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  • Práctica 3. Bioquímica Aplicada

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    Miguel Cayetano
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    práctica 3. bioquímica aplicada

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    borado por: Profa. Maria Zambrano Profa. Aida Betancourt Tec. Prof. Luis Guzman Barinas, Tulio 2009 DETERMINACION DE GRASA CRUDA DETERMINACION DE GRAS L-INTRODUCCION naturaleza anit En el analisis proximal de productos alimenticios, de animal vegetal, es comin Ia determinacion de lipides totes por extraccon con solventes orginicos, del material previamente desceado, seguido de la evaporacién del solvente y pesada del residuo seco. Esta determinacién se denomina “Grasa Cruda” y cuando se ust como solvente el éter se Hama extracto etéreo, Los resultados obtenidos en esta téeniea se expresan generalmente en forma porcentual e incluyen, ademas de la materia grasa propiamente dicha (glicéridos), una gran variedad de sustancias lipidicas que varian segiin la naturaleza de la muestra, entre ellas: acido grasos libres, lipides complejos, alcoholes de elevado peso molecular, esteroles, entre otros. Estos extractos frecuentemente estén contaminados con sustancias lipo-solubles de naturaleza no lipidica Los métodos que se utilizan para esta determinacin se"elasifiean én tres grupos: I. Métodos Gravimétricos: Se basan en la solubilidad de las grasas en disoly (Gieretilico y de petrleo, n-hexano, benceno, cloroforme, etanol) para extracr In grasa; luego se evapora cl solvemte y se deternaina ly grasa mediante pesada del extracto seco, En este grupo se enenemeny Jos métodos SOXHLET, GOLDFISH. (Muesiras slits) 2. Métodos Voluméticos: centes orginicos Estos métodos se basan en descomponer todos k acido. sulfirico concentrado menos Ia grasa separar la grasa. Para ello se usan. los componentes en, Se centrifuga para 1a) Un butirémetro (de vidrio) que tiene un yi ) Centrifuugacién para separar y ©) Un bafio de maria Entre estos métodos se encuentran GERBER. y (Muestras liquidas) stazo graduado BARCoeK. Métodos Instrumentales: 4y Se basan en la medicion de una determinada propiedad del alimento, proporcional en a Ign sentido a su contenido de grasa, como por ejemplo, la medicién de la turbidez de la leche bajo condiciones controladas, en instrumentos como el Milkotester BIETIVO: 1-Conocer los métodos para In’ determinacién del % de grasa en un alimento. 2.-Conocer los métodos de anilisis de identidad y de rancidez, de aceites y prasas. RE-LABORATORIO: El estudiante debe tracr un esquema de trabajo para facilitar el desarrollo del mismo. 4.1-TECNIC. ORGANICOS METODO SOXHLET. Consiste en extraer una sustanca seca con der u otro disolventeorgénico soropiado, en un aparato especial hasia el agotamiento y evaporar después BPO AO da cl solvent, El resid comesponde al extracto {que contenta Ia muestra problem es consisten fundamentalmente de El contenido en lipidos libres, los cuales consisten fundamentalment frnsas neuiras(trighicérios) y de des grasos libres, se puede determinar aravremna ennvententc en 10s alimentos por extrcciGn del material seco y ors volvo con una fraccion ligera del n-Hexano o con éterdietlico rei re enaclon eos. io Soxhlet da na exten 2 un arms con) up. enceeo de dloWvente reciente condensndn, 12 date sompela de In grasa neutrt es extorbadn por Ia peace exe lovedas de austancis solbles en agua como, cnbelieria: sat qsico cleo Cuanda In mctie ao hace pulveryinit¥ Se ree igs de Sole enw aparata de extricion 43 VOS cuerpo intermedio con sifn y EQUIPOS, MATERIALES Y REA Equipo de extraccién Soxhlet. (Colector, refrigerante, manta) Balanza anal Papel de filtro Whatman # 41 Balones de extraccion. Exter etilico. Estufa, DETALLES EXPERIMENTALES 1 Pese 2 g de muestra, Hacer con el papel de filtro un paquete de tal forma que la muestra quede segura. Coloque el paquete en la cémara