2023 年 12 月 首 都 医 科 大 学 学 报 Dec.

2023
第 44 卷 第6期 Journal of Capital Medical University Vol. 44 No. 6

[ doi: 10. 3969 / j. issn. 1006-7795. 2023. 06. 021] ·基础研究·

肿瘤相关基因 ADAM15 在结肠癌中一个非同义变异对细胞黏附

及侵袭的影响

王 晶1 贺礼兵1 张国燕1 刘筱涵2 程 杉1∗

(1. 首都医科大学基础医学院医学遗传学与发育生物学学系,北京 100069; 2. 北京市十一学校,北京 100039)

【摘要】 目的 解析 ADAM15 基因单核苷酸变异(single nucleotide variant,SNV)在结肠癌肿瘤发生发展相关的细胞学过程中的具

体功能作用。 方法 首先对具有侵袭表型的结肠癌患者癌组织及癌旁组织全外显子组测序,然后进行野生型 / 突变型 ADAM15 结
肠癌 HCT-8 细胞系细胞功能实验,进而完成野生型 / 突变型 ADAM15 细胞系的转录组测序分析。 结果 采用全外显子组测序在预
后不良的患者中检出 ADAM15 基因 SNV rs6427128,提示可能影响结肠癌的进展。 细胞功能实验显示,rs6427128 损失了 ADAM15 所
具有的上调细胞侵袭能力的作用,而使细胞黏附能力增加约 26%。 转录组测序分析显示,与野生型相比,rs6427128 过表达细胞的差
异表达基因富集在细胞黏附、DNA 的复制与转录、炎症反应等多种细胞生物学过程,提示 rs6427128 变异可能通过促进肿瘤细胞的
黏附参与调节肿瘤微环境的重塑,从而影响结肠癌的进展。 结论 结合适当的细胞模型和较为精细的分析方法,深入解析临床样
本中所检出的一些高频非同义潜在功能性变异体,可以为肿瘤相关基因的结构功能关系提供有益的提示性实验室数据。
【 关键词】 结肠癌;ADAM15 基因;细胞黏附;单核苷酸变异;肿瘤微环境
【 中图分类号】 R753. 3 【 文献标识码】 A

A nonsynonymous single nucleotide variant of the tumor-related gene ADAM15 in

colon cancer and its impact on cell adhesion phenotype
Wang Jing 1 ,He Libing 1 ,Zhang Guoyan 1 ,Liu Xiaohan 2 ,Cheng Shan 1∗
( 1. Department of Medical Genetics and Developmental Biology, School of Basic Medical Sciences, Capital Medical University, Beijing
100069,China; 2. Beijing No. 11 High School, Beijing 100039,China)

【 Abstract】 Objective To elucidated the specific functional roles of the a disintegrin and metalloproteinase 15 ( ADAM15) gene single
nucleotide variant (SNV) in the cellular processes associated with the development of colon cancer through combination of high throughput
sequencing and suitable cellular models. Methods We initially performed whole exome sequencing on cancerous tissues and adjacent tissues
from colon cancer patients exhibiting invasive phenotypes. Subsequently, functional experiments were conducted using wild-type / mutant
ADAM15 colon cancer HCT-8 cell lines. This was followed by transcriptome sequencing analysis of the wild-type / mutant ADAM15 cell lines.
Results The whole exome sequencing study identified a highly recurrent SNV, rs6427128, located at the ADAM15 gene, which
demonstrated a significant association with adverse prognosis in patients, suggesting its potential influence on the progression of colon cancer.
The functional assays utilizing cells overexpressing the variant gene, indicated that the expression product of this variant gene lost the effect
of upregulating cell invasion capabilities while increased cell adhesion by approximately 26% compared to wild-type ADAM15 cells. To
comprehensively investigate the mechanisms underlying the impact of rs6427128 variation on colon cancer cell phenotypes, we performed
transcriptome sequencing analysis on HCT-8 cells transfected with the overexpressed variant protein. The results revealed differential
expression genes were enriched in various cellular biological processes, including cell adhesion junction pathways, DNA replication and
transcription, as well as inflammatory responses, in comparison to wild-type samples. Conclusion This study indicated that the rs6427128
variant may alter the tumor microenvironment by affecting tumor cell adhesion and contributed to extensive transcriptional changes in tumor
cells, ultimately promoted the malignant phenotype of colon cancer. Although individual gene mutations in malignant tumors often do not act
as primary causative factors, high-frequency recurrent variants detected in clinical samples can provide valuable molecular candidates for
unraveling the structural-functional relationships of tumor-related genes. Using rs6427128 as an example, in combination with appropriate
cell models and refined analytical methods, some potential functional variants can yield informative laboratory data regarding their specific
roles in cellular processes related to the development of colon cancer, such as proliferation, adhesion, invasion, and metastasis.

