins, DNA, RNA or other
molecules, and this requires that they form and maintain an exact spatial
organization of functional groups. Even though most proteins have a well-
defined conformation they are not rigid. Various types of conformational
flexibility (side chain and loop movements, domain rotations) are often
crucial for their function.
Proteins are extremely plastic. They can adopt a very large variety of
shapes. Most positions of a protein sequence can be changed while
maintaining the structure and the function. Proteins can be globular or
fibrous, stiff or elastic. They can change their conformation in subtle ways
or extensively. They can be enzymes, synthesizing small or large
molecules but also catalyzing their breakdown. They can be motors,
generating rotational or sliding motions. In this and subsequent chapters
we will describe the characteristics of proteins that can lead to such a
multitude of roles.
Before going into the details of the structure of proteins it may be
valuable to review some relevant principles of chemistry that are involved.

2.1.1 Covalent Bonds

A chemical bond between two atoms forms if the resulting arrangement of
the two nuclei and their electrons has a lower energy than the total energy
of the separate atoms. If the lowest energy is obtained by a complete

22
transfer of one or more electrons from one atom to the other, ions form and
the compound is held together by electrostatic (coulombic) attraction
between the ions. Here we have got an ionic bond, e.g. as for NaCl salt
crystals. If the lowest energy can be achieved by sharing electrons, then
the atoms link through a covalent bond and discrete molecules are formed,
such as H2 and NH3. For biological macromolecules the covalent bond is
the most frequently occurring one. Hydrogen bonds are also very prevalent
(see Section 2.1.4) and ionic bonds are sometimes found in so-called salt
bridges on the surface of many proteins. When a covalent bond forms, the
atoms share electrons until they reach a so-called noble-gas configuration
(the octet rule according to Lewis). The changes in energy responsible for
the formation of bonds occur when the electrons in the outermost shells
(the valence electrons) move to new locations, i.e. the electronic structures
of the atoms play a crucial role in bond formations. For a theoretical
description of chemical bonds one has to use molecular quantum
mechanics. Some experimentally observed typical bond lengths are given
in Table 2.1.
TABLE 2.1 Some Average Bond Lengths

Concerning the strength of a bond one can look at the average bond
energies, sometimes also called the bond dissociation energy, which is the
energy required to break one mole of the particular bond under discussion.
Bond energies vary between about 160 to 1100 kJ/mol, depending on the

23
number of double bonds between the atoms (N2 has a triple bond with 942
kJ/mol), or if there is a large part of ionic charge (as in F2 with 155
kJ/mol). Certain systematic trends with changes in atomic number are
evident. Bonds generally get weaker with increasing atomic number like in
the series HF>HCl> HBr>HI. Bond energies, like bond lengths, are fairly
reproducible (within about 10%) from one compound to another. It is
therefore possible to tabulate average bond energies from measurements
on a series of compounds. As a final example, it could be mentioned that
the average bond energy increases from 345 to 809 kJ/mol from a single
carbon-carbon bond to a triple carbon-carbon bond.

2.1.2 Disulfide Bonds

One unique feature of proteins is the covalent bond between the sulfur
atoms of two cysteine amino acid residues (the different amino acids will
be discussed in detail in Section 2.2.1). Such disulfides stabilize a protein.
They form in oxidizing environments. Normally, the cytosol is reducing.
In eukaryotes disulfide bonds in proteins are formed in the oxidizing
conditions of the rough endoplasmic environment or in the intermembrane
space in mitochondria. Under reducing conditions these bonds can break
and the sulfur atoms become protonated. The red-ox properties of such
interactions are of great importance to certain proteins. The distance
between the sulfur atoms in a disulfide bond is around 2 Å.

2.1.3 Charge Interactions

Electrostatic interactions are very important in biological systems. It is not
possible to cover electrostatic theory here, and we will just mention a few
points. If we look at a globular protein or at the surface of a lipid
membrane we see that charged groups, such as lysine or arginine residues
in proteins and phosphatidylethanolamine or phosphatidylserine groups on
lipids (Chapter 6), are normally solvated and have nearby counterions. Not
only would burying an isolated ionic group inside the protein or in the core
of the lipid bilayer cause a loss of the solvation energy, but there would
also be an electrostatic price to pay. The attraction between two oppositely
charged ions is given by Coulomb’s law, being proportional to e2/εr, where
e is the unit charge, r is the distance between the ions considered as point
charges, and ε is the dielectric constant of the medium in which they are
located. In aqueous solution ε is roughly 80, whereas it is much lower
inside the hydrophobic core of proteins or the lipid bilayer where it is

24
about 2-20. Thus, if a charge is buried, there is an enormous energetic
advantage in burying a suitable opposite charge as close as possible. This
is one of the reasons for the formation of saltbridges, for example, and
why we need channels in membranes to transport ions through the
membrane (Chapter 13).
Concerning the interactions and binding of ions to charged surfaces on
proteins or membranes, the theory is more sophisticated. This pertains also
to situations where we consider interactions between, for example, two
membranes of the same or different charge or even one neutral and one
charged membrane. Osmotic pressures and entropic forces will be
involved in such events, and it is outside the scope of this book.