de extraccién, 2. Pese el balén vacio, en el cual posteriormente se depositard la grasa, anote el peso, Fije el balén a la parte inferior del Soxhlet en form: con la finalidad de evitar la fuga del éteretilico, 3. Por la parte superior del Soxhlet (refriger lentamente, hasta que por diferencia de presién baje a través del cucllo del Soxhlet al balén, luego aftada éter etilico hasta cubrir cl paquete. Fije bien el Soxhlet ala parte inferior del refrigerante a segura, ante) vierta el éter etilico 4 Asegurar que el agua pase en abundancia por cl refi Sx Aplicar calor con la manta. Al ini vapores ascenderin por el tubo del sifén y al eacrin sobre la sustancia problema disolvien aleanzar ta altura del tubo late grasa disuelta, t disolvente ante, se la ebullicién del éter sus condensarse en el refrigerante do fa gras que contenga, Al d ral sifoneara hacia el mattaz, el éter con la In cual se quedara en el matraz al volatizarse de nuevo el pean Sesen diate Siakto horas, evitando todo tipo de fuego tal FS ee eeoemell, chire ‘otros’ porieaiT cesar eam plsneha/o raanta de caleatamienio debida a que cl cree elite cocoa inflamable. Controle que el flujo de Muarummpa, Si esto ocurticse, dctener la extraccién haste Ges en eee la extraccién hasta que s G7 Mantenes| la cbullicitn, durante. aproximadainenyejaemte == smi agotamiento total anal j 7.- ‘Transcurrido el tiemy ipo de extracci6n, dejar enfriar, retrar el eartueo 4el cuerpo intermedio, ey lestilar el éter y, cuando el matraz_no contents mas 44 _disolvente, desmontarlo y Hevarto a la estufa por 15 ~ 20 min. Enfriarlo en un desecador y pesarlo. Después de las cuatro horas de extraccién recuperar el solvente a medida que se condense en la camara de extraccién. El paquete de la muestra se guarda para su posterior analisis de fibra. Evite que la grasa depositada en el balin se queme, deje enfriar el balén conteniendo la grasa para luego colocarlo en a estufa durante una hora, con la finalidad de que el éter etilico se evapore completamente y sélo se tenga grasa, 8.- Calcular el porcentaje de grasa cruda. CALCULOS mg/l = (B-AIG*10° Donde: A= Peso (g) del balén limpio y seco. B = Peso (g) del balén limpio y seco mas la grasa. G 280 () de la muestra sometida a ensayo. %GRASA= ((B-AYG) * 100 EQUIPO SOXHLET 45 ASAS Y ACEITES SIDAD ESPECIFICA DENSIDAD RELATIVA 0 DEI d-miy Pee umparar amas dea susie) en elaine masa de 4a un mismo volumen y temperatura. Se ust un piendmetra 0 en gu t 0 de 50 ml en caso de emergcncia efecto un balin aforado di 8) Pesar picndmetro limpio, seco y vacfo completo (con termémetto y tapa); burbyja hacia arriba en forma de aguja, 5) Pesar picnémetro eno, quitar fermémetto y tapa; ienar con agua destilada; eolocar termémetro; luego la tapa y con una toalla limpiar el java derramada; tomar ta temperatura del agua; pesar con la balanza; dual pan Poautto de acetona; enjungar el pienémetro con acetona para Aue el picndmeteo este completamente seco en el menor tiempo posible vermanesttt (ayuda a secar el picndmetto), coloery estufa sin semetto para secar, se coloca con las tapas Porque estas también. se dcben seeat pers aparte aun tado del piendrecton ln estufa, colocarlo peas {eseeador para entrar, Henar el piendmetne cot aceite (muestra), Plcndmne tt 1a temperatura, regresar el aceite ol envase, enjuagar el estufa sin termémetro, ee ag wae: RESUMEN 4) Pesar picnémetro com b)- Pesar picnémetro llens de guatleer ta temperatura del agua {lisolver la grasa, estufa, desecador He (leer la temperatura del accite), sémetro con acetona, ™m (aguay’ V (50 ML) maceité (50 ML), « "etomperatura de trabajo Pa caps com le deniasdes 6) ans oar al nc G.EQS5 C725 °c) " aceite/a agua _— @=d+(1+0') 0,00068 si tor eg mperatura de trabajo, temperatura de referencia. lensidad a la temperatura de determinacicn t “densidad a la temperatura de referencia (corregida) @ = d-(U - t) 0,00068 sit

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