∗Corresponding author, E-mail: chengs@ ccmu. edu. cn

网络出版时间:2023-12-13 18 ∶05 网络出版地址:https: / / link. cnki. net / urlid / 11. 3662. R. 20231212. 1730. 022
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【 Key words】 colon cancer; a disintegrin and metalloproteinase 15 ( ADAM15 ) gene; cell adhesion; single nucleotide variation
( SNV) ; tumor microenvironment

结肠癌是全球第三常见的癌症,据报道 [1] ,2020 对的 2 例癌旁组织( N1 ~ N2) ,临床样本资料详见表

年中国结 肠 癌 新 发 病 例 达 55. 5 万, 死 亡 病 例 28. 6 1。 本研究通过首都医科大学附属北京友谊医院伦理
万,分别位居恶性肿瘤的第 2 位和第 5 位。 结肠癌有 委员会审批( 审批号:2017-P2-013-03) 。
高度侵袭性,其可渗透到结肠和直肠组织的深层,通 1. 2 细胞培养
过淋巴系统和血液循环扩散转移 [2]
。 其恶性侵袭和 人结肠癌细胞 HCT-8 购自美国模式菌种收集中
转移是当前临床治疗的极大挑战。 心,使用含 10% ( 体积分数) 胎牛血清的 RPMI-1640
结肠癌是一种复杂的疾病,其发病不仅与生活方 完全培养基,培养于 37 °C、5% ( 体积分数) CO 2 培养
式、饮食习惯等多种环境因素相关,也与遗传因素密 箱中。 以对照质粒 pcDNA3. 1、ADAM15 过表达质粒
切相关。 众多参与肿瘤发生的癌基因及抑癌基因也 Flag-ADAM15wt-pcDNA3. 1、ADAM15 突 变 体 表 达 质
与结肠癌的发生发展密切相关。 去整合素和金属蛋 粒 Flag-ADAM15mt-pcDNA3. 1( 通用生物) 转染 HCT-
白酶 ( a disintegrin and metalloproteinase, ADAM ) 家 8 细胞,用于后续实验。
族,作为一类跨膜蛋白,包括多个成员,与包括结肠癌 1. 3 Western blotting
在内的多种癌症的侵袭和转移过程密切相关 [3-4]
。 细胞裂解液首先通过 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶
ADAM 家族蛋白主要包括金属蛋白酶[ metallo- 电泳使蛋白质样本分离,再将凝胶上的蛋白电泳转移到
proteinase, adamalysin 2 _ like peptidase ( reprolysin ) ] 固相载体 PVDF 膜上,封闭液(脱脂牛奶)室温封闭 1 h;
域、重复 脯 氨 酸 前 体 肽 [ reprolysin propeptide ( Pep _ 加入一抗(ADAM15,ab137387,Abcam 公司,英国) 和内
M12B_propep) ] 域、去整合素 ( disintegrin) 域以及富 参 GAPDH 抗体(TA-08,北京中杉金桥生物技术有限公