2.1.4 Hydrogen Bonds

Hydrogen bonds are central in biology. They contribute by stabilizing and
orienting chemical groups with regard to each other. A proton interacting
with two adjacent electronegative atoms with lone electron pairs (called
the donor and acceptor) can form a hydrogen bond. These terms indicate
that the proton can for some fraction of time be bound to either atom. The
direction and the distance between the hydrogen bond donor and acceptor
vary. The strength of a hydrogen bond is primarily related to its length and
linearity. Normally hydrogen bonds are around 2.8 Å in length and the ΔH
(change in enthalpy) of forming the bond is around 20 kJ/mol. The angle
between the donor, the hydrogen and the acceptor is normally close to
180°. Deviations will decrease the strength of the bond. The angle at the
acceptor atom (for example, the angle C-O-H when a hydrogen bond to a
carbonyl oxygen is formed) is often 120°, corresponding to the position of
a lone pair of electrons in the oxygen atom. Deviations in this angle appear
to be less important. For example, in the hydrogen bonds stabilizing
secondary structure in proteins, this angle is often close to linear, probably
due to steric constraints.
In macromolecules the hydrogen bond donors and acceptors are
normally nitrogen and oxygen atoms, where the donor has a covalently
bound hydrogen and the acceptor has a free electron pair. Hydrogen bonds
to sulfur atoms such as in cysteine are also found.
A macromolecule contains many hydrogen bond donors as well as
hydrogen bond acceptors. In the interior of proteins or nucleic acid
molecules these acceptors essentially always find a partner. The high
energy of an unsatisfied bond in the interior is unfavorable. The tumor
suppressor protein, p53, is an example of a highly unstable protein. Some

25
Another random document with
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 —¡De modo que estaré encerrada aquí hasta las seis! —exclamé
llena de furor—. Esto no se puede sufrir, es un abuso, un escándalo
Me quejaré a las autoridades, al rey.
—El rey está loco —dijo el viejo con horrible ironía.
—Al gobierno; me quejaré al arzobispo. O me dejan salir o gritaré
dentro de la iglesia, reclamando mi derecho.
Discurrí con agitación indecible por la iglesia, nave arriba, nave
abajo, saliendo de una capilla y entrando en otra, pasando del patio a
templo y del templo al patio. Miraba a los negros muros buscando un
resquicio por donde evadirme, y enfurecida contra el autor de orden
tan inicua, me preguntaba para qué existían deanes en el mundo.
Los canónigos dejaban el coro y se reunían en su camarín
marchando de dos en dos o de tres en tres, charlando sobre los
graves sucesos. Los sochantres y el fagotista se dirigían piporro en
mano a la capilla de música, y los inocentes y graciosos niños de coro
al ser puestos en libertad, iban saltando, con gorjeos y risas, a jugar a
la sombra de los naranjos.
Varias veces, en las repetidas vueltas que por toda la iglesia di
pasé por la capilla de San Antonio. Sin que pueda decir que me
dominaban sentimientos de irreverencia, ello es que mi compungida
devoción al santo había desaparecido. No le miré con aversión; pero s
con cierto enojo respetuoso, y en mi interior le decía: «¿Es esto lo que
yo tenía derecho a esperar? ¿Qué modo de tratar a los fieles es
este?»
Mi egoísmo había llegado al horrible extremo de pedir cuenta a la
divinidad de los desaires que me hacía. Irritábame contra el cielo
porque no satisfacía mis caprichos.
Pero, ¡maldita hora!, quien a mí me irritaba verdaderamente era e
deán tirano que mandaba encerrar a la gente porque se le antojaba
Desde que le vi salir del coro en compañía del arcediano, moviéndose
muy lentamente a causa del peso de su descomunal panza, le tuve po
un realistón furibundo, sin que por esto me fuese menos antipático
¿Por qué habían cerrado las puertas? Por poner el sagrado recinto a
salvo de una invasión plebeya, e impedir que el bullicio de los vivas y
mueras turbase la santa paz de la casa de Dios. Con todo su celo no
pudo el señor deán conseguirlo, y desde el patio oíamos claramente
los gritos de la muchedumbre y el paso de la caballería. La Giralda
cantó las cinco, cantó las seis, y la deplorable situación no cambiaba
ni las puertas se abrían, ni se desvanecía el rumor del pueblo. Yo creo
que si aquello se prolonga demasiado, me atrevo a decir dos palabras
al buen canónigo encerrador. Por fin no era yo sola la impaciente
otras muchas personas, detenidas como yo, se quejaban igualmente, y
todos nos dirigíamos en alarmante grupo al sacristán; pero sin
conseguir nada.
—Cuando Su Majestad haya salido de Sevilla —nos respondía—, o
se arma la de San Quintín, o todo quedará tranquilo.
Por fin, después de las siete, la puerta del Perdón se abrió y vimos
las Gradas y la gente que iba y venía sin tumulto. Yo me arrojé a la
calle como se arrojaría en el agua aquel cuyos vestidos ardieran
Miraba a un lado y otro; me comía con los ojos a cuantos pasaban
caminé apresuradamente hacia la Lonja y hasta el Alcázar; mi cabeza
se movía sin cesar, dirigiendo la vista a todo semblante humano. ¡Afán
inútil!... Yo buscaba y rebuscaba, y mi hombre no aparecía en ninguna
parte... Ya se ve... ¡las siete de la tarde! Se cansaría de aguardarme..
tendría que hacer...
Volví de nuevo a la catedral, recorrila toda, salí, di la vuelta por la
Lonja; pero, ¡ay!, si diera la vuelta a toda la tierra, creo que tampoco le
encontrara: ¡tal era la horrible insistencia de mi desgracia! Y, sin
embargo, hasta en las baldosas del piso, en el aire y en el sonido
hallaba no sé qué indicio misterioso de que él me había aguardado all
largas horas. Esto era para morir.
Después de mucho correr, senteme en un banco de piedra junto a
la Lonja. Tanto me enfadaba la gente que veía regresar del Alcázar y
de la puerta de San Fernando, que si las llamas de furor que
abrasaban mi pecho fueran materiales, de buena gana hubiera
vomitado fuego sobre los que pasaban ante mí. Venían de ver partir a
rey loco. Muchos se lamentaban de que se tratase de tal suerte a
soberano de Castilla. ¡Menguados! ¿porqué no tomaban las armas?
Sí, ¿por qué no las tomaban? Me habría gustado ver a todos los
habitantes de Sevilla destrozándose unos a otros.
La Giralda cantó otra hora, no sé cuál, y entonces me decidí a
tomar nueva resolución.
—Vamos a su casa —dije a Mariana.
—Es de noche, señora.
La infeliz no quería alejarse mucho de la casa. Pero no le contesté y
nos pusimos en camino para la calle del Oeste.
 —¿Y si no está? —indicó mi criada—. Porque es muy posible que
con estas cosas...
—¿Qué cosas?
—Estas revoluciones, señora.
—Si no hay nada.
—Pues... como se han llevado al rey después de volverle loco... En
el patio de la catedral decía uno que tendremos revolución mañana
cuando se marche el gobierno, porque el gobierno se marchará.
—Déjalo ir: no nos hace falta. Date prisa.
—Pues yo creo que nos llevaremos otro chasco.
—Si no está en su casa, le esperaré.
—¿Y si no vuelve hasta muy tarde?
—¡Hasta muy tarde le esperaré!
—¿Y si no vuelve hasta mañana?
—Hasta mañana le esperaré. No me muevo de su casa hasta que
le vea. Ahora, ahora sí que no se me escapa. ¿Concibes tú que se me
pueda escapar?
 XXIX