含半胱氨酸[ ADAM cysteine-rich( ADAM_CR) ] 域等 司)孵育过夜,摇床充分洗涤后加入相应二抗室温孵育 1
功能域 [5] 。 其中金属蛋白酶域作为 ADAM 家族最重 h,充分洗涤后加入 ECL 发光液,曝光,数码凝胶图像处
要的功能域,其主要负责切割和处理细胞表面蛋白 理系统扫描图像。
质,在和其他功能域的协调与配合下,完成调控细胞 1. 4 细胞增殖实验
黏附、蛋白信号转导等功能 [6] 。 细胞以 2. 0 × 10 3 个 / 孔接种于 96 孔板中,培养箱
作为 ADAM 家族的基因之一,ADAM15 所编码的 中培养 1 ~ 5 d;96 孔板中加入用双无培养基稀释 10
跨膜蛋白( 即 ADAM15) ,在细胞黏附、迁移、增殖、凋 倍的 CCK-8 溶液,100 μL / 孔;孵育 0 ~ 2 h;用酶标仪
亡,以及调控细胞炎症反应和免疫微环境等方面具有 在 450 nm 波长处检测吸光度值( OA 值) 。
广泛作用 [7-8] 。 已有文献 [9] 报道,ADAM15 基因在乳 1. 5 细胞黏附实验
腺癌、肺癌、结肠癌和膀胱癌等组织中异常表达,提示 96 孔板铺入 4 μL Matrigel,过夜烘干。 加入无血
ADAM15 的异常表达与肿瘤预后不良相关。 因此,本 清培养基水化 40 min 后,2 × 10 5 个细胞 / 孔接种细胞。
研究选取具有侵袭表型的结肠癌患者的临床肿瘤组 培养箱孵育 40 min 后去除培养基,PBS 清洗 3 次;黏
织样本,通过全外显子组测序 ( whole exome sequen- 附于基底膜上的细胞固定染色,光学显微镜下观察、
cing,WES) 发现并验证了 ADAM15 基因非同义单核 拍照。 计数黏附的细胞数,结果取均值。
苷酸变异( single nucleotide variation,SNV) rs6427128 1. 6 细胞侵袭实验
( NM_207194:exon6:c. A572C:p. K191T) ,进一步通 将 Transwell 小室 置 于 24 孔 培 养 板 中, 铺 入 40
过细胞功能实验揭示该 SNV 对结肠癌细胞增殖、黏 μL Matrigel,过夜烘干。 小室中加入无血清培养基水
附、侵袭及转移等恶性表型的影响。 化基底膜 40 min 后,在小室下层加入 600 μL 含 20%
1 材料与方法 ( 体积分数) 胎牛血清的 RPMI-1640 培养基,上层加
入 200 μL 细胞悬液。 培养 48 h 后取出小室,固定染
1. 1 临床样本收集 色,光 学 显 微 镜 下 观 察、 拍 照。 随 机 选 取 3 个 视 野
本研究采集首都医科大学附属北京友谊医院 4 ( 放大 40 倍) ,计数穿过小室的细胞数,结果取均值。
例结肠癌患者的肿瘤组织( T1 ~ T4) ,以及与肿瘤配
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表 1 研究纳入结肠癌患者临床信息
Tab. 1 Clinical Information of Included Patients
Number Gender Age / a Smoking history Alcohol history Initial symptoms Bleeding

Abdominal distention,
T1 / N1 Male 63 No No nausea, vomiting, reduced No
gas discharge

Abdominal discomfort, a-
T2 / N2 Male 75 No No No
nemia
T3 Male 76 No Yes Intestinal obstruction Yes
T4 Male 77 Yes No Diarrhea Yes
Number Perforation Obstruction Preoperative staging Tumor location Differentiation Depth of invasion
Transverse colon, hepatic Invading muscularis
T1 / N1 No No cT4NxM1 Moderately differentiated
flexure adenocarcinoma and serosa

Descending colon near

through muscularis and se-
T2 / N2 No No T4N1M0 splenic flexure, Moderately differentiated
rosa
transverse colon

Invasion through muscu-

T3 No Yes cT4bN1M1a Ascending colon Poorly differentiated
laris and serosa
Invasion through muscu-
T4 No No T3NxM0 Ascending colon Moderately differentiated
laris and serosa

1. 7 细胞迁移功能检测 1. 10 高通量数据分析
1. 5 × 10 6 个 / 孔细胞接种 6 孔板,使细胞在培养 (1) WES 数据:使用 Trimmomatic( 版本:0. 39) 用
过夜后融合率达到 100 %;以 200 μL 枪头在每个孔 于输入 Fasta 序列进行成对匹配和筛选,去掉测序接
中划一条直线,用 PBS 清洗掉划线时脱落的细胞,加 头。 使用 BWA ( 版本:1. 5) 读段拼接和比对。 使用
入含 10 % ( 体积分数) 胎牛血清的 RPMI-1640 培养 SAMtools( 版本:1. 15. 1) 进 行 二 进 制 格 式 转 换 和 排
基;培养箱中培养不同时间点,在显微镜下观察划痕 序。 使用 PICARD( 版本:2. 2. 1) 软件标记重复,去除
生长情况并拍照。 Image J 软件测量划痕宽度,结果 聚合酶 链 反 应 ( polymerase chain reaction, PCR) 重
取均值。 复。 使用 GAKT ( 版 本: 4. 0 ) 进 行 变 异 检 测。 使 用
1. 8 WES Annova 进行功能注释。
从癌 / 癌旁组织样本中提取总 DNA。 将提取的 (2) 全 转 录 组 测 序 数 据: 使 用 Trimmomatic ( 版
DNA 样本进行机械消化,将 DNA 分成 150 bp 左右。 本:0. 39) 用于输入 Fasta 序列进行成对匹配和筛选,
使用 SureSelect Human All Exon V8 进行外显子捕获; 去掉测序接头。 使用 HISAT2( 版本:HISAT2 2. 2. 0)
将捕获的外显子 DNA 片段连接到测序适配器上,形 对处理后数据读段进行参考基因组比对。 使用 SAM-
成 DNA 文库,扩增文库,使用 Illumina Hiseq X10 平 tools( 版本:1. 15. 1) 进行二进制格式转换和排序。 使
台对文库进行双末端测序(2 × 150 bp) 。 用 DESeq2( 版本:1. 40. 2) 进行 RNA-seq 差异表达基
1. 9 全转录组测序 因分 析。 对 基 因 功 能 和 通 路 分 别 进 行 基 因 本 体
提取 细 胞 总 RNA。 使 用 Nanodrop ND1000 分 ( Gene Ontology, GO) ( https: / / go. princeton. edu / ) 和
光光度计 ( Thermo Scientific 公 司, 美 国) 确 定 RNA 京都基因和基因组百科全书 ( Kyoto Encyclopedia of
浓度。 VAHTS Universal V6 RNA-seq 文 库 试 剂 盒、 Genes and Genomes, KEGG) ( https: / / www. kegg. jp /
VAHTS RNA Multiplex Oligos Set1- Set2 for Illumina、 kegg / kegg1d. html) 富集通路分析。
VAHTS DNA Clean Beads、以及 VAHTS mRNA Cap-
2 结果
ture Beads( 南京诺唯赞生物科技股份有限公司) 进
行质量评估和 mRNA 测序文库制备。 使用 Illumina 2. 1 WES 检出 ADAM15 基因非同义 SNV
Hiseq × 10 平 台 进 行 成 对 末 端 多 重 测 序 ( 2 × 首先对 4 例癌组织及 2 例癌旁组织进行 2 × 150
150 bp) 。 bp 双端 WES,筛选外显子区域 SNV,平均每例样本
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携带 24 212 个 变 异,其 中 平 均 携 带 同 义 变 异 ( syn- 义变异( stop gain) 115 个,以及终止缺 失 变 异 ( stop

onymous SNV) 11 981 个, 非 同 义 变 异 ( nonsynony- loss) 11 个( 图 1A 表示每个样本不同类型变异携带
mous SNV) 11 709 个,插入缺失( In / Del) 395 个,无 数) 。

图 1 ADAM 15 结构与功能示意图
Fig. 1 Schematic representation of ADAM15 structure and function
A: schematic diagram of the ADAM15 gene and protein spatial structure. The upper image shows a three-dimensional schematic of the ADAM15 protein, with
green representing the proproteinase domain ( labeled Pep_M12B_propep) , red representing the metalloproteinase domain ( labeled Reprolysin) , blue repre-
senting the disintegrin domain ( labeled disintegrin ) , yellow representing the cysteine-rich domain ( labeled ADAM _ CR) , and orange representing the
rs6427128 site region. The lower image depicts the key structure of the ADAM15 gene, with the colors of relevant domains and sites same with the protein
spatial structure diagram. Green sites indicate some recurrent SNVs of the ADAM15 gene in colon cancer samples from the TCGA database; B: overall surviv-
al curve comparison between the high-expression group and low-expression group of ADAM15 in the TCGA database; C: Comparison of the survival curves of
the ADAM15 high expression group and the local expression group in the GEO database with “ METASTASIS” as an indicator. SNV: single necleotide vari-
ant.
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在肿瘤侵袭表型关联基因 ADAM15 基因中,共计 SNV 变异削弱了 ADAM15 促细胞侵袭的能力,相对于