Diciendo esto, mi corazón, oprimido por tantos desengaños, se

ensanchaba, llenándose otra vez de esperanza, de ese don del cielo
que jamás se agota y que a nadie puede faltar.
—Pues no veo yo muy tranquila esta noche la ciudad de Sevilla —
indicó Mariana—. Si, como dicen, se ha marchado toda la tropa, puede
que nos despertemos mañana en un charco de sangre.
Echeme a reír, burlándome de sus ridículos temores, y seguimos
avanzando con bastante presteza hacia la calle del Oeste. Detúveme
antes de llamar en su casa, para que un breve descanso disimulara m
sofocación y se amortiguasen las llamaradas de mis mejillas.
—Sentémonos —dije a Mariana— al amparo de este árbol. Ahora
no hay gran prisa. Ya le tengo cogido. Estoy tranquila. Él ha de venir a
su casa. Ahora, ahora sí que le tengo en mi mano.
Cuando llamamos en la reja que daba entrada al patio, una muje
nos dijo que el señor Monsalud no estaba en casa.
—Pues tengo que hablarle precisamente esta noche, y le esperaré
—dije resueltamente.
Yo no reparaba en conveniencia alguna social. En el estado de m
espíritu, nada tenía fuerza para contenerme. Importábame ya muy
poco que me vieran, que me conocieran, que me señalasen con e
dedo, ni que el vulgo suspicaz y murmurador me hiciera objeto de
burlas y comentarios deshonrosos.
Al principio vacilaba en dejarme entrar la mujer que me abrió la
puerta; pero tanto insté y con tan arrogante autoridad me expresaba
que al fin me llevó a una sala baja. Allí estaba un viejecillo que, a la
débil claridad de un velón de cobre, arreglaba baúles y cajas, poniendo
en ellas libros, ropa y papeles. Era un tal Bartolomé Canencia. Él no
debía conocerme; pero se apresuró a saludarme con extremada
cortesía. Cual si comprendiera las ansias que yo padecía aquella
noche, dijo:
—No está en casa, ni puedo asegurar que venga pronto; pero s
que vendrá. Necesitamos arreglar todo para nuestra partida.
—¿Cuándo?
—Mañana. Nos vamos con el gobierno. ¿Quién se atreverá a
quedarse aquí después que marchen los ministros? Esto es un volcán
realista. En cuanto desaparezca el gobierno que obstruye el cráter, se
agitará con fuego y vapores vomitando horrores. ¡Pobre Sevilla! no ha
querido oír mis consejos, los consejos de la experiencia, señora; hela
aquí en poder del realismo más brutal. Este pueblo, tan célebre por su
riqueza y por su gracia como por sus procesiones, está infestado de
curas, y aquí los curas son ricos.
Ya me fastidiaba esta conversación, y hábilmente la desvié de la
política haciéndola recaer sobre mi objeto. Canencia contestó a mis
preguntas de una manera categórica.
—Esta tarde salimos juntos —me dijo—. Él se quedó en las Gradas
de la catedral, donde tenía una cita, y yo seguí hacia el Alcázar para
asistir a la salida de Su Majestad... Luego nos encontramos de nuevo
a eso de las siete: parecía disgustado, sin duda porque la cita no pudo
verificarse. Entramos en casa, y a poco salió para ver a Calatrava
Díjome que volvería a arreglar su equipaje, y aquí me tiene usted
arreglando el mío, señora, para lo que se le ofrezca mandar. De modo
que si usted desea algo en Cádiz, puede dar sus órdenes con toda
franqueza.
—Yo también pienso ir a Cádiz.
—¡Usted también! Bueno es que vayan todos —dijo con ironía
maliciosa— para que se haga con solemnidad el entierro de la
Constitución. Allí nació, señora, y allí le pondremos la mortaja; que
todo lo que nace ha de perecer... ¡Si se hubieran seguido mis
consejos, señora!... pero los hombres se han dejado enloquecer por la
ambición y la vanidad. Ya no existen aquellos repúblicos austeros
aquellos filósofos incorruptibles, aquellos sectarios de la honradez más
estricta y de la sabiduría ateniense, hombres que con un pedazo de
pan, un vaso de agua y un buen libro se pasaban la mayor parte de la
vida. Ahora todo es comer a dos carrillos, pedir destinos, figurar... en
una palabra, señora, ya no hay virtudes cívicas.
 —¿Y es seguro que el gobierno marcha mañana? —le pregunté
para desviarle de su fastidiosa disertación.
—Segurísimo. No puede ser de otra manera.
—¿Por tierra?
—Por agua, señora. Los ministros y diputados marchan en el vapor.
—¿Y usted y Salvador van también en el vapor?
—Iremos donde podamos, señora, aunque sea en globo por los
aires.
Él siguió arreglando sus maletas, y yo me abrumé en mis
pensamientos. En la sala había un reloj de cucú con su impertinente
pájaro, de esos que asoman al dar la hora y nos hacen tantas
cortesías como campanadas tiene aquella. Nunca he visto un
animalejo que más me enfadase, y cada vez que aparecía y me
saludaba mirándome con sus ojillos negros y cantando el cucú, sentía
ganas de retorcerle el pescuezo para que no me hiciera más cortesías
El pájaro cantó las nueve y las diez y las once, y con su insolente
movimiento y su desagradable sonido parecía decirme: «¿Qué tal
señora, se aburre usted mucho?»
Todo el que ha esperado comprenderá mi agonía. Aquel resbala
del tiempo, aquella veloz corrida de los minutos que pasan de nuestra
frente a nuestra espalda, amontonándose atrás el tiempo que estaba
delante, es para enloquecer a cualquiera. Cuando no hay un reloj que
lleve la cuenta exacta de la cantidad de esperanza que se desvanece
y de la paciencia que se gasta grano a grano, menos mal; pero cuando
hay reloj y este reloj tiene un pájaro que hace reverencias cada
sesenta minutos y dice cucú, no hay espíritu bastante fuerte para
sobreponerse a la pena. Ya cerca de las doce me decía yo: «¡Si no
vendrá!»
Habiendo manifestado mis dudas al viejo Canencia, que parecía
algo molesto por la duración de mi visita, me dijo:
—Puede que venga y puede que no venga. Seguramente estará
ahora en el café del Turco o en casa del duque del Parque. Ya es
media noche. Dentro de unas cuantas horas será de día, y... ¡en
marcha todo el mundo para Cádiz!
Mariana bostezaba, siendo imitada por Canencia. Yo me sostenía
intrépida, sin sueño ni cansancio, resuelta a estar un año en aque
sitio, si un año tardaba en venir mi hombre.
 —De todas maneras —dije a Canencia—, si se marcha mañana ha
de venir a arreglar su equipaje.
—Es muy posible, señora —me contestó secamente—. En caso de
que quiera usted retirarse, puede con toda confianza dejar el recado
verbal que guste. Yo se lo transmitiré puntualmente y con la fidelidad
de un verdadero amigo.
—Gracias.
—Le diré que ha estado aquí... Aunque usted no me ha dicho su
nombre, yo creo conocer a la persona con quien tengo el honor de
hablar, por haberla visto en Madrid algunas veces... ¿No es usted la
señora marquesa de Falfán?
Esta pregunta me hizo estremecer en mi interior, como si un rayo
pasara por mí. Pero dominándome con soberano esfuerzo, repuse
gravemente, con afectada vergüenza.
—Sí, señor: soy la marquesa de Falfán. Fiada en la discreción de
usted, me he aventurado a esperar aquí en hora tan impropia.
—Señora, yo soy un sepulcro, y además un amigo fiel de ese
excelente joven; y como le debo no pocos beneficios, a la amistad se
une la gratitud. Puede usted con toda libertad confiarme lo que quiera
Es muy posible que él no pueda verla a usted esta noche. Estará muy
ocupado, y sin duda el viaje de mañana trastorna sus planes, porque s
no recuerdo mal, hoy me dijo que pensaba despedirse de usted, por la
noche, en casa de doña María Antonia.
Al oír esto me quedé como mármol, y en seguida se me llenó e
corazón de ascuas. Desplegué los labios para preguntar: «¿dónde vive
esa doña María Antonia?» pero me contuve a tiempo comprendiendo
la gran torpeza que iba a cometer. Evocando toda mi habilidad de
cómica, dije:
—Así pensábamos; pero no ha podido ser.
El infame pájaro se asomó a su nicho, y burlándose de mí cantó la
una. Yo me ahogaba, porque a mis primeras fatigas se unía, desde
que habló aquel hombre, la inmensa sofocación de un despecho
volcánico de los celos que me mataban. En mi cerebro se encajaba
una corona de brasas resplandecientes; mi corazón chorreaba sangre
herido por mil púas venenosas. Mi afán, mi deseo más vivo era morde
a alguien.
Esperé más. Canencia seguía bostezando y Mariana dormitaba. Yo
sentía en mis oídos un zumbido extraño, el zumbido del silencio
nocturno, que es como un eco de mares lejanos, y deshaciéndome
esperaba. Habría dado mi vida entera por verle entrar, por pode
hablarle a solas un momento, arrojando sobre él las palabras, la furia
la hiel que se desbordaban en mí. A ratos balbucía terribles injurias
que siendo tan infames, a mí me parecían rosas.
El vil pajarraco volvió a chancearse conmigo, y haciendo la
reverencia más pronunciada y el canto más fuerte, anunció las dos.
—¡Las dos!... ¡pronto será de día! —exclamé.
—Fijamente no viene ya, señora. Es que se embarca con los
diputados —dijo Canencia, dando a entender con sus bostezos que de
buena gana dormiría un rato.
—¿Y a qué hora se embarcan los diputados?
—Al rayar el día: así se dijo anoche en el salón del Congreso
cuando se levantó la sesión, que ha durado treinta y tres horas.
Estuve largo rato dudando lo que debía hacer. Delante de m
pensamiento daba vueltas un círculo de fuego que alternativamente
en su lenta rotación, mostrábame dos preguntas. Primera: ¿Y si viene
después que yo me vaya? Segunda: ¿Y si se embarca en el muelle
mientras yo estoy aquí?
Yo veía pasar una pregunta, después otra. La segunda sustituía a la
primera, y la primera a la segunda en órbita infinita. Ambas tenían
igual claridad, ambas me deslumbraban y me enloquecían de la misma
manera. Yo, que por lo general me decido pronto, entonces dudaba
Cuando la voluntad se iba inclinando de un lado, el pensamiento
llamábame del otro, y así contrabalanceados los dos, ponían mi alma
en estado de terrible ansiedad. Largo rato permanecí en esta dolorosa
incertidumbre. Los minutos volaban, y acercándose aquel en que era
preciso resolver definitivamente, el silencio mismo llegó a impresiona
mi cerebro como un bramido intolerable, formado por mil voces. Oía e
latir de mi corazón como se oye un secreto que nos dicen al oído; m
sangre ardía, y por fin aquella misma palpitación de mi alborotado
seno fue como una voz que hablaba diciéndome: «Anda, anda.»
El pájaro, riendo como un demonio burlón, me saludó tres veces
con su cortesía y su infernal cucú. Eran las tres.
—Pronto será de día —dijo Canencia dejando caer sobre el pecho
su cabeza venerable.
Levanteme. Estaba decidida. Pareciome que don Bartolomé, a
verme dispuesta a partir, vio el cielo abierto. Despedime de é
bruscamente, y salimos.
—¿Adónde vamos, señora? —me dijo Mariana—. ¿No es hora de
retirarnos ya a descansar?
—Todavía no.
—¡Señora, señora, por Dios!... Está amaneciendo. No hemos
cenado, no hemos dormido...
—Calla, imbécil —le dije clavando mis dedos en su brazo—. ¡Calla
o te ahogo!
 XXX