检出 3 个变异,分别为①非同义变异 NM_207194:ex- 野生型 ADAM15 降低了 80%( P<0. 05) ( 图 2D) 。
on6:c. G484C:p. G162R( T1,N1 携带) ;②非同义变 2. 2. 5 细胞迁移实验
异 NM_207194:exon6:c. A572C:p. K191T,rs6427128 细胞划痕实验结果显 示, 野 生 型 及 突 变 型 AD-
( 全部 6 例样本均携带) ;③同义变异 NM_207194:ex- AM15 并未促进 HCT-8 细胞的迁移能力( 图 2E) 。
on19: c. G2277A: p. K759K ( T2, N2 携 带 ) 。 其 中 2. 3 ADAM15 基因非同义 SNV 通过多种途径影响
rs6427128 位于 ADAM15 基因 6 号外显子,位于重复 结肠癌细胞的恶性表型
脯氨酸前体肽 Pep_M12B_propep 域和 ADAM15 最关 全转录组测序结果显示,与野生型 ADAM15 细胞
键的结构与金属蛋白酶 Reprolysin 域之间( 图 1A) 。 相比,突变型 ADAM15 细胞,共计累积 363 个差异表
无独 有 偶, 查 找 公 共 数 据 库 TCGA ( https: / / www. 达基因[ log2( Fold Change) >0. 585,P adj ( FDR ) <0. 05] ,
cancer. gov / ccg / research / genome-sequencing / tcga ) 显 其中表达上调基因 285 个,表达下调基因 78 个( 图
示,结肠癌患者中聚集重复出现一些 ADAM15 基因的 3A,3B) 。
SNV( 图 1A) 。 GO 分析显示,差异基因群分别富集在 185 条生
此外,除了 SNV 的贡献外,ADAM15 基因的表达 物学 过 程 ( biological process, BP ) 、 29 条 分 子 功 能
量也与预后潜在相关,分析 TCGA 数据库中结肠癌患 ( molecular function, MF) 及 22 条 细 胞 组 分 ( cellular
者的 ADAM15 表达量与生存时间的关系,可知,相对 component,CC) 相关通路。 在 CC 的富集分析中,差
于 ADAM15 低表达组,高表达组的结肠直肠癌患者在 异基因显著聚集在细胞黏附功能相关通路[ P adj ( FDR )
50 个月后的生存率显著下降( 图 1B) ,但 GEO 数据 = 0. 009 6] ,而 BP 分析显示主要富集在 DNA 复制转
库中收录 的 数 据 又 呈 现 不 同 趋 势 结 果, 如 图 1C 所 录活跃度( P adj ( FDR ) = 0. 000 32] 及炎症反应[ P adj ( FDR )
示,以 “ 转移” 为观察指标,相对于 ADAM15 低表达 = 0. 003 9] 等通路;MF 方面显示主要富集在解旋酶
组,同时期高表达组的结肠直肠癌患者的转移率较 活性[ P adj ( FDR ) = 0. 000 62] 、趋化因子活性[ P adj ( FDR )
低,提示该基因与结肠癌病程具体表型的关联仍需 = 0. 002 8] 等通路( 图 3C) 。
探索。 KEGG 分析结果显示,差异基因群主要在 27 个
2. 2 细胞功能实验显示 ADAM15 基因非同义 SNV 通路呈现显著富集, 包括癌症转录失调 [ P adj ( FDR ) =
影响肿瘤细胞的黏附及侵袭功能 0. 012] 以及细胞凋亡[ P adj ( FDR ) = 0. 023] 等( 图 3D) 。
2. 2. 1 Western blotting
3 讨论
用带有 FLAG 标签的 ADAM15 过表达质粒转染
至结肠癌 HCT-8 细胞中 24 h 后,采用 Western blotting ADAM15 基因作为 ADAM 家族中的一员,已经被
验证 ADAM15 的转染效率( 图 2A) 。 证明在多种癌症中过表达,并与预后不良有关,已有
2. 2. 2 细胞增殖实验 研究 [10-11] 结果显示, 异常表达的 ADAM15 可能影响
利用 CCK8 法检测 ADAM15 野生型和突变型过 结肠癌细胞的侵袭和黏附,而 ADAM15 基因的一些潜
表达的 HCT-8 细胞的增殖能力,发现相对于野生型 在功能性 SNV 可能影响其蛋白功能。
ADAM15,突变型 ADAM15 过表达的 HCT-8 细胞的增 本研究首先选取已表现出侵袭表型的结肠癌患
殖能力并未显著提高( 图 2B) 。 者的肿瘤组织和癌旁组织,通过外显子组测序进行了
2. 2. 3 细胞黏附实验 全面的遗传分析。 检测并关注到 ADAM15 基因中的
野生型及突变型 ADAM15 均显著促进了 HCT-8 非同义 SNV rs6427128。 分析在 TCGA 数据库结肠癌
细胞的黏附能力( P<0. 000 1) ;而突变型 ADAM15 呈 癌数据中收录的 26 个 SNV 在 ADAM15 基因上的位
现更强的促 HCT-8 细胞的黏附能力,相对于野生型 置分布可以发现,虽然包括了氨基酸链 249 位置的
ADAM15 增加了 26%( P<0. 05) ( 图 2C) 。 p. F249L 及 X249_splice 在内的 8 个位于已知重要功
2. 2. 4 细胞侵袭实验 能结构域内的变异,但更多的变异是如本研究聚焦的
相对于空载体,野生型及突变型 ADAM15 都显著 rs6427128 一样,分布在各个重要功能结构域周边,这
提高 了 细 胞 的 侵 袭 能 力 ( P < 0. 001 ) , 但 rs6427128 些变异对 ADAM15 基因功能的影响需要通过更有针
第6期 王 晶等:肿瘤相关基因 ADAM15 在结肠癌中一个非同义变异对细胞黏附及侵袭的影响 1049