Amanecía, y multitud de hombres de mal aspecto vagaban por la

calle. Veíanse paisanos armados, y muchos guapos de la Macarena y
de Triana. Mi criada tuvo miedo; pero yo no. Repetidas veces nos
vimos obligadas a variar de rumbo para evitar el encuentro de algunos
grupos en que se oía el ronco estruendo de ¡vivan las caenas!, ¡muera
la nación!
Llegamos por fin al río. Ya el día había aclarado bastante, y desde
la puerta de Triana vimos la chimenea del vapor, que despedía humo.
—Si esos barcos de nueva invención humean al andar —dije—, e
vapor se marcha ya.
Desde la puerta de Triana a la Torre del Oro se extendía un cordón
de soldados de artillería. En la puerta de Jerez había cañones. Nada
de esto me arredraba, porque mi exaltación me infundía grandes
alientos, y hablando al oficial de artillería, logré pasar hasta la orilla
donde algunas tablas, sostenidas sobre pilotes, servían de muelle. E
vapor bufaba como animal impaciente que quiere romper sus ligaduras
y huir. Multitud de personas se dirigían al embarcadero. Reconocí a
Canga-Argüelles, a Calatrava, a Bertrán de Lis, a Salvato, a Galiano y
a otros muchos que no eran diputados.
«Él se irá también —pensé—. Vendrá aquí de seguro... Pero no, no
creo que se me pueda escapar.»
Una idea grandiosa cruzó por mi mente, una de esas ideas
napoleónicas que yo tengo en momentos de gravedad suma
Ocurriome embarcarme también en el vapor, si le veía partir. No tenía
equipaje, ¿pero qué me importaba? Mariana se quedaría para llevarlo
después.
Acerqueme a Calatrava, que se asombra mucho de verme.
—Quiero un puesto en el vapor —le dije.
 —¿También usted se marcha?... ¿De modo que...?
—Temo ser perseguida. Estoy muerta de miedo desde ayer. Me han
amenazado con anónimos atroces.
—¿Ha preparado usted su equipaje?
—He preparado lo más preciso: el viaje es corto. Mi criada se queda
para arreglar lo que dejo aquí.
—También nosotros dejamos nuestros equipajes, porque no caben
en el vapor. Irán en aquella goleta.
—¿Me hace usted un sitio, sí o no?
—¿Un sitio? Sí, señora. Dejando el equipaje... El gobierno ha
fletado el buque. Puede usted venir.
Esto se llama proceder pronto y con energía... Pero observé a todos
los que llegaban, y no le vi. A cada instante creía verle aparecer.
—No puede tardar —dije, después que di mis órdenes a Mariana—
Ahora sí que es mío.
Mariana hacía objeciones muy juiciosas; pero yo a nada atendía
Estaba ciega, loca.
—¿Y si no se embarca? —me dijo mi criada—. Todavía no ha
venido...
—Pero ha de venir... A ver si está por ahí el duque del Parque.
Miramos las dos en todos los grupos, y no vimos al duque.
—¿El señor duque del Parque no va a Cádiz? —pregunté a
Salvato.
—El señor duque no se ha atrevido a votar el destronamiento.
—¿Y qué?
—Que los que no votaron no se creen en peligro, y seguirán en
Sevilla.
—De modo que Su Excelencia...
—No tengo noticia de que se embarque con nosotros.
—Venga usted —me dijo Calatrava alargándome la mano para
llevarme a la cubierta del buque.
—Entre usted, amigo, entre usted, que aún tengo que decir algo a
mi criada.
—Parece que vacila usted...
—En efecto..., sí..., no estoy decidida aún.
No, no podía entrar en aquel horrible bajel que iba a partir silbando
y espumarajeando, sin llevar al que turbaba mi vida. Yo les vi entra
uno tras otro, les conté; ni uno solo escapó a mi observación, y ¡él no
estaba! ¡Siempre ausente, siempre lejos de mí, siempre en dirección
diametralmente opuesta a la dirección de mis ideas y de m
apasionada voluntad! Esto era para enloquecer completamente, y digo
completamente, porque yo estaba ya bastante loca. Mi desvarío
insensato aumentaba como la fiebre galopante del enfermo solicitado
por la muerte.
Se embarcaron, ¡ay! Vi al horrendo vapor separarse del muelle; v
moverse las paletas de sus ruedas machacando y rizando el agua, le
oí silbar y mugir echando humo, hasta que emprendió su marcha
majestuosa río abajo.
No yendo él, no podía causarme aflicción quedarme en tierra. É
estaba también en Sevilla.
—Ahora —dije—, ahora no es posible que lo pierda otra vez. S
tengo actividad e ingenio, pronto saldré de esta angustiosa situación.
No quise detenerme, como el vulgo que se extasiaba contemplando
el humo del vapor que conducía hacia el postrer rincón de España e
último resto del liberalismo. Como aquel humo en los aires, así se
desvanecía en el tiempo la Constitución... Pero en mi mente no podían
fijarse ni por un instante estas ideas.
Érame forzoso pensar en otras cosas, y en la realidad de mi ya
insoportable desdicha. ¿A dónde debía ir? En los primeros momentos
después del embarque no pude determinarlo, y vagué breve rato por la
ribera, hasta que me obligaron a huir los excesos de la salvaje
muchedumbre, que se precipitó sobre los equipajes de los diputados
apoderándose de ellos y saqueándolos en presencia de la poca tropa
que había quedado en el muelle.
Al mismo tiempo sentí el clamor de las campanas echadas a vuelo
en señal de que Sevilla había dejado de pertenecer al gobierno
constitucional, y en cuerpo y alma pertenecía ya al absolutismo
¡Cambio tan rápido como espantoso! El pronunciamiento se hizo entre
berridos salvajes, en medio del saqueo y del escándalo, al grito de
¡muera la nación! La verdad es que los alborotadores hacían poco
daño a las personas; pero sí robaban cuanto podían. Al entrar por la
puerta de Jerez, procuré apartarme lo más posible de la turbulenta
oleada que marchaba hacia el corazón de Sevilla, con objeto, según
oí, de destrozar el salón de sesiones y el café del Turco, donde se
reunían los patriotas.
 Lejos de desmayar yo con tantas contrariedades, el insomnio y e
continuo movimiento, parecía que la misma fatiga me daba alientos
prodigiosos. No sentía el más ligero cansancio, y mi cerebro, como
una llama cada vez más viva, hallábase en ese maravilloso estado de
actividad que es para los poetas, para los criminales y para los que se
ven en peligro, la rápida inspiración del momento. Yo sentía en mí un
estro grandioso, avivado por mis contrariadas pasiones, mi rencor y m
despecho. Tenía la penetrante vista del genio, y había llegado a ese
momento sublime en que los más profundos secretos de nuestro
destino se nos muestran con claridad espantosa. Mi pensamiento
como la aguja magnética de una brújula, señalaba con insistencia la
casa del marqués de Falfán.
—¡Oh, allí, allí... he de encontrar la solución de este horrible
problema!
 XXXI