图 2 ADAM15 野生型和突变型对结肠癌细胞系 HCT-8 细胞恶性表型的影响

Fig. 2 Effects of wild-type and mutant ADAM15 on the malignant phenotype of HCT-8 colon cancer cell line
A: expression of ADAM15 in HCT-8 cells with plasmid overexpression of wild-type and mutant ADAM15; B: comparison of the proliferative capacity of wild-type and
mutant cells; C: comparison of the adhesion ability of wild-type and mutant cells (10× ) (n = 3); D: comparison of the invasive ability of wild-type and mutant cells
(10× ) (n = 3); E: comparison of the migration ability of wild-type and mutant cells (10× ); WT:wild type; Mut:mutant type.
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图 3 ADAM15 野生型和突变型细胞系转录组分析
Fig. 3 Transcriptome analysis of wild-type and mutant ADAM15 cell lines
A:analysis of differentially expressed genes in the transcriptomes of wild-type and mutant ADAM15 cell lines; B: ranking of differentially expressed genes in the tran-
scriptomes; C:enrichment of GO pathways for differentially expressed genes, with the red box indicating pathways related to cell adhesion; D: enrichment of KEGG
pathways for differentially expressed genes, with the red box indicating pathways related to cell apoptosis and transcriptional misregulation in cancer. GO: Gene on-
tology; KEGG: Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes.
第6期 王 晶等:肿瘤相关基因 ADAM15 在结肠癌中一个非同义变异对细胞黏附及侵袭的影响
对性地设计及更细致的实验方法重现和解析。 因此,
本研究揭示的位于重复脯氨酸前体肽和金属蛋白酶
结构域之间的 rs6427128 对细胞表型的影响为此类
研究提供了具体实例及有益提示。
本研究显示,野生型 ADAM15 具有增强细胞黏附
和细胞侵袭的能力,而携带 ADAM15 基因非同义 SNV
rs6427128,呈现了更强的促进肿瘤细胞黏附的能力,
尽管这可能会牺牲它的一些促侵袭能力。 虽然已有
[12]
文献 报道在人膀胱癌异种移植模型中,与对照组