Y corriendo hacia la casa, no soñaba ya con las delicias de un

encuentro feliz y de una amable reconciliación, sino con proporcionar a
mi alma el inefable, el celestial, el infinito regocijo de un escándalo, de
una escena, de una de esas venganzas de mujer que son la Ilíada de
corazón femenino. No sé si me equivocaré juzgando por mí de todas
las mujeres; pero pienso firmemente que ninguna, por muy tímida que
sea, deja de sentir en momentos dados, y cuando se discuten asuntos
del corazón, el poderoso instinto de la majeza. La maja, digan lo que
quieran, no es más que lo femenino puro. De mí puedo asegurar que
en aquel instante me sentía verdulera.
«Tengo la seguridad —decía— de que le encontraré allí. El corazón
me lo dice... Es precisamente lo que necesito; es la satisfacción más
preciosa y agradable de mi inmenso afán, el desahogo de mi pecho
semejante a un volcán sin cráter; el consuelo de todas mis penas
Hablaré, gritaré, vomitaré injurias, ¿qué digo injurias?, verdades. Diré
todo lo que sé: abriré los ojos de un marido crédulo y bonachón
arrancaré la máscara a una hipócrita; confundiré a un ingrato... En
suma, estaré en mi elemento... ¡¡Ahora, Santo Dios de las venganzas
ahora sí que no se me puede escapar!!»
Al dirigirme a la plaza de la Magdalena, donde vivía el marqués, vi a
dos o tres patriotas que eran llevados presos por el pueblo con una
cuerda al cuello. ¡Pobre gente! Entre ellos vi a Canencia, que me
dirigió al pasar una mirada suplicante; pero no hice caso y seguí. Cas
arrastrando a Mariana, que apenas podía seguirme de puro cansada y
soñolienta, llegué a casa de Falfán.
En el patio encontré al marqués, que al punto que me vio
asombrose de la alteración de mi semblante, creyendo que ocurría
algún grave accidente.
 —Señora —me dijo ofreciéndome una silla—, no extraño que esa
gente mal educada... Se están cometiendo toda clase de excesos en
la desgraciada Sevilla.
—No es eso, no. Si no me ha pasado nada.
—Señora, su rostro de usted me indica desasosiego, agitación.
—Es verdad; pero...
—Está usted muy intranquila.
—Intranquila no: estoy furiosa.
Después de decir esto y de romper en seis pedazos mi abanico
que ya lo estaba en cuatro, procuré tomar una actitud aparentemente
serena, pues el caso requería en mí la grave majestad del que
condena, no la atolondrada cólera y pueril turbación del condenado.
—¿Y por qué está usted furiosa? —me preguntó el marqués
confundido—. ¿En qué puedo servir a usted?
—¡Yo sé que está aquí!... —dije mirando al marqués de un modo
que le aterró.
—¿Quién?
—¡Oh!, ¿quién?... será preciso que yo hable, que lo diga todo...
—Señora, no comprendo una palabra.
—Llame usted a la señora marquesa, y quizás ella me comprenda
—repuse con amargo sarcasmo.
—Andrea no está en casa.
Al oír esto sentí un sacudimiento. Nuevo y más doloroso cambio en
mis ideas, en mi voluntad, en mi cólera, en mis planes; nuevo
movimiento de la aguja magnética que brujuleaba en mi corazón
marcándome el derrotero en medio de la tempestad... El marqués no
podía tener interés en negarme a su esposa. Así lo comprendí a
momento, y sin vacilar un instante, dije:
—¿Ha ido a la casa de doña María Antonia?
—Precisamente, allí está —manifestó Falfán en tono de confianza
honrada y tranquila que hubiera cautivado a otra persona más irritada
que yo—. La señora doña María Antonia se puso anoche mala, y m
esposa fue a acompañarla un ratito. A las diez estaba de vuelta.
—¿A las diez?
—Pero sin duda hoy se agravó la señora doña María Antonia
porque al rayar el día vinieron a buscar a Andrea y allá está
¿Encuentra usted en esto algo de extraño?
 —No, señor, nada —dije levantándome—. ¿Y dónde vive esa doña
Antonia?
—En la calle que sale a la puerta de Carmona, número 26. ¿Pero
se va usted sin explicarme el motivo de su visita, su agitación...?
— Sí, señor, me voy.
—Pero...
—Adiós, señor marqués.
Quiso detenerme; pero rápida como un pájaro fugitivo, le dejé y sal
de la casa.
—A la calle que sale a la puerta de Carmona, número 26 —dije a
Mariana, que me seguía durmiendo; y para mí en el horroroso vértigo
que formaban mis pensamientos y mi marcha: «Ahora sí que de
ningún modo se me puede escapar.»
Yo saboreaba de antemano las horribles delicias del escándalo que
iba a dar, de la venganza que tomaría, de las palabras que saldrían de
mi boca, como el humo y la lava de un volcán en erupción. Me
deleitaba con aquella copa de amarguras que se convertía en copa
llena del delicioso licor de la venganza. Había llegado al extremo de
recrearme en el veneno de mi alma, y de hallar delicioso el fuego que
respiraba. Seguía teniendo las mismas ganas de morder a alguien, y
creo que mi linda boca tan codiciada, habría sido un áspid si en carne
humana hubiera posado sus secos labios.
Mariana, que a Sevilla conocía, me llevó hacia la puerta de
Carmona, yo no sé por dónde ni en cuánto tiempo. Había yo perdido la
noción de la distancia y del tiempo. Vi una calle larga y solitaria, con
muchas rejas verdes llenas de tiestos de albahaca. Vi una fila de
casas de fachada blanca iluminadas por el sol, y otra línea de casas
en la sombra. Yo buscaba el número 26, cuando sentí pisadas de
caballos. Delante de mí, como a cuarenta pasos, abriose una gran
puerta y salieron tres hombres a caballo. ¡Era él!
Corrí, corrí... Iba vestido con el traje popular andaluz, y su figura era
la más hermosa que puede imaginarse. Los otros dos vestían lo
mismo. Caracolearon un instante los corceles delante de la casa, y en
seguida emprendieron precipitadamente la carrera en dirección a la
puerta de Carmona.
Yo corría, corría, y al mismo tiempo gritaba. Mariana, que no había
perdido el juicio, me detuvo enlazando con sus dos brazos mi talle... M
furor estalló con un grito salvaje, con una convulsión horrible y este
apóstrofe inexplicable: «¡Ladrones! ¡Ladrones!»
En el mismo momento en que yo rugía de este modo, dos mujeres
se asomaban a la ventana de la casa y saludaban a los jinetes con sus
abanicos. Él miró repetidas veces hacia atrás y saludaba también
sonriendo. Vi brillar el lente de doña María Antonia, vi los negros ojos
de Andrea... ¡Oh, Satanás, Satanás!
Seguí hasta ponerme debajo de la ventana; pero esta se cerró
Seguí corriendo un poco más. Un grupo de hombres feroces apareció
por una bocacalle. Su aspecto infundía pavor; pero yo me adelanté
hacia ellos, y señalando a los tres jinetes que huían a escape fuera de
la puerta, entre nubes de polvo, grité con toda la fuerza de mis
pulmones:
—¡Que se escapan!... Corred... Corred tras ellos... ¡Que se
escapan!... Los patriotas, los más malos de todos, los ateos
blasfemos, los republicanos, los masones, los regicidas, los enemigos
del rey..., los que querían matarle... Corred y cogedles... Yo tengo
dinero... Mil duros al que les coja... ¡En nombre de la religión!... ¡En
nombre de las caenas!... Vamos, vamos tras ellos... ¡Que se escapan!
A medida que hablaba, iba desapareciendo en mi espíritu la noción
de lo externo, y me sentía envuelta en tinieblas o en llamas, no sé en
qué; me sentía caer en un hondo infierno lleno de demonios
sumergirme en abismos de negro delirio, de fiebre, de sueño o muerte
pues no puedo expresar bien lo que era aquello.
Perdí el conocimiento.
 XXXII