相比,敲除 ADAM15 可抑制 45%肿瘤生长。 但本研究
结果显示,过表达野生型或突变型 ADAM15,均未显
现增加细胞增殖能力,提示结肠癌中过表达 ADAM15
对细胞增殖的影响有限。
癌细胞与肿瘤微环境之间的相互作用影响肿瘤
的进展及其对治疗的反应。 ADAMs 家族的重要功能
之一,即参与水解及释放肿瘤微环境中的可溶性因子
[13]
和信号受体。 研究 表明,在肝细胞癌组织中,AD-
AM15 高表达组的通路富集在细胞凋亡、细胞黏附通
路。 数字 空 间 蛋 白 质 检 测 技 术 分 析 野 生 型 和 AD-
AM15 敲除的小鼠结肠癌细胞系研究提示, ADAM15
敲除可能通过促进免疫细胞向肿瘤组织的浸润,进而
增加肿瘤细胞的凋亡 [14] 。 rs6427128 SNV 可能通过
影响肿瘤细胞的黏附能力,影响了结肠癌细胞与微环
境中其他细胞及因子的互作,参与调节了肿瘤微环境
的改变。 细胞转录组学分析也显示,野生型及突变型
ADAM15 过表达 HCT-8 细胞的差异表达基因,除了主
要富集在 DNA 复制转录、细胞凋亡以及细胞黏附等
肿瘤相关重要的信号通路,也在炎症反应相关通路显
著富集。 提示 ADAM15 基因的非同义 SNV 可能通过
影响 ADAM15 的功能,参与了肿瘤微环境的调节,影
响结肠癌的进展。
然而,需要指出的是,本研究还存在一些不足。
首先,研究样本量相对较小,未来需要更大规模的样
本研究来验证该发现。 第二,虽然本研究选取了具有
侵袭表型的结肠癌患者肿瘤样本进行 WES,并检出
了 rs6427128 位点,但细胞功能实验结果表明,与野
生型相比,rs6427128 可能在结肠癌的黏附中发挥了
重要作用,但不具备对肿瘤侵袭能力的促进作用,这
些结果也说明肿瘤的发生发展是非常复杂的,其在体
的侵袭表型受多基因、多信号通路,以及细胞间相互
作用、肿瘤微环境、免疫内生态等多种因素共同调控。
rs6427128 的影响可能在特定的条件下才能显现,而
1051
体外的细胞实验难以完全模拟肿瘤微环境。 此外,在
结肠癌遗传影响的研究方面,除了如 MLH1、MSH2 等
一系列错配修复基因导致的遗传性非聚集性多脏器
癌症综合征( Lynch 综合征) [15] 外,更多的基因通过
多基因致病的模式,以“ 微效基因” 的方式,影响结肠
癌的进展。 因此,未来的研究需要更多地关注到类似
ADAM15 基因 rs6427128 在结肠癌整体疾病研究中的
潜在价值。
本研究以具有侵袭表型的结肠癌患者的肿瘤样
本入 手, 从 遗 传 变 异 的 角 度 出 发, 提 供 了 有 关 AD-
AM15 基因非同义 SNV 在结肠癌中的作用机制的初
步线索。 ADAM15 基因及其 SNV rs6427128 显著促进
了结肠癌细胞的黏附和侵袭能力;ADAM15 rs6427128
可能通过促进结肠癌细胞黏附,参与调节肿瘤微环境
重塑,影响结肠癌的进展。 未来的研究需要更多地关
注到类 似 ADAM15 基 因 rs6427128 这 样 的 “ 微 效 基
因” 在结肠癌整体疾病研究中的潜在价值。 以期为
结肠癌患者的个体化诊断和治疗提供更多的选择,以
改善结肠癌患者预后。
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突。
作者贡献声明 王晶:实验数据获取、分析,论文撰
写;贺礼兵:实验数据获取、分析;张国燕:数据分析;刘
筱涵:实验数据获取;程杉:研究命题的提出、设计。
参考文献
1 国家卫生健康委员会医政司 中华医学会肿瘤学分会.
国家卫生健康委员会中国结直肠癌诊疗规范 2023 版
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