Mi dolorosa enfermedad, que me puso al borde del sepulcro, duró

cuarenta días, de los cuales no sé cuántos pasé en terrible crisis, sin
conciencia de las cosas, atormentada por la fiebre. Mi sangre
enardecida había descompuesto en tales términos las funciones de m
cerebro, que en aquellos angustiosos días no vivía con mi vida propia
sino con el mismo fuego mortífero de la enfermedad. Asistiome uno de
los primeros médicos de Sevilla.
Cuando salí del peligro y hubo esperanzas de que aún podría
seguir mi persona fatigando al mundo con su peso, halleme en
tristísimo estado, sin memoria, sin fuerzas, sin belleza. Mas empecé a
recobrar muy lentamente estos tesoros perdidos, y con ellos volvían
mis pasiones y mis rencores a aposentarse en mi seno, como después
de una inundación, y cuando las aguas se retiran, aparece lentamente
la tierra, dibujándose primero los altos collados, luego las suaves
pendientes, y, por último, el llano. Así, pasada aquella avenida de
sangre que envolvió mi pensamiento en turbias olas venenosas, fue
apareciendo poco a poco todo lo existente antes del 13 de junio.
Una imagen descollaba sobre todas las que me perseguían cuando
mi fantasía, como un borracho que recobra la claridad de sus sentidos
empezó a presentarme lo pasado. Esta imagen era la de la huérfana, a
quien supuse corriendo sin cesar por campos y ciudades, buscando lo
que no había de encontrar. ¿Acaso el tormento de ella no era tan
grande o quizás mayor que el mío? Pero yo no me hacía cargo de
esto; y lejos de sentir lástima de mi víctima, echaba leña a la hoguera
de mis rencores, discurriendo mil defectos y fealdades en el carácte
de la hermana de Salvador, para deducir que sus angustias le estaban
muy bien merecidas. ¡Qué desatinos tan horribles pensé con este
motivo! Parece mentira que la exaltación de mi ánimo me llevara hasta
los últimos desvaríos, hasta el sacrilegio y la blasfemia.
«Es muy posible —decía yo— que mis horribles angustias hayan
sido causadas por las maldiciones de esa mujer. Al verse engañada
habrá pedido a Dios mi castigo, y Dios, no hay duda, hace caso de los
hipócritas... ¡Ah, los hipócritas! ¡Perversa raza! Son capaces con sus
fingidas lágrimas de engañar al mismo Dios y compelerle a castigar a
los buenos.»
A estas horrorosas ideas, hijas de una turbada razón, añadía otras
quizás más sacrílegas. Mi enfermedad, que parecía un aviso del cielo
no me había corregido; antes bien, cuando resucité estaba más
intolerante, más soberbia, y proyectaba nuevos planes para vencer la
tenaz contrariedad de mi destino. Lejos de desconfiar de mis fuerzas y
de acobardarme, tenía fe mayor en ellas y me vanagloriaba
suponiendo una inmediata victoria.
«Me han ocurrido tantos desastres —decía— porque he sido una
tonta. Pero ahora..., ¡oh!, ahora, yo me juro a mí misma que moriré o
he de atraparle... Iré a Cádiz.»
Cuando esto decía, finalizaba julio y la temperatura de Sevilla era
irresistible. El médico me ordenó que buscase en la costa aires más
templados.
Los franceses se habían establecido ya en Sevilla, donde reinaba
un orden perfecto. En toda España, y principalmente en algunos
puntos privilegiados de la tragedia, como Manresa y la Coruña, corría
la sangre a raudales. Los dos furibundos partidos se herían
mutuamente con impía crueldad. Pero los ejércitos de ambas naciones
no habían empeñado ninguna lucha verdaderamente marcial y
grandiosa. El nuestro se desbandaba como un rebaño sin pastores, y
el francés iba ocupando las ciudades desguarnecidas y dominando
todo el país sin trabajo y sin heroísmo, sin sangre y sin gloria. Sus
victorias eran ramplonas y honradas; su proceder dentro de los
pueblos, templado y noble. Era aquel ejército como su jefe, leal y sin
genio; un ejército apreciable, compuesto de cien mil buenos sujetos
que no conocían el saqueo, pero tampoco la gloria. ¡Detestable suerte
la de España!... ¡Haber hecho temblar al coloso, y sucumbir ante un
hijo del conde de Artois, ante un pobre emigrado de Gante!
¡A Cádiz, a Cádiz! Estas palabras compendiaban todo m
pensamiento en aquellos días. Empecé a disponer mi viaje con gran
prisa, y a principios de agosto nada tenía que hacer ya en Sevilla.
Mi belleza recobraba al fin su esplendor. Y no era esto poco triunfo
porque me había quedado como un espectro. ¡Con cuánto alborozo
veía yo despuntar de día en día la animación, la gracia, la frescura, la
viveza, todos los encantos de mi fisonomía, que iban mostrándose
como flores que se abren al cariñoso amor del sol! Yo no cesaba de
mirarme al espejo para observar los progresos de mi restauración, y
casi, casi estoy por decir que me encontraba más guapa que antes de
mi enfermedad. Perdóneseme este orgullo vano; pero si Dios me hizo
así, si me dio hermosura y gracias, ¿por qué no he de decirlo para que
lo sepan los que no tuvieron la dicha de conocerme?
El conde de Montguyon se me presentó en el momento de parti
para Cádiz. ¡Oh, feliz encuentro! Mi don Quijote, que había sido
ascendido a jefe de brigada, me acompañó en casi todo el camino de
Sevilla a la costa, mostrándose en extremo orgulloso por creer próximo
el momento de mi definitiva conquista, y yo cuidaba no poco de
confirmarle en esta creencia, porque quería tenerle muy dispuesto a
servirme en negocios difíciles. Hablamos también de política y de la
Ordenanza de Andújar, en que Su Alteza recomendaba la mayo
templanza a los absolutistas, habiéndoles disgustado por esto. Pero e
tema más agradable a mi caballero era el amor.
Según se expresaba, su bello ideal estaba a punto de realizarse. E
país ardiente, el territorio pintoresco, la dama hermosa, nada faltaba
para que la leyenda fuese completa. Pero yo, esmerándome en
fomentar sus esperanzas, era sumamente avara de concesiones. M
Ordenanza de Andújar prescribía también la moderación. Ya me había
yo instalado en el Puerto cuando, apremiada por el conde, le revelé la
causa de mis ardientes deseos de penetrar en Cádiz.
—Un hombre —le dije— que antes poseía mi confianza
administrando los bienes de mi casa; un mayordomo que supo
servirme algún tiempo lealmente para engañarme después con más
seguridad, huyó de Madrid, robándome gran cantidad de dinero
muchas alhajas de valor y documentos preciosos. Ese hombre está en
Cádiz...
—Pero en Cádiz hay tribunales de justicia, hay autoridades...
—En Cádiz no hay más que un gobierno moribundo, que para
prolongar su vida entre agonías se rodea de todos los pillos.